埃兹蛋白在小鼠围着床期子宫中的表达与意义

目的探讨埃兹蛋白(Ezrin)在小鼠围着床期子宫中的表达与意义。方法以昆明小鼠为实验对象,分别建立小鼠早孕及人工诱导蜕膜化模型,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测小鼠早期妊娠子中Ezrin mRNA水平,免疫组织化学(IHC)SP法检测小鼠早期妊娠子宫中Ezrin的定位。结果 (1)妊娠第1~4天(妊娠第1天记为D1)小鼠子宫Ezrin的表达:RT-PCR结果显示,在D 1~4的小鼠子宫均可检测到Ezrin mRNA表达,随着妊娠天数的增加其表达量逐渐增高(P0.05),以D4更为显著(P0.01);IHC结果显示,D 1~4小鼠子宫内膜的腔上皮与腺上皮均可检测到Ezrin蛋白的表达;IHC半定量分析结果显示,随着妊娠天数的增加Ezrin的蛋白水平逐渐增强(P0.05),以D4更为显著(P0.01)。(2)D5胚胎着床位点小鼠子宫Ezrin的表达:RT-PCR结果显示,在D5子宫着床位点的Ezrin mRNA表达量显著高于非着床位点(P0.01);IHC结果显示,Ezrin在D5着床位点的免疫染色主要位于着床处下方的基质中,在非着床点仅在腔上皮和基质中有较弱的免疫染色;半定量分析结果显示,着床点小鼠子宫Ezrin的蛋白水平较非着床点高(P0.05)。(3)Ezrin在小鼠子宫蜕膜化过程的表达:D8和人工诱导蜕膜化组(蜕膜瘤)小鼠子宫Ezrin mRNA表达量显著高于人工诱导蜕膜化对照组(分别为P0.01和P0.05);D8小鼠子宫Ezrin mRNA表达量高于蜕膜瘤组(P0.05);D8和蜕膜瘤组小鼠子宫Ezrin的免疫染色均位于整个蜕膜区,人工诱导蜕膜化对照组小鼠子宫的Ezrin免疫染色位于腺上皮和腔上皮,基质中未见Ezrin的免疫染色;IHC半定量结果显示,D8和蜕膜瘤组小鼠子宫Ezrin的蛋白水平较人工诱导蜕膜化对照组高(P0.05),D8小鼠子宫Ezrin的蛋白水平较蜕膜瘤组高(P0.05)。结论 Ezrin在小鼠妊娠早期子宫的表达具有时间和空间差异性,可能参与小鼠胚胎着床及蜕膜化过程;激活的胚泡可能促进小鼠Ezrin的表达。     

小鼠早孕期子宫中脂质运载蛋白前列腺素D合成酶和前列腺素D受体的表达

目的检测脑型脂质运载蛋白前列腺素D合成酶(LPGDS)和前列腺素D受体(DP)在早孕期小鼠子宫中的表达变化,评价LPGDS和DP在胚胎着床和妊娠维持中的作用。方法用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测LPGDS和DP在孕1~8 d小鼠子宫中的表达水平,以及在胚胎着床和非着床位点(妊娠第5天)的表达。结果小鼠孕2~4 d,LPGDS mRNA的水平明显高于孕1、5~8 d;孕5~8 d,DP mRNA的水平显著高于孕1~4 d。孕第5天,胚胎着床和非着床位点LPGDS的表达没有差异,DP在胚胎非着床位点的表达显著高于着床位点。结论LPGDS在小鼠胚胎着床前子宫中高表达,DP在胚胎着床后高表达;说明LPGDS可能与子宫发育成为可接受态有关,而DP作用在于维持妊娠。     

Effect of Yiqixue Buganshen Recipe on Meisl Expression in Endometrium of Mice During Peri-implantation Period

[目的]观察益气血补肝肾方对Meisl在围着床期小鼠子宫内膜中表达的影响.[方法]采用免疫组织化学法对Meisl蛋白进行定位及半定量检测;采用免疫印迹法在蛋白水平定量检测Meisl在围着床期小鼠子宫内膜中的表达.[结果]Meisl在围着床期小鼠子宫内膜中呈周期性的表达.免疫组织化学结果显示:妊娠第1天(D1)开始Meisl表达逐渐增强,D4、D5表达显著增强,着床后妊娠D6在蜕膜中的表达增强(均P＜0.05).中药组小鼠子宫内膜中Meisl在D4和D5表达增强,与正常对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05).免疫印迹检测结果与免疫组织化学结果相似,中药组小鼠子宫内膜Meisl表达增强,但与正常对照组比较差异无显著性意义(P＞0.05).[结论]益气血补肝肾方改善子宫内膜容受性,促进胚胎着床的作用与其能增强MeisI在子宫内膜的表达有关.     

