积雪草苷合大黄素对肿瘤坏死因子α诱导的肾系膜细胞C3表达的影响

目的:探讨积雪草苷合大黄素干预肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的BALB/C小鼠肾小球系膜细胞补体核心成分-C3 mRNA及蛋白的表达水平。方法:采用BALB/C第3~5代肾小球系膜细胞,模型组TNFα5 ng.ml-1诱导24 h,治疗组在TNFα诱导的同时,分别以积雪草苷1、2、4μg.ml-1合大黄素0.1、0.2、0.4μg.ml-1进行干预,于24 h后分别提取细胞上清及RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶链免疫方法(ELISA)分别检测肾小球系膜细胞C3 mRNA和蛋白的表达。结果:正常BALB/C小鼠的肾小球系膜细胞具有一定的C3 mRNA和蛋白表达。经TNFα诱导后C3 mRNA和蛋白表达均明显上调,用上述3种不同浓度的积雪草苷合大黄素干预后,肾小球系膜细胞C3 mRNA及蛋白水平表达均出现不同程度的下调,呈一定的剂量依赖关系。结论:积雪草苷合大黄素能够抑制炎性细胞因子TNFα上调所致的肾局部C3过度产生,具有保护肾功能、延缓病程进展的作用。     

对比剂诱导巨噬细胞来源外泌体对肾小管上皮细胞的作用及甘草酸苷的干预效应#br#

目的　探讨对比剂诱导巨噬细胞来源外泌体对肾小管上皮细胞的作用及甘草酸苷的干预效应。方法　分别用PBS、碘海醇、碘海醇+甘草酸苷刺激THP-1细胞,获取3种外泌体（NC-Exo、CIN-Exo、CIN-GL-Exo）。透射电镜观察外泌体的形态;蛋白免疫印迹（Western blot）检测CD63、TSG101、calnexin的表达;荧光标记法检测外泌体的摄取。将HK-2细胞随机分为4组：Con组、NC-Exo组、CIN-Exo组、CIN-GL-Exo组。Western blot检测3种外泌体中高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达量,以及4组细胞中凋亡相关蛋白及HMGB1/Toll样受体4（TLR4）/核因子κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的表达;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测4组细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测4组细胞炎性因子［白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α］mRNA的表达。结果　THP-1细胞来源的外泌体为圆形或类圆形小囊泡,表达标志物蛋白CD63、TSG101,而不表达内质网蛋白calnexin。标记DiR荧光素的外泌体可被HK-2细胞摄取。CIN-Exo中HMGB1表达量高于NC-Exo和CIN-GL-Exo（P＜0.05）。CIN-Exo组的细胞凋亡率以及Bax、Cleaved caspase-3表达量高于Con组、NC-Exo组、CIN-GL-Exo组,而Bcl-2表达量低于其他3组（P＜0.05）。CIN-Exo组细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平,以及HMGB1、TLR4、NF-κB表达量高于其他3组（P＜0.05）。结论　对比剂可通过巨噬细胞来源外泌体诱导肾小管上皮细胞凋亡和炎症反应,可能与外泌体HMGB1水平上调有关,甘草酸苷可抑制该途径而发挥保护效应。     

复方积雪草煎剂对单侧输尿管结扎小鼠肾小管间质骨架蛋白α-SMA、vimentin表达的影响

目的：通过对复方积雪草煎剂对单侧输尿管结扎（unilateral ureteral occlusion，UUO）小鼠模型肾小管间质骨架蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、波形蛋白（vimentin）表达影响的研究，探讨其防治肾间质纤维化的作用和机理。方法：采用小鼠UUO模型，用复方积雪草水煎剂进行灌胃干预，血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin-converting enzyme inhibitor，ACEI）福辛普利作为对照。MASSON染色观察肾组织病理及间质纤维化；肾组织中α-SMA、vimentin表达采用免疫组化和Westem-blotting方法检测；基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法。结果：UUO模型组和治疗组小鼠肾间质纤维化程度以及α-SMA、vimentin蛋白表达和基因表达水平均较假手术组显著增高，而复方积雪草煎剂、福辛普利治疗组肾间质纤维化和间质骨架蛋白的表达均较模型组显著降低。结论：复方积雪草可显著抑制肾小管上皮细胞或间质细胞的表型转化，提示降低肌成纤维细胞的积聚是其防治肾间质纤维化的重要机制之一。     

