MMP-9/TIMP-1在哮喘气道重塑中的作用及抗-RANTES抗体的干预作用

目的:通过抗-RANTES抗体对细胞外基质(ECM)代谢相关因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响,探讨抗-RANTES抗体对哮喘气道重塑的干预机制。方法:雄性Wistar大鼠36只,随机分为3组:生理盐水对照组(对照组)、卵蛋白致敏及激发的哮喘组(哮喘组)、抗-RANTES抗体干预组(干预组)。肺组织切片用免疫组化法标记MMP-9、TIMP-1,并用图像分析MMP-9、TIMP-1表达水平,用ELISA方法测定RANTES。结果:哮喘组肺组织中MMP-9、TIMP-1表达水平明显高于对照组(P<0.05),MMP-9/TIMP-1比值下降,RANTES与MMP-9/TIMP-1呈负相关;抗-RANTES抗体干预后MMP-9、TIMP-1明显下降(P<0.05),MMP-9/TIMP-1逐渐恢复,与对照组比较无统计学差异(P<0.05);干预组气道炎症等病理学变化较哮喘组明显减轻,临床症状明显改善。结论:抗-RANTES抗体可调节哮喘大鼠肺组织MMP-9/TIMP-1比例的平衡,干预细胞外基质重塑,延缓哮喘气道重塑的发生。     

归肺理气方对痰热壅肺证慢性阻塞性肺疾病大鼠血清与肺组织MMP-9和TIMP-1的影响

目的观察归肺理气方对痰热壅肺证慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血清与肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的影响。方法将61只SD大鼠随机分为7组(正常组、正常+中药中剂量组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、泼尼松组),采用香烟熏吸加气管内注入脂多糖(LPS)法建立大鼠痰热壅肺证COPD模型。予归肺理气方高、中、低3个浓度及强的松灌胃干预28d,检测血清与肺组织MMP-9和TIMP-1含量。结果模型组大鼠血清与肺组织的MMP-9和TIMP-1含量以及MMP-9/TIMP-1值较正常组显著增加(P0.05),中药中、高剂量组与泼尼松组的MMP-9量以及MMP-9/TIMP-1值较模型组显著下降(P0.05)。结论归肺理气方可调节痰热壅肺证慢性阻塞性肺疾病大鼠的MMP-9/TIMP-1失衡,可能有一定的改善COPD气道重塑作用。     

氨茶碱对支气管哮喘气道重塑大鼠支气管肺组织内皮素-1和一氧化氮含量的影响

目的观察氨茶碱对支气管哮喘气道重塑大鼠气道形态学及肺组织中内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）、11型胶原含量的影响。方法24只SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组,每组8只,除正常组外以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠哮喘模型,治疗组、模型组从第1次哮喘激发开始（造模第15天）分别给予氨茶碱35mg·kg^-1·次^-1·d^-1、0．9％氯化钠溶液2ml·次^-1·d^-1灌胃给药,用药4周后处死大鼠,取肺组织HE染色,病理图象分析仪测量支气管壁面积、支气管平滑肌面积,采用放射免疫法测定肺组织ET-1、Ⅲ型胶原含量,采用硝酸还原酶法测定肺组织NO含量。结果与正常组比较,模型组大鼠支气管壁面积、平滑肌面积明显增加（P〈0．01）,肺组织中ET-1、NO、II型胶原含量均明显增加（P〈0．01）;与模型组比较,治疗组大鼠支气管壁面积、平滑肌面积较模型组显著降低（P〈0．01）,肺组织中ET-1、NO、11型胶原含量均显著降低（P〈0．05或〈0．01）结论氨茶碱可通过降低肺组织中ET—1、NO、Ⅲ型胶原含量,抑制哮喘大鼠气道壁、平滑肌增厚,从而抑制支气管哮喘大鼠气道重塑。     

