心脏基因工程研究对一级康复的干预作用：构建柯萨奇B2病毒毒粒蛋白候选基因疫苗诱导体液免疫的评估

目的：探讨心脏基因工程研究中构建柯萨奇B2病毒毒粒蛋白侯选基因疫苗，并评价其诱导体液免疫的效果：方法：实验于2003—05／12在中国农业科学院国家生物重点实验室哈尔滨兽医研究所生物二室完成。采用反转录聚合酶链反应技术扩增柯萨奇B2病毒的主要中和抗原毒粒蛋白基因，通过分子克隆构建pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白基因免疫质粒。选择3周龄BALB／c雄性小鼠30只，随机分成3组，pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白组：对小鼠进行pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白免疫；空载体对照组对小鼠进行pcDNA3免疫；磷酸盐缓冲液组：对小鼠进行磷酸盐缓冲液免疫，每组10只。每组免疫时间和接种量、接种方法相同。采用酶联免疫吸附法测定pcDNA3．柯萨奇B2病毒毒粒蛋白、pcDNA3、磷酸盐缓冲液免疫小鼠后2，4，6，8周柯萨奇B2病毒特异性抗体免疫球蛋白C水平。结果：①获得pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白基因免疫质粒，可在HeLa细胞中表达。②免疫后6，8周pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白组柯萨奇B2病毒特异性抗体免疫球蛋白G水平明显高于免疫后4周似4靠0．153&;#177;0．013，0．150&;#177;0．011，0．142&;#177;0．014，P〈0．01，0．05）；免疫后4周pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白组柯萨奇B2病毒特异性抗体免疫球蛋白G水平明显高于空载体对照组和磷酸盐缓冲液组（0．120&;#177;0．007，0．119&;#177;0．009．P〈0.011。结论：pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白可诱导小鼠产生体液免疫，做为候选基因疫苗，以基因免疫的角度参与心脏基因工程研究．有望为该病毒性心肌炎的发生起到一级预防作用。     

来氟米特联合甲氨喋呤治疗多发性肌炎的疗效研究

目的：探讨来氟米特（LEF）联合甲氨喋呤（MTX）治疗多发性肌炎（PM）的疗效。方法：治疗组LEF20mg，1R／d、MTX10mg1次／周，并设对照组，监测肌力、肌酶等。结果：治疗组肌肉功能2个月时增强有显著性（P〈0．05），3个月时有非常显著性（P〈0．005）；对照组2个月时无显著性（P〉0．05），3个月时有显著性（P〈0．05）；两组酶学变化治疗前后差异均有显著性。结论：LEF联合MTX治疗多发性肌炎起效快，肌肉功能及肌酶显著改善，不良反应少。     

心脏基因工程研究对一级康复的干预作用:构建柯萨奇B2病毒毒粒蛋白候选基因疫苗诱导体液免疫的评估

目的:探讨心脏基因工程研究中构建柯萨奇B2病毒毒粒蛋白侯选基因疫苗,并评价其诱导体液免疫的效果。方法:实验于2003-05/12在中国农业科学院国家生物重点实验室哈尔滨兽医研究所生物二室完成。采用反转录聚合酶链反应技术扩增柯萨奇B2病毒的主要中和抗原毒粒蛋白基因,通过分子克隆构建pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白基因免疫质粒。选择3周龄BALB/c雄性小鼠30只,随机分成3组,pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白组:对小鼠进行pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白免疫;空载体对照组对小鼠进行pcDNA3免疫;磷酸盐缓冲液组:对小鼠进行磷酸盐缓冲液免疫,每组10只。每组免疫时间和接种量、接种方法相同。采用酶联免疫吸附法测定pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白、pcDNA3、磷酸盐缓冲液免疫小鼠后2,4,6,8周柯萨奇B2病毒特异性抗体免疫球蛋白G水平。结果:①获得pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白基因免疫质粒,可在HeLa细胞中表达。②免疫后6,8周pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白组柯萨奇B2病毒特异性抗体免疫球蛋白G水平明显高于免疫后4周(A450:0.153±0.013,0.150±0.011,0.142±0.014,P<0.01,0.05);免疫后4周pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白组柯萨奇B2病毒特异性抗体免疫球蛋白G水平明显高于空载体对照组和磷酸盐缓冲液组(0.120±0.007,0.119±0.009,P<0.01)。结论:pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白可诱导小鼠产生体液免疫,做为候选基因疫苗,以基因免疫的角度参与心脏基因工程研究,有望为该病毒性心肌炎的发生起到一级预防作用。     