去甲斑蝥素对TGF—β1诱导的人近端肾小管细胞上皮细胞转分化及信号蛋白Smad2／3表达的影响

目的探讨去甲斑蝥素对体外人源性肾小管细胞株（HK－2）上皮细胞间质转分化（epithelial—mesenchymal transition,EMT）以及信号蛋白Smad2／3的影响。方法体外培养HK2细胞,分为对照组、TGF-β1组和去甲斑蝥素组（NCTD组）。对照组为无血清DMEM培养,TGG-β1组为TGF-β1 5ng·mL^-1诱导,NCTD组为不同浓度NCTD（0．5、1．0、2．5μg·mL^-1）与TGF-β1（5ng·mL^-1）共同作用,各组作用时间48h。使用半定量RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、上皮性钙黏附蛋白（Ecadherin）与Smad2、Smad3mRNA表达;采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2／3、p-Smad2／3蛋白质表达。结果与对照组相比,TGF-β1组α—SMAmRNA及其蛋白表达明显上调（Pd0．05）,E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著下调（P〈0．05）;与TGF-β1组相比,NCTD干预组α—SMAmRNA及其蛋白表达明显下调（P〈0．05）,而E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著上调（P〈0．05）,且均呈剂量依赖性。与对照组相比,TGF-β1组Smad2、Smad3rnRNA和Smad2／3、p-Smad2／3蛋白表达上调（P〈0．05）;与TGF-β1组比较,NCTD干预组Smad2、Smad3mRNA和Smad2／3、p-Smad2／3蛋白表达下调（P〈0．05）,具有剂量依赖关系。结论去甲斑蝥素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用,该作用可能与其下调信号蛋白Smad2／3的表达有关。     

红景天苷对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞逆向分化的影响

目的：阐释红景天苷对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HKC）表型转分化的效应,探讨其对I型（colⅠ）和Ⅲ型（ColⅢ）胶原蛋白表达的影响。方法：体外培养HKC,应用不同浓度红景天苷处理经TGF-β1诱导活化的HKC细胞,显微镜观察细胞形态改变,免疫组化法检测角化蛋白-18和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达：应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测ColⅠ型和ColⅢ型胶原蛋白表达。结果：HKC细胞经过TGF-β1诱导,细胞角化蛋白．18表达明显下调,α-SMA、ColⅠ、ColⅢ型胶原表达明显上调,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。经红景天苷干预后,其表达有所下降,与TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：红景天苷可抑制TGF-β1诱导的HKC表型转分化,同时可以抑制肾小管上皮细胞外基质成分ColⅠ、ColⅢ型胶原的合成,在一定程度上具有阻止肾小管间质纤维化的作用。     

霉茶蛋白对自发性高血压大鼠肾脏的保护作用及机制研究

摘要：目的:观察霉茶蛋白对自发性高血压大鼠（SHR）肾脏的保护作用,并借助肾小管上皮细胞（NRK-52E）对其作用机制进行探讨。方法:将40只雄性SHR随机分为4组:模型组、复方罗布麻片组(阳性药物,50 mg·kg-1)、霉茶蛋白低、高(70,140 mg·kg-1)剂量组,每组10只。复方罗布麻片组和霉茶蛋白组早晚各灌胃给药1次,容量为10 ml·kg-1,连续给药7周,模型组给予等体积蒸馏水。末次给药后1 h处死动物,迅速剥离肾脏组织,HE染色观察肾脏组织结构形态变化;测定肾脏组织Toll样受体4（TLR4）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α） mRNA表达;血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激NRK-52E后,经霉茶蛋白各剂量(0.05,0.1,0.2,0.4μg·ml-1)干预24 h,收集细胞,测定各组TLR4、IL-6、TNF-αmRNA表达。结果:霉茶蛋白可改善SHR肾脏组织的炎性病变,降低SHR肾脏组织和NRK-52E细胞中TLR4、IL-6、TNF-αmRNA表达水平,与模型组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:霉茶蛋白对SHR肾脏具有一定的保护作用,其机制可能与下调炎性因子TLR4、IL-6、TNF-α的表达有关。     