着床期小鼠子宫内膜促血管生成素-2的表达

目的　检查促血管生成素- 2(Ang- 2)蛋白在小鼠着床期子宫内膜的分布及mRNA的表达,以探究Ang- 2基因表达在着床过程中的作用和生物学意义(OD)。　方法　取妊娠2、4、6和8 d的小鼠子宫内膜(蜕膜),运用免疫组织化学S P法和原位杂交技术,检测着床期子宫内膜中Ang- 2蛋白的表达及mRNA的转录水平。结合图像分析技术检测不同时期子宫内膜中Ang -2表达的平均光密度(OD)。　结果　结果显示,Ang 2特异性免疫反应产物在基质细胞及腔上皮细胞胞浆中表达,随着妊娠天数的增加,表达逐渐增强(P<0.01)。原位杂交显示,Ang- 2 mRNA自妊娠第2天起即表达于基质细胞和腺上皮;第4天血管壁胞浆中也出现阳性表达,且其表达强度在妊娠第 6、8 天时逐渐增加。平均 OD值具有显著性差异(P<0.01)。　结论　在小鼠妊娠过程中Ang- 2和Ang 2 mRNA在着床前小鼠子宫内膜中即开始表达,并随妊娠进程而表达增强,提示Ang 2基因在“胎 母”对话的信号传导过程中起调节作用。     

宫腔内脂质体转染技术在围着床期小鼠子宫内膜表达的研究

目的探讨宫腔内脂质体转染法对围着床期小鼠子宫内膜进行基因修饰的可行性。方法于小鼠妊娠第2天(D2),通过宫腔内脂质体转染法分别介导绿色荧光蛋白基因,Meis1表达基因、Meis1小分子干扰RNA(siRNA)及其各自对照空载体进入孕鼠子宫内,于转染后第3天(D5)荧光显微镜下观察荧光蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹和免疫组织化学法检测Meis1基因在基因转染上调组及其对照组,下调组及其对照组的表达变化。结果绿色荧光蛋白可在小鼠子宫组织内表达;Meis1基因上调组其mRNA和蛋白水平明显高于对照组,而Meis1基因下调组其mRNA和蛋白水平明显低于对照组。结论宫腔内脂质体转染法可以介导外源基因在小鼠子宫中表达,并可对小鼠子宫内膜着床相关基因的表达进行调控。     

着床期小鼠子宫内膜有丝分裂原活化蛋白激酶的表达及LeY寡糖对其表达的调控

目的观察围着床期小鼠子宫内膜有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的定位及表达变化,探讨LeY寡糖对其表达的调控。方法应用免疫组织化学、Western-blot方法,检测小鼠着床期(D1~D8)子宫内膜MAPK的两种亚型ERK1(p44 MAPK)和ERK2(p42 MAPK)的表达部位及水平;并通过点杂交方法,分析细胞表面的LeY寡糖被抗体阻断后,对培养的D4子宫内膜上皮细胞ERK1/2表达的影响。结果免疫组织化学分析显示D2、3、4磷酸化活性ERK1/2分布于子宫内膜腔上皮和腺上皮,D4主要集中在腔上皮,而D5、6则以蜕膜细胞表达最强;Western-blot结果显示ERK1亚型表达水平高于ERK2,后者在围着床期的变化趋势较前者明显;LeY寡糖被抗体阻断后D4内膜上皮细胞ERKs的表达下降。结论MAPK在围着床期小鼠子宫内膜中有特异的定位和表达规律,其表达强度与子宫内膜的接受态及蜕膜化有关。LeY寡糖可能作为一种信息分子,对MAPK信号转导通路起调控作用。     

