用谷氨酰羟基对硝基苯胺作基质测定GGT活力的探讨

测定γ-谷氨酰转肽酶活力(GGT)过去用γ-L-谷氨酰-α-萘胺或-β-萘胺,前者敏感度低,后者很难溶解,均不受欢迎。1963年Orlowski等合成了新基质γ-L-谷氨酰对硝基苯胺,敏感度明显提高,且可直接比色测定,具有快速简便,重复性好等优点,迄今国内外大多沿用该法。1975年Bernt介绍用     

稳定单一重氮试剂显色法测定GGT

γ－L-谷氨酰转肽酶（GGT）测定主要有γ-谷氨酰-α-萘胺法与γ－L-谷氨酰对硝基苯胺法两大类。前者应用比较普遍、历史悠久，但是，反应产物α萘胺的显色剂需临用新鲜配制，本文介绍一种改进的稳定单一重氮显色试剂，不必每次配制；简便实用。并调查了参考值及初步临床价值，将GGT列为肝功常规提供条件。1材料和方法1．1试剂1.1.1基质准：取0．15mol／L（1．829／dl）三羟甲基氨基甲烷及0．06mol／L（0．792g／dl）双甘肽溶液90ml。称取γ－L-谷氨酰-α-萘胺（无水，Mr272．3）217mg，加1mol／L盐酸4ml，使溶解后，与Tris-双甘肽溶液…     

重氮法测定γ-GT基质重组和影响因素分析

血清γ-GT测定以γ-谷氨酰对硝基苯胺为底物时，释出的对硝基苯胺含量低、色浅、吸光度低，对结果影响较大。国内目前仍常用重氮显色法，为缩短该法的反应时间，较好的控制实验条件，本文将其基质重组和对影响因素作了初步分析。现报道如下。     

血清氨基肽酶测定法的探讨

氨基肽酶是水解酶,可作用于多种氨基酸衍生物。如用亮氨酰-β-萘胺为底物的固定时间法或用亮氨酰对硝基苯胺为底物的连续监测法。本文分别以亮氨酰对硝基苯胺和丙氨酰对硝基苯胺为底物测血中氨基肽酶活性,建立了适合于临床应用的方法和正常值。     

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶在肝胆疾病诊断中的价值

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（Slycylprolinedipeptidy laminopeptidase,GPDA），有色特异地水解肽链末端第2位为脯氨酸所形成的肽键（对其他肽键无作用）。用人工合成的X-脯氨酰对硝基苯胺作底物来检测此酶活性发现，以甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺为底物时酶活性最强，Km值最小，故称此酶为甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶或甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺酶（glycylproline—p—nitmanilidase）。又由于它也能水解甘氨酰脯氨酰-β-萘胺，故又称为甘氨酰脯氨酰-β萘胺酶（Slycylproly--β-naphthvlamidase）。。     

重氮法测定γ-GT基质重组和影响因素分析

血清y-GT测定以y-谷氨酰对硝基苯胺为底物时,释出的对硝基苯胺含量低、色浅、吸光度低,对结果影响较大.国内目前仍常用重氮显色法,为缩短该法的反应时间,较好地控制实验条件,本文将其基质重组和对影响因素作了初步分析.现报告如下.     

血清γ—GT速率测定法的实验条件探讨

本文以γ-谷氨酰对硝基苯胺为底物终浓度为5.0mmol/L。用Tris-甘氨酰甘氨酸(双甘肽)缓冲液(pH8.2),其中双甘肽作γ-谷氨酰基的受体,终浓度为100mmol/L,生成的对硝基苯胺为黄色,在410nm波长处     

γ-GT 基质液简易干燥法

γ-GT 基质液配制后,保存期短,且在4℃下保存易析出结晶.我们对它的保存方法作了如下改进,秤取γ-谷氨酰-α-萘胺81.3mg,加pH9.0硼酸缓冲液30ml,加热助溶,并迅速冷至室温.将此液分     

