外源性睫状神经营养因子对离断面神经修复的实验研究

OBJECTIVE: To study the role of extrinsic (CNTF) in the regeneration of severed facial nerve in cats. METHOD: The facial nerve in temporal bone of adult cats were severed and the severed ends were connected with CNTF or saline applied at the connection. Electrophysiological examination and immunocytochemistry were performed with immunoelectron microscope for morphological analysis at 2, 4 and 8 weeks after the operation. RESULTS: Two weeks after operation, both CNTF and saline groups failed to exhibit muscular excitement by facial nerve stimulation, but the amount of myelinated nerve fibers had statistical difference between the two groups (P<0.05). At 4 weeks, the latency of the facial muscle excitement was 7.832+/-2.695 ms in CNTF group and 16.120+/-3.516 ms in saline group, and the average number of myelinated axons was significantly different between the two groups (1,435+/-318 vs 957+/-269, P<0.05). At the 8th weeks, the latency of facial muscle excitement was reduced to 3.125+/-0.165 ms in CNTF group and to a comparable level of 3.095+/-0.178 ms in saline group (P>0.05), and the average number of myelinated axons increased to 1,695+/-283 and 1,543+/-320 respectively in the two groups (P>0.05). Significant increase of Schwann cells was noted in both groups at this stage. CONCLUSION: Local application of CNTF may enhance facial early-stage nerve regeneration in adult cats, but its long-term effects remain unclear.     

外源性睫状神经营养因子对离断面神经修复的实验研究

目的 探讨应用外源性睫状神经营养因子(CNTF)对成年猫面神经损伤后的再生修复作用。方法 猫颞骨内面神经横断损伤后端端对合,局部应用CNTF作实验组,对照组用同等量生理盐水(SAL);于术后2、4和8周各组进行电生理、免疫组织化学细胞化学技术结合免疫电镜观察及形态学分析。结果 术后2周两组电刺激面神经均未诱发面肌兴奋,有髓纤维计数实验组(834±326)、对照组(235±152)t检验(P<0.05),有显著意义。术后4周CNTF组,面神经复合肌动作电位潜伏期实验组(7.832±2.695)、对照组(16.120±3.516);有髓神经纤维数实验组(1435±318)、对照组(957±269),有显著性差异。术后8周CNTF组,面神经复合肌动作电位潜伏期实验组(3.125±0.156)、对照组(3.095±0.178),有髓神经纤维数实验组(1695±283)、对照组(1543±320),t检验(P>0.05),两组差异均无明显意义。但髓鞘厚度较均匀、结构尚完整,轴突再生明显,雪旺细胞增多。结论 局部应用CNTF在正常猫神经损伤的较早期(4周左右)有促进再生修复作用,但远期作用尚不明确。     

睫状神经营养因子促进大鼠周围神经再生的实验研究

探讨局部应用睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＣＮＴＦ）对大鼠周围神经损伤后再生的影响。方法３４只大鼠分为４组,１～３组每组各１０只,切除两侧坐骨神经各１０ｍｍ并用硅胶管套接,左侧套管内注入ＣＮＴＦ５０μｇ,右侧注入生理盐水对照。术后１、３、４个月分别进行电生理和组织学检查。另４只鼠于术后３个月行ＨＲＰ逆行示踪检查。结果ＣＮＴＦ治疗组术后１、３、４个月时的电生理和组织学检查结果均明显优于对照组。相应节段脊髓前角标记辣根过氧化物酶的神经元明显多于对照组。结论ＣＮＴＦ可促进周围神经特别是运动神经损伤后的再生。     

睫状神经营养因子单克隆抗体制备

目的：制备睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)单克隆抗体。方法：将CNTF免疫的BALB/c小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次克隆化培养,获得分泌CNTF单克隆抗体的杂交瘤细胞株;然后进行体内诱生获取含大量CNTF单克隆抗体的腹水和血清;再进行CNTF单克隆抗体鉴定和效价测定。结果：获得5株分泌CNTF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型为IgG2a;腹水和血清中该抗体效价分别为1∶107-1∶108和1∶106;该抗体能特异性地显示SD大鼠脑内表达CNTF的神经元,其中1株单克隆抗体能抑制CNTF促进体外培养新生SD大鼠骨骼肌细胞增殖的功能。结论：制备成功高效且特异的CNTF单克隆抗体,为CNTF结构、功能和机制的研究提供了有效工具。     

