VZV糖蛋白E表达载体免疫接种:DNA疫苗与重组痘苗病毒诱导的抗体应答的比较

本试验比较了水痘-带状疱疹病毒( VZV)包膜糖蛋白( g E)在不同免疫载体和免疫途径下诱导的抗体应答,以寻求具有高效保护作用的疫苗及其最佳免疫途径。　　作者构建了表达VZV g E基因的载体p SG5- g E(含SV4 0启动子)、p BK - g E(含HCMV启动子)、p BK - g ES(截去g E转膜锚定序列和C端序列) ,并使用两个编码g E6 8基因的重组痘苗病毒( r VV) VV2 0 - g E-HA和VV1 3- g E- TK。大量扩增纯化后,转染入3T3、2 93T细胞,r VV在CV- 1细胞上增殖,用蛋白印迹法鉴定g E表达量。然后免疫4周龄ICR雌鼠。DNA免疫采用基因枪皮下注射…     

用流感病毒和痘苗病毒重组体免疫接种增强对SIV Gag的细胞免疫应答

作者在该研究中从感染猴免疫缺陷病毒(SIV)Gag VabT252-51重组痘苗病毒(rVac／SIV Gag)的Hela细胞中经DNA体外扩增得到SIVmac239Gag序列，并将此序列设计为5个不同的Gag基因片段(SIV Gag no．1     

初免-双重加强免疫接种策略后的持久性多种同型抗HIV抗体应答

据估计，全世界有超过四千万HIV病毒感染者。为研制一种有效的疫苗，研究者们已尝试运用多种传统的疫苗载体，包括减毒活病毒、灭活病毒和亚单位疫苗，且新的免疫接种策略和新疫苗（包括质粒DNA和新病毒载体）也应运而生。而疫苗的成功可能与其所诱发的抗包膜同型抗体的分布相关。多种同型抗体作用于不同的生理部位，结合不同的Fc受体，影响调理／吞噬作用，并通过不同途径激活补体，此多样性能有效提高疫苗的保护作用。初免-加强策略利用DNA、痘苗病毒（VV）和／或纯化的重组蛋白即D—V—P以期获得持久、有效的免疫效果。     

疫苗诱导的抗结核病保护性免疫应答

BCG是公认的结核病预防疫苗，但其保护力从0％～80％不等，因而印度德里大学南校的Khera等分别以pAK3和pAK4为载体制备了6种表达结核杆菌（MTB）ESAT-6蛋白（E6）、a晶体蛋白（acry）或超氧化物歧化酶（sod）的DNA疫苗（pAK3-E6、pAK4-E6、pAK3-acry、pAK4-acry、pAK3-sod和pAK4-sod），并评估了疫苗诱导小鼠体液和细胞免疫应答的能力及对MTB感染豚鼠的保护效力。     

改良的基因重排16型人乳头瘤病毒E7DNA候选疫苗诱导野生型E7特异性T细胞应答

高危人乳头瘤病毒（hr-HPV）感染是宫颈癌（cc）发生的主要原因，约50％的cc由HPV—16所致。hr—HPVE7致癌基因编码的蛋白具有转化活性，并在HPV感染细胞中持续表达，可以作为特异的靶抗原用于cc及恶性前发育异常的免疫治疗。为去除HPV-16E7的致癌活性，德国OEhlschlaeger等将野生型E7基因（E7WT）中与转化活性相关的三个位点切开，得到的4个片段重排后形成核心部分，尾部加入原片段间三个连接处的核苷酸序列以保留所有潜在CTL表位，头部加入Kozak序列以增强免疫原性，获得了改良的重排HPV-16E7基因（HPV—16E7SH），同时构建了pTHamp—E7SH重组质粒，并以pTHamp—E7WT和空质粒作对照进行了研究。     

鸡-人嵌合抗体表达载体的构建

由于鸡与哺乳动物亲缘关系较远，因此，可以对一些高度保守的哺乳动物分子产生烈强的抗体应答。而且鸡可通过DNA重组、基因转移而产生具有不同型别的抗体库。鸡抗体重链和轻链的基因座仅含有单一功能可变区和连接区基因，通过一对引物就可扩增可变区基因库。但是由于鸡抗体对人体具有免疫原性，因此其临床应用受到限制。     

改良霍乱全毒素CT—E29H可增强对重组诺沃克病毒样颗粒疫苗的免疫应答

此项研究评估了基因修饰的霍乱毒素CT—E29H作为重组诺沃克病毒样颗粒(NV—VLP)疫苗的粘膜免疫佐剂作用，CT—E29H与CT的区别在于CT的亚单位CT—A1在氨基酸29位点由H取代E，形成脱毒的突变体。     

在未免疫志愿者中抗肝内期恶性疟DNA疫苗及改良痘苗病毒Ankara疫苗的安全性[英]

