不同冷冻保护剂对外周血干细胞保存的研究

目的:探索冻存外周血干细胞(peripheralbloodstemcell,PBSC)的最佳冷冻保护剂组合和最大细胞浓度。方法:将冷冻保护剂二甲基亚砜(dimethylsulfoxideDMSO)、羟乙基淀粉(hydroxyethylstarchHES)、人血清白蛋白(humanserumalbrinALb)及自体血浆(autoplasma)按不同比例组成3组冷冻保护剂,A组:5%DMSO+6%HES+4%ALb;B组:5%DMSO+6%HES+autoPLASMA;C组:5%DMSO+4%Alb。冻存PBSC的细胞浓度分别为1×108/ml、2×108/ml和4×108/ml3个梯度。比较3组不同冷冻保护剂对不同细胞浓度的PBSC的冻存效果。进行冻存前后粒单系集落形成单位集落形成能力(colonyformingunitGranulocytemacrophage和爆式红系集落形成单位CFUGM;burstformingUniterythroid,BFUE)、CD34+CD38-细胞的测定,及复苏后细胞拒染率测定。数据处理用统计学区组方差分析。结果:3组不同冷冻保护剂组合中以B组的CFUGM,BFUE回收率最高,在细胞浓度为1×108/ml的回收率分别为78.7±9.8%和69.8±14.1%;A组与C组的CFUGM回收率分别为68.3±6.2%和65.8±7.2%,BFUE回收率分别为63.4±9.7%和60.4±10.6%,B组与A组、C组方差分析F=56.7,0.01相似文献   

粒细胞集落刺激因子动员外周血造血干细胞致急性肺损伤1例

患者,女,32岁,确诊非霍奇金淋巴瘤Ⅳ期(非特异性外周T细胞型)2个月,于2002年12月7日入院行自体外周血造血干细胞移植。既往体健。入院后查血常规、胸片、心电图、肺功能等均正常。遂于12月10日开始外周血干细胞动员,方案为NAP(米托蒽醌 阿糖胞苷 泼尼松)化疗及G-CSF(粒细胞集落刺激因子)联合,G-CSF自化疗结束后24h始用,     

外周血CD34 +细胞计数对外周血干细胞采集时机选择及结果的影响

目的:探讨外周血造血干细胞动员过程中外周血CD34 +细胞计数的变化趋势及其对采集时机选择和采集结果的影响。 方法:收集2012年4月至2017年3月在山西省肿瘤医院行自体外周血造血干细胞动员的62例血液病患者临床资料,采用化疗联合粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的动员方案,监测外周血及采集物中白...     

流式细胞仪检测恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群的临床研究

目的 探讨流式细胞仪检测恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群的效果及其与临床病理、肿瘤类型的关系。方法 选取我院于2014年8月-2016年9月收治的98例恶性淋巴瘤患者为研究组,同期选取98例健康体检者为对照组。应用流式细胞仪检测两组外周血T细胞亚群(CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺)并进行比较。结果 研究组CD3⁺、CD4⁺/CD8⁺水平分别为(55.63±11.25),(1.32±0.62),显著低于对照组的(68.96±12.63),(1.59±0.59),差异具有统计学意义(P＜0.05);研究组CD4⁺、CD8⁺水平(33.67±8.14),(26.02±4.67)与对照组的(34.12±8.33),(25.67±4.53)相比差异无统计学意义(P＞0.05)。霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者CD3⁺、CD4⁺/CD8⁺水平分别为(54.63±11.36),(1.22±0.65)和(55.52±12.02),(1.34±0.71),显著低于对照组的(68.96±12.63),(1.59±0.59),差异具有统计学意义(P＜0.05);霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者CD4⁺、CD8⁺水平分别为(33.78±8.23),(25.74±4.88)和(33.62±8.74),(26.32±4.85)与对照组的(34.12±8.33),(25.67±4.53)相比,差异无统计学意义(P＞0.05)。Ⅲ~Ⅳ期恶性淋巴瘤患者CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺水平分别为(52.66±12.47),(28.25±6.32),(1.30±0.62)明显低于对照组的(68.96±12.63),(34.12±8.33),(1.59±0.59),差异具有统计学意义(P＜0.05);Ⅰ~Ⅱ期恶性淋巴瘤患者CD3⁺水平为(58.63±11.85),显著低于对照组的(68.96±12.63),而CD8⁺水平为(29.63±3.57),显著高于对照组的(25.67±4.53),差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 流式细胞仪检测外周血T细胞亚群可以作为诊断恶性淋巴瘤患者的病情、分期以及免疫状态的重要手段,具有较高的应用价值。     