血清血管紧张肽-转换酶简易的酶法测定

本文作者介绍了一种简单的动力学酶法测定血管紧张肽-转换酶(ACE)活性的方法。首先,ACE与底物质马尿酰-甘氨酰-甘氨酸(Hip-Gly-Gly)反应释出Gly-Gly,接着在γ-谷胺酰转移酶(GGT)催化反应中,Gly-Gly作为受体底物从供体底物L-γ-谷胺酰-3-羧基-4-硝基替苯胺(GGCN)转移γ-谷胺酰基团。反应中释放的3-羧基-4-硝基替苯胺可于410nm测定。反应式如下:     

肾病患者γ—谷氨酰转移酶测定的意义初探

γ-谷氨酰转移酶 ( GGT)在肾脏中含量最高 ,通常肾脏疾病中血液 GGT增高不明显 ,尿液 GGT排出增加 [1] ,作者对部分肾脏疾病患者 GGT进行检测 ,以了解其临床应用价值。现报道如下。材料和方法一、材料 :Beckman- Coulter CX7Delta全自动生化分析仪及配套试剂。二、方法 :GGT测定采用连续监测法 ,即在GGT催化作用下 ,γ-谷氨酰对硝基苯胺上的谷氨酰基转移到双甘肽上 ,生成对硝基苯胺 (黄色 )和谷氨酰双甘肽 ,40 5nm连续监测对硝基苯胺生成速率(吸光度变化 ) ,吸光率增高与 GGT活性成正比。三、检测对象 :正常对照组 30例 ,均为体…     

γ-谷氨酰氨基转移酶(GGT)临床测定966例分析

γ-谷氨酰氨基转移酶(GGT)来源于肝脏其后通过胆道排泄。另外,在肾小管细胞的嗜碱性外侧膜也含有GGT。因此GGT对肝、胆、肾小管病变有重要诊断意义。特将我院及五院2005元月至2008年6月间GGT升高966例病人进行临床分析如下:方法原理:连续监测法(MODULAR定量测定GGT活性)γ-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺和双苷肽在GGT的作用下,生成对硝基苯胺及γ-谷氨酰双苷肽,所释放出的对硝基苯胺与GGT活性成正比,通过在405nM处测定对硝基苯胺的变化,可求出GGT活力。临床测定结果分析各组GGT升高的对比例数GGT单纯升高组ALT升高大于GGT升高组GGT升高是ALT升高的1-6倍组GGT升高是ALT升高6倍以上组病毒性肝炎257025700脂肪肝1427010134药物性肝病593401718酒精性肝病863803117原发性肝癌48402321转移性肝癌38170211阻塞性黄疸44230183胆囊炎胆石症29293011485讨论原发性亲肝病毒引起的急性病毒性肝炎在无并发症的情况下GGT中度升高约100~300U/L。在最初的2周内,黄疸或临床症状出现后,GGT/ALT比值是0.1~0.2,3~4...     

测定尿γ-GT与肌酐的比值监测氨基糖苷类抗生素对肾的毒性

尿γ-GT 检测的临床价值,特别对肾病的诊断,已引起重视.我们观察了临床使用氨基糖苷类抗生素(庆大霉素、丁胺卡那霉素等)尿中γ-GT 的变化,以了解药物对肾的影响.一、材料与方法1.仪器IL Monarch-2000生化自动分析仪.2.γ-GT 试剂盒中生公司速率法试剂盒,其成份:γ-谷氨酰对硝基苯胺4.0mmol/L,甘氨酰甘氨酸90.0mmol/L,Tris 缓冲液100.0mmol/L.3.尿肌酐测定碱性苦味酸终点法.     

血清LDL—VLDL—GGT测定及其影响因素的实验探讨

本文报道了血清中与LDL、VLDL 结合的γ-谷氨酰转肽酶(LDL-VLDL-GGT)活力的测定方法.以磷钨酸钢—MgCl_2沉淀血清中LDL-VLDL-GGT,采用Tris-双甘肽缓冲系统.γ-谷氨酰对硝基苯胺作底物。测定血清总GGT 与上清液GGT 活力,两者之差值即为LDL-VLDL-GGT 活力.本法重复试验CV6.7～10%.线性范围达474.2U/L.正常参考范围<13.6U/L,男女差异不显著.初步临床应用提示本法结果对肝癌鉴别诊断有一定价值.     

