成骨生长肽对钛表面人牙周膜成纤维细胞增殖分化影响的研究

目的:研究成骨生长肽(Osteogenic growth peptide,OGP)对人牙周膜成纤维细胞(Periodontal ligament cells,PDLCs)在钛金属表面增殖分化的影响.方法:将纯钛试件放在12孔培养板内,取生长良好的第五代人牙周膜成纤维细胞接种在试件表面,加入不同浓度的OGP(10-11～10-7mol/L),分别在接种后1、3、5、7 d应用MTT法检测细胞增殖;接种后3、7、10 d应用酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性的表达.结果:OGP在该浓度范围内时,对钛表面的人牙周膜成纤维细胞的增殖率有明显的促进作用(P＜0.05),并且能促进细胞内ALP表达活性(P＜0.05),最佳作用浓度为10-9mol/L.结论:OGP可促进钛片表面人牙周膜成纤维细胞的增殖活性,同时可以增强细胞碱性磷酸酶表达的活性,提示OGP在口腔种植领域中具有良好的应用前景.     

成骨生长肽对大鼠骨髓基质细胞增殖分化的影响

目的 研究成骨生长肽(osteogenic growth peptide, OGP)在体外对骨髓基质细胞增殖和成骨向分化的影响.方法 在体外培养的大鼠骨髓基质细胞中加入不同浓度的OGP(10-11～10-7 mol/L),用MTT法检测细胞增殖,酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)的表达,RT-PCR法检测细胞内核心结合因子1(Cbfa1) mRNA的表达.结果 OGP对骨髓基质细胞增殖有促进作用(P《0.05),最大效应浓度为10-9 mol/L;能增加细胞内ALP活性(P《0.05),最大效应浓度为10-8 mol/L;可诱导Cbfa1 mRNA的表达(P《0.05).结论 OGP可促进骨髓基质细胞的增殖,并通过诱导其内Cbfa1 mRNA的表达促进其成骨向的分化.     

成骨生长肽对大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞增殖和分化的影响

目的研究成骨生长肽(OGP)在体外对成骨细胞样细胞增殖分化的影响。方法在体外培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞中加入不同浓度的OGP(10-11mol/L~10-7mol/L),用MTT法检测细胞增殖,酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)的表达,RT-PCR法检测核心结合因子1(Cbfa1)mRNA的表达。结果OGP对成骨细胞样细胞增殖有促进作用(P<0.05),最大效应浓度为10-9mol/L;能增加细胞内ALP活性(P<0.05),最大效应浓度为10-8mol/L;可促进Cbfa1mRNA的表达(P<0.05),其最佳促进表达浓度为10-8mol/L,Cbfa1mRNA与β-actinmRNA像素值比值为0.89±0.02。结论OGP可促进成骨细胞样细胞增殖,增强Cbfa1mRNA的表达水平。     

邻苯二甲酸二丁酯对体外人肝细胞HL-7702毒性作用的研究

目的探讨邻苯二甲酸二丁酯对肝细胞的毒性作用及可能的损伤机制。方法1、10、50、100μmol/L浓度的邻苯二甲酸二丁酯作用于人肝细胞HL-7702后,检测邻苯二甲酸二丁酯对肝细胞HL-7702的增殖率、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的变化。结果邻苯二甲酸二丁酯(DBP)作用于肝细胞后,肝细胞HL-7702的增殖率随DBP浓度的增加而下降,在≥10μmol/L浓度,细胞的增殖率显著降低(P<0.01),肝细胞的增殖率从对照组的100%降低到100μmol/L浓度的50.7%。DBP可使肝细胞HL-7702中的SOD含量降低,MDA含量升高,当浓度大于50μmol/L时,与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01)。结论DBP对体外培养人肝细胞HL-7702具有细胞毒性和氧化损伤作用。     

成骨生长肽对大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的影响

目的:研究成骨生长肽OGP在体外对大鼠颅盖骨成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的影响.方法:在体外培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞中加入浓度为10-11～10-7mol/L的OGP,处理7天后收集细胞爬片,采用SABC法行细胞免疫化学染色,通过图像分析系统观察不同OGP作用后,成骨细胞胶原蛋白的变化情况.结果:OGP作用于成骨细胞后,Ⅰ型胶原蛋白表达明显增强,其中OGP浓度为10-9mol/L时促进作用最为明显.结论:OGP可促进成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达.     