实验性肌炎动物模型中肌电图变化分析

目的建立类似于人类多发性肌炎(PM)的豚鼠模型,观察肌电图在此模型中的变化。方法用兔肌匀浆加完全佛氏佐剂免疫注射豚鼠制作实验性自身免疫性肌炎(EAM)动物模型,将EAM豚鼠随机分为强的松治疗组及空白对照组,比较模型前后及治疗前后肌电图、肌肉病理和血清肌酶改变。结果模型制作后肌电图呈肌源性改变,肌肉病理出现骨骼肌多发性炎症病变,血清肌酶显著升高;治疗后肌电图、肌肉病理、肌酶显著好转。结论本实验所建立的EAM豚鼠模型与人类PM相似,肌电图对于评估EAM模型建立及药物疗效有重要意义。     

抗心律失常肽对抗柯萨奇B3病毒的体外研究

目的观察抗心律失常肽(AAP10)对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染的原代小鼠心肌细胞的保护作用。方法将BALB/C小鼠原代心肌细胞分为7组,每组12孔,分别为细胞对照组,病毒对照组,药物干预组(A组、B组、C组、D组、E组)。用不同浓度的AAP10培养液干预100TCID50CVB3感染的心肌细胞,对比每组的细胞活性。结果药物干预组细胞活性高于病毒对照组(F=7.489,P0.05)。其细胞活性与药物浓度(r=0.942,P=0.005)及作用时间(r=0.993,P0.05)均呈正相关。结论 AAP10具有明显的抗病毒活性,呈剂量时间相关性,对CVB3感染的心肌细胞有保护作用。     

生黄合剂对病毒性心肌炎小鼠的干预实验

目的：观察生黄合剂对病毒性心肌炎小鼠的治疗作用。方法：实验于2003-10／2004-12在承德医学院中心实验室完成。生脉饮（人参：五味子：麦冬=1：2：1）与总黄酮按不同比例制成1：1、1：2合剂．将180只昆明种小鼠按分层随机方法分为6组：生脉饮治疗组、1：1液治疗组、1：2液治疗组、阳性药物对照组、病毒对照组、正常对照组，每组30只。生脉饮治疗组、1：1液治疗组、1：2液治疗组、阳性药物对照组、病毒对照组腹腔注射1000TCID50／0．1mE的柯萨奇B组病毒0．1mL，正常对照组腹腔注射RPMI 1640维持液0．1mL，1h后生脉饮治疗组、1：1液治疗组、1：2液治疗组灌胃给药，0．2mL／10g，阳性药物对照组利巴韦林0．1mL／10g腹腔注射，正常对照组给予相同剂量的生理盐水灌胃，2次／d，持续给药10d。于第7天每组随机抽取6只小鼠摘眼球取血并分离血清，用AU640全自动生化分析仪测定心肌酶.观察生黄合剂对模型鼠的一般情况、生存率、心肌病理损害及心肌酶的影响。结果：180只小鼠均进入结果分析，中途无脱落。①各组生存率比较：生脉饮治疗组、1：1液治疗组、1：2液治疗组、阳性药物对照组与病毒对照组比较，差异显著（50％，79％，67％，33％，25％，χ^2=40．11，P〈0．005）；生脉饮治疗组与1：1液治疗组比较，差异显著（χ^2=4．46，P〈0．05），1：1液治疗组和1：2液治疗组分别与阳性药物对照组比较，差异均显著（χ^2=10．24，χ^2=5．33，P〈0．05）。②除正常对照组外，其他各组小鼠在感染柯萨奇B组病毒后均出现不同程度的心脏病理改变。生脉饮治疗组与1：1液治疗组小鼠的心肌病理积分低于病毒对照组（0．80&;#177;0．45，0．40&;#177;0．55；2．40&;#177;1．14，P〈0．05）。各治疗组小鼠血清心肌酶明显低于病毒对照组[肌酸磷酸激酶：（16．26&;#177;2．89），（13．41&;#177;1．81），（16．90&;#177;3．42），（17．33&;#177;3．31），（25．03&;#177;3．50）mkat／L，P〈0．05；肌酸磷酸激酶同工酶：（10．72&;#177;2．69），（10．41&;#177;2．03），（10．30&;#177;2．72），（15．14&;#177;2．92），（24．25&;#177;3．28）mkat／L，P〈0．05]，各治疗组之间比较无统计学意义。结论：实验所试药物对柯萨奇B组病毒感染鼠均有保护作用，1：1液治疗组、1：2液治疗组对感染鼠的保护和治疗作用要好于阳性药物利巴韦林对照组，尤其是1：1液治疗组的保护和治疗作用最佳。     