乳腺癌干细胞相关亚群细胞周期分析

目的:流式细胞仪分选乳腺癌细胞系MCF-7的肿瘤干细胞相关SP亚群(side population,SP),并检测SP和非SP细胞周期。方法:MCF-7细胞悬液经Hoechst33342染色,流式细胞仪分选SP和非SP后,乙醇固定,PI染色,流式细胞仪检测细胞周期。结果:SP细胞在MCF-7细胞中占4%,Verapamil阻断后比例减为0·5%。SP细胞中S/G2/M期细胞最低,仅占7·9%,而非SP细胞增殖期比例相对高,S/G2/M期细胞约占34·2%。未分选细胞中S/G2/M期细胞比例居中,为22·9%。结论:人乳腺癌细胞系MCF-7含SP亚群,比例约为4%,且SP细胞多处于静止期,具有一般干细胞的特性。     

自体外周血造血干细胞移植过程中淋巴细胞亚群和CD34+细胞变化的动态研究

目的动态观察动员、采集过程中外周血及造血干细胞中的淋巴细胞亚群和造血干细胞含量变化,及时指导临床选择最佳采集时机。方法 采用流式细胞术(FCM)测定大剂量化疗(HDC)联合重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对47例恶性实体瘤患者自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)过程中,外周血和外周血造血干细胞(PBPC)中的淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8、NK、CD19和造血干细胞CD34+及其亚群CD34+CD38-、CD34+ Thy1+、AC133+细胞含量的变化,同时用体外集落培养的方法评价干细胞克隆形成能力。结果 动员后外周血淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8、NK和CD19细胞含量均低于动员前,其中CD3、CD8含量明显低于基础状态(P=0.007,P=0.016),而动员后外周血中的CD34及其亚群含量均明显高于动员前(P<0.05)。动员后中位时间第16天(15～17 d)外周血中的CD34含量达到最高峰,且第1次采集物中的造血干细胞含量最高。PBPC中除CD4、CD4/CD8明显低于外周血外(P<0.000 5),其他淋巴细胞亚群含量与外周血比较无明显改变。外周血单个核细胞中CD34+细胞含量与PBPC中CD34+细胞、CD34+CD38-及粒/单系集落形成单位(CFU-GM)、红系爆式集落形成单位(BFU—E)均存在显著相关性(P<0.05),而与采集的单个核细胞(MNC)总数、CD34+Thy1+、AC133+细胞含量间无相关关     

应用粒细胞集落刺激因子动员后异基因外周血干细胞移植供者外周血干细胞与不成熟粒细胞的相关性

 目的　探讨供者应用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员后单采外周血干细胞（PBSC）移植物中的不成熟粒细胞与CD+34 细胞及单个核细胞（MNC）之间的相关性。方法　122例异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT）供者用rhG-CSF 7.25～10 μg·kg-1·d-1进行动员,于动员前及动员后对外周血及PBSC收集物中的MNC和不成熟粒细胞及CD+34 细胞进行检测,并计算出输给患者的MNC、不成熟粒细胞及CD+34 细胞数。结果　动员后白细胞计数及不成熟粒细胞比值逐渐升高,至第5天达高峰;外周血MNC中不成熟粒细胞与CD+34 细胞同步增加有较好的相关性;采集后的PBSC移植物输给患者后,均全部植活并恢复造血功能,为染色体核型或血型及HLA转为供者型所证实,慢性粒细胞白血病患者Ph1染色体转阴。结论　rhG-CSF 7.25～10 μg·kg-1·d-1分两次皮下注射能有效动员PBSC;allo-PBSCT供者经rhG-CSF动员后,外周血MNC中不成熟粒细胞与CD+34细胞数同步增加有较好的相关性,不成熟粒细胞的数量可间接反映干／祖细胞的数量,故MNC与不成熟粒细胞数结合可作为allo-PBSCT的剂量阈标准。     