子宫内膜息肉中雌、孕激素受体的表达

目的检测子宫内膜息肉雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达,探索子宫内膜息肉形成的原因及机制。方法子宫内膜息肉48例为观察组,正常子宫内膜36例为对照组,采用免疫组化SP法,行半定量分析,检测ER、PR的表达。结果增殖期的息肉组织中PR表达的评分结果为(2.89±2.16),低于增殖内膜的评分(4.04±1.73),差异有统计学意义(P<0.05);分泌期的内膜息肉中ER表达的评分结果为(3.80±1.64),高于分泌期内膜中的评分(2.64±1.45),差异有统计学意义(P<0.05)。结论增殖期的子宫内膜息肉中PR的表达降低及分泌期的息肉中ER表达增高可能参与了子宫内膜息肉的形成及发展。     

滋肾育胎丸对促排卵小鼠着床期子宫内膜HOXA10及下游基因整合素β3表达的影响

目的探讨滋肾育胎丸对促排卵小鼠胚胎着床期子宫内膜容受性的影响。方法将75只雌性动情间期昆明小鼠随机分为5组,正常组予以生理盐水处理,模型1组给予生理盐水+孕马血清促性腺激素(PMSG)+人绒毛膜促性腺激素(HCG),模型2组给予生理盐水+促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)+PMSG+HCG,治疗1组给予滋肾育胎丸+PMSG+HCG,治疗2组给予滋肾育胎丸+GnRH-a+PMSG+HCG。造模成功后,检测小鼠子宫内膜中同源框异形基因A10(HOXA10)及下游靶基因整合素β3mRNA和蛋白的表达。结果与正常组比较,模型1组和模型2组HOXA10mRNA和蛋白表达均下降,其下游靶基因整合素β3mRNA及蛋白表达亦下降,组间比较差异有统计学意义(P0.01)。模型各组与治疗各组比较,治疗各组HOXA10mRNA和蛋白表达增加,其下游靶基因整合素β3mRNA和蛋白表达亦增加,组间比较差异有统计学意义(P0.01)。结论滋肾育胎丸可能通过上调HOXA10及其下游靶基因整合素β3的表达,改善促排卵后子宫内膜的容受性。     

植入窗期血清孕激素水平及子宫内膜白血病抑制因子表达对体外受精-胚胎移植结局的预测价值

目的探讨植入窗期血清雌(E2)、孕(P)激素水平及子宫内膜白血病抑制因子(LIF)表达对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法40例不育患者在行IVF-ET前一周期采用磁分离酶联免疫法测定植入窗期血清E2、P水平;免疫组化SP法和组织学积分H-score法对LIF在子宫内膜的表达定位和半定量分析。IVF-ET后患者分为:妊娠和未妊娠两组。结果植入窗期血清P水平妊娠及未妊娠组分别为(56.59±4.83)(、44.89±3.08)nmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);LIF在子宫内膜腔上皮和腺体表达,两组分别为(1.56±0.41)、(1.31±0.32)及(1.45±0.31)、(1.15±0.37),差异有统计学意义(P<0.05)。血清P水平与子宫内膜LIF的表达显著相关(腺体r=0.589,P<0.01;腔上皮r=0.553,P<0.01)。结论植入窗期血清P水平下降及子宫内膜LIF的表达减弱可导致IVF-ET妊娠失败。植入窗期血清P水平和子宫内膜LIF的表达可作为预测IVF-ET成功与否的指标。     