哮喘患者检测痰中基质金属蛋白酶的临床意义

目的探讨支气管哮喘（简称哮喘）患者诱导痰中基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）的浓度比值与气道炎症和气流受限的关系。方法选择缓解期哮喘患者（哮喘组）和健康对照者（健康对照组）进行肺功能测定;用诱导痰检查方法对痰炎性细胞进行分类计数,并用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定诱导痰上清液中MMP-9和TIMP-1浓度。结果哮喘组和健康对照组诱导痰中MMP-9、TIMP-1浓度比较差异和MMP-9／TIMP-1比值比较差异有统计学意义。结论哮喘组患者诱导痰中MMP-9／TIMP-1比值的失衡与气道炎症有关,从而造成气道重塑和气流受限,导致肺功能下降。     

Egb761对哮喘模型大鼠MMP-9及TIMP-1表达的影响和对气道重构的干预研究

目的:研究银杏叶提取物(Egb761)对哮喘大鼠气道上皮细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响和对气道重构的干预作用。方法:40只大鼠随机均分为4组,即正常对照、哮喘模型、地塞米松及Egb761组,以吸入卵蛋白复制大鼠哮喘模型,用免疫组化技术结合计算机病理图像分析技术,测定各组大鼠气道形态学参数和气道上皮细胞MMP-9及TIMP-1表达的相对含量。结果:哮喘模型组大鼠气道壁的总厚度及内壁厚度和平滑肌层的厚度均显著高于正常对照、地塞米松和Egb761组(P<0.05);哮喘模型组MMP-9及TIMP-1表达量也显著高于上述3组(P<0.01);哮喘模型组MMP-9与TIMP-1的比例显著失衡。结论:少量多次的卵蛋白吸入可以导致大鼠气道重构的发生,MMP-9及TIMP-1在气道重构中发挥着重要作用,Egb761对哮喘模型大鼠的气道重构有干预作用。     

基质金属蛋白酶-9及其抑制剂-1与气道重塑的关系

气道重塑是支气管哮喘的主要特征之一,细胞外基质(ECM)的降解和沉积失衡是导致呼吸道壁结构异常构建的重要原因之一,基质金属蛋白酶(MMPs)是调节细胞外基质代谢的主要限速酶,其中MMP-9与哮喘的关系最密切。金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)家族是MMPs天然的内源性抑制因子,其中TIMP-1是TIMPs中活性最强的并能特异性抑制MMP-9的活性,两者含量的高低和比例     

哮喘大鼠中性粒细胞基质金属蛋白酶9和血清基质金属蛋白酶抑制剂-1的表达及地塞米松对其的影响

目的：观察基质金属蛋白酶9（MMP-9）在哮喘大鼠血中性粒细胞（PMN）中的表达及地塞米松对其的影响,探讨血PMN中MMP-9和基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的相关性。方法：采用哮喘大鼠模型,随机分成哮喘组、正常对照组、地塞米松治疗组,对血PMN进行分离纯化,免疫细胞化学法检测MMP-9的表达水平,ELISA法检测血清TIMP-1的蛋白浓度。结果：哮喘组（0.196±0.011,OD值）和地塞米松治疗组（0.135±0.008,OD值）中MMP-9的表达水平均显著高于正常对照组（0.100±0.010,OD值）（P〈0.01）,地塞米松治疗组MMP-9的表达水平显著低于哮喘组（P〈0.01）。哮喘组[（34.96±4.54）ng/mL]血清TIMP-1的表达水平分别显著高于正常对照组[（26.14±3.43）ng/mL]和地塞米松治疗组[（29.89±3.43）ng/mL]（均P〈0.01）,地塞米松治疗组TIMP-1的表达水平显著高于正常对照组（P〈0.05）。MMP-9与TIMP-1的表达水平呈显著正相关（n=29,r=0.741,P〈0.01）。结论：PMN能合成MMP-9,且哮喘时其合成水平增加。PMN可能部分通过MMP-9起作用来参与哮喘的炎症过程,其合成功能可以被地塞米松所抑制。MMP-9及其抑制物TIMP-1共同参与哮喘的发病机制。     

