碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对成年牛晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和表皮生长因子 (EGF)对成年牛晶状体上皮细胞增殖的影响。　方法　按正交表 L16 (4 5)进行正交设计 ,将不同浓度 b FGF和 EGF共同作用于体外培养的成年牛晶状体上皮细胞 ,采用 MTT法测定细胞的增殖能力。　结果　单用 b FGF、EGF均可促进成年牛晶状体上皮细胞增殖。0 .75 ng/ m L 的 b FGF开始对晶状体上皮细胞有促增殖作用 ,1～ 10 0 ng/ m L 的 EGF对成年牛晶状体上皮细胞均有明显的促增殖作用 (P<0 .0 1) ,但 b FGF和 EGF无交互作用。　结论　 b FGF和 EGF是诱导成年牛晶状体上皮细胞增殖的重要因素 ,但两者无交互作用     

口腔黏膜成纤维细胞与癌细胞相互作用的基因表达特性研究

目的：探讨口腔癌细胞与成纤维细胞间信号传递的分子机制。方法：将口腔癌细胞与正常黏膜成纤维细胞（NMFs）共培养,采用半定量RT-PCR方法,测定细胞共培养前后6种基因表达改变。结果：共培养之后,除IGFBP1表达较共培养前减少外,Notch3、TFPI-2 TIMP-3、ST3、Tenascin-C基因表达均增加。这些基因分属生长因子／细胞因子类、信号转导／膜受体类、蛋白酶／蛋白酶抑制剂类、细胞基质及相关蛋白类,与ECM降解、血管生成、细胞生长和生存有关。结论：口腔黏膜成纤维细胞与癌细胞相互作用产生促肿瘤发生发展的调控因子和抗肿瘤的调控因子,二者间可能存在着复杂的调控网络。     

舌鳞癌细胞Tca-8113与舌成纤维细胞间信号传导机制的研究

目的：探讨舌鳞癌细胞Tca-8113与正常舌粘膜成纤维细胞（normal mucosa fibroblasts, NMFs）共培养前后多种信号传递分子的基因水平改变。方法：原代培养NMFs，将NMFs与Tca-8113共同培养，观察细胞形态学变化，收集细胞后，分别利用半定量RT-PCR法测定细胞共培养前后生长因子/细胞因子类(IGFBP1)、信号转导/膜受体类(Notch3)、蛋白酶/蛋白酶抑制剂类(ST3，TIMP3，TFPI-2)、细胞基质及相关蛋白类(Tenascin-C) 等6种信号传导分子基因表达的改变。结果：共培养后，NMFs围绕Tca-8113生长，透射电镜下可见细胞内细胞器增多；除Tca-8113的IGFBP1表达减少外，Tca-8113的TFPI-2及NMFs的Notch3、TIMP-3、ST3、Tenascin-C基因表达均增加。结论：舌鳞癌细胞Tca-8113与NMFs相互作用可产生促进肿瘤和抑制肿瘤的调控因子，二者间可能存在着复杂的调控网络。     

碱性成纤维细胞生长因子在P物质诱导肉芽组织成纤维细胞增殖中的作用

目的探讨感觉神经肽P物质(substance P, SP)对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)表达的调控作用及其在SP促离体培养的肉芽组织成纤维细胞增殖中的作用.方法采用MTT法测定SP对原代培养的肉芽组织成纤维细胞的促增殖作用;采用RT-PCR和Western blotting方法检测SP对成纤维细胞bFGF基因和蛋白表达的调控作用,观察时间及剂量-效应关系.结果 10-9～10-5mol/L的SP在体外对原代培养的肉芽组织成纤维细胞均具有明显的促增殖作用(P<0.01),且具有明显的剂量依赖性(r=0.594,P<0.01),bFGF抗体只能部分抑制这一作用(与对照组比较,P<0.01; 与10-7mol/L SP组比较, P<0.05).10-7mol/L SP可诱导成纤维细胞bFGF mRNA的表达,在作用后3,6 h与对照组相比,差异有非常显著性意义(P<0.01);12 h后可检测到bFGF蛋白明显表达增强(P<0.01),24 h达高峰,48 h后逐渐有所回落.SP在10-9～10-5mol/L范围内可显著促进成纤维细胞bFGF mRNA表达,在10-8～10-5mol/L范围可诱导bFGF蛋白的表达,均在10-7 mol/L剂量点达到峰值(P<0.01).结论 SP对肉芽组织成纤维细胞具有明显的促增殖作用,这种作用与其诱导内源性 bFGF表达有关.     

