噬菌体展示技术及其在药物筛选中的应用

噬菌体展示文库是目前广泛应用于生物医学领域的较为重要的分子工具,近年来相关研究进展迅速,目前该技术以具有库容量大、结合特异性强等特点而成为药物筛选的实用性工具.本文以噬菌体展示技术的原理为出发点,对噬菌体载体的分子生物学、噬菌体展示文库的构建和筛选及其在药物筛选中的应用进行了综述.     

高通量筛选技术在中药研究的应用

高通量筛选（high throughput screening,HTS）技术是将多种技术方法有机结合而形成的新的技术体系,它以分子水平和细胞水平的实验方法为基础,以微板形式作为实验工具载体,以自动化操作系统执行实验过程,以灵敏快速的检测仪器采集实验数据,以计算机对实验获得的数据进行分析处理,在同一时间内对数以千、万计的样品进行检测,并以相应的数据库支持整个技术体系的正常运转.该技术正逐渐地发展成为新药发现的重要手段.中医药（TCM）是中华民族在长期的生产、生活中逐渐积累沉淀下来的宝贵的财富,近几十年来,由于我国药学工作者的努力,在中药的研究方面有了比较大的进步,但是由于中药治疗中讲求辨证施治,具有量效关系复杂、多靶点等特征,使得中药很难摆脱粗、大、黑的禁锢,至今还有许多中药没有经过系统的研究,也还没有比较系统的中药研究方法.HTS技术由于其快速、高效、分析样本量大等特点,在寻找新的活性的化合物方面有非常大的优势,必将会在今后的中药研究中发挥重要作用.     

抗体噬菌体展示技术研究进展

抗体工程技术随着现代生物技术的发展而不断完善，并且是生物技术产业化的主力军，尤其在生物技术制药领域占有重要地位。噬菌体抗体展示是利用基因工程技术发展起来的一种模拟自然免疫选择系统制备抗体的新技术，与多克隆抗体和单克隆抗体相比，噬菌体抗体展示技术的筛选范围从几千扩增到几百万甚至几亿，而时间则从几个月缩短到几周，且操作简便，成本低廉。     

噬菌体展示技术的研究进展

噬菌体展示技术是将外源蛋白通过与丝状噬菌体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒表面,被展示的外源多肽可保持相对独立的空间结构和生物活性。最近有实验表明噬菌体表面展示的外源多肽模拟了天然抗原的空间结构,利用筛选肽库的方法确定抗原的线性和构象型表位是可行的。这对于发现与疾病相关的抗原表位具有一定的普遍意义,有可能在未知的情况下进行疫苗及诊断分子的设计。     

噬菌体展示技术

噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽与噬菌体的一种衣壳蛋白融合表达,融合蛋白则表达在病毒颗粒的表面,而编码这个融合子的DNA则位于该病毒粒子内.噬菌体展示技术使大量随机多肽与其DNA编码序列之间建立了直接联系,可以通过检测病毒内部的DNA,使得各种靶分子的多肽配体通过淘选的体外选择程序而快速鉴定.其在生物医学的诸多领域有着...     

高通量筛选在抗病毒药物筛选中的应用

细胞和分子生物学的迅速发展为药物作用靶点研究提供了新的领域,大量分子细胞水平的药物筛选模型不断出现,并应用到药物筛选和研究中。多学科交叉使细胞分子水平筛选方法能实现自动化技术而形成高通量筛选(highthroughput screening,HTS)。HTS是以分子和细胞水平的实验方法为基     

用T7噬菌体展示技术筛选HCV核心蛋白的相互作用蛋白

目的 用T7噬菌体筛选系统筛选HCV核心蛋白的相互作用蛋白.方法 应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到HCV的核心蛋白作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜索.结果 经鉴定得到1个阳性克隆,确定了能与HCV核心蛋白相互作用的蛋白为:Smad interacting-protein 1(SIP1).结论 T7噬菌体展示筛选系统是筛选相互作用蛋白的一种简单、快速和有效的手段,筛选到的相互作用蛋白为进一步探讨核心蛋白的致病、致癌机制提供重要依据.     

噬菌体展示技术的应用及其进展

<正>1985年Smith首次证实丝状噬菌体fd基因组能通过基因工程的手段进行改造,将EcoRⅠ内切酶的部分基因片段(171 bp和132 bp)与pⅢ基因融合,获得的重组噬菌体可在体外稳定增生,表达产物能被抗EcoRⅠ内切酶抗体所识别。1988年Parmley等将已知抗原决定簇与pⅢ的N端融合呈现在表面,可特异性地被抗体选择出来,并提出通过构建随机肽库可以了解抗体识别的抗原决定簇表位的     

噬菌体展示技术及其在医药上的主要应用

噬菌体展示技术（phage display）是一种用于筛选和改造功能性多肽的生物技术，编码多肽的DNA片段与噬菌体表面蛋白的编码基因融合后，以融合蛋白的形式表达在噬菌体的表面，不影响噬菌体的生活周期。同时可保持目的蛋白的天然构象，且能被相应的抗体或受体所识别。随着此项技术的不断完善和发展，噬菌体展示技术已在许多领域得到广泛的运用：抗原表位筛选及疫苗研制、多肽药物的筛选、疾病检测等，并显示了良好的发展前景。本文对近几年来噬菌体展示技术的研究及应用进展作以综述。     