人重组S100A8对牙周膜细胞增殖和迁移活性的影响

目的:观察人钙结合蛋白轻亚基S100A8对牙周膜细胞增殖和迁移活性的影响,探讨S100A8在牙周炎发生及发展中的作用。方法:体外培养人牙周膜原代细胞,给予人重组S100A8处理,MTT检测细胞增殖活性的改变,Annexin-Ⅴ/PI染色后流式细胞检测技术观察细胞的凋亡状况,Transwell小室及划痕实验检测细胞迁移能力的改变。结果:10-7～10-5mol/L人重组S100A8抑制牙周膜细胞增殖,而10-9～10-7mol/L S100A8促进牙周膜细胞迁移,其中10-5mol/L S100A8作用牙周膜细胞48 h后可以显著抑制其增殖并诱导其凋亡,而10-9mol/L S100A8却显著促进牙周膜细胞的迁移。结论:高浓度S100A8抑制牙周膜细胞增殖且促进其凋亡,而牙周治疗后低浓度的S100A8可以促进牙周膜细胞迁移,有助于疾病后期组织的修复。     

转化生长因子β1对体外培养hRPE细胞增殖率及Ⅰ型胶原表达的影响

目的:探讨TGF-β1对体外培养人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞增殖率及I型胶原表达的影响。方法:实验组用0.1、1、10μg/L的TGF-β1对体外培养hRPE细胞进行干预,对照组只加培养液培养hRPE细胞,用RT-PCR与酶联免疫吸附法检测Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达,用MTT法检测细胞的增殖率。结果:实验组hRPE细胞Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量及细胞增殖率较对照组明显增高(P<0.05),1μg/L组进一步升高(P<0.05),10μg/L组达高峰(P<0.05),呈现明显的剂量依赖性,TGF-β1浓度与Ⅰ型胶原蛋白的表达及增殖率的相关系数r分别为0.863及0.901。结论:TGF-β1能够促进hRPE细胞Ⅰ型胶原的表达和细胞的增殖,这种现象与TGF-β1的浓度成正相关。     

同型半胱氨酸诱导人血管平滑肌细胞增殖与凋亡

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响.方法:采用组织贴块法体外培养人VSMC,MTT法检测人VSMC增殖,流式细胞术检测人VSMC凋亡.结果:体外培养的人VSMC在终浓度为100,200,500和1000 μmol/L Hcy的培养液中孵育24 h后的A值均高于对照组(P<0.05),表明Hcy可诱导人VSMC增殖,而且呈浓度依赖性诱导人VSMC增殖(r=0.94,P<0.01).终浓度为200,500和1000 μmol/L Hcy时细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),表明较高浓度的Hcy可以诱导人VSMC凋亡,而且这一效应呈浓度依赖性(r=0.85,P<0.05).结论:Hcy可以诱导VSMC增殖和凋亡.     

缬沙坦对巨噬细胞增殖、炎症因子表达及活性氧生成的抑制作用

目的 探讨血管紧张索Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂缬沙坦对巨噬细胞炎症因子表达、活性氧(ROS)生成及其细胞增殖的影响,初步探讨缬沙坦的抗炎作用机制.方法 体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7并随机分为对照组(10-6 mol/L AngⅡ)和缬沙坦干预组(10-6 mol/L AngⅡ+不同浓度缬沙坦).Real-time PCR检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、白介索-6(IL-6)和巨噬细胞炎性蛋白-2(M1P-2)等炎症因子的表达;荧光探针法检测ROS含量;CCK-8法检测巨噬细胞增殖活性.结果 缬沙坦干预组TNF-α、IP-10、IL-6、MIP-2 mRNA表达均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01);不同浓度缬沙坦均能降低细胞ROS含量,其中以10-5 mol/L缬沙坦效果最明显(P<0.05);不同浓度缬沙坦均能降低巨噬细胞的增殖活性(P<0.05或P<0.01),其抑制作用随缬沙坦浓度的上升而更加明显.结论 缬沙坦可能通过抑制巨噬细胞炎症因子表达、ROS生成及细胞增殖而发挥抗炎作用.     

AngⅡ对人脐动脉平滑肌细胞PAPP-A、IGF-1 mRNA表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐动脉平滑肌细胞妊娠相关蛋白-A(PAPP-A)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA表达的影响.方法 (1)应用10-5mol/L AngⅡ与人脐动脉平滑肌细胞及在Ox-LDL中刺激过的人脐动脉平滑肌细胞共同培养0、6、12、24、36、48h后收集细胞.(2)应用不同浓度的AngⅡ(10-7、10-6、10-5、10-4mol,L)与上述两种细胞共同培养24 h后收集细胞.(3)应用RT-PCR方法检测细胞内PAPP-A、IGF-1 mRNA的表达量.结果 在浓度为10-5mol/L的AngⅡ作用下,PAPP-A、IGF-1表达量在12 h时开始升高(P<0.05),24 h左右达高峰(P<0.01),而后表达量无进一步上升(P>0.05).在不同浓度AngⅡ刺激下,PAPP-A、IGF-1表达量随着浓度的升高而增加(P<0.05),10-5mol/L时达高峰(P<0.01),进一步加大浓度表达量无进一步升高(P>0.05).Ox-LDL刺激过的细胞不间时间点以及不同AngⅡ浓度下表达最明显高于同一时间及同一浓度时未刺激细胞的表达量(P<0.05).结论 在一定的作用时间和浓度范围内,AngⅡ呈浓度和时间依赖性升高PAPP-A、IGF-1,从而影响动脉粥样硬化斑块的稳定性而导致急性冠脉综合症的形成,Ox-LDL可以促进这种作用.