JNK信号通路对葡萄籽提取物抑制Eca-109细胞增殖的调控作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路对葡萄籽提取物抑制Eca-109细胞增殖过程的调控作用。方法体外培养Eca-109细胞,用不同浓度葡萄籽提取物、JNK特异性抑制剂SP600125对Eca-109细胞进行处理,应用噻唑蓝比色法检测细胞增殖,倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变,annexinV/碘化丙锭双标记观察细胞凋亡;Western印迹检测磷酸化JNK蛋白表达的变化。结果葡萄籽提取物作用于Eca-109细胞后,细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高,具有时间和剂量依赖性,并伴随磷酸化-JNK蛋白水平上调;加入SP600125能下调磷酸化-JNK的水平,显著降低葡萄籽提取物对Eca-109细胞的增殖抑制率和凋亡率。结论 JNK信号通路参与葡萄籽提取物抑制Eca-109细胞增殖过程的调控,抑制JNK活性可降低葡萄籽提取物对Eca-109细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用。     

ABT737通过激活JNK/c-Jun通路上调Bim诱导宫颈癌细胞凋亡

【目的】探讨JNK/c-Jun信号通路激活Bim在ABT737诱导宫颈癌细胞凋亡中的作用。【方法】用MTT法检测ABT-737对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用;用流式细胞术检测细胞凋亡率;用Western blot方法检测JNK、phospho-JNK、c-Jun、phospho-c-Jun以及Bim蛋白的表达;用RT-PCR检测Bim在mRNA水平的变化;用JNK特异性抑制剂SP600125和siRNA瞬时转染抑制JNK及c-Jun的活性。 【结果】ABT-737能抑制Hela细胞的生长,诱导HeLa细胞发生凋亡。ABT737可激活JNK激酶活性其下游靶分子c-Jun,凋亡相关基因Bim在mRNA水平和蛋白水平的表达也随之上调。应用JNK特异性抑制剂SP600125和靶向JNK及c-Jun的siRNA抑制JNK或c-Jun的活性或表达后,ABT737诱导的Bim上调及细胞凋亡亦被有效阻断。【结论】ABT737通过JNK/c-Jun信号通路上调凋亡相关基因Bim的表达,诱导HeLa细胞发生凋亡。     

JNK信号传导通路在星形胶质细胞缺氧/复氧后损伤的作用

目的 建立SD大鼠星形胶质细胞（astrocyte,AC）缺氧/复氧损伤模型,探讨JNK信号转导通路与星形胶质细胞损伤的关系.方法 体外培养新生SD大鼠星形胶质细胞,传至第3代,细胞自然纯化,实验设正常对照组（N）、SP600125组（SP组,10 μmol /L）、缺氧/复氧组（H/R组）和缺氧/复氧＋SP600125组（H/R＋SP组）.分别利用MTT法、AnnexinV/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染法、WB法检测缺氧8 h,复氧4、6、12、24 h时细胞存活率、凋亡率、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）的变化.结果 ①缺氧/复氧后细胞活力出现明显下降,SP600125阻断JNK通路后细胞活力高于H/R组;②缺氧/复氧后细胞凋亡率增加,SP600125阻断JNK通路后能够减轻细胞凋亡.③各组AC的JNK水平无显著变化,缺氧/复氧干预后p-JNK表达上调,用SP600125阻断JNK通路后,H/R＋SP组较H/R组p-JNK水平降低.结论 JNK信号通路参与了星形胶质细胞缺氧/复氧损伤过程.     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在金黄色葡萄球菌α-毒素所致人外周血单核细胞凋亡中的作用

目的研究丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在金黄色葡萄球菌α-毒素所致人外周血单核细胞凋亡中的作用。方法以Annexin V异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染流式细胞仪检测人外周血单核细胞的凋亡率,以Western blot法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及c-Jun N末端激酶(JNK)等蛋白的表达。结果随着α-毒素作用时间的延长,磷酸化-p38 MAPK和JNK1/2等蛋白的表达逐渐增高,而磷酸化-ERK1/2蛋白的表达不变。用SB203580和SP600125阻断p38 MAPK和JNK1/2后,单核细胞凋亡率明显降低,分别为(17.7±1.8)%和(15.3±1.6)%,与感染60 min时(35.7±3.6)%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MAPK信号通路的成员p38 MAPK和JNK1/2在金黄色葡萄球菌的致病过程中起重要作用。     