阿奇霉素对哮喘模型小鼠气道上皮细胞基质金属蛋白酶-9表达及气道重塑指标的影响研究

目的:观察阿奇霉素对哮喘模型小鼠气道上皮细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及气道重塑指标的影响,探讨其在哮喘预防中的作用。方法:取小鼠随机分为正常对照组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阳性对照组(地塞米松,0.18mg·mL-1)和阿奇霉素低、中、高剂量组(0.2、0.4、0.8mg·mL-1),每组10只,除正常对照组外其余各组腹腔注射卵蛋白致敏并雾化卵蛋白激发15d建立哮喘模型,每日雾化前1h腹腔注射相应药物0.5mL,末次激发24h后,观察各组小鼠肺组织病理学变化,检测气道上皮细胞MMP-9表达及气道重塑指标。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠气道平滑肌明显增厚,上皮细胞脱落,炎性细胞浸润增多;而阿奇霉素各剂量组和阳性对照组上述病变较模型组均有减轻。与模型组比较,阳性对照组和阿奇霉素各剂量组小鼠MMP-9表达(P<0.05)及气道重塑指标(3种面积(支气管总管壁面积、气道内壁面积、平滑肌面积)与基底膜周径之比)均明显下降(P<0.01),但仍高于正常对照组(P<0.01)。结论:阿奇霉素可能通过下调MMP-9表达延缓气道重塑的病理变化,从而减慢哮喘气道重塑的进程。     

MCP-1和MMP-9在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的表达

目的研究单核细胞趋化蛋白-1(MCP—1)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型气道和肺组织中的表达及其在细胞外基质重塑中的作用：方法采用熏香烟加气管注入内毒素法，建立大鼠COPD模型，观察其气道和肺组织的病理改变；用免疫组化法规察MCP-1、MMP-9的蛋白定位及表达。结果该法建立大鼠COPD模型，其病理学改变与人类COPD的改变相似，COPD模型组MCP-1、MMP-9在气道上皮、成纤维细胞、肺泡巨噬细胞等表达均明显增强．结论MCP-1主要通过刺激单核细胞和巨噬细胞浸润进入肺内，MMP-9主要通过降解细胞外基质参与COPD的形成，MCP-1和MMP-9之间有一定的协同作用。     

哮喘患者血清MMP-9及TIMP-1的变化及意义

目的 探讨支气管哮喘患者血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)和基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)水平的变化及其临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验检测125例支气管哮喘患者和60例健康对照组患者血清MMP-9和TIMP-1水平.结果 支气管哮喘患者发作组和缓解组血清MMP-9和TIMP-1及其二者比值均明显高于对照组(P<0.05,P<0.01),且发作组较缓解型组明显增高.结论 检测支气管哮喘患者血清MMP-9和TIMP-1水平对临床诊断和治疗具有一定的指导意义.     

贴敷"咳喘宁"贴膏对支气管哮喘模型大鼠肺泡灌洗液中炎性细胞的影响

目的:通过建立大鼠支气管哮喘模型,观察穴位贴敷“咳喘宁”贴膏对支气管哮喘模型大鼠肺泡灌洗液中炎性细胞的影响。方法:将60只Wistar大鼠按随机数字表分组法随机分为空白对照组(A组)、模型对照组(B组)、内服“桂龙咳喘宁”对照组(C组)、内服“地塞米松”对照组(D组)、穴位贴敷“咳喘宁”高剂量治疗组(E组)、穴位贴敷“咳喘宁”低剂量治疗组(F组)6组,每组10只。各组大鼠用Elwood法造模。于诱喘前10h开始给药,并分别观察各组哮喘模型大鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞的改变。结果:与C组比较,D、E、F组炎性细胞减少有显著性差异(P<0.05);与D组比较,C组、E组、F组嗜酸性粒细胞明显增高,有显著性差异(P<0.05);各治疗组中的中性粒细胞都明显减少,与B组比较有显著性差异(P<0.05);各治疗组中淋巴细胞水平明显降低,P<0.05或P<0.01。结论:穴位贴敷“咳喘宁”贴膏对支气管哮喘模型大鼠有明显的抑制炎症的作用,其作用虽不及内服“地塞米松”组,但等同内服“桂龙咳喘宁”组;有明显的改善变态反应和增加免疫功能作用。     

