大鼠液压脑损伤后bax和bcl—XL的表达改变在mRNA和蛋白水平的相关性

目的探讨脑创伤后bax和bcl-XL在mRNA和蛋白水平的变化规律及其与神经细胞凋亡发生、发展的关系.方法在液压脑损伤模型中,应用逆转录聚合酶链反应、免疫组化分别检测大鼠脑创伤后不同时程bax和bcl-xL的表达;采用凋亡原位末端标记、电镜超微结构、DNA凝胶电泳观察脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征.结果伤后6h,bcl-xL.mRNA下调[伤侧半球为对侧的(67.42±7.54)%],bcl-xL蛋白水平下降[伤侧为对侧的(85.85±5.72)%].伤后3d,bcl-xLmRNA和bd-xL蛋白表达分别为对侧的(39.97±3.61)%和(57.50±6.21)%;baxmRNA和bax蛋白分别为对侧半球的(203.95±17.53)%和(189.02±7.23)%.伤后bax/bclxL比率升高比细胞凋亡提前出现,早期由于bcl-xL.的表达下降,后期主要是由于bax的升高所致.结论细胞凋亡及其调节基因的表达间具有一致性;脑创伤对bax和bcl-xL的调节发生在转录水平以前的某一环节.bax/bcl-xL平衡体系的维持或紊乱影响脑创伤后神经细胞生存或死亡.     

液压脑损伤后大鼠脑组织DNA片段化及bax的表达改变

目的：探讨液压脑损伤后大鼠脑组织DNA片段化及凋亡相关基因bax的变化规律。方法：在液压颅脑损伤模型中，观察伤后神经功能，神经病理学改变，DNA片段化的形态和生化特征以豚凋亡促进基因bax的表达；比较液压致伤前5min应用放线菌酮对上述指标的影响。结果：伤后不同时间，不同脑区均出现特征性的DNA片段片，具有凋亡细胞的特征，放线菌酮治疗组的颅脑伤大鼠，伤后行走功能，平衡功能障碍程度明显低于未治疗组（P＜0．01），神经病理学改变减轻；不同脑区各个时间点凋亡细胞数均显减少，DNA电泳未见凋亡带谱，不同脑区bax蛋白水平升高受到抑制。结论：细胞凋亡参与了创伤性脑损伤后的病理生理改变，抑制脑创伤后神经细胞凋亡，可以减轻神经病理损害，具有神经保护作用。     

大鼠液压脑损伤后bcl-2和bax基因的表达分布

目的;观察SD大鼠单侧液压脑损伤后凋亡相关基因（bcl-2,bax）在脑组织中的表达特点。方法：采用侧方液压打击颅脑损伤模型,应用免疫组化和原位杂交方法,以及计算机显微图像分析技术,观察SD大鼠脑损伤后12 b脑内bcl-2、bax蛋白和mRNA的阳性细胞分布。结果：液压打击伤后bcl-2、bax基因在损伤侧大脑皮质、海马表达明显增强,挫裂伤组织内的血肿周边bcl-2、bax基因表达亦明显增强,阳性细胞受打击能量传递的影响呈梯度分布。结论：大鼠液压脑损伤后bcl-2和bax基因的表达分布受打击能量和脑内血肿的影响,并与脑损伤后迟发性神经元死亡（delayed neuron death,DND）密切相关。     

切断面神经干后大鼠面神经元bcl-2、bax基因表达变化及意义

目的 观察面神经干切断后面神经元ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因表达与面神经元调亡的关系。方法 采用大鼠面神经干切断模型,应用免疫组织化学方法观察面神经干切断后面神经元内ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因表达变化和对面神经元凋亡的影响。结果 面神经干切断后可以导ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因表达的明显变化及面神经元的凋亡。结论 ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因参与了面神经干切断诱导的面神经元凋亡过程的调控。     

胆管癌组织中自发性细胞凋亡和bcl-2/bax表达的状况及意义

目的：研究胆管癌组织中自发性细胞凋亡和bcl-2/bax基因表达的状况及意义。方法：TUNEL法原位检测凋亡细胞，免疫组化检测bcl-2和bax蛋白表达。结果：40例胆管癌标本自发性细胞凋亡指数（AI）的中位值为7．89％，高／中分化和无淋巴结转移胆管癌AI分别高于低分化和淋巴结转移者（P＜0．01），胆管癌组织bcl-2和bax蛋白表达率分别为７２．５％（２９／４０）和５７．５％（２３／４０），与癌旁正常胆管壁组织比较差异显著（Ｐ＜０．０１），高／中分化胆管癌bcl-2蛋白表达率高于低分化胆管癌（P＜0．01），bcl-2表达阳性胆管癌AI低于阴性，bax阳性高于阴性（P＜0．01），结论：胆管癌细胞仍保胃凋亡机制，bcl-2凋亡途径参与了胆管癌的发生，发展过程，AI和bcl-2蛋白表达可作为判断胆管癌恶性程度的指标。     