脐血与成人血成分、T淋巴细胞亚群及正常人骨髓集落形成的比较研究

目的：研究脐血,成人外周血及骨髓的特性,方法：采用全自动血细胞分析仪及流式细胞仪分别测定济血,成人外周血的血成分及T巴细胞亚群,采用集落形成试验观察脐血,外周因及骨髓的CTU－GM和BFU－E的产率变化,结果：脐血的各种血成分均显著高于外周血,CD,CD3明显低于外周血,而CD4,CD8的表达与外周血相似,经细胞因子诱导后,脐血中的CUF0－GM及BFU－E显著升高,结论：脐血富含造血干细胞,是重建造血与免疫系统的血细胞新来源。     

乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究

目的 通过乳腺癌细胞系及其干细胞的培养,化疗药干预和流式细胞仪筛选鉴定,探讨不同乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例,及富集乳腺癌干细胞相关亚群的方法。方法 通过细胞培养乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231,观察生长曲线,比较化疗药物干预下生长情况;利用流式细胞仪检测两种乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例;无血清悬浮培养,化疗药(多西紫杉醇、表阿霉素)干预这两种乳腺癌细胞系,观察其是否形成细胞球。结果 (1)MDA-MB-231细胞系倍增时间短,生长速率高于MCF-7细胞系;(2)MCF-7细胞系中可能存在较大比例肿瘤干细胞,其对化疗抵制,能自我更新;(3)化疗敏感性用两独立样本t检验,MCF-7细胞,差异没有统计学意义;MDA-MB-231细胞,差异有统计学意义,提示MDA-MB-231细胞系对该方案化疗较敏感;(4)无血清悬浮培养,MDA-MB-231细胞系未发现明显细胞球;MCF-7细胞系初次无血清培养约6天出现细胞球。加入化疗药筛选后两种细胞,见大部分肿瘤细胞逐渐死亡,未发现明显细胞球;(5)流式细胞仪检测,MCF-7、MDA-MB-231两种细胞系中主要是CD44⁺CD24⁺亚群和CD44^-CD24⁺亚群,CD44⁺CD24^-/low细胞比例分别2.07%和0.20%。结论 (1)MDA-MB-231细胞系增值较快,恶性度相对较高,其对TA联合化疗药物较敏感;MCF-7细胞系中可能存在少量肿瘤干细胞,对化疗抵制,能自我更新;(2)无血清培养液培养MCF-7细胞系能形成悬浮细胞球;流式细胞仪检测两种细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例小;(3)CD44⁺CD24^-/low表型可能不是乳腺癌干细胞唯一特异性的表面标志。     

恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+调节T细胞的检测及其临床意义

目的探讨恶性肿瘤外周血CD4+CD25+调节T细胞水平的特点及其临床意义.方法采用流式细胞术检测53例恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+调节T细胞水平及淋巴细胞亚群,并进行分层分析.结果外周血淋巴细胞亚群分析显示恶性肿瘤患者CD4、CD16阳性细胞比例在早期(Ⅰ+Ⅱ期)患者即低于对照组,但差异无显著性意义(P＞0.05),CD4/CD8亦低于对照组,差异有显著性意义(P＜0.05);随着疾病进展(Ⅲ、Ⅳ期)CD4、CD4/CD8、CD16阳性细胞比例减低明显,差异有显著性意义(P＜0.05);各期CD8、CD19、CD3与对照组接近(P＞0.05).外周血CD4+CD25+调节T细胞比例健康对照组CD4+CD25+T细胞水平为(14.49±4.69)%,恶性肿瘤53例CD4+CD25+T细胞比例为(19.61±8.17)%,统计学有差异(P＜0.05);进一步分层分析显示随疾病进展外周血CD4+CD25+T细胞水平升高,在肿瘤进展期(Ⅳ期)尤其明显,统计学有极显著差异(P＜0.01).结论恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+调节T细胞水平的升高,与恶性肿瘤免疫功能低下及肿瘤的发生发展密切相关.去除这群细胞可有效诱导肿瘤免疫,为肿瘤治疗提供一种新的方法.     

CD34+ CD90+ cells and late hematopoietic reconstitution after autologous peripheral blood stem cell transplantation

Autologous peripheral blood stem cell transplantation (PBSCT) has been demonstrated to result in rapid, stable long-term engraftment. However, there has been considerable debate concerning the cells responsible for early and late hematopoietic reconstitution after PBSCT. Recently, CD34⁺ hematopoietic stem and progenitor cells have been clearly divided into two subpopulations by flow cytometry; namely undifferentiated pluripotent stem cells and differentiated committed progenitor cells. However, only a few studies have defined which subset contained in graft products might be the most predictive for late hematopoietic reconstitution after PBSCT. In this review, we present updated information regarding the relationships between the number of infused CD34⁺ cells or their immature subsets such as CD34⁺CD90⁺ cells and the late hematopoietic reconstitution after PBSCT, and discuss the threshold dose of CD34⁺CD90⁺ cells required for sustained long-term engraftment.     