柯萨奇病毒B4 2B基因siRNA表达载体的构建及其对柯萨奇病毒B4抑制作用的研究

目的构建针对柯萨奇病毒B42B基因的siRNA表达载体并检测该载体在体外培养细胞中对柯萨奇病毒B4的抑制作用。方法选择柯萨奇病毒B4的2B基因区21bp的基因片段作为靶序列，合成含有靶序列的DNA片段并克隆到pGCai-U6／Neo／GFP／siNeGative载体中，构建pGCsi-U6／Neo／GFP／2B，使其可表达具有发夹结构的双链siRNA，在转染该载体后用柯萨奇病毒B4攻击Hela细胞，检测该载体对病毒感染细胞的保护效应。结果通过酶切、电泳、序列分析及荧光显微镜观察证明载体构建成功，而且DGCsi-U6／Neo／GFP／2B转染组的柯萨奇病毒B4的滴度及TCID50都明显低于pGCsi-U6／Neo／GFP／siNeGative转染组。结论成功构建了柯萨奇病毒2B基因的siRNA表达载体，而且该载体在体外培养细胞中对柯萨奇病毒的复制具有抑制作用。     

病毒性心肌炎血清柯萨奇B组病毒特异性IgM及RNA检测的临床意义

目的：探讨由柯萨奇B组病毒所致病毒性心肌炎的病原学诊断价值。方法：应用酶联免疫吸附试验及聚合酶链反应对46例病毒性心肌炎患血清柯萨奇B组病毒(CBV)特异性IgM和RNA进行检测。结果：心肌炎组CBV-IgM检出率为60.90％，CBV-RNA为43.5％．非心肌炎组分别为20％和12％．两组有非常显的差异。表明CBV是病毒性肌炎的主要病原。心肌炎组2周内检测CBV-IgM和CBV-RNA的阳性事分别为78.6％和85.7％，2～6周分别为45.2％和22.6％．其阳性检出率与病程呈负相关。结论：早期检测对于心肌炎的早期诊断及病因学研究具有指导意义。     

小儿急性良性肌炎38例临床分析

目的：探讨小儿急性良性肌炎的病因、临床特点、鉴别诊断及转归。方法：分析2007年1月～2009年1月38例A,JL急性良性肌炎的临床资料。结果：38例中92．1％病前有上呼吸道感染,73．7％冬春季节发病,男孩多见。38例均有突然发作行走困难、跛行、肌痛,累及双侧小腿或大腿肌肉,急性期血清肌酸磷酸激酶（CK）显著升高。30例做病原学检查,5例柯萨奇病毒IgM阳性,4例分离出B流感病毒,3例支原体抗体阳性,2例EB病毒PCR阳性,16例未检出病原。经过治疗81．6％在7d内疼痛消失,CK恢复正常,2例疾病复发。结论：小儿急性良性肌炎起病突然,据其临床特征及急性期血清CK显著增高,诊断并不困难,需与格林－巴利综合征、流行性肌痛等鉴别。其病原除B流感病毒外,柯萨奇病毒、支原体及EB病毒也可能为本病病原。该病有复发可能,其机制有待进一步探讨。     