Ghrelin通过JNK信号通路抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞凋亡

【目的】观察体外条件下加入外源性ghrelin对内毒素(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞NR8383凋亡以及吞噬能力的影响,并探讨JNK(c-Jun N-terminal kinase)信号通路在其中所起的作用。【方法】用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测加入LPS或者ghrelin与LPS共孵育后NR8383的细胞毒性;流式细胞技术、原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;Western blot检测JNK、phospho-JNK信号通路蛋白以及cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2凋亡相关分子蛋白的表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力;使用ghrelin受体拮抗剂[D-Lys-3]-GHRP-6、JNK特异性抑制剂SP600125分别抑制ghrelin受体及JNK激酶的激活。【结果】CCK-8检测结果显示LPS可显著抑制NR8383增殖,而ghrelin可呈浓度依赖性地阻断这种抑制作用;流式和TUNEL检测进一步证实ghrelin可显著降低LPS所致NR8383凋亡作用(P<0.05),而应用ghrelin受体拮抗剂[D-Lys-3]-GHRP-6可以减弱ghrelin的抗凋亡效果(P<0.05);LPS可以激活JNK激酶活性,并改变其下游凋亡相关蛋白的表达,其中促凋亡蛋白Bax以及cleaved caspase-3表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,应用ghrelin可以逆转LPS对JNK激酶的激活,继而下调Bax以及cleaved caspase-3的表达,上调Bcl-2的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05);ghrelin还可以维持LPS持续刺激下NR8383的吞噬能力(P<0.05)。【结论】ghrelin通过下调JNK信号通路的激活抑制LPS诱导的NR8383的凋亡,并维持其吞噬能力。     

JNK／c-Jun 信号通路参与介导 EB 病毒编码的BARF1基因上调胃癌细胞 Bcl-2的表达

目的:探讨EB病毒编码的BARF1基因对胃癌细胞JNK-MAPK信号通路活性及Bcl-2基因表达的影响。方法:以p SG5空载体转染的胃癌细胞系BGC823(BGC-SG)为对照,采用蛋白质印迹分析稳定表达BARF1的BGC823细胞(BGC-BARF1)中,以及采用JNK-MAPK的特异性抑制剂SP600125处理后JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平以及cJun和Bcl-2蛋白的表达。结果:与BGC-SG相比,BGC-BARF1细胞中JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平,以及c-Jun和Bcl-2蛋白的表达均显著提高(P<0.05)。SP600125处理后,c-Jun蛋白的磷酸化水平以及c-Jun和Bcl-2蛋白的表达均显著下降。结论:JNK/c-Jun信号通路参与介导BARF1上调胃癌细胞中Bcl-2的表达。     

JNK/SAPK和p38信号转导通路在高渗透压介导的兔髓核细胞凋亡中的作用

 目的 观察高渗透压对兔髓核细胞活性的影响及JNK/SAPK(c-Jun N-terminal kinases/stress-activated protein kinases)和p38信号转导通路在此过程中的作用。方法 根据不同渗透压及时间段处理髓核细胞将实验分为对照组、刺激组和阻断组后采用流式细胞仪检测各组髓核细胞凋亡情况,同时利用免疫荧光和Western blot技术检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen-activated protein kinases,P-p38 MAPK)、磷酸化JNK/SAPK激酶(phospho-JNK/SAPK, P-JNK/SAPK)的亚细胞定位及表达水平,观察其对髓核细胞凋亡的影响。结果 高渗透压［600 mOsm/kg H2O(mOsm)］可导致髓核细胞显著凋亡及P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK蛋白表达水平改变。600 mOsm时各刺激组凋亡细胞与对照组相比,差异均有显著统计学意义(P<0.01),而阻断组凋亡细胞明显减少;而400 mOsm时各刺激组和阻断组凋亡细胞与对照组相比差异均无统计学意义;免疫荧光结果显示P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK在髓核细胞质和细胞核中均有表达;经高渗透压(600 mOsm)刺激后P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK表达均显著高于对照组(P<0.01),而相应阻断组P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK表达均显著降低。结论 高渗透压通过激活JNK/SAPK和p38信号转导通路导致体外培养的兔髓核细胞凋亡,同时髓核细胞对轻度的渗透压升高具有一定的适应性。     