睫状神经营养因子对应激引起行为障碍的作用

目的 探讨睫状神经营养因子对应激引起行为障碍的作用。方法 采用ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ测定，观察急性和慢性足底电击应激大鼠的ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为变化，及双侧海马注射睫状神经营养因子对其影响。结果 急性应激大鼠ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为活动增加，慢性应激大鼠ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为活动减少；睫状神经营养因子对对照组大鼠和急性应激大鼠的ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为无明显作用，但可显著改善慢性应激大鼠的行为障     

睫状神经营养因子对脊髓神经元的保护作用

目的：研究脊髓操作后脊髓神经元内酶学的变化,并探索睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对神经元的保护作用,方法：用Ａｌｌｅｎ改良法打击摸型致ＳＤ大鼠Ｔ８脊髓操作分别于术前及术后３,７,１０ｄ测定脊髓组织内乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）和酸性磷酸酶（ＡＣＰ）的含量。结果：ＡＣｈＥ于术后持续下降;ＡＣＰ在术后第３天开始上升,第７天至最高,以后逐渐下降;用ＣＮＴＦ处理的大鼠上述两种酶变化的幅度较小,且整个过程也比较平     

睫状神经营养因子对损伤脊髓神经元酶学的影响

目的：研究脊髓损伤后脊髓神经元的酶学变化,并探索睫状神经营养因子（CNTF）对脊髓神经元的保护作用。方法：用改良Allen打击法致SD大鼠T8脊髓损伤,分别于术术前术后第3、7、14天测定脊髓组织内乙酰胆碱酯酶（AChE)和酸性磷酸酶（ACP）的含量。结果：AChE于手术持续下降,ACP在术后3天开始上升,第7天升至最高,以后逐渐下降,经CNTF治疗后上述峡谷种酶变化的幅度较小,且整个过程比较平衡,结论：CNTF对脊髓损伤的神经元具有一定的保护作用。     

人睫状神经营养因子结构和功能的研究

制备高活性的重组人睫状神经营养因子，并研究其生物学功能。方法：应用大肠杆菌表达ｈＣＮＴＦ，用片段插入和法研究其结构与功能关系；切断大鼠骨神经，局部及皮下给予ＣＮＴＦ，应用辣根过氧化物酶逆行追踪技术显示再生轴突通过修复部位的胞体。结果；ｈＣＮＴＦ分子中α－螺旋结构的维持对其生物活性十分重要Ｃ端松散地其生物活性贡献不大，Ｄ螺旋中后段可能与生物活性有密切关系；     

睫状神经营养因子对脊髓神经元离子内环境的影响

目的 :研究脊髓损伤前后脊髓组织内离子含量的变化 ,探索睫状神经营养因子 (CNTF)对损伤脊髓神经元保护作用的可能机制。　方法 :采用改良Allen打击法致SD大鼠T8脊髓损伤 ,分别于术前及术后 3天用原子吸收分光光度计测定脊髓组织中Na 、K 、Ca2 、Mg2 的含量。　结果 :脊髓损伤后局部组织Na 、Ca2 含量均显著增加 ,K 、Mg2 含量均降低 (P <0 .0 1)。用CNTF治疗后Na 、Ca2 含量明显下降 ,同时 ,K 、Mg2 含量明显回升(P <0 .0 1) ,但与正常组相比 ,仍有明显差异。　结论 :CNTF可能是通过调节损伤细胞内外离子水平、稳定细胞内外离子平衡而起到保护损伤的脊髓神经元的作用     

睫状神经营养因子对星形胶质细胞细胞周期的影响

目的探讨睫状神经营养因子（CNTF）在有血清培养和无血清培养的情况下，对星形胶质细胞分化和增殖的影响。方法将纯化的星形胶质细胞分为有血清培养和无血清培养组，根据CNTF剂量不同，每组再分别分为0、2、20、200ng／ml 4个亚组（共8个亚组）。每个亚组分别在6、12和24h取材，应用流式细胞术检测星形胶质细胞在各细胞周期时相中的百分比。结果CNTF使无血清培养组的星形胶质细胞处于G0／G1期的细胞百分比上升，而使有血清培养组的星形胶质细胞处于G0／G1期的细胞百分比下降。结论无血清培养时CNTF可以刺激星形胶质细胞分化进入活化状态，但不刺激其增殖；有血清培养时CNTF可以协助血清中的丝裂原引起星形胶质细胞增殖。     

