温热化疗对胃癌细胞的杀伤作用

目的：评价温热化疗对人胃癌细胞的体外杀伤作用。方法：6株人胃癌细胞（AGS，MKN45，SGC7901，NCI-N87，SNU—1和SNU-16）和临床病例来源胃癌细胞，处理分常温对照、温热、常温化疗和温热化疗4组；MTT评价细胞增殖和细胞毒作用；光镜动态观察细胞基本形态变化；透射电镜和荧光染色定性观察细胞死亡形式；流式细胞术定量分析凋亡和坏死比例。结果：根据MTT和光镜观察，温热和化疗对抑制胃癌细胞增殖具协同作用；联合温热处理能够增强胃癌细胞对CDDP的敏感性，温热化疗抑制胃癌细胞增殖和杀伤胃癌细胞的药物浓度远低于常温化疗；透射电镜和荧光染色显示温热化疗杀伤AGS和SNU—1细胞包括诱导凋亡和坏死两种形式，流式定量分析显示诱导凋亡是主要形式。结论：温热和化疗抑制胃癌细胞增殖具协同作用，温热增强胃癌细胞对化疗的敏感性；温热化疗杀伤胃癌细胞包括诱导凋亡和坏死两种形式，其中凋亡是主要形式。     

沙利度胺、5-氟尿嘧啶对胃癌细胞生长和凋亡作用的影响

 目的　探讨沙利度胺（Thal）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）单用和联合应用对MGC-803细胞株的抑制增生、诱导凋亡的作用。方法　采用 AO／EB染色荧光显微镜观察处理细胞的形态变化,MTT法检测对细胞的增生抑制作用,流式细胞术（FAM）定量检测对细胞的诱导凋亡作用。结果　在MTT分析中,单药Thal药物浓度≥25 mg／L、5-Fu单药各浓度组与空白对照组相比均可增加对MGC-803细胞的增生抑制率（P＜0.05）。在5-Fu剂量为25 mg／L时,联合用药组的增生抑制率增加更显著（P＜0.01）,但两个联合用药组之间差异无统计学意义（P＞0.05）;在5-Fu剂量均为12.5 mg／L时,联合使用沙利度胺50 mg／L或100 mg／L时与5-Fu 25 mg／L单药组相比差异均无统计学意义（P＞0.05）。而在FAM检测中,各实验组与空白对照组相比及各实验组两两比较,凋亡率差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论　Thal和5-Fu单用时对MGC-803细胞株均有抑制增生和诱导凋亡作用,联合应用时其作用明显增强,联合使用沙利度胺时可降低5-Fu的使用剂量。     

山奈酚对人胃癌MGC-803细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

目的:探讨山奈酚(kaempferol)对人胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用,以及诱导细胞凋亡和对细胞周期的影响. 方法:采用MTT法检测细胞存活率;DAPI染色法观察细胞的凋亡形态;彗星电泳技术和FCM检测不同浓度山奈酚对细胞中DNA的影响. 结果:山奈酚体外能明显抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖.用不同浓度(6.25、12.5、25、50和100 μmol/L)的山奈酚处理MGC-803细胞72 h后,细胞的生长抑制率分别为10.32%、13.95%、21.58%、35.18% 和58.13%,各药物处理组与对照组比较,P值均<0.01,呈剂量效应关系.50和100 μmol/L山奈酚分别作用细胞24、48、72和96 h后,结果显示药物作用的时间越长,对细胞的抑制作用越强,呈时间效应关系.DAPI染色结果显示,不同浓度药物组的细胞均有明显的细胞凋亡特征.30、60和120 μmol/L山奈酚作用于细胞72 h后,彗星电泳检测结果显示细胞后面均呈现拖尾现象,细胞头部平均光密度值较阴性对照组降低,彗星尾距较阴性对照组增加,各药物组与对照组比较,P值均<0.01,且与药物浓度呈相关性.FCM检测结果显示,浓度为30、60和120 μmol/L的山奈酚作用于细胞72 h后,出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期被阻滞于S期和G2/M期,各药物组凋亡率较阴性对照组均明显升高. 结论:山奈酚能抑制人胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导其凋亡.     