病毒性心肌炎患者的病原学检测及护理

目的探讨病毒性心肌炎惠者病原学检测及护理，为预防早期治疗及护理提供有效的依据和可行性方法。方法取59例病毒性心肌炎患者外周血栓测柯萨奇B组病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、HIV病毒。结果59例中检测到柯萨奇B组病毒IgM阳性28例(47．5％)。乙肝病毒DNA9例(15．3％)、丙肝病毒RNA6例(10．2％)，HIV病毒4例(6.8％)，乙肝病毒DNA柯萨奇B组病毒IgM4例(6．8％)，未知8例(13．6%)。结论柯萨奇B组病毒是引起病毒性心肌炎的最常见病原体，其后依次是乙肝病毒、丙肝病毒、HIV病毒，在临床实践中应重视肝炎病毒引起病毒性心肌炎的可能。     

三种不同检测方法对婴幼儿丙型肝炎病毒感染的诊断价值

目的探讨不同检测方法对婴幼儿丙型肝炎病毒感染诊断结果的影响。方法对66例ELISA法检测抗HCV阳性孕妇所生婴幼儿血清,分别用ELISA法检测抗HCV和HCV-cAg,用荧光定量PCR法检测HCV-RNA,并对结果对比分析。结果 66例婴幼儿血清中,61例抗HCV阳性,阳性率92.4%;9例HCV-cAg阳性,阳性率13.6%;11例HCV-RNA阳性,阳性率16.6%。结论抗HCV检测阳性率过高,且有可能漏诊。建议采用HCV-RNA检测和HCV-cAg综合诊断婴幼儿HCV感染。     

血清IgA及IgA／C3比值在IgA肾病诊断中的价值

IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是我国最常见的原发性肾小球肾炎,但至今其确切发病机制仍不明确.免疫反应和补体系统可能在IgAN的发生、发展中起重要作用,9%～70%的IgAN患者血清IgA升高[1],其血清C3水平是否下降仍有争议.     

HCV感染者外周血淋巴细胞表达BLyS和CD38的变化

[目的]研究丙型肝炎病毒(HCV)感染者外周血淋巴细胞表达B淋巴刺激因子(BLyS)和CD38的变化.[方法]收集48例HCV感染者和20例健康人外周血淋巴细胞,用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞表达BLyS和CD38的变化.[结果]HCV感染者外周血BLyS阳性淋巴细胞、CD19 淋巴细胞和CD19 CD38 淋巴细胞显著增加,BLyS 淋巴细胞增加与CD19 CD38 淋巴细胞增加呈正相关(r=0.52,P＜0.01).[结论]HCV感染者外周血淋巴细胞表达BLyS和CD19 B淋巴细胞表达CD38 均显著增加,且二者增加呈正相关.     

富甘油三酯脂蛋白中载脂蛋白CⅢ测定及意义

目的：探讨富甘油三酯脂蛋白（TRL）中载脂蛋白CⅢ（ApoCⅢ）测定及临床意义。方法：用高密度脂蛋白沉淀剂除去血清中非高密度脂蛋白组分，测定上清液高密度脂蛋白（HDL）组分中ApoCⅢ，再用总ApoCⅢ减去HDL组分中ApoCⅢ间接反映TRL中ApoCⅢ，并对48例冠心病（CHD）患者TRL中ApoCⅢ进行了测定。结果：CHD患者血清TRL中ApoCⅢ水平（81．25％）明显高于正常对照组（32．91％）（p〈0．001）。结论：用高密度脂蛋白沉淀剂沉淀法间接测定TRL中ApoCⅢ是测定TRL中ApoCⅢ的一种有效而简便的方法，通过血清TRL中ApoCⅢ测定，对了解肝脏对乳糜微粒（CM）和极低密度脂蛋白（VLDL）的摄取情况及CHD的疗效预测有重要意义。     