应用彩色多普勒能量图检测子宫内膜血流评价IVF-ET结局

目的探讨彩色多普勒能量超声子宫内膜血流检测在预测IVF-ET结局中的作用。方法前瞻性研究2005年11月~12月于我中心行IVF-ET,年龄在38岁以下的患者182例,测定hCG注射日(注射hCG前8 h)子宫内膜厚度、形态及血流状态,按子宫内膜血流显示情况分为3组:A组,不能检测到子宫内膜血流;B组,仅可检测到子宫内膜下血流;C组,可检测到子宫内膜内及子宫内膜下血流。随访IVF-ET结局,组1为未妊娠组,组2为宫内孕活胎组(移植后30 d超声检查宫内可见妊娠囊及有原始胎心管搏动),组3为其他(包括生化妊娠、异位妊娠、胚胎停育和自然流产)。结果C组的宫内活胎率为62.2%(59/90)、胚胎种植率为65.6%(59/90),明显高于A组(0、0)及B组[17.1%(14/82)、20.7%(17/82)],差异有高度显著性(P<0.001)。组2(宫内孕活胎组)子宫内膜PI、R I及S/D分别为1.0±0.2、0.6±0.1及2.5±0.4,明显低于组1的1.1±0.2、0.6±0.0、2.8±0.4及组3的1.0±0.1、0.6±0.0、2.8±0.4(P1-2<0.001,P2-3<0.05)。妊娠组hCG日子宫内膜厚度、形态、容积及子宫、卵巢动脉血流与其他两组相比差异无显著性。结论hCG日子宫内膜内血流存在与否与胚胎种植及继续发育明显相关;存在子宫内膜内血流及子宫内膜血流阻力低者,显示了较高的临床妊娠率及胚胎种植率;彩色多普勒能量图检测子宫内膜血流预测子宫内膜容受性,是一种较好的无创检查方法。     

妊娠早期小鼠子宫内膜原癌基因H-ras的表达

目的 :本实验检测原癌基因 H-ras的转录和翻译水平在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达规律。方法 :采用反转录聚合酶链反应 ( RT-PCR)、免疫转移印迹 ( Western-blot)和免疫斑点印迹 ( Dot-blot)法。结果 :原癌基因 H-ras在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达呈现两个峰值 ,分别为妊娠的第 1和第 6、7天。结论 :提示原癌基因 H-ras参与了胚泡着床过程及胚胎的早期增殖与分化过程     

白血病抑制因子在小鼠围着床期子宫内膜的表达

采用逆转录 -聚合酶链反应和免疫印迹法 ,研究了白血病抑制因子 (L IF)m RNA和蛋白在小鼠围着床期子宫内膜的表达规律。结果 :L IF m RNA在未孕期子宫内膜表达量极低 ,孕期升高 ,孕第四天达峰值 (P<0 .0 1 ) ,此后逐渐下降 ;LIF蛋白与 m RNA的表达规律一致 ,其水平在孕第四天达最高 ,显著高于未孕期 (P<0 .0 1 )。结果表明 L IFm RNA和蛋白孕早期子宫内膜的表达高峰与着床期一致 ,它可能参与了胚泡着床的启动     

细胞因子对白血病抑制因子在小鼠孕早期子宫内膜表达的调节

本研究观察了白细胞介素 - 1(IL - 1)、白细胞介素 - 6 (IL - 6 )、单、粒 -细胞集落刺激因子 (GM- CSF)对子宫内膜白血病抑制因子 (LIF)表达的调节 ,探讨围着床期 LIF表达的调节机制。给妊娠 2～ 4 d的小鼠分别腹腔注射不同剂量的 IL - 1、白介素 - 1受体拮抗剂 (IL- 1ra)、IL- 6、GM- CSF,对照组注射 PBS,用免疫印迹法逆转录 -聚合酶链反应进行子宫内膜 LIF蛋白和 m RNA的半定量分析。结果 :对照组 LIF蛋白水平为 39.6 4± 9.95,与对照组比 ,IL - 14μg/kg剂量组明显升高 (P<0 .0 1) ;IL- 6和 GM- CSF 0 .8和 4μg/kg剂量组均明显升高 (分别为 P<0 .0 5,P<0 .0 1)。对照组 L IFm RNA水平为 1.10± 0 .2 1、IL-1、IL- 6和 GM- CSF4 μg/kg剂量组明显高于对照组 (分别为 P<0 .0 5,P<0 .0 5,P<0 .0 1) ,IL - 1ra 2 0μg/kg剂量组与对照组相比明显下降 (P<0 .0 5)。表明 IL- 1、IL - 6、GM-CSF对孕早期小鼠子宫内膜 LIF转录和转录后水平均有上调作用 ,可能是 L IF在围着床期子宫内膜的规律表达的潜在正调节因子     

