补肾活血祛风方对阿霉素肾病大鼠肾组织NF-κB及IL-18水平的干预研究

目的 观察补肾活血祛风方对阿霉素肾病大鼠肾组织中核因子-κB(NF-κB)及白介素-18(IL-18)表达的影响,探讨补肾活血祛风方治疗肾病综合征的可能机制.方法 60只SD雄性大鼠随机分为5组:空白组、模型组、泼尼松组、补肾活血祛风方组和补肾活血祛风方+泼尼松组.空白组和模型组每天给予蒸馏水灌胃;泼尼松组给予醋酸泼尼松片混悬液灌胃,剂量为6 mg/kg;补肾活血祛风方组给予补肾活血祛风方药液灌胃,剂量17.19 g/kg;补肾活血祛风方+泼尼松组上午以醋酸泼尼松片混悬液6 mg/kg灌胃,下午以补肾活血祛风方药液17.19 g/kg灌胃;连续灌胃4周.光镜和电镜观察肾组织病理结构变化;免疫组化法检测肾组织NF-κB-p65、IL-18的平均光密度;Real-time PCR法检测NF-κB-p65、IL-18的mRNA表达含量.结果 与空白组比,模型组电镜下观察足细胞广泛融合,NF-κB-p65及IL-18的平均光密度上调(P<0.05),NF-κB-p65及IL-18的mRNA表达上调(P<0.05).与模型组比,电镜下泼尼松组、补肾活血祛风方组、补肾活血祛风方+泼尼松组各组足细胞融合减轻,多呈节段性融合;泼尼松组、补肾活血祛风方组、补肾活血祛风方+泼尼松组NF-κB-p65、IL-18的平均光密度下调(P<0.05),NF-κB-p65、IL-18的mRNA表达下调(P<0.05).电镜下补肾活血祛风方+泼尼松组足细胞融合程度最轻;补肾活血祛风方+泼尼松组IL-18的平均光密度较补肾活血祛风方组和泼尼松组下调(P<0.05).结论 泼尼松组、补肾活血祛风方组、补肾活血祛风方+泼尼松组可能通过下调NF-κB-p65、IL-18的mRNA及其蛋白表达,改善大鼠足细胞融合程度,从而缓解肾脏炎症反应、延缓疾病进展,且补肾活血祛风方+泼尼松组在疗效上最优.     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球基底膜HSPG蛋白及mRNA表达的影响

目的 观察阿霉素肾病大鼠肾小球基底膜硫酸肝素蛋白多糖(HSPG)蛋白及其mRNA表达及祛风通络方对其表达的影响.方法 尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型,并随机分为A(空白对照,n=32)、B(模型,n=18)、C(祛风通络方,n=18)、D(祛风通络方+激素,n=18)、E(激素,n=18)、F(苯那普利,n=18)组,应用间接免疫荧光染色、RT-PCR分别检测各组大鼠肾小球基底膜HSPG的荧光分布和HSPG mRNA表达的变化.结果 造模成功后透射电镜示B组肾小球足突呈部分或弥漫性融合.干预结束后与B组相比,C、E组HSPG的荧光分布呈连续性或斑片状,平均荧光强度明显增强(P<0.01);D、F组HSPG的荧光呈不连续分布或点状分布,平均荧光强度增强(P<0.01).干预结束后与B组相比,各干预组HSPG mRNA的表达均上调(P<0.01),尤以C、F组明显.相关分析显示24 h尿蛋白定量与HSPG蛋白表达呈明显负相关(r=-0.7353,P<0.001).结论 肾小球基底膜HSPG的表达异常和分布改变是阿霉素肾病大鼠蛋白尿发生发展的重要机制,祛风通络方可能通过改变HSPG的表达和分布而达到治疗蛋白尿的目的 .     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠Pododcin mRNA表达及足细胞足突形态的影响

目的观察祛风通络方对阿霉素肾病大鼠Pododcin mRNA表达及足细胞足突形态的影响,探讨祛风通络方治疗肾病蛋白尿的分子生物学机制。方法 SD大鼠随机分为空白组和造模组,以阿霉素(6 mg/kg)尾静脉注射法造模,模型成功后将大鼠随机分为模型组、祛风组、激素组和苯那组,并给予相应干预。用RT-PCR法测定肾组织Podocin mRNA表达,透射电镜观察足细胞及足突形态变化。结果 (1)模型成功与空白组比较,造模组大鼠Podocin mRNA表达明显下调(P<0.01),足细胞足突融合甚至消失,足细胞有脱落、细胞数明显减少。(2)干预结束后与模型组比较,各干预组PodocinmRNA表达均上调(P<0.01);祛风组足细胞及足突形态改善明显。结论祛风通络方可能通过上调阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞Podocin mRNA表达,改善足细胞及足突形态结构而达到防治蛋白尿的目的。     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞 nephrin mRNA表达的影响