诱导痰嗜酸性粒细胞阳离子蛋白对支气管哮喘的诊断价值

目的：通过检测支气管激发试验阳性患者诱导痰中嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）水平,探讨ECP对哮喘的诊断价值.方法：选取呼吸内科以咳嗽3周以上就诊的患者,共300例,进行支气管激发试验检查.通过ELISA法检测所有支气管激发试验阳性患者诱导痰的ECP水平,根据最后追踪最终确诊为哮喘的患者,用ROC曲线统计分析得出哮喘患者ECP水平与激发试验阳性的临界值.结果：激发试验阳性患者最后确诊为哮喘组的ECP水平为226.6±30.8 μg/L,激发试验阳性患者非哮喘组ECP水平为61.0±22.2 μg/L,2组比较有极显著性差异（P＜0.01）;诱导痰ECP水平对支气管哮喘诊断的最佳临界值为186.05 μg/L,该切点的灵敏度为0.938,特异度0.895,Youden指数0.833.结论：ECP水平能作为气道高反应诊断的评价指标,有助于对支气管哮喘的诊断以及鉴别诊断.     

阿托伐他汀对哮喘大鼠气道炎症及气道重构的影响

目的：探讨阿托伐他汀对卵清白蛋白致敏哮喘模型大鼠气道炎症和重构的影响。方法清洁级 SD 雄性大鼠24只按随机数字表法分为对照组、哮喘组和阿托伐他汀组,每组8只。对照组大鼠采用0．9％氯化钠溶液（生理盐水）进行致敏和激发,哮喘组大鼠采用卵清白蛋白致敏和激发,阿托伐他汀组在致敏和激发前以阿托伐他汀口服。采用肺功能检测3组大鼠气道呼气阻力;采用图像分析软件测定肺组织切片中的支气管壁内周长、支气管管壁面积、支气管平滑肌面积;胶原表达通过气道壁 Masson 染色进行观察;实验动物血清中白介素－13（IL－13）及转化生长因子－β1（TGF－β1）的水平以 ELISA 法测定。结果肺功能检测显示哮喘组平均呼气阻力显著升高,阿托伐他汀组低于哮喘模型组（ P ＜0．05）;病理检查显示哮喘组气道炎症明显,对照组和阿托伐他汀组与之相比炎症轻微;阿托伐他汀组大鼠气道管壁面积、平滑肌面积图像分析和哮喘组比较差异有统计学意义（ P ＜0．05）;阿托伐他汀组肺组织中胶原沉积表达较哮喘组减少（ P ＜0．05）;阿托伐他汀组大鼠血清中 IL－13和 TGF－β1较哮喘组降低（ P ＜0．05）。结论阿托伐他汀能够明显减轻哮喘大鼠气道炎症,降低哮喘大鼠的气道基本阻力;减少肺组织中胶原沉积,降低气道管壁面积、平滑肌层面积,减轻哮喘气道重构。阿托伐他汀治疗能够降低血清中 TGF －β1和 IL－13水平,或为其减轻炎症和气道重构的机制。     

建立支气管哮喘大鼠模型的新方法及评价

目的 探讨建立支气管哮喘动物模型的新方法.方法 20只清洁级SD大鼠随机分为哮喘组和对照组,每组10只,哮喘组以小剂量卵蛋白(OVA)1 mg致敏并激发为大鼠哮喘模型,对照组以氢氧化铝凝胶致敏,以0.9％氯化钠溶液激发.观察2组大鼠肺组织病理、支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞分类及血清OVA-specific IgE水...     