PLA激活JNK信号通路促进NCI-H292细胞凋亡

目的 探讨多聚左旋精氨酸(PLA)诱导NCI-H292细胞凋亡的信号通路及分子机制.方法 将加入PLA 的浓度梯度分5组:0、10、20、40、60 mg/L,作用NCI-H292细胞24 h后Western blot法检测每组c-Jun氨基末端激酶( JNK)的磷酸化水平;设对照组、PLA 组(40 mg /L)、SP组(加入特异性JNK通路抑制剂SP600125)、PLA+SP组,加药24 h后流式细胞仪检测每组NCI-H292细胞凋亡率,Western blot法检测各组NCI-H292细胞内凋亡相关蛋白 Bcl-2/Bax、Caspase-3、P-JNK/JNK和β-actin蛋白的表达水平.结果 对照组、PLA组、SP组、 PLA+ SP组 NCI-H292细胞凋亡率分别为(5.13 ±1.07)%、(22.62 ± 1.66)%、(5.69 ± 0.14)%、(8.99 ± 3.73)% ;Western blot 法检测 PLA 诱导 NCI-H292 细胞内BCL-2/Bax比值降低( P＜0. 01),Caspase 3 表达升高( P＜0. 001),PLA诱导NCI-H292 细胞JNK 磷酸化水平增加(P＜0.001 ), SP600125 抑制 PLA 诱导 JNK 磷酸化( P ＜0.001).结论 PLA可能介导JNK信号通路引起NCI-H292细胞凋亡水平增加.     

MAPKs通路在胰岛素促人乳腺癌细胞系增殖中的机制研究

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号转导通路在胰岛素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用机制?方法:通过MTT比色法观察不同浓度(0?25?50?100?200 nmol/L)胰岛素促MCF-7细胞的增殖效应,及用JNK?ERK1/2通路特异性抑制剂(SP600125?PD98059)阻断MAPKs信号通路对胰岛素促MCF-7细胞增殖效应的影响; Western blot检测胰岛素干预对磷酸化JNK?磷酸化ERK1/2蛋白表达水平的影响以及JNK?ERK1/2?JAK2特异性抑制剂对上述蛋白表达的影响?结果:各浓度胰岛素均能不同程度促进人乳腺癌细胞MCF-7增殖,25 nmol/L胰岛素的促增殖效应最强(P < 0.01);分别用SP600125?PD98059?AG490阻断JNK?ERK1/2?JAK/STAT信号通路均可不同程度抑制胰岛素促MCF-7细胞的增殖效应;胰岛素可诱导MAPKs信号通路中靶蛋白的磷酸化激活,Western blot结果显示,100 nmol/L胰岛素作用于MCF-7细胞5 min后即可磷酸化激活JNK途径,且该活化状态可持续1hr,而ERK1/2蛋白在胰岛素作用30 min后才被磷酸化激活;10 μmol/L PD98059(ERK通路抑制剂)可显著抑制200 nmol/L 胰岛素作用30 min对ERK1/2的磷酸化激活,而20 μmol/L SP600125(JNK通路抑制剂)以及20 μmol/L AG490(JAK/STAT通路抑制剂)对ERK1/2磷酸化激活的抑制作用则不明显?结论:胰岛素可促进人乳腺癌细胞MCF-7增殖,该增殖效应可能与其激活MAPKs信号通路及下游其他信号转导有关,上述通路的激活可能促进乳腺癌的发生发展?     

埃他卡林通过c-JNK信号通路抑制缺氧诱导的人肺血管内皮细胞凋亡

目的:研究KATP通道开放剂埃他卡林在缺氧诱导的肺血管内皮细胞凋亡调节中的作用及机制?方法:细胞分组培养并经过药物及缺氧处理后,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法对细胞活性进行测定,同时采用Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡,采用Western blot对JNK?磷酸化JNK?caspase-3等蛋白的表达进行检测?结果:缺氧可降低细胞活性,诱导肺动脉内皮细胞凋亡,而埃他卡林可抑制凋亡,这种细胞保护作用可被KATP拮抗剂5-HD阻断;埃他卡林可抑制缺氧引起的c-JNK通路的磷酸化激活,并抑制下游凋亡蛋白caspase-3的表达,与c-JNK抑制剂SP600125作用一致,而5-HD处理组的趋势则相反?结论:埃他卡林可通过开放KATP通道抑制缺氧诱导的肺动脉内皮细胞凋亡,这种保护机制涉及了对c-JNK通路及下游凋亡蛋白的调节?     