不同品系小鼠骨髓间质干细胞扩增能力及细胞表型差异的比较

背景：虽然近年来对小鼠骨髓间质干细胞分离培养的报道层出不穷，但就其方法而言，有的操作步骤过于繁琐，有的不适用于国内相关实验，如采用一系列抗体负选或利用自行研制的新抗体筛选。目的：拟建立简便稳定的小鼠骨髓间质干细胞体外分离和扩增的方法，并比较不同品系小鼠骨髓间质干细胞的生物学特点。设计、时间及地点：细胞学体外对比观察，于2007—04／09在中山大学中山医学院病理生理教研室完成。材料：清洁级6周龄雄性C57BL／6和BABL／C小鼠各5只，由中山大学中山医学院实验动物中心提供。方法：取两种品系小鼠双侧股骨，去除股骨上附带组织，用含10％FCS的DMEM培养基冲洗骨髓腔，过200目不锈钢网，收集骨髓细胞，用Tris—NH4Cl红细胞裂解液溶解2min，用含10％FCS的DMEM培养基调整细胞浓度，按500个细胞，孔低密度接种于24孔板，置于37℃、体积分数为0．05的CO2培养箱中。出现成纤维样细胞克隆后消化收集并移至6孔板，待细胞70％～80％融合时消化传代。主要观察指标：细胞形态和生长特点，流式细胞仪检测细胞表型，茜素红染色观察成骨诱导情况，油红O染色观察成脂诱导情况。结果：约培养2周可形成细胞克隆，经历一缓慢扩增阶段后，第6～7代细胞生长明显加快，可见形态均一的成纤维细胞群，呈典型的旋涡状生长，两种品系小鼠骨髓间质干细胞均可传至10代以上，但C57BL／6小鼠骨髓间质干细胞体外扩增能力更强。C57BL／6和BABL／C小鼠骨髓间质干细胞均呈CD45^＋CD11b^-CD117^-，CD44和Sca-1呈阳性表达，可连续表达MHC—Ⅰ，少量表达CD80，此外前者可少量表达MHC—Ⅱ，而后者几乎不表达MHC-Ⅱ。两者体外均能够向成骨、成脂方向分化。结论：通过低密度培养技术可简单方便的体外分离并扩增C57BL／6和BALB／c小鼠骨髓间质干细胞。两品系小鼠骨髓间质干细胞均易向成骨成脂分化，但在扩增能力、细胞表型上略有不同。     

不同品系小鼠幽门螺杆菌感染实验模型的建立及其病理特征的比较

目的应用不同的HP菌株感染不同遗传背景小鼠,观察HP的感染状况及病理特征。方法SPF级C57BL/6及BALB/C小鼠预先灌饲0.5 ml NaHCO3(0.1M),随后分别接种HP SS1、NCTC11637菌液0.5 ml(1×109CUF/ml)连续4次,间隔48 h,对照组灌饲相同剂量的PBS。于末次接种后4、8、12周处死小鼠,胃黏膜行快速尿素酶检测、HP培养以及病理组织学检查。结果C57BL/6小鼠接种HP SS1后4、8及12周HP感染率均为100%,HP主要定植在胃窦部及胃窦/胃体交界部,黏膜下可见淋巴细胞及单核细胞浸润。C57BL/6小鼠接种HP NCTC 11637、BALB/C小鼠接种HP SS1或NCTC 11637,HP感染率低,胃黏膜HP定植量低,病理组织学改变轻。结论C57BL/6小鼠接种HP SS1可获得较好的HP感染模型。     