bcl-xL基因介导白血病细胞多药耐药的形成

观察ｂｃｌ－ｘＬ基因可否介导白血病细胞的多药耐药,并探讨其机制。方法采用脂质体法将ｂｃｌ－ｘＬｃＤＮＡ转导入ＨＬ－６０细胞,免疫印迹法检测Ｂｃｌ－ｘＬ及抗凋亡蛋白Ｂａｘ的表达;ＭＴＴ法测定呈足乙甙、柔红霉素、阿霉素对转染细胞的细胞毒性;流式细胞仪定量检测凋亡细胞及细胞内药物浓度。     

bcl—2,bcl—xl,bax在短暂性脑缺血后海马区的表达及对 …

探索神经细胞凋亡与ｂｃｌ－２家族基因表达的关系。方法短暂性脑缺血后海马区神经细胞ｂｃｌ－２家族基因的表达。结果在缺血后２４ｈ，ｂｃｌ－２、ｂｃｌ－ｘｌ的表达显著下降，７２ｈ表达量更低，ｂａｘ则相反，在缺血后表达量呈逐渐增高趋势。结论ｂｃｌ－２家族基因与缺血后海马神经元细胞的延性死亡有密切关系。     

液压冲击脑损伤对大鼠c—fos mRNA表达的影响

为研究大刀中度侧位液压冲击脑损伤对ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达的影响，将雄性ＳＤ大鼠，随机分为正常对照组、手术对照组和损伤组。损伤组动物均给０．２ＭＰａ液压冲击造成脑损伤，按冲击后处死时间不再分为５分钟、１５分钟、３０分钟、１小时、２小时组。应用ＲＴ－ＰＣＲ方法半定量观察ｃ－ｆｏｓ在大脑皮层和脑干的表达。结果显示，对照组顶叶皮层和脑干均有低水平ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达，冲击后５分钟，表达逐渐增强，冲击     

大鼠创伤性脑损伤的神经生长因子治疗

目的 :探讨脑室灌注NGF对大鼠创伤性脑损伤后神经元的凋亡和认知功能的影响。方法 :采用大鼠自由落体脑损伤模型 ,在创伤后不同时间从损伤侧侧脑室分别灌注NGF和人工脑脊液 ,一半动物于伤后第 5天取脑切片 ,Nissl染色 ,TUNEL染色 ,并用NADPH -d组化染色及NGF -R、bcl-2、ChAT免疫组化染色。另一半动物于伤后 1月时行避暗回避试验和跳台试验。结果 :Nissl染色见损伤给药组损伤侧海马各区细胞排列整齐 ,仅部分细胞出现轻微肿胀变性。与损伤对照组比较 ,损伤给药组损伤区周围皮质及损伤侧海马凋亡细胞明显减少 ,损伤给药组损伤区周围皮质、两侧海马及损伤侧隔区iNOS阳性神经元数量明显减少 ,损伤给药组损伤侧海马NGF -R阳性神经元数量亦减少、bcl-2阳性神经元数量有所增加、损伤侧隔区ChAT阳性神经元丢失不明显。与损伤对照组相比 ,损伤给药组避暗回避试验探索次数减少、滞留时间延长 ,跳台试验主动回避及总回避阳性率增高。结论 :大鼠创伤性脑损伤后使用神经生长因子脑室灌注治疗 ,可能通过对神经元iNOS、NGF -R的表达抑制和bcl-2的表达促进作用阻遏损伤区神经元凋亡的发生     

兔脑出血灶周围脑组织细胞凋亡及bcl-2和bax的检测

目的 :探讨兔脑出血灶周围脑组织中bcl 2、bax蛋白表达和细胞凋亡的关系。方法 :家兔 40只 ,分为A、B、C、D 4组。B、C、D 3组采用兔自体血二次注射法制作脑出血模型 ,分别于模型制作完成后 12h ,2 4h ,72h断头处死 ,运用TUNEL法、免疫组化SP技术 ,检测出血灶周围脑组织中细胞凋亡及bcl 2、bax蛋白表达。结果 :出血灶周围脑组织中细胞凋亡、bcl 2和bax蛋白表达在各组间差异有显著性 (P <0 .0 5 )。bcl 2蛋白表达与凋亡阳性细胞数呈负相关 (r=- 0 .781,P <0 .0 5 ) ,bax蛋白表达与其呈正相关 (r=0 .72 3,P <0 .0 5 )。结论 :出血灶周围脑组织中存在细胞凋亡 ,细胞凋亡的变化在一定程度上反映了周围脑组织的损伤程度。bcl 2和bax蛋白对凋亡具有调控作用。     

大鼠颅脑液压损伤的实验研究

目的:制作稳定的液压性颅脑损伤动物模型,重点探讨液压损伤装置制作方法,为进一步研究颅脑外伤提供基础.方法:将40只SD大鼠分损伤组3组,对照组1组分别给予不同打击造成轻中重颅脑液压打击伤并观察生命体征及病理学变化.结果:损伤组大鼠均有不同程度的脑损伤病理改变,造成的损伤稳定.结论:制作的液压损伤装置可以复制出大鼠分级液压打击脑损伤,模型冲击力定量准确,重复性好.     