尿中3-甲氧基-4羟基苦杏仁酸(VMA)两种测定方法简评

尿液VMA测定常用高碘酸氧化法(简称间接法)和对硝基苯胺显色法(简称直接法)(详见湖南医学院二附院检验科编《临床生化检验》).我们对两法作了     

血清一氧化氮含量测定方法的比较

目的 寻找一种有效的血清一氧化氮含量测定方法。方法 比较Griess试剂法、α－萘胺重氨法及硝酸根还原酶法检测血清NO的线性范围、精确度与准确度。结果 硝酸根还原酶测定法具有较好准确度与精确度的血清NO测定方法；α－萘胺重氮法与常用的Griess试剂显色法具有相似的检测下限、准确度与精确度。结论 硝酸根还原酶是一种有效的血清一氧化氮含量测定方法，但成本较高；而α－萘胺重氮法与Griess试剂法检测血清一氧化氮的准确度略低但成本较低。     

血清r-GTP比色法有关因素的探讨

比色法测定血清r-GTP,应用最广的是重氮试剂显色法及对硝基苯胺直接比色法。近年来,由于检测试剂的不断改进及试剂盒的生产,使测定方法更趋规范化。我们从1987年开始使用市售的试剂     

用国产Glucana测定GGT活性的中止比色法

本文介绍用国产γ-L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(Glucana)作底物测定GGT 活性的中止比色法.以国外文献推荐的连续监测常规法为基础,但改为37℃反应10分钟用1mol/L 盐酸中止反应,410nm 比色,以3-羧基-4-硝基苯胺(Cana)为标准,按U/L 计算结果.Glucana 的Km=0.64mmol/L,最适pH=7.9,10分钟内成零级反应,300U/L 内成线性,批内CV0.26%,天间CV1.9%,平均回收率98.5%,参考范围10～36U/L。用国产底物和进口试剂,用本法和动力学法进行对比试验。实验结果证明:国产Glucana 性能良好;本法快速、简便、精密度及准确度符合临床要求,可在无自动生化分析仪或基层实验室推广。     

凝血酶原活性(Ⅱ:C)的显色底物测定法

显色底物法测定凝血酶原具有快速、灵敏、微量、准确、稳定等优点.其原理是利用巨齿蛇蛇毒(Echis Carinatus Venom ECV)激活凝血酶原,使其转变成凝血酶,后者具有酰胺酶活性,再使合成的发色底物Chromozym P(Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA)释放出对硝基苯胺(PNA)而显黄色,其色泽的深浅与酶的含量呈线性关系.现介绍测定方法.     

酶偶联法测定血清血管紧张素转换酶

目的 建立一种测定血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的酶偶联法，方法 血清与底物马尿酸双甘肽（Ｈｉｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）混合温育３０分钟，生成马尿酸（Ｈｉｐ）与双甘肽（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）再加入Ｌ－γ－谷氨酰－３－羧基－４－硝基苯胺（ＧＧＣＮ）和γ－谷氨酰基转移酶（ＧＧＴ），催化ＧＧＣＮ与Ｇｌｙ－Ｇｌｙ偶联，产生的３－羧基－４－硝基苯胺于４１０ｎｍ波长测定其吸收度，结果 当底物ｐＨ８．０，ＧＧＣＮ１．０ｍｍｏｌ     

甘氨酰脯氨酰-对-硝基苯胺酶与肝胆疾病

甘氨(酰)脯氨酰-对-硝基苯胺酶(GPN)是一种肽酶.根据以往有关肝硬变、肝癌时血中GPN活性升高的报告,作者测定了健康对照、肝胆疾病、心肌梗塞和肠道慢性炎症患者血清