RNA 原位杂交法检测弓形虫对BALB/c小鼠睾丸及附睾侵入的实验研究

目的 探讨刚地弓形虫能否通过血睾屏障侵入小鼠的睾丸及附睾组织.方法 选用9～10周龄雄性BALB/c小鼠20只,随机分为感染组(16只)和正常对照组(4只),其中感染组小鼠每只腹腔注射含2.5×103 个弓形虫速殖子的PBS 0.2 ml,建立弓形虫致小鼠感染的动物模型,对照组给予等量的无菌PBS.分别于攻击感染后第1、3、5、7天各处死4只感染组小鼠、1只正常对照组小鼠,取睾丸及附睾,应用RNA原位杂交法检测睾丸及附睾组织中的弓形虫.结果 对照组及感染后第1天的感染组小鼠睾丸及附睾中未检出速殖子;实验组在感染后第3天小鼠睾丸及附睾内偶尔可见弓形虫速殖子,以后随着感染时间的延长睾丸及附睾中的弓形虫速殖子数量逐渐增多,且不同感染时间点同一组织内的弓形虫速殖子的数目差别具有显著的统计学意义.结论 刚地弓形虫可通过血睾屏障侵入小鼠的睾丸及附睾组织中.     

细粒棘球蚴致敏反应机制和分子靶标的生物信息学分析

目的 基于生物信息学分析细粒棘球蚴致敏反应机制和分子靶标。随机分为3组,每组3只,分别为感染未致敏组、感染致敏组、健康对照组。感染未致敏组小鼠经腹腔注射原头节悬液（0.2 ml/鼠）,90 d后腹腔注射生理盐水（0.2 ml/鼠）;感染致敏组小鼠经腹腔注射原头节悬液（0.2 ml/鼠）,90 d后腹腔注射粗制囊液致敏（0.2 ml/鼠）,健康对照组小鼠注射等量生理盐水。注射后1 h,取各组小鼠的脾组织提取RNA进行转录组测序,通过生物信息学分析找到差异表达基因,使用edgeR （以RNA-Seq by expectationMaximization RSEM进行定量）软件进行表达差异显著性分析,用String数据库和Cytoscape软件对差异基因作网络互作分析,并将得分设置为> 500;使用cytoHubba获取节点的度（degree）筛选degree大于3的节点作展示;使用DAVID在线富集分析工具进行分析,分析结果使用R语言ggplot2进行可视化。结果感染致敏组与健康对照组有743个基因差异表达,其中568个上调表达基因和175个下调表达基因。感染未致敏组与健康对照组中有...     

弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质质谱分析的初步研究

目的 分析弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质组学变化。方法 16只同窝配对的C57BL/6J小鼠, 随机分成弓形虫急性感染组和对照组, 每组8只。弓形虫急性感染组每鼠腹腔感染经CF?11纤维素纯化的RH株弓形虫速殖子 （1×104 /ml） 0.2 ml, 对照组每鼠腹腔接种0.2 ml 灭菌生理盐水。感染后4 d, 处死全部小鼠, 应用弱阳离子 （WCX） 纳米磁性微球捕获小鼠血清蛋白, 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 （MALDI?TOF?MS） 技术检测两组小鼠血清蛋白质变化, 并采用Au? toflex analysis 与Clin ProTools 软件进行分析与比较。结果 在分子量为1 000~16 000 Da区段, 与对照组小鼠血清蛋白指纹图谱比较, 弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质谱有13种蛋白表达差异有统计学意义, 其中9种蛋白质表达上调, 4种蛋白质表达下调。表达上调的多肽质荷比 （m/z值）分别为1 932.76、 1 976.85、 2 090.53、 5 004.5、 5 776.01、 5 803.05、 5 847.99、 5 877.51和7 501.58, 表达下调的多肽m/z值分别为1 866.40、 4 063.71、 8 120.31和8 203.83。结论 弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质组发生显著改变, 采用WCX纳米磁性微球联用MALDI?TOF?MS技术可检出弓形虫急性感染小鼠血清中的特异性蛋白标志物。     