大黄素对心肌梗死后小鼠心肌组织TNF-α、IL-10基因表达和NF—κB活性的影响

目的：研究大黄素对小鼠缺血后心肌局部细胞因子TNF—α和IL-10表达及NF—κB活性的影响。方法：持续性结扎小鼠冠状动脉左前降支造成心肌缺血损伤模型,用大黄素进行干预。实时定量PCR检测干预后心肌组织的TNF—α和IL-10的mRNA,ELISA法检测TNF—α和IL-10蛋白水平,EMSA测定NF—κB的活性。结果：经大黄素干预后,心肌组织TNF—α的表达明显减少（P〈O．01）,IL-10的表达增加（P〈0．01）,IL-10／TNF—α的比值显著性升高,NF—κB的活性明显减弱（P〈0．01）。结论：大黄素显著抑制干预后心肌组织促炎性细胞因子的表达,抑制NF—κB的活性。     

脂多糖对大鼠小气道上皮细胞TNF-α,TNFR表达和结构的影响

探讨脂多糖（LPS）引起大鼠小气道上皮细胞损伤及机制。将SD大鼠随机分为脂多糖气管注射组（LPS 100μg/100μl L1组，50μg/100μl L2组）和对照组（生理盐水100μl,C组）。光镜和透射电镜动态观察小气道上皮细胞损伤改变，以原位分子杂交方法检测小气道上皮细胞TNFαmRNA和TNF受体mRNA表达的变化。结果：L1组和L2组病理改变趋势相似。LPS注射2d后，小气道上皮细胞轻度变性；LPS注射4d后，上皮细胞坏死，脱落明显，周围炎症也加重。与C组比较，L1组各时间处死大鼠小气道上皮细胞TNFαmRNA和TNF受体mRNA表达均增高（P＜0．01）；L1组d8 TNFαmRNA比d4TNFαmRNA表达明显增强（P＜0．05）。L1组d4和d8TNF受体mRNA分别比d2 TNF受体mRNA表达增强（P＜0．01）。脂多糖在体内可引起大鼠小气道上皮细胞明显损伤；小气道上皮细胞TNFαmRNA表达上调在脂多糖引起上皮细胞损伤中具有重要作用。     

肺炎克雷伯菌引起大鼠小气道上皮细胞损伤及与肺内α肿瘤坏死因子关系的探讨

目的探讨肺炎克雷伯菌引起大鼠小气道上皮细胞损伤及机制。方法将Wistar大鼠随机分为两组:对照组和感染组采用光镜动态观察小气道上皮细胞损伤改变。以免疫组化及原位分子杂交分析方法,检测小气道上皮细胞α肿瘤坏死因子(TNF-α)蛋白和TNF-αmRNA表达的变化。并用放射免疫分析法测定肺组织中TNF-α含量。结果显示感染组大鼠小气道上皮细胞病理改变明显。感染第2周起至第4周小气道壁各种炎症细胞增加,可见上皮细胞部分脱落坏死,损伤明显加重。感染组在2～4周TNF-αmRNA表达与对照组比较显著增强(P <0 .0 1)。在第4周TNF α蛋白明显增高(P <0 .0 1)。从第1周起肺组织中TNF-α含量增加并保持到第8周。结论肺炎克雷伯菌在体内可引起小气道上皮细胞损伤,肺内TNF-α水平升高与气道上皮细胞损伤程度平行。并且TNF-α蛋白和TNF-αmRNA表达上调在加重上皮细胞损伤中又具有重要作用     

拮抗Toll样受体4对于溶血磷脂酸诱导的THP-1细胞Toll样受体4／核因子-κB信号通路的影响

目的：通过拮抗Toll样受体4（TLR4）观察其对于溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）诱导的人单核细胞株THP-1细胞的核因子-κB（nuclear factor-kappaB,NF-κB）p65表达的影响以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的变化。方法取THP-1细胞,LPA以不同浓度水平（0～10μmol·L－1）刺激4 h,或1μmol·L－1浓度刺激不同时间（0～8 h）,酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞因子TNF-α,随后在LPA （1μmol·L－1）条件下分别予不同浓度TLR4单克隆抗体（TLR4 mAb）（5,20,30 mg·L－1）干预THP-1细胞,观察其对LPA诱导的核蛋白NF-κB p65表达及TNF-α分泌水平的影响。结果 LPA以剂量依赖方式促进TNF-α分泌,并可诱导THP-1细胞NF-κB p65活化,予TLR4 mAb阻断TLR4后,可显著抑制NF-κB p65表达及TNF-α分泌。结论 LPA可经由Toll4／NF-κB信号途径激活单核细胞,最终引起TNF-α等炎性因子的分泌,参与动脉粥样硬化进程。     