Clinical outcome of peripheral blood stem cell support

Two clinical results of peripheral blood stem cell support are commonly considered: (1) the effect on hematopoietic recovery and (2) the effect on the underlying malignancy. The dynamics of hematopoietic recovery after autoiogous bone marrow transplantation and after autologous peripheral blood stem cell transplantation in a clinical setting are similar if no exogenous cytokines are administered and the peripheral stem ceils are collected while their numbers are not deliberately increased (mobilised). If mobilized peripheral stem cells are transplanted, hematopoietic recovery is accelerated. In some circumstances, patients who receive peripheral stem cell transplantation may experience an improved progression-free survival after high-dose therapy when compared with similar patients who receive autologous bone marrow transplantation. Explanations for such a survival advantage might include (1) a lower likelihood of occult tumor cells capable of restoring disease in peripheral stem cell autograft products than in bone marrow harvests, (2) a greater number of cytotoxic effector cells capable of destroying occult tumor ceils in the peripheral stem cell collections than in bone marrow harvests, and (3) a different and advantageous pattern of immunologic recovery following autologous peripheral stem cell transplant compared to autologous bone marrow transplant.     

异基因外周血干细胞移植后外周血出现幼稚粒细胞与白血病复发的关系

目的了解异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT）后白血病复发与外周血幼稚粒细胞的关系。方法97例白血病患者经allo-PBSCT治疗,于14、30、60、90、120、180d及1年以后骨髓随访时同时观察外周血幼稚粒细胞出现情况,分析与白血病复发的关系。结果97例中,15例发生白血病复发。在30d及其以后外周出现幼稚粒细胞的57例中,复发14例,复发率24．6％,而30d及其以后外周血未出现幼稚粒细胞者的40例中仅有1例复发,复发率2．5％（P〈0．05）。复发与不复发者移植物抗宿主病（GVHD）差异无统计学薏：义（P〉0．05）。结论白血病复发与移植后外周血幼稚粒细胞有关．复发后治疗难度大,预后差。     

应用C1iniMACS细胞分选系统纯化自体外周血干细胞的探讨

目的 探讨应用CliniMACS细胞分选系统纯化自体外周血干细胞的效果。方法 4例非霍奇金淋巴瘤患者,经Vp-16+G-CSF动员后,采集外周血中造血干细胞,并用CliniMACS细胞分选系统作干细胞纯化分选,3例患者作2次采集后行1次分选,1例患者经3次采集后作2次分选。通过单个核细胞计数及流式细胞术测定CD34+细胞,分析纯化效果。结果 4例患者进行7例次干细胞采集,循环量6000～8 000ml,采集前体内CD34+细胞数为每千克体重(12.77±11.21)×106,经采集得到CD34+细胞数为每千克体重(4.70±4.17)×106,CD34+细胞采集效率为(40.91±33.35)％,对5例次磁珠分选结果,标记前CD34+细胞数为每千克体重(6.07±3.18)×106,分选后获得的CD34+细胞数为每千克体重(4.03±2.28)×106,CD34+细胞回收率为(64.19±13.35)％。终产物细胞悬液量为40～45 ml,CD34+细胞纯度为(83.18±6.76)％。结论 应用CliniMACS细胞分选系统获得纯化的自体造血干细胞,可应用于支持大剂量化疗治疗实体肿瘤。     