隐性弓形虫感染的复发及包囊的形成

<正> 本文应用药物诱发隐性弓形虫感染的复发,探讨了虫血症出现及宿主脑内包囊形成的规律,旨在为亚临床型弓形虫病复发的防治和诊断提供实验依据,并对包囊形成的动态进行了分析。 实验用动物为std/ddy小鼠、虫株为FUK无毒株和BEV低毒株。用Ficoll-Pague密度梯度离心法自鼠脑分离包囊腹腔感染小鼠,每周取5只小鼠血0.5ml,抗凝,同时摘取颌下淋巴结2粒及肝组织0.1g,分别轻碾成匀浆。将上述待检材料腹腔接种正常鼠,3周后检查接种鼠脑内包囊,同时用乳胶凝集试验(LAT)检测弓形虫抗体以助诊断。感染后第六周始,每日经后肢皮下注射强的松龙连用两周,用药物前后按上法分离弓形虫,并用LAT和染色试验(DT)鉴测抗体动态,同时取血清进行免疫印迹分析。包囊检查系取鼠脑组织数取每克组织包囊数。 结果见到,小鼠腹腔感染FUK株包囊后1周时,     

弓形虫感染对雌鼠性器官凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响

目的 采用弓形虫感染雌性小鼠,观察弓形虫对卵巢、输卵管、子宫、阴道等性器官组织细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响,分析和探讨凋亡调控蛋白bax和bcl-2的表达是否与生殖毒性有关.方法 10周龄的处女鼠18只,随机分为感染组和正常对照组,9只/组.感染组腹腔注射纯化弓形虫速殖子0.2ml(160个/只),正...     

肾综合征出血热R_(22)病毒对孕鼠垂直传播实验

肾综合征出血热（HFRS）垂直传播途径已被证实’‘’，本文特对传播途径进行研究，报告如下。1材料与方法1．1毒株标准毒株R22。1．2实验动物昆明系小鼠。滤纸采尾血IFAT阴性为实验鼠。1．3感染方式以取毒株R。。制成10‘悬液，于孕鼠颈后皮下接种0．05ml，接种后7日内死亡为非特异性死亡。发病孕鼠于濒死解剖，14天尚存活的孕鼠解剖。1．4标本的采集胎鼠采用组织印片”‘，无菌取胎鼠脏器组织，用定性滤纸吸去血液及渗出液，以切面压印于经60oC预热的载玻片上，每张玻片压印三个点，自然干燥，以冷丙酮固定，凉于，做病毒抗原检测。尿…     

先天性弓形虫感染胎鼠脑组织蛋白差异分析

目的检测先天性弓形虫感染胎鼠脑组织差异蛋白并分析其功能,为先天性弓形虫病的发生机制研究提供理论基础。方法选取9~10周龄BALB/c孕鼠20只,随机分为正常对照组和感染组,每组10只。于妊娠第10d,感染组每只小鼠腹腔注射经胰酶消化的弓形虫速殖子40个/0.2ml;正常对照组腹腔注射无菌PBS溶液0.2ml/只(0.01mol/L,pH 7.3)。于妊娠第20d处死孕鼠,取胎鼠脑组织,采用Bradford法测定蛋白含量;采用双向凝胶电泳分离胎鼠脑组织蛋白,运用ImageMaster 2D软件分析差异蛋白,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析差异蛋白点的肽指纹谱(PMF),运用Mascot软件在SWISS-PROT数据库中对差异蛋白进行比较与评判,运用David软件对差异蛋白进行生物信息学分析。结果两组胎鼠脑组织均分离出约500个蛋白点,经蛋白质胶图分析鉴定出显著差异蛋白点15个,分子质量单位(Mr)多分布于(8~48)×103之间,等电点(pI)在3~10之间。在弓形虫感染胎鼠脑组织低表达的15个差异蛋白点经过鉴定和功能分析,主要是以下6种:结蛋白,肌动蛋白,血清白蛋白,葡萄糖调节蛋白,蛋白质二硫键异构酶和膜联蛋白。结论弓形虫感染胎鼠脑组织中有6种差异蛋白低表达,弓形虫可能通过降低这些蛋白的表达量来影响胎鼠脑组织的正常结构、物质转运和调节功能等,从而引发先天性弓形虫脑病。     