气道上皮损伤对成纤维细胞增殖的影响

目的探讨气道上皮细胞对成纤维细胞生长的调节机制。方法应用一种间接的气道重构的细胞模型,以酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)TyrphostinAG1478及金转停为干预因素,用3HTdR掺入法观察大鼠气管上皮细胞不同损伤状态下培养上清液对成纤维细胞生长的影响,用ELISA方法检测上清液中表皮生长因子(EGF)及转化生长因子β1(TGFβ1)的变化。结果损伤组上皮的50%培养上清液刺激成纤维细胞的增殖,上皮损伤后50μmol/L的TKIs预处理30min可减弱其刺激作用;损伤组上皮细胞的上清液中TGFβ1明显降低,50μmol/L的TKIs预处理后可使上清液中TGFβ1明显增高;各组中均未检测出EGF。结论上皮损伤可间接导致成纤维细胞增殖,上皮损伤后一定浓度的TKIs预处理30min则可一定程度地抑制此种增殖效应,TKIs对气道重构的发生可能有一定预防作用。     

新生小鼠皮肤成纤维细胞的分离培养与鉴定

目的：建立一种简单易行的自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞的方法,并对分离细胞进行鉴定。方法：无菌取新生Balb/c小鼠背部皮肤,剪碎呈1 mm2大小,组织块均匀放置于培养皿并以DMEM（含10%胎牛血清）培养基对组织块进行培养;以胰蛋白酶消化分离细胞-重新贴壁法对分离培养细胞进行纯化;以NIH3T3细胞为对照,免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测波形蛋白表达情况以对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果：新生小鼠背部皮肤组织培养3 d时可见细胞呈细长梭形或呈多角形,组织培养5 d后可见大量细胞自组织块游离生长,组织培养7 d后可见细胞呈单层漩涡状排列或纵横交错,贴壁细胞团呈放射状生长。免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测发现分离细胞和NIH3T3细胞均表达波形蛋白;流式细胞术证实分离的成纤维细胞波形蛋白表达阳性率和平均荧光密度分别为13.33%和9.89,而NIH3T3细胞波形蛋白阳性率和平均荧光密度分别为28.11%和14.16。结论：分离培养的细胞具有成纤维细胞的形态学特征,并表达成纤维细胞的特征分子波形蛋白。以组织块直接培养法成功自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞,为建立肿瘤体外模拟微环境提供实验材料和研究基础。     

MyoD基因诱导大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞的实验研究

目的：探讨MyoD基因诱导大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞的可能性。方法：将MyoD基因重组腺病毒载体转染大鼠心脏成纤维细胞，观察转染后大鼠心脏成纤维细胞形态的变化；用RT-PCR和Western blot方法检测MyoD和肌细胞生成素的表达；免疫组化检测骨骼肌肌球蛋白和结蛋白的表达。结果：MyoD基因转染后的大鼠心脏成纤维细胞形态和排列方式发生明显变化；RT-PCR可检测出转染后细胞表达MyoD；Western blot结果表明转染后细胞表达MyoD和肌细胞生成素；免疫组化检测骨骼肌肌球蛋白和结蛋白表达均为阳性。结论：MyoD基因可诱导体外培养的大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞，为进一步研究MyoD对心肌损伤的修复作用奠定了基础。     