胰岛素增强5-氟尿嘧啶对体外结肠癌细胞的细胞毒作用

目的 观察胰岛素增强5-氟尿嘧啶(5-Fu)对结肠癌HCT-8细胞株和HT-29细胞株的细胞毒作用,探讨其增效作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测胰岛素和5-Fu联合应用对HCT-8细胞和HT-29细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析胰岛素对HCT-8细胞和HT-29细胞周期的影响.结果 于5.Fu应用前0-8h加入胰岛素,对结肠癌细胞的生长抑制率显著高于单用5-Fu组(P<0.01),以在5-Fu应用前4h加入胰岛素对细胞的生长抑制率最高,HCT-8细胞和HT-29细胞的生长抑制率分别为71.27%和70.71%.胰岛素浓度在0.8 mU/ml以上时,与5-Fu联用,对结肠癌细胞的生长抑制率高于单用5-Fu组(P<0.01).胰岛素浓度在0.8-8 mU/ml之间,细胞生长抑制率随着胰岛素剂量的增加而增高;但当胰岛素浓度在8-200 mU/ml之间时,细胞生长抑制率并未随胰岛素剂量的增加而增高,而是稳定在一定的水平.胰岛素作用于结肠癌HCT-8细胞和HT-29细胞后,各时点G_0/G_1期细胞百分比均明显低于对照组(P<0.01).胰岛素作用6、12和24h,HCT-8细胞和HT-29细胞s期百分比明显增高(P<0.01),其中以作用6h最高(HCT-8细胞和HT-29细胞分别为39.18%和36.42%),之后逐渐降低.结论 胰岛素可以增强5-Fu对结肠癌细胞的细胞毒作用.胰岛素作用细胞后使S期细胞增多.是其增强5-Fu细胞毒作用的主要机制之一.     

蒙药升阳十一味丸对胃癌细胞抑制作用及其机制研究

目的研究蒙药升阳十一味丸对体外培养的人胃癌MGC-803细胞系抑制作用,并探讨其作用机理.方法通过MTT法检测药物作用后细胞的增殖抑制率,倒置光显微镜、透射电镜、Hochest33342/PI荧光染色观察细胞形态学变化,检测凋亡细胞.结果MTT显示,蒙药升阳十一味丸能抑制MGC-803细胞的增殖,其IC50值在2.0 mg/ml左右;光镜、电镜下可见凋亡细胞,凋亡细胞的比率较对照组明显增加.结论蒙药升阳十一味丸对胃癌MGC-803细胞具有明显的抑制作用,这种抑制作用可能是通过诱导细胞凋亡而实现的.     

吡柔比星与温热协同对胃癌组织的体外作用

目的 比较吡柔比星（Pirarubicin,THP）和其他化疗药物对胃癌组织温热协同的作用,探讨化疗药物与温热化疗的协同作用机制。方法 利用36个病例的手术切除胃癌组织,建立人胃癌组织体外立体培养作用模型,MTS-PMS比色法检测组织培养物活性以了解化疗药物以及温热化疗的抑瘤效果。TUNEL荧光检测原位细胞凋亡,HE染色研究评价药物对胃癌组织在组织形态学上的改变并进行电镜观察。结果 DDP、MMC和THP对胃癌组织的杀伤均具有较强的温热协同关系（P=0．000）,THP单独处理和温热协同处理均具有较强的抑制作用,和其他3种药物抑制率比较具有显著性差异（P〈0．05）。THP和温热协同处理效果和胃癌病例组织学分级有关（P=0．000）,而与年龄、性别、肿瘤大小、临床分期和术前CEA水平无关（P〉0．05）。THP温热协同处理凋亡指数和其他3种药物比较具有显著性差异（P〈0．05）。HE染色表明,THP和温热处理后,胃癌组织大部崩解,细胞变性坏死。电镜分析表明经THP和温热协同处理后细胞胞膜内陷,胞浆空泡化,并出现染色质浓聚,同时核膜消失。结论 THP对胃癌组织具有良好的温热协同效应和肿瘤杀伤效果,具有进一步临床研究价值。     