刚地弓形虫感染致小鼠睾丸细胞DNA的损伤作用

目的探讨刚地弓形虫感染对小鼠睾丸细胞DNA的损伤作用。方法选用9～10周龄雄性BALB/c小鼠20只,随机分为对照组(CG)和3个染虫组(G1、G2和G3)。采用腹腔注射法建立小鼠刚地弓形虫感染的动物模型,CG组注射PBS 0.2 ml/只,染虫G1、G2和G3组各注射纯化刚地弓形虫速殖子悬液0.2 ml,剂量分别为2.5×10~3个、5×10~3个和1×10~4个。应用单细胞凝胶电泳(彗星实验)检测睾丸细胞DNA的损伤。结果对照组和3个染虫组的彗星实验尾矩分别为10.94±7.57、40.37±6.25、69.76±3.97和79.16±6.36;Olive尾矩分别为10.57±6.72、31.39±4.59、48.66±4.60和53.87±6.55,对照组和实验组彗星尾矩和Olive尾矩差异有统计学意义(P<0.01)。结论弓形虫感染可致小鼠睾丸细胞DNA不同程度的损伤。对小鼠有生殖遗传毒性。     

刚地弓形虫感染致小鼠生殖细胞DNA损伤的作用

目的 探讨刚地弓形虫感染对小鼠睾丸细胞DNA的损伤作用.方法 选用9～10周龄雄性BALB/c小鼠20只,随机分为4组,每组5只,分为正常对照组(CG)和3个染虫组(G1,G2,G3).采用腹腔注射法建立小鼠刚地弓形虫感染的动物模型,CG组每只注射PBS 0.2 ml;染虫G1,G2,G3组注射纯化的刚地弓形虫速殖子悬液,每只注射刚地弓形虫速殖子的量依次为2.5×10 3、5×10 3、1×10 4,注射体积均为0.2 ml,应用单细胞凝胶电泳检测睾丸细胞DNA的损伤. 结果 正常对照组和染虫组的尾距分别为10.94±7.57、40.37±6.25、69.76±3.97、79.16±6.36,olive尾距分别为10.57±6.72、31.39±4.59、48.66±4.60、53.87±6.55,G1-G3组与CG组比较,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 弓形虫感染可导致小鼠睾丸生殖细胞DNA不同程度的损伤.     

刚地弓形虫感染孕鼠胎盘组织中中性粒细胞和IL-17与不良妊娠结局的关系

目的 探究孕鼠胎盘中性粒细胞和炎性因子白细胞介素17 (IL-17)在孕期刚地弓形虫(简称弓形虫)感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法 将C57BL/6孕鼠随机分为未感染组和感染组(每组6只),感染组孕鼠在孕8 d腹腔注射0.2 ml弓形虫RH株速殖子悬液(约400个速殖子),未感染组孕鼠腹腔注射等量灭菌PBS。于孕14 d采用颈椎脱臼法处死孕鼠,解剖观察并记录妊娠结局。取胎盘组织,制备石蜡切片,经苏木苏-伊红(HE)染色后观察胎盘组织学改变和多形核粒细胞的浸润情况,并计算浸润指数。制备胎盘组织单细胞悬液,采用流式细胞术检测胎盘免疫细胞中中性粒细胞。采用免疫组织化学染色检测胎盘组织中弓形虫的分布、定位及IL-17的表达水平(灰度值),采用Spearman相关性分析方法分析IL-17的表达水平与中性粒细胞浸润指数的关系。两组间数据比较采用独立样本Student’s t检验。结果 感染组孕鼠出现弓背、耸毛和行动迟缓等症状,胎鼠和胎盘出现明显出血及淤血点,胎鼠发育不良;未感染组孕鼠无异常表现,胎鼠和胎盘发育正常。感染组孕鼠的流产率为82.35%(42/51),高于未感染组的4.08%(2/4...     