富甘油三酯脂蛋白中载脂蛋白C测定及意义

目的:探讨富甘油三酯脂蛋白(TRL)中载脂蛋白C(ApoC)测定及临床意义。方法:用高密度脂蛋白沉淀剂除去血清中非高密度脂蛋白组分,测定上清液高密度脂蛋白(HDL)组分中ApoC,再用总ApoC减去HDL组分中ApoC间接反映TRL中ApoC,并对48例冠心病(CHD)患者TRL中ApoC进行了测定。结果:CHD患者血清TRL中ApoC水平(81.25%)明显高于正常对照组(32.91%)(P<0.001)。结论:用高密度脂蛋白沉淀剂沉淀法间接测定TRL中ApoC是测定TRL中ApoC的一种有效而简便的方法,通过血清TRL中ApoC测定,对了解肝脏对乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)的摄取情况及CHD的疗效预测有重要意义。     

皖北地区MRSA耐药基因研究

目的了解皖北地区临床分离的耐甲氧西林金葡菌(MRSA)所携带5类药物的7种耐药基因状况,并探讨其耐药特性。方法应用PCR方法检测64株MRSA中mecA、gyrA、qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB、tetM耐药基因。结果 64株MRSA中,mecA基因携带率为100%,tetM、gyrA、qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB基因携带率分别为95.3%、81.3%、34.4%、15.6%、39.1%、28.1%;基因组合以mecA+tetM+gyrA模式最多,为26.5%。MRSA对万古霉素无耐药,对氯霉素、磷霉素、利福平的耐药性较低,对多种药物表现出较高的耐药性。结论皖北地区MRSA中,mecA、tetM、gyrA基因携带率较高,而qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB基因携带率相对较低。     

Upper Cervical Facet Joint and Spinal Rami Blocks for the Treatment of Cervicogenic Headache

(Headache 2010;50:657‐663) Objective.— To evaluate the efficacy of upper cervical facet joint injections and spinal rami blocks in the treatment of cervicogenic headache. Background.— Cervicogenic headache has been recognized as a common and often disabling disorder. The treatment of this headache type remains challenging. Methods.— We conducted a retrospective chart review of 31 patients with refractory cervicogenic headache who underwent fluoroscopically guided C_1/2, C_2/3 facet joint injections and C₂, C₃ spinal rami blocks using a mixture of 0.25% bupivacaine and 3 mg betamehtasone. The outcome measures were the change in headache severity, assessed using an 11‐point numerical pain scale, after treatment, and the duration of head pain relief. Results.— Twenty‐eight (90.3%) patients experienced >50% headache relief after treatment, with an average duration of 21.7 (1‐90) days. Mean (±SD) head pain intensity decreased from 7.5 ± 1.3 before treatment to 2.7 ± 1.9 immediately after it (P < .0001). The procedures were well tolerated. Conclusions.— C_1/2, C_2/3 facet joint injections and C₂, C₃ spinal rami blocks were effective and well tolerated for the treatment of cervicogenic headache in this study. The procedures provided significant and prolonged pain relief in the majority of patients. Larger controlled studies are needed to further evaluate the efficacy of this treatment modality in cervicogenic headache.     

郑州地区不同人群HCV感染及HCV基因型研究

目的 :了解郑州地区不同人群 HCV感染情况及基因分型。方法 :应用酶联免疫检测技术 (EL ISA)检测郑州地区 2 6 6 5例不同人群血清的抗 - HCV情况 ,再对 6 4例抗 - HCV阳性血清用逆转录 -套式多聚酶链反应检测 HCV-RNA。然后对其中 5 3例 HCV- RNA阳性者用限制性片段长度多态性分析法进行基因分型。结果 :抗 - HCV阳性在郑州地区总人口中的发生率是 0 .5 6 %～ 0 .78% ,原发性肝癌患者抗 - HCV的发生率明显高于其他各组。HCV基因型分布HCV- ,HCV- 和 HCV- / ,分别为 90 .5 6 % ,5 .6 6 %和 1.89%。结论 :原发性肝癌患者其 HCV的感染危险较高 ;HCV- 型是本地区的优势株 ;HCV各基因型在不同人口中的分布没有明显差异。(P>0 .0 5 ) HCV基因型可能与丙型肝炎病情轻重有关。