雷帕霉素对哮喘大鼠气道重塑和白细胞介素-8白细胞介素-10的影响

目的观察雷帕霉素对哮喘大鼠模型气道重塑和肺组织白细胞介素(IL)-8、IL-10的影响,探讨其在干预支气管哮喘气道炎症和气道重塑中的作用机制,为临床研究提供实验依据。方法建立哮喘大鼠气道重塑模型,30只SD大鼠按随机数字法随机分为正常对照组(A)、哮喘组(B)、雷帕霉素干预组(C),每组10只。对肺组织切片行苏木素-伊红染色观察气道重塑情况。采用免疫组织化学和图像分析技术的方法测定各组大鼠肺组IL-8、IL-10的表达。结果哮喘组动物出现管壁增厚、平滑肌增生、黏液分泌增加等气道重塑的特征性改变,免疫组织化学染色显示气道各层细胞及炎性细胞均有IL-8表达增多,且IL-10水平也显著减少。雷帕霉素干预组与哮喘组比较,炎症反应轻微,平滑肌增生、黏液分泌不明显,免疫组织化学染色示各细胞IL-8表达也有所降低,IL-10水平表达增高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论雷帕霉素可减轻哮喘大鼠的气道炎症和气道重塑,并可降低IL-8表达水平,增高IL-10表达水平,调节失衡的致炎因子/抑炎因子比例,发挥对支气管哮喘的炎症抑制和免疫调节作用。     

支气管扩张合并哮喘的临床特点及其治疗的探讨

目的探讨支气管扩张合并哮喘(支扩合并哮喘)此一特殊类型临床特点和治疗方法。方法①用支气管激发试验和支气管舒张试验对临床诊断为支气管扩张的102例患者进行测试,筛选出支扩合并哮喘的病例。②对单纯性支扩和支扩合并哮喘此两类患者的以往病史详细问卷。③对此两类型患者的临床表现进行观察。④对支扩合并哮喘此一类型的病例进行分组试验性治疗。A组按抗支扩加抗哮喘治疗。B组按常规抗支扩治疗,均治疗2个月。结果①102例临床诊断支扩患者,其中98例进行支气管激发试验,其中18例阳性(PD20FEV1<12.8μmol)4例进行支气管舒张试验,其中2例阳性(FEV1增加幅度>15%)。即102例临床诊断支扩患者,发现20例为支扩合并哮喘。另外82例为单纯性支扩。②支扩合并哮喘以往病史的特点是个人过敏病史和家族过敏史的频率很高,分别为120%和110%。而单纯性支扩的发生频率很低,仅为7.3%和3.6%。③支扩合并哮喘的临床特点是发病呈季节性加重(20例);常有上呼吸道过敏症状;痰液多为黏液脓性;除固定部位湿性音外,全部病例有散在性或弥漫性喘鸣音。④支扩合并哮喘类型的分组试验性治疗,用抗支扩+抗哮喘药物治疗的10例,疗效显著,基本属完全治愈,而单独用抗支扩药物的10例,大部分遗留下症状和体征。结论支扩合并哮喘是一个特殊类型,可通过支气管激发试验和支气管舒张试验和以往病史追询、临床特点观察,而与单纯性支扩相鉴别,其治疗方法也和单纯性支扩不同。对支扩合并哮喘应当应用抗支扩+抗哮喘的治疗方案。在抗哮喘方面应用表面糖皮质激素吸入,疗效确实而且安全。     