吡柔比星在体外胃癌细胞温热化疗中协同作用的探讨

目的：研究吡柔比星（Pirarubicin，THP）在体外对胃癌细胞温热化疗的协同作用，探讨其协同作用机制．方法：建立人胃癌细胞MGC-803作用模型，利用MTS—PMS比色法检测细胞活性、测定生长曲线并计算细胞倍增时间；流式细胞仪测定细胞周期；Annexin V—FITC方法测定细胞凋亡。结果：THP对MGC-803细胞的杀伤具有较强的温度依赖关系，其作用在39℃～45℃温度区间内随温度升高而加强。THP对癌细胞的杀伤具有剂量和时间依赖关系．随药物浓度增加或处理时间的延长而增强。经THP和温热处理后，MGC-803细胞生长速度减慢，细胞倍增时间延长（P〈0．01）。THP和温热协同处理后，处于S期的细胞增多，G2／M期细胞减少，与单纯加温或单纯加药组相比差异显著（P〈0．05），细胞凋亡与坏死比例升高，与单纯加温或单纯加药组相比差异显著（P〈0．01）。结论：THP对胃癌细胞具有良好的温热协同杀伤效果．具有临床探讨价值．     

E2F-1基因过表达影响胃癌MGC-803细胞对化疗药物敏感性的研究

目的:构建E2F-1真核表达载体,建立稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株,探讨E2F-1基因过表达对胃癌MGC-803细胞化疗敏感性的影响.方法:应用Trizoi法从胃癌的癌组织中提取mRNA逆转录合成cDNA,按Gene-Bank公布的E2F-1基因序列设计带有酶切位点的引物并行扩增获得E2F一1的ORF片段;然后经限制性内切酶EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选.用脂质体Lipofectamine2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株.实时定量PCR(real-timequantitative PCR)和蛋白印迹(Western blotting)技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况.四唑蓝(MTT)法检测MGC-803/E2F-1组(实验组)、MGC-803/EV组(阴性对照组)和MGC-803组(未转染组)细胞对化疗药物的敏感性.结果:重组载体pCMV-E2F-1-HA2经EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的E2F-1基因之ORF完全一致.证明目的基因已成功克隆入真核表达载体,获取具Genectin抗性的细胞克隆,并进行了扩增.RT-PCR和Westernblotting实验证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1.MTT法检测发现,5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)对MGC-803/E2F-1组细胞的抑制率分别为71.45%、74.03%、76.72%,均明显高于MGC-803/EV组(45.58%、53.69%、54.58%)和MGC-803组(53.70%、54.67%、55.05%)(P<0.05).结论:成功构建了真核表达载体pCMV-E2F-1-HA2,并建立了稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株MGC-803/E2F-1.E2F-1过表达增强了胃癌细胞对化疗药物的敏感性.     

术前区域性射频热疗同步靶动脉热灌注化疗对胃上部癌细胞形态、增殖和凋亡的影响

胃上部癌（proximal gastric carcinonm，PGC）指发生于胃上1／3部位的胃癌，按照1998年日本胃癌分类英文版的定义，胃上部癌包括贲门癌和非贲门上部癌。贲门癌指癌中心位于胃-食管连接部上下2．0cm以内，非贲门上部癌指癌中心位于胃底及胃小弯上1／3处。。PGC由于解剖学和淋巴引流特征板易发生淋巴结转移，常规手术加术后化疗或术前化疔的效果不理想。     

一株对LAK细胞杀伤耐受的胃癌细胞株的建立及其相关生物学特性的研究

人胃癌细胞系MGC-803经反复与LAK细胞共培养获得对LAK细胞杀伤耐受的特性。在反复共培养十个周期后，残留细胞数量逐渐增多并达到稳定。在八小时^3H-TdR释放细胞毒实验中，当效靶比为40：1时，LAK细胞对亲代细胞MGC-803^p杀伤率为90%，而对耐受株MGC-803^R的杀伤率仅为40%。     

腹腔热灌注化疗治疗结直肠癌腹膜癌

结直肠癌局域性进展可形成腹膜癌，大约10％的患者初诊即发现腹膜癌，有4％～19％的患者在根治术后随访期发生腹膜癌，25％～35％的复发患者以腹膜癌为唯一表现。全身化疗对此类腹膜癌只是姑息性治疗，中位生存期不足6个月。缩瘤术加腹腔热灌注化疗则可清除宏观和微观癌细胞。荷兰癌症中心的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床试验总结分析表明，接受完全缩瘤术加腹腔热灌注化疗者的中位生存期可达42．9个月，1、3、5年生存率分别是95％、56％和43％，明显高于传统治疗方法，已成为英国、法国、意大利、荷兰、西班牙和澳大利亚等国的标准治疗。     