HIF-1α、EGFR、Caspase-3在鼻咽癌中的表达

目的研究HIF-1α、EGFR、Caspase-3在鼻咽癌中的表达及其与鼻咽癌放射敏感性的关系。方法采用免疫组化S-P法检测28例鼻咽癌和25例鼻咽癌放疗后复发组织中HIF-1α、EGFR及Caspase-3的表达,RT-PCR检测YC-1对鼻咽癌细胞CNE-2Z中EGFRmRNA表达的影响。结果在鼻咽癌放疗后复发组织中HIF-1α和EGFR的阳性率均高于鼻咽癌组（P〈0.05）;Caspase-3的阳性率低于鼻咽癌组（P〉0.05）。Spearman相关分析显示鼻咽癌组织中HIF-1α与EGFR表达具有相关性（γ=0.387,P〈0.05）,与Caspase-3表达无明显相关性。鼻咽癌放疗后复发组织中HIF-1α阳性表达鼻咽癌患者放疗后复发时间早于阴性表达患者,但差异无统计学意义（P〉0.05）,HIF-1α与Caspase-3表达呈负相关（γ=-0.436,P〈0.05）,与EGFR表达无明显相关性。YC-1抑制CNE-2Z细胞中EGFRmRNA的表达（P〈0.01）。结论 HIF-1α及EGFR表达与鼻咽癌放射敏感性有关,EGFR可能通过非HIF-1α依赖途径参与鼻咽癌放疗后复发。     

JNK和Caspase-3在夏枯草引起人淋巴瘤细胞凋亡中的作用

目的 研究夏枯草对淋巴瘤细胞生长的影响及其可能的机制.方法 参考临床常用剂量,采用50 g/L夏枯草(夏枯草组)、50 g/L夏枯草及20 μmol/L c-Jun氨基末端激酶(JNK)特异抑制剂SP600125(SP600125组)处理Raji细胞,以加入同体积生理盐水处理的Raji细胞作对照,应用噻唑蓝比色法(MTT法)检测各处理方式下细胞增殖率,通过Western印迹检测JNK、c-Jun磷酸化水平和半胱氨酰天门冬氨酸(Caspase-3)的表达,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率.结果 夏枯草细胞增殖率(67.32±1.96)%低于其余各组(P<0.05);JNK磷酸化水平(0.48 ±0.03)和c-Jun磷酸化水平(0.46±0.04)在夏枯草组均明显增高(P<0.05),SP600125可抑制c-Jun磷酸化(0.43±0.01);夏枯草组的Caspase-3表达(1.35±0.07)高于其他各组,SP600125使其表达减少(0.79±0.06,P<0.05);细胞凋亡率在夏枯草组中最高(25.32±5.27)%(P<0.05).结论 夏枯草可以明显抑制Raji细胞的生长,这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路和Caspase途径导致细胞凋亡实现的.     

JNK通路促进乳化异氟烷引起的大鼠胚胎神经干细胞的增殖抑制

目的 探讨乳化异氟烷( EI)对原代培养的SD大鼠胚胎神经干细胞增殖的影响以及JNK通路在此影响中的作用. 方法 建立体外培养胚胎神经干细胞接受EI处理的模型,分为6组(n=8):正常组(N组)、脂肪乳组(F组)、EI处理组(8. 12 、9. 80 、12. 04 mmol/L EI)、9. 80 mmol/L EI组+20 μmol/L SP600125组( EISP组). 细胞处理12 h后,采用噻唑蓝( MTT)法分别检测6组胚胎神经干细胞的细胞活力;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot 法定量检测Caspase-3蛋白表达. 实验重复3次. 结果 与N组比较,F组各项指标无显著差异, EI组细胞增殖的抑制率明显升高(P<0. 01),EI组细胞的凋亡率明显升高(P<0. 01),EI 组明显上调Caspase-3的表达量( P<0. 05 );EI组内3 个浓度之间比较,细胞增殖的抑制率( P<0. 01 )、细胞的凋亡率以及Caspase-3 的表达量差异均有统计学意义( P<0. 05 );与EI组比较,EISP组细胞增殖的抑制率明显下降 ( P<0. 05 ) , EISP组细胞的凋亡率明显降低 ( P<0. 01 ) , EISP组明显下调Caspase-3的表达量( P<0. 05 ). 结论 EI引起的SD大鼠胚胎神经干细胞的增殖抑制具有一定的浓度依耐性,并且与JNK通路相关.     