CNTF对视神经损伤后视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的：研究睫状神经营养因子（CNTF）对视神经损伤后视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡的影响。方法：采用中号显微血管夹建立视神经中度损伤模型后,取左眼作为治疗组,在即时、1、37、d时分别向玻璃体腔内注入2μl（1μg/μl）CNTF溶液;取右眼作为实验对照组,同治疗组在每个时间点向玻璃体腔内注入2μl双蒸水。于伤后1、3、71、4 d时分别做HE染色、原位末端标记法（TUNEL）检测。结果：光镜下观察治疗组细胞形态明显好于实验对照组。TUNEL显示凋亡RGCs数随视神经损伤时间延长而变化（P〈0.05）。伤后1 d,治疗组和实验对照组凋亡RGCs数两组间相比较无统计学意义（P〉0.05）。伤后3、7、14 d时治疗组的凋亡RGCs数明显比实验对照组少（P〈0.05）。结论：玻璃体腔内注射外源性CNTF可以减少RGCs的凋亡,对视神经中度损伤后RGCs具有明显保护作用。     

人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定

目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTF重组蛋白。然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性。结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Western印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性。表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活。结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白。     

外源性神经节苷脂GM1对面神经再生的影响

目的：探讨神经节苷脂GM1对面神经损伤再生的影响。方法：建立兔面神经损伤后再生的实验模型，外源性给予GM1，分别在术后2，4，8周观察面神经的组织学及超微结构变化。结果：实验组术后2，4周光镜下可见大量有髓神经纤维排列整齐，髓鞘厚度增加，雪旺氏细胞多见。术后8周时实验组与对照组无明显差异。术后2，4周时，电镜观察实验组再生神经纤维增多，轴索成熟，可见雪旺氏细胞胞体完整。术后8周时实验组与对照组无明显差异。结论：神经节苷脂GM1对兔面神经损伤的早期康复有明显促进作用。     

雪旺细胞源神经营养因子对端侧吻合后神经再生的影响

目的研究雪旺细胞源神经营养因子对神经端侧吻合后神经再生的影响.方法取SD大鼠24只,随机分为实验组和对照组,每组12只;随机切断一侧腓总神经,与胫神经外膜开窗处行端侧吻合,另一侧作为正常对照.术后于实验组端侧吻合侧小腿外侧肌肉注射雪旺细胞源神经营养因子(10 μg/ml),而于对照组注射等量的生理盐水,隔天一次,共用2周;术后12周,行腓总神经传导速度测定、组织学检查及胫前肌湿重测定.结果实验组再生的腓总神经纤维质量、数目、运动神经传导速度和胫前肌湿重均优于对照组,但不如正常的腓总神经和胫前肌.结论雪旺细胞源神经营养因子对神经端侧吻合后的再生具有一定的促进作用.     

神经生长因子对周围性面神经炎的循证治疗

目的从循证医学的角度，介绍神经生长因子对面神经炎循证治疗方案的确立方法。方法以一位难治性面神经炎患者为例，介绍如何提出临床问题，怎样检索文献，如何对文献进行评价，怎样结合病例的具体情况和临床医生的个人经验，应用得到的证据拟定治疗方案。结果按照循证医学方法确立的以神经生长因子为主治疗面神经炎患者40次后，患者症状得到明显改善。结论依据循证医学的原则，对该患者采用神经生长因子治疗，获得了满意效果，对提高难治性面神经炎患者的生活质量具有重要意义。     

睫状神经营养因子对视神经损伤修复作用的研究

目的：观察睫状神经营养因子（CNTF）能否促进视神经（ON）损伤后在原中枢神经环境中再生,为临床救治提供理论依据和新的治疗途径。方法：选用成年日本青紫蓝兔22只,其中随机抽取两只做正常对照,不做任何处理;其余20只为实验组,构造视神经中度损伤模型（中号显微血管夹于视神经后3 mm处夹持20 s）。于损伤后即时、3 d、7 d、14 d各时间点给予右眼（实验眼）玻璃体腔内注射CNTF 2μl（1μg/μl）,左眼（对照眼）于同等时间点注射等量双蒸水。于损伤后3 d、7 d、14 d、28 d分别取实验眼和对照眼视神经行常规HE染色观察视神经组织学变化;免疫荧光检测观察生长相关蛋白-43（GAP-43）在视神经的表达;同时将动物实验眼及对照眼于损伤前、损伤后即刻及处死前进行视觉诱发电位（F-VEP）检查以观察兔视功能变化情况,采用SPSS 13.0统计学软件包对数据进行统计学分析。结果：HE及免疫荧光检测实验组组织学变化明显好于对照组;F-VEP检查可见视神经损伤后即时闪光视觉诱发电位波形几近熄灭。伤后1周,两组潜伏期基本恢复至损伤前水平,振幅恢复缓慢,组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）;2周以后两组间比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：睫状神经营养因子对视神经损伤有修复作用,可促进视神经轴突在原中枢环境中的再生。