Diclazuril单用或与乙胺嘧啶联用对小鼠急性弓形虫感染的治疗

作者早先的研究表明Diclazuril作为小鼠弓形虫感染的预防性用药具有明显的效果。本文意在进一步研究Diclazuril在小鼠急性弓形虫感染中的治疗作用。 采用HSD:ICR雌鼠,以细胞培养收集的RH株速殖子按1×10~4/只于背部肩胛皮下接种,建立小鼠急性感染模型。将Di-clazuril和乙胺嘧啶溶于二甲基亚砜中经管饲法给药治疗,给药时间、配伍及剂量分别如     

弓形虫感染雄性小鼠对生育影响的研究

目的观察弓形虫急性感染雄性小鼠后对其生育能力的影响。方法实验组雄鼠急性感染弓形虫后和对照组雄鼠同时与性成熟雌鼠分笼配对饲养,观察其受孕、产仔情况及仔鼠的身长、体重情况。取雄鼠生殖器官及丘脑作病理切片,观察弓形虫感染后对雄鼠睾丸、附睾、输精管、前列腺及生殖中枢所致病理变化。结果急性感染弓形虫的雄鼠配对平均产仔鼠数为10只,对照组平均产仔鼠数为15只,差异显著(P<0.05)。两组仔鼠身长、体重差异无显著性意义(P>0.05)。病理学检查实验组雄鼠睾丸、附睾、输精管、前列腺、丘脑均出现明显病变,睾丸中仅见初级、次级精母细胞,少见或不见成熟精子。附睾管中精子明显少于正常鼠。输精管正常结构改变。结论弓形虫急性感染雄性小鼠可致生殖系统明显病变。成熟精子减少或无精,导致雄性不育。     

扁桃酸对小鼠实验感染弓形虫的疗效

用扁桃酸对急性弓形虫感染小鼠进行实验治疗,动态小鼠感弓形虫后腹水中弓形虫数量的变化,光镜结构与超微结构的改变。在小鼠感染弓形虫２４ｈ、７２ｈ将小鼠解剖及小鼠发病死亡后取小鼠腹水,分别计数试验组和对照组各时间腹水中弓形虫数,将腹水片做Ｇｉｅｍｓａ染色光镜下观察虫体结构变化及用腹水制作电镜切片。结果显示,试验组小鼠３个不同时间腹水中弓形虫民对照组相比均明显减少,光镜观察可见组小愎水中弓形虫形态异常,虫     

弓形虫慢性感染对小鼠脑内葡萄糖代谢影响的研究

目的探讨弓形虫慢性感染对小鼠脑内葡萄糖代谢的影响。方法将30只SPF级ICR小鼠随机分成弓形虫感染组和正常对照组,感染组每只小鼠口服感染弓形虫PRU株包囊悬液0.3m（l含包囊10个）,对照组口服0.3ml生理盐水。小鼠感染弓形虫6个月后,应用MicroPET扫描脑内葡萄糖代谢,结束后解剖小鼠进行脑组织病理学观察。结果与正常对照组小鼠相比,弓形虫慢性感染6个月后,＂无症状＂的感染小鼠脑内葡萄糖代谢均显著下降,脑组织中可见大小不一、数量不等的包囊,脑膜下有大量淋巴细胞浸润、血管充血、小血管淋巴细胞袖管形成。结论弓形虫慢性感染可造成宿主脑内葡萄糖代谢下降,神经元变性或细胞丢失。     

孕鼠弓形虫感染对胎盘激素水平的影响

目的通过检测弓形虫感染孕鼠胎盘分泌的胰岛素生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)含量和11β-羟基类固醇脱氢酶-2(11β-HSD2)的表达,分析弓形虫感染对孕鼠胎盘激素水平和胎鼠发育的影响。方法腹腔接种弓形虫速殖子0.2ml/只(含50个速殖子)感染孕8d小鼠,分别于感染后12、14、16和18d处死,取胎盘组织,用酶联免疫吸附试验检测IGF-Ⅱ含量,用免疫组织化学法检测11β-HSD2的表达。未感染孕鼠做健康对照。结果健康对照组孕鼠胎盘组织IGF-Ⅱ含量随妊娠天数的增加逐渐升高,弓形虫感染组IGF-Ⅱ含量先降低后升高。IGF-Ⅱ含量不同妊娠天数组内比较差异有统计学意义(P<0.05),相同妊娠天数组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。11β-HSD2含量,不同妊娠天数健康对照鼠差异有统计学意义(P<0.05),不同妊娠天数弓形虫感染鼠含量差异无统计学意义(P>0.05);妊娠14d、16d、18d组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论弓形虫感染鼠孕中期,胎盘IGF-Ⅱ含量及11β-HSD2表达降低,可能影响胎盘血管形成及糖原合成与转运及进入胎儿体内糖皮质激素的含量,从而导致胎儿发育异常。     