Establishment of a rat chronic asthma model and its evaluation

This study is to establish a rat chronic asthma model. Sensitive SD rats were selected through histamine challenge. The asthmatic groups were sensitized by ih and ip with OVA, aluminium hydroxide gel and inactivated bacillus pertussis on day 1 and 14. From day 21, acute asthmatic group was aerosolized 1% OVA for 1 week, chronic asthmatic group was aerosolized 0.1% OVA for 12 weeks. The control groups received saline as the substitution of OVA. Twenty four hours after the last provocation, physiological monitoring equipment was used to detect the pulmonary function, then the rats were sacrificed. Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was collected to calculate the ratio of different inflammatory cells. ELISA was used to detect total IgE and OVA-specific IgE in serum. Microscopy was conducted to observe the histopathology of lung stained with haematoxylin and eosin staining. Collagen fibers were detected using Picric acid-Sirius red staining technique. The optical density at 610 nm of extractive from locus caeruleus was detected by passive cutaneous anaphylaxis (PCA). The results showed that the asthmatic characteristics were significantly developed in model groups, but not in control groups. Chronic asthmatic group had significantly higher indexes than acute asthmatic group, including the thickness of airway smooth muscle and bronchial basement membrane, and goblet cell hyperplasia, the area of collagen in airways, A610 of extractive from locus caeruleus, the concentration of total IgE and OVA-specific IgE in serum. However, inflammatory cell infiltrate in lungs and the percentage of eosinophils of white blood cells in BALF were lower in chronic asthmatic group than those in acute asthmatic group. Respiratory rate and respiratory flow showed no significant difference in both model groups. In conclusion, the rat chronic asthma model is established by the way in this study, which is comparable to the physiopathologic characteristics of human asthma.     

补肾平喘方对肾虚哮喘模型大鼠的作用及其机制的实验初探

目的 观察补肾平喘方对肾虚致哮喘模型大鼠的实验影响并探讨其作用机制.方法 SPF级清洁雄性大鼠60只,除空白对照组外,其余大鼠均采用注射卵蛋白（OVA）与氢氧化铝致敏、OVA雾化吸入激发来复制哮喘动物模型,造模后将其随机分为5组,模型组（等容量蒸馏水）、补肾防喘片组（377.5 mg·kg-1）、补肾平喘方高剂量组（49.68 g·kg-1）、补肾平喘方中剂量组（24.84 g·kg-1）、补肾平喘方低剂量组（12.42 g·kg-1）,每组10只.并于致敏2周后开始灌胃给药8周.末次给药后,采用ELISA法检测血浆ACTH,血清CORT的含量;取肺脏,一侧做HE染色,另一侧采用免疫组化法检测肺组织内β-AR的含量.结果 补肾平喘方能有效缓解哮喘的症状,减轻肺组织病变程度,同时显著升高血清CORT,血浆ACTH,肺组织β-AR的水平.结论 补肾平喘方通过补肾温阳,可改善肾虚致哮喘模型大鼠的症状,其机制可能与改善HPA轴的功能有关.     

布地奈德对哮喘大鼠碱性成纤维细胞生长因子蛋白和mRNA表达的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子在急性哮喘大鼠肺组织的表达情况及布地奈德的干预影响.方法：36只雄性SD大鼠随机分为对照组、哮喘组和布地纳德治疗组,以卵清白蛋白激发法制备哮喘模型,采用ELISA法测定支气管肺泡灌洗液中碱性成纤维细胞生长因子的含量,免疫组化和原位杂交法测定肺组织中碱性成纤维细胞生长因子蛋白和mRNA的表达情况.结果：支气管肺泡灌洗液中的碱性成纤维细胞生长因子浓度、肺组织碱性成纤维细胞生长因子蛋白和mRNA的表达水平哮喘组显著高于对照组（P＜0.01）,治疗组显著低于哮喘组（P＜0.01）,但与对照组相比仍较高（P＜0.01）,上皮细胞为主要表达细胞.结论：碱性成纤维细胞生长因子参与了哮喘的发病机制,布地奈德可抑制哮喘急性期碱性成纤维细胞生长因子蛋白和mRNA的表达增加效应,这可能是布地奈德抑制哮喘气道重塑的重要机制之一.