瑞舒伐他汀对心肌肥厚大鼠TLR4信号通路的影响

目的研究瑞舒伐他汀(rosuvastatin,RSV)对压力负荷诱导心肌肥厚大鼠心肌中toll样受体4(TLR4)及其下游核转录因子NF-κB p65、IκBα、炎症因子TNF-α表达的影响。方法采用腹主动脉缩窄大鼠模型,♂Wistar大鼠随机分为假手术组(S)、模型组(M)、RSV给药组(R,10 mg·kg~(-1)·d~(-1))每组10只。行心脏超声学检查,采用RT-PCR、Western blot、免疫组化、ELISA等方法检测心肌组织中心肌肥大基因ANP及TLR4、NF-κB p65、IκBα、TNF-α的表达。将TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平进行相关性分析。结果 M组与S组相比,心脏体积和心肌细胞横截面直径、ANP mRNA水平均明显增加(P<0.01),伴TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的水平明显增加及IκBα蛋白水平减少(P<0.05)。RSV抑制心肌肥厚,下调心肌组织中TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的表达及上调IκBα蛋白水平(P<0.05)。在M组和R组,TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平呈正相关。结论 RSV抑制心脏压力负荷诱导的心肌肥厚的作用可能与其抑制TLR4信号系统有关。     

丹参酮ⅡA对EA.hy926细胞TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响

目的观察丹参酮ⅡA对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926 TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法体外培养人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926;观察丹参酮ⅡA低、中、高剂量组对LPS刺激EA.hy926细胞的保护作用,RT-PCR和Western bolt法检测TLR4、NF-κB、TNF-αmRNA和蛋白表达。结果 LPS刺激组TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA和蛋白表达较正常组明显增加(P<0.05)。与LPS刺激组相比,丹参酮ⅡA低剂量组TLR4、NF-κB、TNF-αmRNA及蛋白表达无明显差异,而丹参酮ⅡA中、高剂量组TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA及蛋白质表达明显降低(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA抗AS的作用机制之一是通过干预TLR4/NF-κB信号通路来实现的。     

柚皮苷对人皮肤角质细胞分泌趋化因子RANTES及其核转录因子-kB信号通路影响的实验研究

目的：研究炎症性细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）和γ干扰素（IFN-γ）对人皮肤角质细胞（HaCaT）分泌趋化因子RANTES的诱导作用;以阿维A为阳性对照药,研究柚皮苷对此诱导作用的抑制作用及其机制。方法：将HacaT分为阴性对照组、模型刺激组（TNF-α＋IFN—γ）、阿维A预处理组（TNF-α＋IFN—γ＋阿维A）和柚皮苷预处理组（TNF-α＋IFN—γ＋柚皮苷）等;采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定HaCaT细胞经单用和合用TNF-α、IFN-γ刺激以及加入阿维A和柚皮苷后RANTES的分泌量。采用免疫细胞化学方法和Western blot法检测HaCaT中核转录因子-KB P65（NF—kB P65）蛋白的表达。结果：单用或合用TNF—α、IFN-γ可显著诱导细胞分泌RANTES,并以合用组作用最显著（P〈0．01）。柚皮苷、阿维A均能明显抑制TNF-α、IFN-γ诱导的RANTES的分泌（P〈O．01）及NF—kB P65蛋白的表达。结论：柚皮苷可以抑制TNF-α、INF-γ诱导RANTES的分泌及相关蛋白的产生,其机制可能是通过抑制NF—kB信号传导途径的活化而实现。     

丹参酮ⅡA对EA.hy926细胞TLR4/NF-кB炎症信号通路的影响

目的 观察丹参酮ⅡA对脂多糖(LPS)诱导入脐静脉细胞融合细胞EA.hy926 TLR4/NF-кB炎症信号通路的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制.方法 体外培养人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926;观察丹参酮ⅡA低、中、高剂量组对LPS刺激EA.hy926细胞的保护作用,RT-PCR和Westem bolt法检测TLR4,NF-кB、TNF-αmRNA和蛋白表达.结果 LPS 刺激组TLR4,NF-кB和 TNF-αmRNA和蛋白表达较正常组明显增加(P<0.05).与LPS刺激组相比,丹参酮ⅡA低剂量组TLR4,NF-кB,TNF-αmRNA及蛋白表达无明显差异,而丹参酮ⅡA中、高剂量组TLR4,NF-кB和TNF-αmRNA及蛋白质表达明显降低(P<0.05).结论 丹参酮ⅡA抗AS的作用机制之一是通过干预TLR4/NF-кB信号通路来实现的.     