人晶状体上皮细胞体外培养方法的改良

目的改良现有人晶体上皮细胞的培养方法,建立稳定的体外培养模型。方法用改良培养法对人胚胎眼晶体前囊膜进行培养,并利用形态学检查方法进行检测和鉴定。结果组织块法在加入培养基24 h内即可见细胞生长,且保持上皮细胞形态,1wk左右细胞融合。在体外可传5代以后细胞衰老,存活者呈成纤维细胞状。消化法中2 d后见细胞壁生长,1周左右细胞融合。结论成功地改进了建立晶状体上皮细胞体外培养模型的方法,为研究后囊膜混浊发病机制提供了方法学基础。     

呼吸道合胞病毒感染对鼻黏膜下成纤维细胞分泌趋化因子的影响

[目的]了解呼吸道合胞病毒（RsV）感染对鼻黏膜下成纤维细胞分泌趋化因子的影响．[方法]取手术切除的下鼻甲鼻黏膜进行上皮细胞及黏膜下成纤维细胞培养,将RSV感染鼻黏膜上皮细胞后,用其培养上清液刺激培养的成纤维细胞,用荧光定量PCR分别于6,12,24,48h时测定嗜酸细胞活化趋化因子、调节活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子（RANTES）、白细胞介素8（IL－8）及生长调节癌基因α（GRO—α）的mRNA表达程度;用ELISA方法分别于24,48h测定培养液中嗜酸细胞活化趋化因子、RANTES,IL-8,GRO-α蛋白质的含量．[结果]实验组IL-8,GRO-αmRNA的表达程度明显高于对照组,RANTES,IL-8,GRO-α蛋白表达量明显高于对照组．[结论]被RSV感染的鼻黏膜组织中成纤维细胞有     

蛋白激酶与蛋白磷酸酶在细胞增殖分化中的机制研究

细胞生长发育和癌变过程中有众多复杂的信号转导途径以及信号分子参与,其中最基本的生化反应过程是系列蛋白质(信号分子)的磷酸化.     

肿瘤特异性蛋白70用于乳腺肿瘤良恶性鉴别

目的：探讨肿瘤特异性蛋白70（tumor specific protein 70,SP70）在乳腺肿瘤组织及血液中的表达情况及其对乳腺肿瘤良恶性鉴别的意义。方法：乳腺肿瘤患者125例（乳腺癌65例、良性病变60例）,免疫组化法检测切片中SP70的表达。ELISA检测120例乳腺肿瘤患者（58例乳腺癌、62例乳腺良性疾病）和60例健康体检者血清中SP70蛋白的水平。结果：SP70在乳腺癌组织中的表达阳性率（55.38%）高于乳腺良性病变（15.00%）,差异有统计学意义（χ2=23.846,P<0.001）。乳腺癌患者血清中SP70的水平显著高于乳腺良性疾病患者和健康对照,差异有统计学意义（F=11.884,P<0.001）。SP70在血清中的敏感性高于CA153(53.45% vs. 44.82%),且血清中SP70和CA153的表达无显著相关性（r=0.132,P=0.324）,两者联合能够明显提高检测敏感性（84.38%）。结论：检测乳腺肿瘤组织和血液中SP70的表达对其良恶性的鉴别有重要临床价值。     

恶性淋巴瘤组织中内皮细胞特异性分子-1mRNA及其蛋白的表达

目的探讨恶性淋巴瘤组织中内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)mRNA和蛋白的表达及其与临床病理特征的关系.方法采用免疫组化S-P法、原位杂交方法对58例淋巴瘤组织和10例正常淋巴结的ESM-1蛋白及mRNA进行检测.结果 ESM-1蛋白及 mRNA 在淋巴瘤组织中均有表达,在血管中较少表达.结论 ESM-1分子可能参与了淋巴瘤的发生发展过程.     

