血液病毒核酸筛查系统室内质控方法的建立及评价

目的建立并评价血液病毒核酸检测系统的室内质控方法。方法将浓度为200 IU/m L的HBV DNA、2 000 IU/m L的HCV RNA及2 000 IU/m L的HIV RNA质控标准品用已知阴性献血者血浆标本作不同倍数稀释,直至接近检测下限,确定合适质控品浓度后与献血者标本一同进行核酸提取、扩增,连续检测20次,用即刻法分析所得核酸扩增循环阈值(Ct值)结果,计算Ct值的均值(x珋)、标准差(s)和变异常数(CV),以x珋±2s为警告限,超过x珋±3s为失控限,以此分别建立核酸筛查室内质控图框架并分析室内质控结果。绘制Levey-Jennings质控图,统计180次室内质控结果,结合Westgard多规则质控方法,评价该室内质控模式的可行性和有效性。结果以HBV DNA为例,室内质控品浓度与Ct值的相关系数r=-0.920,在0.05水平达到高度相关。选择浓度100 IU/m L的HBV DNA室内质控品,连续测定20次的Ct值x珋为31.76,s为1.10,CV为3.46%。连续检测180次室内质控品Ct值的x珋为32.02,s为1.13,CV为3.53%。结论 Ct值可以作为室内质控的依据。本实验室选择的弱阳性质控品能增强当次实验结果的可靠性,可以排除因人员更换等实验条件的差异而导致的误差,可用于日常监控核酸提取扩增检测的有效性。     

4项目混合酶联免疫吸附试验室内质控品的应用探讨

目的探讨4项混合酶联免疫吸附试验(ELISA)质控品的应用可行性及优势。方法 ELISA每板加入一孔室内质控品,对4项混合质控品与单项浓度质控品检测的结果进行比较和分析,以选择更适合该实验室的质控品类别。结果 4项混合质控品的每个项目检测结果变异系数(CV)值浮动范围均低于单项浓度质控品检测的CV值浮动范围,4项混合质控品比单项浓度质控品检测的结果更稳定。结论选择4项混合质控品更适合该实验室血液筛查4项的室内质量控制。     

4项目复合ELISA室内质控品制备方法的建立和评估

目的探讨临界值多项目复合ELISA质控品的制备方法,以控制本实验室ELISA检测的精密度,使实验结果更好地满足血液安全的需要。方法利用乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、梅毒抗体和人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)各单项阳性血浆进行混合,自制临界值4项目复合质控品随每批献血者标本同时检测进行室内质控。结果制备的室内质控品放置-30℃保存1年后,检测结果差异无统计学意义。采用同一厂家、同一批号的各诊断试剂对室内质控品检测,结果差异无统计学意义。不同厂家的诊断试剂进行检测,结果差异无无统计学意义。结论通过多年的实践证明,自制临界值4项目复合质控品进行室内质控,是实验室内部观察精密度敏感的窗口,也是实验结果可靠的保证。     

Ct值与浓度对数在HBV核酸定量检测室内质控中的作用

目的 评价Ct值和浓度对数两种参数对临床HBV核酸定量检测室内质控结果分析的影响。 方法 分别以室内质控品Ct值和浓度对数的均值绘制Levery-Jennings质控图。以1 2S为“告警”规则,1 3S为失控规则。 结果 以Ct值为参数分析质控结果时未发现失控;而以质控品浓度对数为参数分析质控结果时出现一个批次的失控结果。 结论 以质控品浓度对数为参数分析室内质控,较Ct值更为敏感,可以更好地保证临床核酸定量检测质量。     

一种输血相容性检测室内质量控制方法的探讨简

目的 探讨一种输血相容性检测室内质量控制方案的可行性.方法 利用外购血配血标本制备输血相容性检测室内质控品,用不同厂家试剂进行标定.在日常输血相容性检测工作中利用不同批次自制质控品进行室内质控.结果 20个批次的自制室内质控品标定结果稳定,洗涤红细胞质控品3周内无明显溶血,12个月室内质控过程中没有因质控品原因导致结果失控的情况.结论 此方法原料易得、制备简单、结果稳定,适于在各医院输血科开展.     

不同标本类型对血气室内质控结果的影响

目的 探讨在同一仪器上相同质控标本选择不同标本类型检测对血气分析结果的影响.方法 利用不同水平的质控品,选择不同标本类型在罗氏Cobas b121血气分析仪上进行测试,分析其结果差异.结果 不同水平的质控品选择不同标本类型检测其pH值、二氧化碳分压(PCO2)结果无差异(P＞0.05),氧分压(PO2)结果差异有统计学意义(P＜0.05),PO2值越低,差异越大.结论 同一质控品在罗氏Cobas b121血气分析仪上选择不同标本类型检测时,PO2结果会有明显差异,应引起高度重视.     