丹参酮ⅡA磺酸钠联合阿托伐他汀对冠心病患者外周血单个核细胞TLR4、MyD88、NF-κB表达的影响

目的：观察冠心病患者外周血单个核细胞 TLR4、MyD88、NF-κB 的表达,分析丹参酮ⅡA 磺酸钠联合阿托伐他汀对其表达的影响,以 TLR4炎症信号通路为靶点探讨丹参酮ⅡA 磺酸钠治疗冠心病的可能机制。方法选取诊治的冠心病患者160例,同期进行健康体检的正常人100例作为对照。采用 Real time-PCR 和 Western blot 测定外周血单个核细胞 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定血清高敏 C-反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。160例冠心病患者随机分为观察 A 组和观察 B 组,每组80例。观察 A 组在常规治疗基础上给予阿托伐他汀治疗,观察 B 组在观察 A 组基础上加用丹参酮ⅡA 磺酸钠注射液,疗程均为30 d,比较2组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平。结果与对照组比较,冠心病患者组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平显著升高（ P ﹤0.05）。TLR4、MyD88、NF-κB 蛋白表达与 hs-CRP、TNF-α呈正相关（ r ＝0.761和0.802,0.699和0.774,0.835和0.749,P 均﹤0.05）。与治疗前比较,治疗后观察 A 组和观察 B 组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平均显著降低（ P ﹤0.05）;但观察 B 组降低程度更明显（ P ﹤0.05）。结论丹参酮ⅡA 磺酸钠联合阿托伐他汀通过抑制外周血单个核细胞 TLR4炎症信号通路的激活发挥抗炎作用,可能是丹参酮ⅡA 磺酸钠发挥治疗作用的机制之一。     

栀子拮抗细菌脓毒症有效成分京尼平苷的研究

目的：脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征,是烧伤、创伤和感染性疾病患者的常见并发症,其中内毒素（LPS）是介导细菌脓毒症的重要病原体相关分子模式。重组人活化蛋白C作为FDA批准的第一个用于治疗重度脓毒症的药物,经过6年的应用评估,其疗效已被否定,迄今脓毒症治疗仍缺乏有效药物。本文通过从中药栀子中提取分离具有中和LPS作用的有效成分京尼平苷,研究其拮抗细菌脓毒症的活性。方法：以LPS活性中心LipidA为靶点,采用生物传感器技术,从传统清热中药中筛选出具有LipidA结合活性的栀子,进而利用现代色谱技术分离出具有拮抗LPS活性的单体京尼平苷,通过鲎试剂法检测京尼平苷对LPS的体内外中和作用;RT-PCR法检测京尼平苷对LPS诱导巨噬细胞TLR4和TNF—αmRNA表达的影响;ELISA法检测京尼平苷对LPS刺激RAW264．7细胞产生细胞因子（TNF—α）的抑制作用;观察京尼平苷对脓毒症模型小鼠的保护作用。结果：京尼平苷在体外对LPS具有直接的中和作用,并呈现出较好的剂量效应关系：同时可剂量依赖的抑制LPS刺激引起的RAW264．7细胞的活化（TLR4和TNF-αmRNA的表达下调,细胞因子TNF-α的产生减少）;在体内可降低LPS血症模型动物血中的LPS水平;对致死剂量热灭活大肠埃希氏菌攻击的小鼠具有显著的保护作用。     

口腔扁平苔藓病灶中Toll样受体4与TNF-α的表达

目的探讨TLR4、TNF-α在口腔扁平苔藓(OLP)发病中的可能作用。方法采用免疫组化法检测OLP组与正常对照组口腔黏膜蜡块标本中TLR4、TNF-a的表达;采用q RT-PCR法检测TLR4的基因表达。结果OLP组中的TLR4、TNF-α蛋白及TLR4 mRNA表达均显著高于对照组(P<0.05);TNF-α蛋白与TLR4蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论 OLP病灶部位TLR4 mRNA表达激活,TLR4、TNF-α表达增多,与OLP局部炎症和破坏的迁延不愈有关。     