目的：观察阿霉素肾病(AN)大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达及祛风通络方对其表达的影响。方法：清洁级SD大鼠140只,随机抽取32只作为空白组,余108只建立AN大鼠模型,90只大鼠模型成功后随机分为模型组、祛风组、祛风+激素组、激素组和苯那组,给予相应干预,电镜检测超微结构变化,第0,3,5,7周应用间接免疫荧光技术、RT-PCR分别检测nephrin蛋白荧光表达分布和nephrin mRNA表达并进行组间比较。结果：模型成功时,透射电镜示AN大鼠肾小球足突呈部分或弥漫性融合。7周时与模型组相比,祛风组和激素组nephrin蛋白的荧光分布呈连续性或斑片状分布,荧光强度明显增强(P＜0.01);祛风组和激素组nephrin mRNA的表达明显上调(P＜0.01)。结论：Nephrin的表达异常是AN大鼠蛋白尿发生发展的重要分子机制,祛风通络方可上调AN大鼠足细胞nephrin的表达和分布而起保护肾小球滤过屏障的作用。     

温阳活血、养阴活血法对肾病模型大鼠作用的比较

目的比较温阳活血和养阴活血两种治则的中药方剂治疗原发性肾病综合征的疗效,探讨治疗儿童原发性肾病综合征的有效治法。方法用阿霉素(ADR)诱导一种类似人类微小病变肾病模型,选用中药温阳活血方、养阴活血方对模型进行治疗,并设正常组、模型组、强的松对照组。观察实验大鼠的一般情况、尿蛋白、血清蛋白水平、血脂水平、光镜下肾组织病理损伤的修复。结果温阳活血组尿蛋白、血脂水平明显降低,血清蛋白水平提高,肾脏病理损伤明显改善。养阴活血组尿蛋白、血脂水平均有下降,肾脏病理损害有改善。强的松对照组尿蛋白、血脂水平有所下降,血清蛋白水平有所提高,肾脏病理损伤有改善。结论温阳活血法、养阴活血法对肾病模型大鼠均有治疗作用,温阳活血方疗效较养阴活血方疗效好且作用更全面。     

复方鳖甲软肝方防治阿霉素肾病模型大鼠作用机制的实验研究

目的:探讨复方鳖甲软肝方防治阿霉素肾病模型大鼠肾小球硬化的作用机制。方法:将45只Wistar雄性大鼠,适应性喂养1周,测尿蛋白阴性后,随机分为正常组、假手术组、模型组、苯钠普利组、复方鳖甲软肝方组,每周测大鼠体重,每2周1次收集大鼠24h尿量,测24h尿蛋白定量,10周后处死大鼠,分离血清观察血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、胆固醇(Cho)、三酰甘油(TG)、总蛋白(TP)和清蛋白(Alb),应用HE、六胺银染色及Mallory染色,观察肾组织病理学改变,数据用SPSS11.0进行统计学处理。结果:复方鳖甲软肝方能够减轻阿霉素肾病模型大鼠肾组织病理损害,增加阿霉素肾病模型大鼠体重,减少尿蛋白排泄,提高血TP和Alb水平,降低BUN和SCr,改善肾功能。结论:复方鳖甲软肝方能减轻阿霉素肾病模型大鼠的肾脏病理损害,对阿霉素肾病模型大鼠肾小球硬化有一定的保护作用。     