人胚胎间充质干细胞向平滑肌细胞定向分化标志蛋白的选择

目的:选择平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)特异性标志蛋白,作为判断人胚胎间充质干细胞(mesenchymalstem cell,MSC)是否向SMC方向分化的指标.方法:采用免疫细胞化学、免疫荧光、Western印迹和RT-PCR等方法,检测SMC分化早、中、晚期标志蛋白smooth muscle(SM)-α-actin、calponin、SM-myosin heavy chain(SM-MHC)在人胚MSC中的表达情况.结果:各实验均证明SM-α-actin和calpomn蛋白在人胚MSC中表达.各种实验方法在人胚MSC中均检测不到SM-MHC蛋白及其mRNA的表达.结论:SM-MHC是一个有价值的SMC特异性标志物,可以做为判断人胚MSC向SMC方向分化与否的指标.     

睾丸特异性表达GFP小鼠的繁殖及其表型鉴定

目的 繁殖睾丸特异性表达绿色荧光蛋白（GFP）小鼠,为进行小鼠生殖系统的研究提供有效的工具。方法 将Ddx4-cre转基因雄鼠与Rosa26mT/mG转基因雌鼠交配,通过Cre/loxP重组系统产生睾丸特异性表达GFP小鼠,利用分子、病理及活体成像的方法,从器官、细胞、分子水平上对该鼠进行表型鉴定。结果 分子水平的结果表明在这种小鼠的睾丸组织中发生了Cre酶介导的特异性基因重组;从器官水平上可以看到在这种小鼠的睾丸组织中具有GFP的表达;睾丸冰冻切片及精子荧光观察显示GFP主要表达于次级精母细胞、精子细胞和精子中。结论 睾丸特异性表达GFP小鼠繁殖成功。     

骨形态生成蛋白在成骨细胞分化机制中的研究进展

在成骨细胞分化和骨形成过程中，骨形态生成蛋白（BMP）是关键性的调节因素，它通过调节转录因子以及借助一些未知的信号转导途径，发挥诱导分化和定向分化的效应，而借助于受体的特异性信号转导系统和特异的受体抑制剂。其表达水平及功能还可受到多种方式的调控。作者就BMP在骨分化中的作用、基本机制方面的研究进展进行综述。     

香草醛缩氨基均三唑席夫碱对肝癌细胞分化相关酶和蛋白的影响

目的:研究香草醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用。方法:用不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)与SMMC-7721细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用;镜下观察细胞形态改变;采用酶联免疫法检测细胞甲胎蛋白含量,金氏法检测细胞碱性磷酸酶活性的变化。结果:LH-37在1×10-5~1×10-3mol/L的浓度范围均能抑制细胞增殖且抑制率随浓度的的增加而增高(P<0.05或P<0.01),细胞形态和结构向正常肝细胞方向逆转,1×10-5mol/L和1×10-6mol/L的LH-37均可使细胞甲胎蛋白含量明显下降,碱性磷酸酶活性明显升高。结论:香草醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌SMMC-7721细胞具有抗增殖、促分化作用。     

非小细胞肺癌中PGP9.5的表达与其神经内分泌分化关系的研究

目的 探讨外科切除非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中蛋白基因产物9.5( protein gene product 9.5,PGP9.5)表达的临床病理特征和意义及其与神经内分泌分化标记物神经烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、突触素(sy...     

人晶状体上皮细胞体外培养

目的 建立一种简单有效的人晶状体上皮细胞体外培养的方法. 方法 用组织块培养法,对不同年龄组(儿童组16例,中青年组18例,老年组14例)的人晶状体前囊膜进行培养.对培养的细胞进行形态学和增殖活动观察. 结果 组织块培养法较易在体外培养人类晶状体上皮细胞并传代,其增殖能力与供体年龄有关,但是老年人晶状体上皮细胞无法传代. 结论 成功地建立起人晶状体上皮细胞体外培养模型,可用于白内障及后发性白内障时后囊膜混浊发病机制和药物试验研究.