香菇多糖预处理对急性弓形虫感染小鼠中枢神经系统损伤的保护性作用研究北大核心CSCD

目的探究香菇多糖预处理对急性弓形虫感染小鼠脑中枢神经系统的保护性作用。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组(NC)、模型组(TDI)和香菇多糖预处理组(pre-10dLNT TDI)。弓形虫感染前10d,pre-10dLNT组小鼠连续10d腹腔注射LNT(1mg/kg体重,1次/d),弓形虫感染后无任何处理;TDI组小鼠腹腔注射弓形虫悬液0.5 mL/只鼠;NC组小鼠感染前10d开始腹腔注射同等体积的生理盐水(1次/d)。通过观察小鼠的死亡时间及数量计算各组小鼠的存活率,使用流式细胞仪检测感染后第8d小鼠脑组织中CD8+IFN-γ+T细胞百分比,ELISA法检测感染后第4d和第8d小鼠外周血中IFN-γ、GABA和DA水平,应用SoftMax Pro 4.3.1LS软件绘制标准曲线计算各项指标的含量(pg/ml)。采用Grapad 8.0软件进行处理和分析。结果TDI组小鼠第8d存活率为0%,pre-10dLNT TDI组小鼠第8d存活率为60%;与NC组相比,TDI组和pre-10dLNT TDI组CD8+IFN-γ+T细胞亚群水平均明显增高;与TDI组小鼠相比,pre-10dLNT预处理明显降低了弓形虫感染的C57BL/6J小鼠脑组织中CD8+IFN-γ+细胞数量(P<0.01)、明显降低了小鼠第4d和8d的外周血中IFN-γ产生水平(P<0.05;P<0.01)、第8d小鼠外周血中DA和GABA的产生水平显著增加(P<0.01)。结论LNT预处理可以显著提高急性弓形虫感染小鼠的存活率,通过减少CD8+T细胞通过血脑屏障进入CNS,降低神经系统的广泛炎症反应,通过降低脑组织中CD8+IFN-γ+T细胞数量,调节神经递质的分泌水平,从而改善小鼠脑部的炎症反应,对急性弓形虫小鼠中枢神经系统的损伤具有明显的保护作用。     

弓形虫感染大鼠外周血T细胞亚群动态变化

目的观察弓形虫感染大鼠外周血T淋巴细胞亚群的动态变化。方法将58只清洁级SD成年大鼠随机分成9组,其中8组为实验组,1组为对照组,实验组每鼠腹腔注射2×105/LCF-11纤维素纯化的活弓形虫速殖子悬液2ml,对照组腹腔注射2ml生理盐水,并留4只为正常对照鼠。分别于弓形虫感染后1、3、7、14、28、35、42、60d时取大鼠外周全血,用流式细胞术检测外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+百分比。结果弓形虫感染后3d、7d时,CD3+水平降至最低,但与正常鼠和对照鼠无显著性差异(P>0.05),至感染14d基本恢复至正常水平,此后再无明显变化。CD8+亚群水平在感染后3d、7d、14d时均显著低于正常水平(P<0.05),至感染后28d恢复正常水平。而CD4+亚群水平在整个感染过程中无明显变化(P>0.05)。CD4+/CD8+比例在感染后3d、7d、14d时显著高于正常鼠和对照鼠(P<0.05)。结论弓形虫感染影响大鼠外周血T淋巴细胞亚群比例,但可自行恢复正常。     