腹腔热灌注化疗治疗结直肠癌腹膜癌

结直肠癌局域性进展可形成腹膜癌,大约10％的患者初诊即发现腹膜癌,有4％～19％的患者在根治术后随访期发生腹膜癌,25％～35％的复发患者以腹膜癌为唯一表现。全身化疗对此类腹膜癌只是姑息性治疗,中位生存期不足6个月。缩瘤术加腹腔热灌注化疗则可清除宏观和微观癌细胞。荷兰癌症中心的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床试验总结分析表明,接受完全缩瘤术加腹腔热灌注化疗者的中位生存期可达42．9个月,1、3、5年生存率分别是95％、56％和43％,明显高于传统治疗方法,已成为英国、法国、意大利、荷兰、西班牙和澳大利亚等国的标准治疗。     

青蒿琥酯对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究青蒿琥酯对胃癌细胞增殖和凋亡的作用,探讨其对胃癌作用机制,为进一步的临床研究及应用提供依据。方法:采用MTT噻唑蓝法观察青蒿琥酯对胃癌细胞MGC-803生长增殖的影响,流式细胞仪和透射电镜检测药物作用前后细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应测定药物作用前后凋亡抑制基因survivin表达的变化。结果:青蒿琥酯在3.125~50μg/ml浓度范围内呈剂量依赖性方式抑制胃癌细胞MGC-803的生长增殖,并能显著抑制胃癌细胞survivin基因的表达。流式细胞仪检测出凋亡峰,透射电镜下可见部分MGC-803细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论:青蒿琥酯能显著抑制胃癌细胞生长,并诱导胃癌细胞凋亡。     

进展期胃癌术中腹腔热灌注化疗临床研究

目的探讨进展期胃癌术中腹腔热灌注化疗对防治腹膜转移的疗效及安全性。方法对40例进展期胃癌患者进行回顾性分析,热化疗组(实验组)20例行根治性手术联合术中腹腔热灌注化疗(H IPEC),采用奥沙利铂350 mg溶于右旋糖酐4000 m l中,加热至41.5℃~42.5℃腹腔内循环灌注40~60 m in;选择同期单纯根治性手术治疗的20例胃癌患者作为对照组,对比分析两组患者的临床指标及预后。结果热化疗组仅少数病例治疗后出现短期血压降低、心率增快及肝肾功能、凝血功能指标异常,两组并发症发生率无明显差异;术后腹腔种植转移率热化疗组为5.0%(1/20),对照组15.0%(3/20);1,2年生存率热化疗组分别为90.0%(18/20)和75.0%(15/20),对照组分别为80.0%(16/20)和60.0%(12/20)。结论 H IPEC可有效防治腹膜转移、提高生存率,且并发症少,可作为进展期胃癌术中的辅助治疗。     

胃及直肠、结肠癌术前区域性动脉内化疗联合热疗的临床应用

目的：研究胃及直、结肠癌外科术前应用区域性动脉内新辅助化疗联合区域性热疗的临床疗效。方法：胃及直肠、结肠癌患者共48例,分为研究组26例和对照组22例。均采用LFP方案化疗(氟尿嘧啶 四氢叶酸 奥沙利铂)。研究组26例,肿瘤热疗系统下对肿瘤部位加温,然后在1 h内通过肿瘤靶动脉行灌注化疗,一月内行肿瘤切除术,术后再酌情选择区域内动脉化疗并腹腔泵内化疗或全身静脉化疗联合腹腔泵内化疗。对照组22例,肿瘤切除术后行全身静脉化疗联合腹腔泵内化疗。结果：对照组相比,治疗组外科术后生存时间延长,P值＜0．05,且手术根治率提高。结论：外科手术前行区域性动脉内新辅助化疗联合区域性热疗治疗胃及直肠、结肠癌较传统单纯术后全身静脉化疗生存期延长,毒副反应小,手术根治率高。     