原癌基因c-jun、c-fos 在小鼠胚泡着床前后的表达

为了解胚泡着床前后ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ表达的动态变化。采用逆转录聚合酶链反应方法检测小鼠子宫内膜原癌基因ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ的表达。结果表明：（１）小鼠正常内膜有一定的ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ基因的表达；（２）胚泡着床前（孕３天）的内膜ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ基因的表达明显高于正常内膜（Ｐ＜０．００１）；（３）着床后，孕５与孕７天内膜ｃ ｆｏｓ、ｃ ｊｕｎ基因的表达低于着床前，至孕７天已低于正常水平（Ｐ＜０．００１）。提示原癌基因ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ与小鼠胚泡着床有关。     

胚泡着床期碱性成纤维细胞生长因子在小鼠子宫内膜的转录和表达

为进一步阐明碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)在胚泡着床过程中的生物学作用。采用昆明小鼠 3 0只 ,随机分为 5组 ,分别于受精后 4～ 8天处死孕鼠。应用原位杂交和免疫组织化学的方法 ,检测了不同孕期的子宫内膜 b FGF的转录和表达状况。结果 :子宫内膜多种细胞可产生 b FGF,受精后第 4～ 5天 ,b FGF表达仅限于子宫腔上皮和腺上皮 ,b FGF在蜕膜细胞的转录则最早出现于受精的第 5天 ,随胚泡植入的进程 ,蜕膜细胞b FGF的转录和表达明显增加 ,但在胚泡着床部位周围蜕膜细胞转录和表达由有至无。表明 b FGF通过自或旁分泌的方式参与调节胚泡着床的生理过程     

神经营养因子家族及其受体在重组人骨形态发生蛋白-2诱导成骨中的表达

[目的]通过观察重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）诱导成骨过程中神经营养因子（NTFs）家族及受体的表达，探讨神经营养因子在BMP骨诱导中的作用。[方法]建立小鼠右侧股后部异位成骨模型，实验组植入rhBMP-2胶原复合物，对照组仅植入相同体积的胶原海绵。分别于术后7、14和21d取材，进行组织学、免疫组化及RT-PCR检测。[结果]组织学证实rhBMP-2胶原复合物具有良好的骨诱导能力，而对照组未见成骨。术后第7d，在大量软骨形成期NGF和TrkA阳性染色达到高峰，成纤维细胞、成软骨细胞、软骨细胞、肥大软骨细胞和成骨细胞中均有阳性表达；BDNF在软骨细胞及软骨基质中有阳性染色，其受体TrkB仅在成软骨细胞和软骨细胞中有表达；NT-3与NGF表达相似，其受体TrkC仅在成软骨细胞和软骨细胞中有阳性染色。术后第14d，NGF和TrkA阳性表达局限于部分成骨细胞、骨样细胞和成骨样细胞；NT-3在软骨细胞、成骨细胞中明显表达。术后21d，只有少量成骨细胞、成骨样细胞中有NGF和TrkA的表达。RT—PCR检测结果显示，NTFs mRNA于术后第7d表达最高，与免疫组化中蛋白质的表达结果相一致。[结论]NTFs及其受体在rhBMP-2诱导成骨过程明显表达，提示NTFs可能通过直接和间接的方式协同BMP的诱导成骨过程。     

Expression of N-acetyl-glucosamine-6-O-sulfotransferase in the endometrium of implantation window stage from infertile patients

Objective:To observe the expression of N-acetyl-glucosamine-6-O-sulfotransferase(GN-6-ST)in the endometrium during the window stage of implantation from infertile women before IVF-ET treatment,we compared the GN-6-ST gene expression level between the women with succeeded and failed implantation,and investigated the roles of selectin and its ligands in the embryo implantation.Methods:The hysteroscopy and endometrial biopsies were performed in patients prior to undergoing IVF-ET treatment in the IVF Center of the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University from July 2004 to March 2005.Fourteen patients who succeeded in implantation were taken as study group,while the 28 infertile patients with failed implantation served as control group.The RT-PCR method was used to detect the mRNA levels of N-acetyl-glucosamine-6-O-sulfotransferase in the endometrium during the window stage of imp-lantation of the women from both groups.Results:For these infertile patients with succeeded implantation,the average mRNA expression level of acetyl-glucosamine-6-O-sulfotransferase in the endometrium during the window stage of implantation was(0.65±0.33),while for those with failed implantation cycle,the average mRNA expression level was(0.41±0.36),which was significantly lower than that of study group,P<0.05.Conclusions:The combination of the selectin and ligands may play a role in the embryo implantation capacibility.