当今世界面临的最大公共卫生挑战之一就是控制疟疾，因此迫切需要开发能够抵抗恶性疟疾感染的疫苗。小鼠疟疾模型研究已经显示DNA疫苗接种后再用改良痘苗病毒Ankara(MVA)免疫能够诱导强T细胞免疫应答，作者报告了人类志愿者以DNA初免再以MVA加强免疫的安全性与耐受性结果。     

表达不同形式HCVE2蛋白和用CpG优化载体的DNA疫苗在小鼠免疫效果的比较

理想的丙型肝炎病毒(HcV)疫苗应既能诱导特异性中和抗体，又能诱导有力的T细胞免疫应答，DNA疫苗在此方面已经显示了一定的前景。为了探索增强HCV DNA疫苗免疫效果的可行途径，作者观察了改变抗原的细胞分布和增加质粒骨架中的CpG免     

来自腺病毒载体的从头合成的马尔堡病毒抗原诱导有效的体液和细胞免疫应答

马尔堡病毒（MARV）是一种引起人类致死性出血热的非洲丝状病毒，死亡率高达90％。目前尚无人用疫苗和治疗方法。美国GenPhar公司Wang等利用复制缺陷型腺病毒疫苗载体系统（cAdVax），将MARV Ci67、Ravn和Musoke株的糖蛋白（GP）基因克隆至穿梭质粒从而构建了基于cAdVax的3个MARV候选疫苗cAdVax M（ci）、cAdVax M（ra）和cAdVax M（mu）。Veto细胞感染，蛋白质印迹试验结果显示，基于cAdVax的MARV疫苗表达了高水平的MARV GP。     

SARS病毒E2蛋白保护性抗原片段原核表达载体的构建及表达

为构建SARS病毒E2蛋白保护性抗原片段的原核表达载体，采用人工合成法合成SARS病毒E2蛋白3’端cDNA；用常规分子克隆方法将此cDNA片段克隆入原核表达载体pBV220中，经温度诱导和SDS-PAGE电泳证明外源蛋白表达。结果表明合成的E2蛋白cDNA经序列测定，与报道的SARS病毒相应序列一致，内切酶酶切及PCR均得到456bp的cDNA片段，与实验设计一致，证明此cDNA片段已插入pBV220载体中；SDS-PAGE电泳表明有外源蛋白表达。结论：用本文介绍的方法可成功地合成并克隆SARS病毒E2蛋自原核表达载体，此项研究结果为SARS的诊断和预防奠定了基础。     

表达甲型H5N1禽流感病毒结构蛋白的重组痘苗病毒的构建与鉴定

目的  构建表达甲型H5N1禽流感病毒（H5N1 avian influenza A virus,H5N1 AIAV）NIBRG14株结构蛋白的重组痘苗病毒,为研制新型人用流感疫苗奠定基础。方法  通过反转录PCR扩增H5N1 AIAV NIBRG14株的血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）编码基因,并将改造的HA、NA基因克隆至痘苗病毒穿梭质粒 pSCCK。在重组质粒与痘苗病毒天坛株（vaccinia virus Tiantan,VTT）于Vero细胞中发生同源重组后,筛选同时表达HA和NA的重组痘苗病毒（rVTT-HA/NA）,并对其进行鉴定。结果  反转录PCR扩增的HA和NA基因大小约分别为1 700和1 400 bp,与预期相同。DNA测序证实,改造的HA和NA序列正确。对获得的rVTT-HA/NA进行PCR及测序表明,HA和NA基因正确插入VTT。蛋白质印迹显示,rVTT-HA/NA感染的Vero细胞表达的HA和NA能与相应的抗体发生反应。表达的HA具有血凝活性,血凝滴度为1∶32。结论  重组痘苗病毒rVTT-HA/NA可稳定表达H5N1 AIAV NIBRG14株的HA和NA。     

Hib-CRM197多糖结合疫苗经皮免疫诱导的抗Hib抗体应答

经皮免疫（TCI）是一种新型免疫方法，英国国立生物制品标准和控制研究所Mawas等检测了TCI b型流感杆菌（Hib）-白喉毒素（DT）交叉反应物质（CRM197）多糖结合疫苗加霍乱毒素（CT）或大肠杆菌不耐热肠毒素突变体（LTK63和LTR72）诱导的抗Hib和DT抗体应答。     

马尔堡出血热感染非人灵长类动物后用重组水泡性口炎病毒载体疫苗治疗的保护效力评估

马尔堡病毒（MARV）是引起致死性出血性疾病的一种丝状病毒，目前尚无人用治疗药物或疫苗。先前的研究表明，一种表达MARV跨膜糖蛋白的减毒重组水泡性口炎病毒（rVSV）活疫苗（VSVΔG／MARVGP）可保护非人灵长类动物防御致死性MARV攻击。美国陆军传染病医学研究所Dadd—ario—DiCaprio等用这种疫苗对MARV接触后的治疗效果进行研究。