积雪草酸通过调节TLR4和PPAR-γ活性抑制内毒素诱导的血管平滑肌细胞炎症反应

目的观察积雪草酸(asiatic acid,AA)能否抑制内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)炎症反应,并探讨其作用机制。方法原代培养SD大鼠主动脉VSMCs;不同浓度AA干预后,采用MTT法测定VSMCs的活性;分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和real-time PCR检测IL-6、MCP-1、TNF-α蛋白及mRNA水平;Western blot和real-time PCR法测定TLR4和PPAR-γ的蛋白及mRNA的表达水平。结果当AA浓度在0~30μmol·L^-1范围内时,对VSMCs细胞活性无明显影响,当500μg·L^-1LPS刺激VSMCs后,IL-6、MCP-1、TNF-α、TLR4蛋白及mRNA水平明显升高(P<0.05),而PPAR-γ的表达明显降低(P<0.05);AA(10、20、30μmol·L^-1)对LPS诱导的VSMCs细胞IL-6、MCP-1和TNF-α蛋白及mRNA水平的降低作用呈浓度依赖性;此外,AA能浓度依赖性地抑制LPS诱导的VSMCs细胞TLR4 mR-NA和蛋白表达,且TLR4-siRNA能够起到与AA类似的抗炎作用。AA还可上调VSMCs细胞内PPAR-γmRNA和蛋白表达,而PPAR-γ拮抗剂GW9662则能够部分抵消AA的抗炎作用。结论AA能有效抑制LPS诱导的VSMCs细胞IL-6、MCP-1、TNF-αmRNA和蛋白表达,AA的抗炎作用可能与其下调TLR4表达和上调PPAR-γ活性作用相关。     

大黄素通过调控TLR4/NF-κB通路对脂多糖诱导血管内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

目的 研究大黄素对脂多糖（LPS）诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）氧化损伤的保护作用及机制。方法 运用CCK-8细胞活力检测法筛选LPS体外诱导HUVEC细胞氧化损伤模型浓度及大黄素给药浓度。取HUVEC细胞,分为对照组、模型组（1 μg/L LPS）、吡咯烷二硫代氨基甲酸铵（PDTC,阳性药,10 μmol/L）组和大黄素低、高剂量（40、80 μmol/L）组,置于37℃、5% CO₂培养箱中培养24 h。ELISA法测定各组细胞上清液中一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;采用Western Blotting法检测各组细胞中Toll样受体（TLR4）、核因子κB（NF-κB p65）、TNF-α蛋白的表达。结果 LPS浓度为1 μg/L,作用24、48 h,HUVEC细胞存活率分别为64.8%、51.2%; 40、80 μmol/L大黄素作用24、48 h对HUVEC细胞存活率无显著影响,选择1 μg/L作为LPS造模浓度,40、80 μmol/L作用24 h作为大黄素给药条件。与对照组比较,模型组HUVEC细胞增殖活力显著下降,NO、MDA、ROS、TNF-α含量显著升高,TLR4、NF-κB p65、TNF-α蛋白表达升高（P<0.01）;与模型组比较,40、80 μmol/L大黄素给药后HUVEC细胞生存率显著升高,NO、MDA、ROS、TNF-α含量显著降低,TLR4、NF-κB p65、TNF-α蛋白表达显著降低（P<0.05、0.01）。结论 大黄素对LPS诱导的HUVEC细胞氧化损伤具有显著保护作用,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB通路、抑制炎症有关。     

褪黑素干预急性坏死性胰腺炎肺损伤及巨噬细胞移动抑制因子表达

目的：研究急性坏死性胰腺炎（acute necrotizing pancreatitis,ANP）大鼠肺组织巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、TNF-α的变化及褪黑素（MT）的干预效果。方法：36只大鼠随机分为假手术组（SO组）、急性坏死性胰腺炎组（ANP组）和MT干预组（MT组）,每组12只。应用胰胆管内注射牛磺胆酸钠的方法诱导ANP模型,MT组于诱导模型前30min皮下注射MT。术后4h和24h分批处死大鼠（每个时间点n=6）,用RT—PCR检测肺组织MIF、TNF-αmRNA的表达情况,用SABC免疫组织化学法检测肺脏MIF蛋白表达情况,并行胰腺及肺脏的病理检查。结果：ANP组4、24h肺组织MIF、TNF-αmRNA表达较SO组明显升高（P〈0．05）,肺脏及胰腺病理损伤较严重;MT组较ANP组肺组织MIF、TNF-αmRNA表达下降（P〈0．05）,病理损伤减轻;MIF主要表达于肺脏支气管上皮细胞胞浆。结论：MIF可能参与急性胰腺炎肺损伤的发生,MT可减弱其肺内表达及胰腺炎相关肺损伤的严重程度。