不同保存条件对ELISA检测结果影响的观察

严格的血液检测是保证输血安全的重要手段,在日常的检测工作中常会遇到阳性或可疑标本、质控品、试剂开封后放置不同温度和时间时出现测定值明显差异现象,严重影响血液标本检测结果的正确性.导致室内质控图曲线的失控.为此,笔者对ELISA法试剂和质控品开封后分别在不同保存条件下和不同保存时间对检测结果的影响进行观察,报道如下.     

解脲支原体DNA检测室内质控物的制备及质控方案的设计

目的制备解脲支原体(UU)DNA荧光定量PCR室内质控物,建立室内质量控制体系,对其临床应用进行初步评价。方法分别留取Ct值为24~25(阳性)和32~33(弱阳性)标本和检测结果为阴性的标本,待留取到15mL时充分混匀,按每管150μL分装作为室内质控物。前20次检测采用"即刻法"判断检测结果是否在质控范围内,20次以后绘制Levey-Jennings图,确定靶值、标准差(s)和变异系数(CV),采用Westdard多规则质控方法对自制室内质控物检测结果进行判断。在Unity Real Time(URT)系统中使用质控规则配置操作导出UU-DNA的功效函数图(OPSPecs图),根据OPSPecs图设置质控规则。结果131次实验中,前20次采用"即刻法"判断室内质控物;20次以后采用Levey-Jennings图判断,质控品稳定,质控规则合理。结论用临床分泌物混合液制备UU-DNA检测项目的室内质控物品,制备方法简单,测定结果稳定,可作为实验室检测UU-DNA项目的质控品;依据OPSPecs图设置分子生物学检测项目的室内质控规则简便、实用。     

不同保存条件对ELISA检测结果影响的观察

严格的血液检测是保证输血安全的重要手段．在日常的检测工作中常会遇到阳性或可疑标本、质控品、试剂开封后放置不同温度和时间时出现测定值明显差异现象．严重影响血液标本检测结果的正确性．导致室内质控图曲线的失控．为此．笔者对ELISA法试剂和质控品开封后分别在不同保存条件下和不同保存时间对检测结果的影响进行观察．报道如下。     

比对室内质控软件的设计与应用研究

目的探讨应用病人新鲜标本作为室内质控品在不同仪器或不同检测系统之间进行相对偏差室内质量控制的可行性。方法在LIS系统的基础上设计一个比对室内质控软件．以KX-21N为参比仪器．以CD-1700和XE-2100D为比对仪器．同时采用L—J室内质控法、零偏差室内质控法和偏差均值室内质控法,分别用购买的质控品和新鲜病人全血对三台血细胞分析仪进行室内质量控制．观察其质控效果。结果利用比对室内质控软件采用病人全血作为质控品进行零偏差室内质量控制,具有较好的误差检出概率和低失控概率．同时可达到比对试验的目的．使不同检测系统检测同一项目的结果具有可比性．可节约成本。结论在LIS系统的基础上可开发比对室内质控软件,在实际工作中利用该软件进行零偏差室内质控可达到质内质控的目的。     

以临界值进行即刻法室内质控的探讨

ELISA竞争一步法检测抗-HBc的室内质控通常是用室内质控品来进行的.由于室内质控品的浓度较高,使得检测的吸光度A值较低,求得的吸光度值/临界值(S/CO)难以绘制Levey-Jennings质控图,对临界值样本不能起有效的质控作用.此外在基层医院由于标本量较少,检测的频次较低,加之使用室内质控品也存在着一定的困难,因而许多单位事实上不能按照要求进行室内质控.使用"即刻法"进行ELISA检测的室内质控虽有较多报道,然而以何种数据进行尚不一致.本文以抗-HBc检测为例探讨了直接以临界值(cut-off,CO)进行 "即刻法" 室内质控的方法,现报道如下.     

比对室内质控软件的设计与应用研究

目的 探讨应用病人新鲜标本作为室内质控品在不同仪器或不同检测系统之间进行相对偏差室内质量控制的可行性.方法 在US系统的基础上设计一个比对室内质控软件,以KX-21N为参比仪器,以CD-1700和XE-2100D为比对仪器,同时采用L-J室内质控法、零偏差室内质控法和偏差均值室内质控法,分别用购买的质控品和新鲜病人全血对三台血细胞分析仪进行室内质量控制,观察其质控效果.结果 利用比对室内质控软件采用病人全血作为质控品进行零偏差室内质量控制,具有较好的误差检出概率和低失控概率,同时可达到比对试验的目的,使不同检测系统检测同一项目的结果具有可比性,可节约成本.结论 在US系统的基础上可开发比对室内质控软件,在实际工作中利用该软件进行零偏差室内质控可达到质内质控的目的.     