噬菌体展示载体的构建

目的 构建适宜噬菌体展示的载体系统。方法 利用pCOMB3的LacZ强启动子，Pelb引导序列，包膜蛋白Ⅲ基因，用NHeI-XbaI双酶切，切除一个克隆位点；同时设计一对引物，用PET-28（a)^ 作模板扩增550bp片段，插入XhoI-SpeI位点之间，扩增质粒后用限制性内切酶，PCR，DNA测序等方法作鉴定。结果 切除了272bpNHeI-XbaI片段。插入片段后酶切鉴定显示：XhoI,SpeI单酶切，XbaI,NheI无酶切；所构质粒用XhoI SpeI双酶切及PCR扩增均可见550bp片段；测序结果正确。结论 成功构建了一种高拷贝，稳定，多用途，易于操作的噬菌体展示载体。     

噬菌体展示肽库技术在胃癌研究与治疗中的进展

胃癌(Gastric cancer)是我国最常见的消化道肿瘤之一。近几年,胃癌早期诊断以及低副作用的有效治疗已经成为研究人员重点关注的方向和领域。噬菌体展示肽库技术 (phage display library, PDL)作为分析蛋白质之间相互作用的有效方法,具有简便、高效、高通量等优点,这使得PDL在胃癌的诊断检测和靶向治疗领域展示出了极大的研究价值和潜力。本文就目前PDL技术在胃癌诊断和治疗领域中的研究进展进行综述。     

噬菌体展示技术筛选MRC-5细胞上人巨细胞病毒的结合位点

目的 以人巨细胞病毒(HCMV)感染的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)为靶细胞,寻找参与HCMV识别并结合细胞的多肽区域,研究HCMV膜蛋白中哪些功能域参与细胞识别以及膜融合过程.方法 以HCMV感染阳性的MRC-5细胞为液相筛选物,从随机七肽噬菌体展示库中筛选出能够与感染阳性MRC-5细胞特异性结合而与正常细胞不结合的噬菌体配体.通过ELISA分析亲和力、DNA测序、序列对比及理化性质分析多肽.结果 初步发现EVNMSDS、NVSVFET和GQQPTTV 3个肽段可能参与HCMV与宿主细胞的识别过程.同时通过同源比对分析还发现,这3个七肽与HCMV gB和gH蛋白存在共有序列.结论 应用PHD7噬菌体随机肽库和生物信息学方法 筛选出3个可能参与HCMV识别宿主细胞并进行膜融合的功能域,为进一步研究HCMV感染宿主细胞的具体机制提供新的思路以及为抗HCMV感染提供新的策略.     

噬菌体展示技术在神经系统疾病中的应用

噬菌体展示是一种能够在丝状噬菌体表面展示大量多肽和蛋白质文库的分子多样性技术,从噬菌体展示的文库中几乎可以筛选出针对所有靶标存在高度亲和性和特异性的多肽、蛋白质及抗体,这些筛选的多肽及抗体已经被广泛应用于临床疾病的诊断和治疗。本文概要综述在神经变性疾病及神经免疫性等相关疾病中,噬菌体展示技术在探究疾病的病因、发病机制及疾病的诊断、治疗方面的研究现状及技术进展。     

高通量筛选系统

本文简要介绍高通量筛选系统的基本概念及其在新药研究中的作用和发展现状 ,强调了基因组研究成果和发展新型筛选模型的密切关系 ,并对国内新药研究中的问题提出了个人见解     

INTRODUCTION OF THE HIGH THROUGHPUT SCREENING SYSTEM

In this article, we introduce the system of high throughput screening (HTS). Its role in new drug study and current development is described. The relationship between research achievements of genome study and new type screening model of new drugs is emphasized. The personal opinions of current problems about HTS study in China are raised.     

噬菌体展示技术筛选小细胞肺癌细胞特异性结合多肽

目的 利用噬菌体七肽库,筛选出与小细胞肺癌细胞系H446细胞特异性结合的多肽。 方法 利用噬菌体展示技术和小细胞肺癌细胞系H446细胞,经过多次3轮筛选,每次挑取12个噬菌体单克隆进行DNA测序,分析得到多肽序列,并利用免疫组织化学技术验证多肽的特异性。 结果 多肽AF(AGALHQF)与小细胞肺癌病理组织有较高的亲和性。 结论 噬菌体展示技术筛选的多肽AF可望为小细胞肺癌靶向治疗提供新的方向。     

关于"中药制备高新技术"的思考与实践

阐述了“中药制备高新技术”的概念及其内涵,并针对中药学科前沿问题药效物质基础研究,提出“分离”应是中药制药领域迫切需要引入高新技术解决的核心问题。     

分子靶向药物在结直肠癌治疗方面的研究进展

在消化系统中,结直肠癌是常见的恶性肿瘤,并且其发病率日渐提高。以手术为主,结合化疗、放疗的综合治疗方法,是结直肠癌的主要治疗模式,在过去和现在均发挥着不可替代的作用,但该治疗方法自身的弊端也不容忽视。而分子靶向药物的出现为结直肠等肿瘤的治疗开辟了一个新方向,该药物在临床及临床前研究均取得了一定成果,已成为结直肠癌治疗的一条新途径。在此就近些年来分子靶向药物在结直肠癌治疗方面的相关进展予以综述。     

中药现代化研究的生物技术

中药在人类疾病的预防和治疗以及天然药物筛选中占有重要地位。随着科学技术的进步，生物技术在中药现代研究中展示出良好的应用前景。可用扩增片段长度多态性、限制性片段长度多态性、随机扩增多态性和微卫星DNA等生物技术进行中药材的甄别和品种选育，利用遗传转化、组织和细胞培养进行药材资源的保护和有效成分或部位的大规模发酵生产。蛋白质组、生物芯片等高通量技术可应用于中药作用的分子机制研究，从蛋白质图谱和基因表达的变化中寻找中药作用的靶点和途径。把机制研究成果应用于新药研发和中药的二次开发，将极大推动中药现代化的进程。