外周血造血祖细胞检测对外周血干细胞动员采集的预测意义

 目的　通过血细胞分析仪检测外周血造血祖细胞（HPC）含量,探寻一种快速预测采集物干细胞含量、判断外周血造血干细胞采集时机的手段,并评价其应用意义。方法　对27例化疗联合粒细胞集落刺激因子（G-CSF）进行外周血造血干细胞动员采集者及17例单用G-CSF动员的采集者,利用血细胞分析仪检测外周血HPC计数,血液治疗和移植工程国际组织（ISHAGE）法检测外周血及采集物CD+34 细胞计数,并进行相关回归分析。对外周血HPC计数预测采集物CD+34 含量进行受试者工作曲线（ROC）分析。结果　无论化疗组或非化疗组,外周血HPC计数与CD+34 计数均具有线性相关性（r＝0.711,P＝0.000及r＝0.656,P＝0.004）。化疗组外周血CD+34 计数＝-0.829+0.648×外周血HPC计数;非化疗组外周血CD+34 细胞计数＝45.033+0.460×外周血HPC计数。化疗组患者外周血HPC计数与采集物CD+34 细胞量呈线性相关（r＝0.602,P＝0.001）,采集物CD+34 计数＝1.106+0.046×外周血HPC计数。以HPC≥85／μl预测采集物CD+34 计数≥5×106／kg的灵敏度为78 %,特异度为82 %。结论　在自体干细胞移植动员患者中,外周血HPC计数可部分替代外周血CD+34 计数预测采集效果,HPC≥85／μl为较好的预测阈值。     

非小细胞肺癌患者外周血CD4+CD25+调节T细胞的检测及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌患者外周血CD4 CD25 调节T细胞水平的特点及其临床意义。方法采用流式细胞术检测61例非小细胞肺癌患者外周血CD4 CD25 调节T细胞水平,并进行分层分析。结果非小细胞肺癌组外周血CD4 CD25 调节T细胞水平(27.14±12.74)%,明显高于30例健康人群对照组CD4 CD25 T细胞水平(14.02±5.42)%(P<0.01),而且该CD4 CD25 调节T细胞CD45RA(-),CD69(-)。进一步分层分析显示与正常对照组比较,随肺癌进展,外周血CD4 CD25 T细胞水平显著升高,进展期尤其明显[Ⅲ期(25.97±5.94)%,n=20,P<0.01;Ⅳ期(35.13±13.27)%,n=26,P<0.001]。结论非小细胞肺癌患者外周血CD4 CD25 调节T细胞水平明显高于正常,且与肿瘤的发生发展密切相关。去除这群细胞可能有效诱导肿瘤免疫,为肿瘤治疗提供一种新的方法。     

肺癌患者外周血循环中癌细胞的流式细胞仪分析

目的：用流式细仪分析肺癌患者外周血循环中的癌细胞,方法：外周血经Ficoll梯度离心分离单核细胞组分,后者用CD45、细胞角蛋白（CK）及肺癌特异性抗体（2F／S5A）染色后,应用流式细胞仪检测CD45^-CK^ /S5A^ 细胞。结果检测了165例肺癌患者外周血,发现50例（30．3％）患者外周血癌细胞呈阳性。其中非小细胞肺癌阳性率为30．67％（45／150）,小细胞肺癌为33．33％,阳性率为与患者的病理分期有显著相关性（P＜0．05）。结论：利用流式细胞仪分析检测癌患者外周血循环中的癌细胞不驻有助于临床病理分期,而且对预测肺癌转移潜能具有应用价值。     

外周血CD_(34)~+细胞检测对外周血干细胞采集结果及时机选择的意义

 目的　研究外周血CD+34 细胞数对采集结果的意义,并探索可用于临床指导外周干细胞采集时机选择的参考阈值。方法　2007年1月至2009年12月共57例次自体造血干细胞移植动员采集患者,以环磷酰胺（CTX）化疗+粒细胞集落刺激因子（G-CSF）（5～10 μg／kg）动员,COBE分离仪（Spectra Version 6）行外周血造血干细胞采集,应用流式细胞术监测外周血中CD+34 细胞绝对计数。结果　采集产品单个核细胞（MNC）中位数4.6×108／kg（0.3×108／kg～10.5×108／kg）,CD+34 细胞中位数2.4×106／kg（0.16×106／kg～34.9×106／kg）,外周血CD+34 细胞数是产品MNC和CD+34 细胞总量唯一相关指标,外周血白细胞（WBC）与采集产品MNC和CD+34 细胞数无关。进一步分析提示外周血CD+34 计数≥15／μl,单次采集效率提高,CD+34 细胞采集量达1×106／kg和2×106／kg比例为81 %和60 %,采集产品MNC和CD+34 总数明显提高。提示外周血CD+34 细胞数15／μl可作为启动采集。ROC分析发现外周血CD+34 细胞 25（26.5～28.6）／μl,单次采集足量CD+34 细胞概率最大。结论　外周血CD+34 细胞计数是外周血自体干细胞采集重要的相关指标,CD+34 细胞 15／μl可作为采集时机选择的阈值。