血站核酸筛查混样和拆分单检室内质控方法的建立和评价

目的:建立核酸检测技术(NAT)用于血液筛查的室内质量控制(QC)方法。方法:将浓度为60 IU/ml HBV-DNA质控标准品,以6个混样常规筛查浓度稀释至10.0 IU/ml,接近检测下限的2倍。如出现混样结果阳性,则需进行拆分单检,以同管HBV-DNA质控品(浓度为60 IU/ml)作为拆分单检质控品,与需拆分样品同时单检。分别通过平行检测各20份同一批次质控品的方式,所得结果用即刻法分析其核酸扩增循环数,计算Ct值的均值()、标准差(SD)和变异常数(CV),以±2SD为警告限,超过±3SD为失控限,输入Excel后绘制LeveyJennings质控图,并以此分别建立核酸筛查混样和拆分单检室内质控图框架。结果:混样和拆分单检连续20次检测结果,其±2SD分别为33.03±1.47和30.08±0.98;±3SD分别为33.03±2.20和30.08±1.47;CV分别为2.22﹪和1.63﹪。t检验计算其P值分别为0.08和0.17。在此质控标准下,在同等条件下混样检测60份、拆分单检13份质控品,检测结果为混样检测59次结果在控,1次失控;拆分单检13次全部在控。阴阳性对照物结果均符合实验要求,结果有效。结论:核酸筛查时混样检测和拆分单检采用不同浓度的质控品,混样时以接近试剂检测限的弱阳性血清作为核酸筛查的质控品,拆分单检时的浓度是混样检测浓度的6倍。此质控方法可保证检测核酸提取和扩增的有效性,提高实验结果的稳定性。     

ELISA法检测HBsAg室内质控方法及结果分析

目的 探讨ELISA法测定HBsAg的室内质控方法 .方法 选择一个阳性(0.5mg/ml)质控品和一个阴性质控品,采用L-J的室内质控方法 和对阳性、阴性质控品进行检测,采用12S、13S质控规则和Icutoff(+)、Icutoff(-)质控规则对ELlSA法测定HbsAg进行室内质控.结果 检测0.5ng/ml质控血清20天,得20个s/co值,经统计得20个s/co值的X为1.984,SD为0.551,CV为27.8%.2月份74个阳性(0.5ng/ml)质控结果中,最大的s/co值为3.01,最小值为0.952,按12S、13S质控规则无失控和警告结果,而按Icutoff(+)有一次失控,2月份74个阴性质控品测定结果中最大值为0.653,均小于1,按Icutoff(-)质控规则本月阴性质控品无失控,即无假阳性结果 .3月份96个s/co结果 的时段均值(x)为1.746,时段标准差(SD)为0.5385,时段CV为30.8%,按12S、13S质控规则仅有一次警告,按Icutoff(+)规则也无失控.3月份96个阴性质控品测定结果 中有一次阴性质控品检测的s/co结果 大于1.按Icutoff(-)规则判断本批次为失控.结论 ELISA检测试剂盒生产厂商应标明试剂的灵敏度或检测低限,ELISA法的室内质控品应选择一个灵敏度(或检测低限)浓度处的室内质控品,采用于Icutoff(+)规则用于监控检测结果 中的假阴性;同时选择一个阴性质控品,采用Icutoff(-)用于监控检测结果 的假阳性,不能按统计学方法 来选择什么样浓度的质控品或按经验选择s/co值在2～4相当浓度的质控品,而用L-J室内质控方法 进行ELISA法检测过程的室内质控,本作者认为意义不大,但其可用于评估和监测ELISA法检验过程中的精密度.     

多项目特种蛋白复合冻干质控品的研制

目的 研制冻干多项目特种蛋白复合质控品,用于对多种临床检测项目进行同时质控.方法 选择临床检测中所需项目的 高浓度标本,使用真空冷冻干燥法制备多项目特殊蛋白复合质控品,对其各项指标进行检测.结果 制备的13个项目特种蛋白在日本HITACHI7170全自动生化分析仪上检测,质控效果良好,质控品稳定. 结论制备的多项目特殊蛋白复合冻干质控品能够满足室内质控的要求,效果满意.     