褪黑素对大鼠液压脑损伤后NGF、bcl-2、bax mRNA表达的影响

目的:观察褪黑素对颅脑损伤后受损脑组织神经生长因子(NGF)、bcl-2、bax mRNA表达的影响,探讨褪黑素对创伤性脑损伤的保护作用机制.方法:采用侧方液压打击法制备大鼠颅脑损伤模型,应用原位杂交方法和计算机显微图像分析技术,观察褪黑素(5、10 mg/kg,皮下注射)对大鼠受损脑组织NGF、bcl-2、bax mRNA表达的调节作用.结果:脑损伤后立即给予褪黑素能够增强伤后12 h大鼠受损脑组织NGF和bcl-2 mRNA表达,增强效应与剂量呈正相关;褪黑素对bax mRNA表达无明显影响.结论:褪黑素能够增加液压脑损伤后NGF和bcl-2 mRNA表达而不改变bax mRNA表达,提示褪黑素可能通过提高受损神经细胞修复和抗凋亡能力发挥脑保护作用.     

乳腺癌组织中巨噬细胞浸润与bcl-2,bax表达的关系

目的 :研究巨噬细胞在乳腺癌组织中的浸润状况及其与凋亡相关因子bcl 2 ,bax表达的关系 .方法 :采用抗CD6 8(MΦ标记物 )、bcl 2和baxmAb分别对 4 1例乳腺癌组织进行免疫组化染色 ,使用SPSS 10 .0统计软件进行分析 .结果 :乳腺癌癌巢及间质中均有CD6 8+ 细胞浸润 ,CD6 8+ 细胞数与bcl 2表达强度显著负相关 (rS=- 0 .4 4 1,P =0 .0 0 4 ) ,与bax表达强度正相关 (rS=0 .348,P =0 .0 2 6 ) .CD6 8+ 细胞数与患者年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移和病理学类型无关 (P值均 >0 .0 5 ) .结论 :巨噬细胞的浸润与乳腺癌组织中细胞凋亡的形成和清除关系密切 ;与乳腺癌的生长和转移无明显关系     

急性闭合性颅脑损伤脑微循环形态学改变的实验研究

目的:研究急性闭合性颅脑损伤后大鼠脑微循环形态学的改变.方法:制作大鼠侧位液压冲击脑损伤模型,脑微血管墨汁灌注、制备透射电镜脑组织标本,观察脑微循环形态学的变化.结果:墨汁灌注示脑外伤后3h微血管的数目和密度均较对照组降低.伤后48h、72h微血管数目和密度均较3h组增加,但仍较对照组低.透射电镜示微血管在伤后3h即有微绒毛的形成,伤后6h微血管内膜不完整,内皮细胞管腔面有微绒毛形成,相邻的微绒毛往往合抱形成小泡.伤后24h～72h,微血管内皮细胞肿胀明显、管腔狭窄呈缝状,细胞核轻度固缩,胞质内线粒体呈空泡状.毛细血管内膜凸凹不平,有断裂.结论:急性颅脑损伤后微循环的改变是导致脑外伤后继发性缺血缺氧的主要原因.     

幼龄和老龄大鼠液压脑损伤后NGF、Bcl-2、Bax蛋白的表达

目的:研究衰老因素对神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)表达的影响,探讨老年颅脑损伤恢复不良的分子生物学机制。方法:采用侧方液压打击颅脑损伤模型,应用免疫组化方法和计算机显微图像分析技术,比较幼龄(2～3个月)和老龄(15个月)大鼠脑损伤后12 h脑内NGF、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的差异。结果:液压打击伤后NGF、Bcl-2、Bax蛋白在损伤侧大脑皮质、海马表达明显增强,老龄组大鼠伤侧皮质NGF蛋白表达和Bcl-2/Bax蛋白表达比率显著低于幼龄组(P<0.05)。结论:老龄和幼龄大鼠液压脑损伤后NGF、Bcl-2和Bax蛋白表达的差异提示老龄哺乳动物受损神经元修复和生存能力下降,为认识创伤性脑损伤后年龄相关性神经功能缺失的病理生理学机制提供了帮助。     

实验性脑损伤中c-fos的表达与脑水肿的相关性研究

目的探讨脑损伤后c-fos基因和蛋白的表达变化规律与脑水肿之间的关系.方法利用Feeney's自由落体法制作局灶性脑损伤动物模型,应用原位杂交和免疫组化技术检测不同受伤时间段c-fos mRNA和蛋白的表达,同时观察脑组织的水肿情况.结果c-fos mRNA在伤后15 min即有高水平表达,并出现两次表达高峰,分别出现于30 min和16 h.c-fos蛋白随受伤时间的延长表达逐渐增强,在16 h表达最强,随后表达下降,48 h时表达又有升高现象.脑水肿在伤后30 min开始发生,逐渐加重,6 h达高峰,持续至16 h,后逐渐减轻,48 h基本正常.结论脑损伤后c-fos的首次表达高峰可能参与了损伤神经元的修复和生存,与神经细胞的保护机制有关.c-fos第二次表达高峰与脑水肿所致缺血缺氧有关,参与脑损伤后的继发性损害.