祛风通络方对阿霉素诱导的肾病大鼠足细胞Synaptopodin、α-Actinin-4蛋白的影响

目的 探讨祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞Synaptopodin和α-Actinin-4蛋白的作用。方法 采用一次性尾静脉注射阿霉素(adriamycin,ADR)的方法,建立阿霉素肾病大鼠模型。3周后造模成功,进行24 h尿蛋白定量及血清生化项目检测。此后随机分为空白对照组(A组,n=12),模型组(B组,n=8),祛风通络方小、中、大剂量组(分别为C、D、E组,每组n=8)和阳性对照组(F组,n=8)。从第4周起,A组和B组给生理盐水,C、D、E组分别给祛风通络方1.0,2.1,4.2 g/ml,F组给泼尼松25 mg/kg。各组均灌胃给药,10 ml/kg,1次/d,连续28 d。期间进行24 h尿蛋白定量、血清生化指标检测,实验结束时用real-time PCR法及Western blot法检测足细胞骨架蛋白Synaptopodin mRNA、α-Actinin-4 mRNA及Synaptopodin、α-Actinin-4蛋白表达。结果 1各干预组均可有效减少尿蛋白,升高血浆白蛋白、降低总胆固醇的含量。2阿霉素肾病大鼠中α-Actinin-4 mRNA及蛋白表达升高,Synaptopodin mRNA及白表达下降。经祛风通络方干预后,各组Synaptopodin mRNA及蛋白表达均上调,α-Actinin-4 mRNA及蛋白表达下调。结论 祛风通络方对阿霉素肾病大鼠的治疗作用伴随着改变足细胞骨架蛋白Synaptopodin和α-Actinin-4表达的改变而实现。     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾小球滤过膜的影响

目的探讨祛风通络方对阿霉素肾病(AN)大鼠蛋白尿及肾小球滤过膜的影响。方法 56只雄性清洁级SD健康大鼠随机分为空白对照组(A组)和AN模型组,采用一次性尾静脉注射阿霉素(ADR)的方法,建立大鼠AN模型,空白对照组一次性尾静脉注射等量生理盐水,造模成功后再将模型组分为病理组(B组)、祛风通络方组(C组)、强的松组(D组)和贝那普利组(E组)。邻苯三酚红/钼酸盐法测定24 h尿蛋白量;取肾皮质经聚乙烯亚胺(PEI)染色检测大鼠肾小球滤过膜上AS的表达;免疫荧光技术检测Nephrin蛋白表达。结果①模型组大鼠于实验第21天时尿蛋白排泄较正常对照组明显增高(P<0.01),提示造模成功;药物干预后,各药物组大鼠尿蛋白排泄均显著下降,与病理组比较(P<0.01);②祛风通络方组比模型组大鼠肾小球滤过膜上阴离子位点、Nephrin蛋白表达明显上调(P<0.01)。结论祛风通络方能显著降低阿霉素肾病大鼠24 h尿蛋白定量,改善症状,上调肾小球滤过膜上AS及Nephrin蛋白表达。     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达的影响

目的：观察阿霉素肾病（AN）大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达及祛风通络方对其表达的影响。方法：清洁级SD大鼠140只,随机抽取32只作为空白组,余108只建立AN大鼠模型,90只大鼠模型成功后随机分为模型组、祛风组、祛风＋激素组、激素组和苯那组,给予相应干预,电镜检测超微结构变化,第0,3,5,7周应用间接免疫荧光技术、RT-PCR分别检测nephrin蛋白荧光表达分布和nephrinmRNA表达并进行组间比较。结果：模型成功时,透射电镜示AN大鼠肾小球足突呈部分或弥漫性融合。7周时与模型组相比,祛风组和激素组nephrin蛋白的荧光分布呈连续性或斑片状分布,荧光强度明显增强（P〈0.01）;祛风组和激素组nephrin mRNA的表达明显上调（P〈0.01）。结论：Nephrin的表达异常是AN大鼠蛋白尿发生发展的重要分子机制,祛风通络方可上调AN大鼠足细胞nephrin的表达和分布而起保护肾小球滤过屏障的作用。     

丹蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠治疗作用的观察

目的:观察益气养阴活血方丹蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠的治疗作用。方法:SD大鼠单侧肾脏结扎后链脲佐菌素腹腔注射制造糖尿病肾病大鼠模型,分为假手术组、模型对照组、益气养阴活血方(丹蛭降糖胶囊)低、中、高剂量组,分别给药6周后观察糖尿病肾病大鼠一般情况及血糖、糖化血红蛋白、尿量、24 h尿蛋白量。结果:模型大鼠给药前造模动物血糖、糖化血红蛋白、尿量、24 h尿蛋白量显著升高,给药6周后均能不同程度降低各指标。结论:益气养阴活血方(丹蛭降糖胶囊)可降低糖尿病肾病大鼠的血糖,改善糖尿病肾病大鼠肾功能,对糖尿病肾病有一定的治疗作用,为临床使用提供依据。