整体护理在胃肠道肿瘤患者围手术期腹腔热灌注化疗的作用

目的探讨整体护理在胃肠道肿瘤患者围手术期腹腔热灌注化疗中的作用。方法将实施整体护理的40例经腹腔热灌注化疗的胃肠道肿瘤患者设为观察组,将实施常规护理的40例经腹腔热灌注化疗的胃肠道肿瘤患者设为对照组,比较两组患者满意度、治疗效果和不良反应发生情况。结果观察组患者满意度、治疗效果均好于对照组,不良反应的发生率低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对围手术期行腹腔热灌注化疗的胃肠道肿瘤患者进行整体护理,可提高满意度和临床疗效,减少不良反应的发生,从而能提高患者生存质量。     

结肠癌干细胞研究进展

结肠癌干细胞(Co-CSC)是结肠癌中一小部分具有自我更新、增殖和多向分化能力的细胞亚群,在肿瘤的发生、发展、转移中起着重要作用.结肠癌干细胞的研究将为肿瘤的治疗提供新的策略和有效的靶点.     

参芪扶正注射液在胃癌腹腔温热灌注化疗中的应用

目的探讨参芪扶正注射液在胃癌患者腹腔温热灌注化疗中的作用。方法将60例进行术后腹腔温热灌注化疗的胃癌患者分为两组,实验组加用参芪扶正注射液。观察治疗期间出现的不良反应及终止腹腔化疗的例数,治疗前、后检查外周血WBC、Hb、PLT及T淋巴细胞亚群（CD4、CD8、CD4／CD8）的变化。结果实验组的不良反应的发生率及终止腹腔化疗的例数明显少于对照组,有统计学差异（P〈0．05）。实验组的WBC计数下降明显低于对照组,差异有显著性（P〈0．05）。实验组CD4、CD4／CD8明显提高,与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论胃癌术后腹腔温热灌注化疗合并应用参芪扶正注射液可明显改善免疫功能,防止白细胞下降,帮助肿瘤患者顺利完成治疗,最终提高患者生活质量。     

乳腺癌肺转移的放化疗评价

目的以乳腺癌肺转移患者进行放、化疗评价。方法68例乳腺癌肺转移病人中8例为单发转移灶,行局部放疗合并化疗;60例为多发转移灶,给予CMF、CAF、CAP三阶梯方案化疗。结果8例单发转移灶放疗后CR3例,PR3例,合并化疗后CR62．5％,PR37．5％;60例多发转移灶病人先予CMF方案,CR28．3％,PR23．3％,缓解率51．7％,无效病人依次使用CAF、CAP方案,CR分别为11．6％,19．0％。三方案毒性反应依次增加。结论放疗对局部转移灶的控制是重要的,CMF应为乳腺癌肺转移的首选方案,CMF、CAF、CAP依次使用有利于提高完全缓解率,延长生存期。     

吲哚美辛抗人结肠癌HCT116细胞双向电泳蛋白质表达谱的差异分析

目的分析吲哚美辛(indomethacin,IN)对人结肠癌细胞系HCT116蛋白质表达谱的影响,为研究IN抗结肠癌作用的相关蛋白提供新的方法.方法应用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离IN-处理组和未处理组HCT116细胞的总蛋白,银染显色,ImageMaster 2D图像分析软件比较分析IN-处理组和未处理组HCT116细胞系的双向凝胶电泳图谱并识别差异表达的蛋白质.结果获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的HCT116细胞系的双向凝胶电泳图谱,IN-未处理组与处理组蛋白质点数为:1256±50,1169±36;匹配率为:93.0%,90.6%.IN-未处理组的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)方向的偏差是0.896±0.177 mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdo-decylsufate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)方向的偏差为1.106±0.289 mm.比较分析IN-处理组和未处理组HCT116细胞的双向凝胶电泳图谱,发现IN-处理组和未处理组共有45个差异点,IN-处理组有9个蛋白质点表达上调,34个蛋白质点表达下调,2个蛋白质点仅在IN-未处理组表达.结论首次建立了IN-处理和未处理HCT116细胞的双向凝胶电泳图谱,识别了45个差异表达的蛋白质点,对这些差异蛋白质点的鉴定将为揭示IN抗结肠癌作用的机理提供实验依据.