血液感染性病毒核酸检测室内质量控制方法的研究

目的 探讨合适血液感染性病毒核酸检测（nucleic acid testing, NAT）的室内质量控制（internal quality control,IQC）方法。方法 使用北京康彻斯坦质控品（常规质控品）和澳大利亚国立血清学参比实验室（National SerologicalReference Laboratory, NRL）QConnect 质控品（评估质控品）进行血液感染性病毒核酸平行检测。收集2 种质控品的检测结果,在常规质控方法判断为在控的检测批次中,再分别采用Westgard 多规则质控方法和NRL 质控限质控方法进行判断,观察2 种质控方法假失控的次数和比例。结果 在常规质控方法判断在控的实验批次中,再次使用Westgard 多规则质控方法分析,HBV DNA,HCV RNA 和HIV RNA 三项仍各有0 ～ 2.46%（罗氏核酸混样检测）和0.73% ～ 2.55%（盖立复核酸单人份检测）比例的假失控。使用NRL QConnect 质控品在常规质控方法判断在控的盖立复检测批次中,使用NRL 质控限进行室内质控,未发现失控情况。使用NRL QConnect 质控品,在常规质控方法判断在控的罗氏检测批次中,使用NRL 质控限的计算方法,计算该实验室的质控限,发现在HBV DNA 和HIV RNA 检测中各有1 次失控（0.30%）。结论 Westgard 多规则质控方法不适合用于目前血站血液感染性病毒核酸检测的室内质控。该文浓度的NRL QConnect质控品和NRL 质控限适合用于国内盖立复核酸单人份检测方法的室内质控,但该浓度不适合用于国内罗氏核酸混样检测。该实验室在用的室内质控方法与NRL 质控限的室内质控方法,均适用于国内罗氏核酸混样检测和盖立复核酸单人份检测的室内质控。     

酶联免疫吸附试验中HBsAg室内质控参考品的制备和应用

目的建立室内质控参考品以鉴别诊断试剂的质量和控制操作误差,提高乙型肝炎病毒表面抗原的检测准确度。方法以国家标准品为标准制备灵敏度系列参考品、特异性参考品及精密性参考品。检测其稳定性,并进行同厂家、不同批号试剂的比较及不同厂家、三批试剂的比较。结果制备的室内质控参考品在-20℃与4℃保存3～4周检测结果无统计学差异。采用同一厂家、不同批号的HBsAg诊断试剂检测室内质控参考品,结果无统计学差异。采用不同厂家、同一批号的HBsAg诊断试剂检测结果有统计学差异。结论我们建立的室内质控参考品适宜作HBsAg室内质控,提醒我们在更换试剂厂家时应特别注意室内质控参考品的变化。     

酶联免疫实验质控物的选择

目的 探讨通过酶联免疫(下称酶免)检测实验质控物浓度的选择,监测实验的精确性和重复性,及时发现随机误差,减少系统误差对实验的影响,确保酶免检测实验的有效性和检测结果的精确性及重复性.方法 选用人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)试剂对高、中、低值不同浓度的质控血清进行检测,结果用统计学方法处理.结果 不同浓度的质控血清对实验室室内质控的检测结果差异有统计学意义,选择使用S/CO比值1～3的临界值质控血清就可以将实验室的酶免实验结果的变异系数控制在15%的范围内.结论 选择合适浓度的质控血清进行实验稳定性和有效性的监控,才能确保实验室酶免检测实验的有效性和检测结果的精确性及重复性.     

血清总钙项目L-J质控图“假在控”的原因分析

目的通过分析L-J质控图假在控原因,进一步完善室内质控方法,保证检测结果的准确性。方法用超纯水、蒸馏水复融校准品,建立校准曲线,检测质控品、校准品、标本血清,以病人数据均值质控法(AON)和L-J质控法比较,查找和分析假在控原因。结果蒸馏水中0.40mmol/L的钙,造成校准品和质控品的污染,致使蒸馏水复融校准品的校准值R、R0异常,引起血清标本结果异常及L-J质控法的假在控。结论 L-J质控法的假在控情况发生时,自身无法检出,工作中除结合其他质控法外,努力做好标本检测结果的审核环节,以保证报告的准确性。     

ISO 15189:2012与室内质量控制

室内质量控制(质控)是保证检验质量的重要措施。ISO 15189:2012对室内质控部分内容作了相应的规定。定量检测应规定允许总误差,选择合适的质控材料,根据检测性能设计合理的质控程序,包括质控规则和频率;定性检测每批应包括阴性和阳性质控品,根据质控品阴性、阳性结果判断是否在控。出现失控现象时,应仔细分析误差类型,积极查找失控原因,采取纠正措施,并做详细记录。