右旋松萝酸体外抗弓形虫速殖子的实验研究

目的 探索右旋松萝酸在体外抗RH株弓形虫速殖子的效果。 方法 实验设右旋松萝酸组、乙酰螺旋霉素组、二甲基亚砜（DMSO）组及生理盐水对照组,前两组分别再设4个浓度组,于1 ml弓形虫速殖子悬液（1×10⁶个/ml）中分别加入终浓度为5、10、25和50 μg/ml右旋松萝酸或乙酰螺旋霉素;后两组分别加入等体积的生理盐水和1％ DMSO;每组15管。作用1、2和4 h后,取弓形虫悬液涂片,台盼蓝染色,光镜观察记数。将各组作用4 h的弓形虫悬液洗涤后,接种昆明小鼠,作再转种试验,观察弓形虫速殖子复苏情况。同时将洗涤后的虫体接种于制备的SD大鼠心肌成纤维细胞,观察虫体侵袭力。 结果 10、25和50 μg/ml右旋松萝酸组作用4 h,弓形虫速殖子台盼蓝着色率达100％,部分虫体肿胀,两端变圆,细胞质内出现颗粒,细胞核深染。各浓度的乙酰螺旋霉素组弓形虫速殖子变化与右旋松萝酸组相似,仅50 μg/ml组作用4 h后台盼蓝着色率达100％。再转种试验结果显示右旋松萝酸组仅5 μg/ml组小鼠于接种后第8～9天死亡,腹腔液见大量弓形虫速殖子;其余各组小鼠大多存活至再次转种,且腹腔液均未见弓形虫速殖子。但乙酰螺旋霉素各浓度组小鼠均于接种后6～8 d死亡,腹腔液见大量虫体及假包囊。右旋松萝酸5 μg/ml组,弓形虫速殖子侵入大鼠心肌成纤维样细胞,会形成假包囊,其余组均为阴性。但乙酰螺旋霉素、生理盐水和DMSO组速殖子对大鼠心肌成纤维细胞均有不同程度感染。 结论 右旋松萝酸在体外有较强的抗弓形虫速殖子作用。     

扁桃酸对小鼠实验感染弓形虫的疗效

用扁桃酸对急性弓形虫感染小鼠进行实验治疗,动态观察小鼠感染弓形虫后腹水中弓形虫数量的变化、光镜结构及超微结构的改变。在小鼠感染弓形虫２４ ｈ 、７２ ｈ 将小鼠解剖及小鼠发病死亡后取小鼠腹水,分别计数试验组和对照组各时间腹水中弓形虫数,并将腹水涂片做Ｇｉｅｍｓａ 染色,光镜下观察虫体结构变化及用腹水制作电镜切片。结果显示,试验组小鼠３ 个不同时间腹水中弓形虫数与对照组相比均明显减少（ Ｐ＜ ０．０１） ;光镜观察可见试验组小鼠腹水中弓形虫形态异常,虫体肿胀,胞膜破裂,胞质减少,胞内出现空泡,胞核染色质疏松、聚集成块,核内出现空泡;电镜观察可见虫体超微结构受到不同程度的破坏。     

刚地弓形虫感染对小鼠脑组织转录本m6A甲基化修饰的影响

目的 分析刚地弓形虫感染对小鼠脑组织转录本的N6-甲基腺苷(m⁶A)甲基化修饰水平的影响。方法 20只雌性C57BL/6J小鼠随机分为TgCtwh6感染组(7只)、LHG感染组(7只)和对照组(TgCtwh6感染组、LHG感染组的对照各3只)。TgCtwh6感染组、LHG感染组分别灌胃接种中国Ⅰ型wh6株(TgCtwh6)和中国Ⅲ型LHG株刚地弓形虫感染小鼠脑组织悬液0.2ml (20个包囊/鼠),对照组灌胃等量的生理盐水。分别在接种后15、30和45 d,用抽签法随机抽取感染组小鼠各1只,麻醉后处死,取脑组织,于显微镜下分别记录大脑皮层区、海马区和嗅球区的包囊数。感染后45 d每组分别取3只小鼠的全脑组织,提取总RNA,制备基因组文库,进行转录组测序,筛选差异甲基化位点(DML),统计感染组和对照组的mRNA的差异m⁶A甲基化位点及其所在转录本;对甲基化位点所在转录本进行基因本体功能注释(GO)分析,京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,对甲基化差异转录本进行基因集富集分析(GSEA)。选取甲基转移酶样3 (METTL3)、肥胖相关...