TNF—α对鼻咽癌放射增敏的体内实验研究

目的探讨TNF—α对鼻咽癌放射敏感性的影响。方法裸鼠体内移植瘤实验观察CNE-2Z、H5、S1放射后的体内增殖能力,采用HE染色观察各组裸鼠移植瘤组织坏死程度、核分裂指数、肺转移率和淋巴结转移率,免疫组织化学染色和图像分析法检测不同方法处理的s1裸鼠移植瘤组织中Caspase-3和Survivin的表达。结果鼻咽癌细胞CNE-2Z存在放射敏感性异质性,S1细胞是具有放射抵抗潜能的亚克隆株。TNF-α联合放射治疗对s1裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用（P〈0．01）,TNF—α联合放射治疗组中瘤组织坏死程度、核分裂指数、肺转移率和淋巴结转移率与生理盐水联合放射治疗组比无明显差异（P〉0．05）。TNF—α联合放射治疗组S1裸鼠体内移植瘤细胞核中Caspase-3表达高于单独TNF—α处理组（P〈0．05）;各组S1裸鼠移植瘤细胞浆中Caspase-3及Survivin的表达无明显差异（P〉0．05）。结论TNF—α联合放射治疗可能通过影响胞核中Caspase-3表达抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤生长。     

低氧激活ERK／JNK通路促进Smad2／3蛋白磷酸化诱导小鼠心脏成纤维细胞表型转换的实验研究

目的研究体外低氧诱导小鼠心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）向心脏肌成纤维细胞（cardiac myofibroblasts,CMFs）表型转换过程中,促分裂素原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）信号通路与Smad2／3蛋白磷酸化的关系。方法新生小鼠第1代CFs低氧（37℃、3％O2）无血清培养48h,免疫荧光检测α-SMA蛋白;新生小鼠CFs给予3种MAPK（ERK、JNK和p38）特异性抑制剂常氧培养1h,进行低氧培养30min,免疫印迹检测ERK、JNK、p38和Smad2／3蛋白磷酸化水平。结果①低氧显著上调新生小鼠CFs中α-SMA蛋白的表达;②低氧能显著地促进ERK、JNK和P38蛋白磷酸化,PD98059（ERK特异性抑制剂）、SP600125（JNK特异性抑制剂）和SB203580（P38特异性抑制剂）能抑制低氧诱导的ERK、JNK和P38蛋白的磷酸化;③PD98059（ERK特异性抑制剂）和SP600125（JNK特异性抑制剂）能抑制低氧诱导的Smad2／3蛋白的磷酸化,SB203580（P38特异性抑制剂）无此作用。结论①低氧可诱导小鼠CFs细胞发生表型转化为CMFs;②ERK和JNK信号通路能调控Smad2／3蛋白的磷酸化表达;③MAPK和Smad信号通路可能参与低氧诱导的小鼠CFs细胞的表型转化。     

细胞间粘附在肺腺癌细胞株A549群集耐药中作用探讨

目的检测肺腺癌细胞株A549单层培养与三维培养时对阿霉素(adriamycin, ADM)药物敏感性的差异,并探讨细胞间粘附在肺腺癌群集耐药(multicellular drug resistance)中可能的作用机制.方法以多细胞球(multicellular spheroids,MCSs)为模型,比较MCSs与单层细胞(monolayer cells, MCs)对ADM药物敏感性的差异.透射电镜观察细胞超微结构.间接免疫荧光法流式细胞术检测Bcl-2,Bcl-xL,Bax的表达.结果 MCSs由多层细胞组成,细胞间粘附广泛而紧密;可见镶嵌连接.与MCs相比,MCSs的药物敏感性显著减弱.MCSs的Bcl-2,Bcl-xL表达量显著高于MCs,ADM处理后表达显著升高.结论 MCSs能够较好地模拟体内实体瘤的细胞间粘附,具有群集耐药性;其机制可能与Bcl-xL,Bcl-2高表达相关.     

双肾上腺素样激酶1不同剪接体通过激活JNK通路增强胰腺癌细胞的增生能力

目的 研究双肾上腺素样激酶1（doublecortin-like kinase 1,DCLK1）长、短亚型对人胰腺癌增生能力的影响,并探讨其分子机制。方法 分别将空载（PCMV6-AC-GFP）、DCLK1亚型1和DCLK1亚型4真核表达质粒转染胰腺癌PANC-1细胞,G418筛选法构建DCLK1不同亚型稳定过表达的细胞系;通过定量实时聚合酶链式反应（quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）和Western blotting法鉴定DCLK1长、短亚型的表达情况;实时无标记细胞分析仪（real-time cell analysis,RTCA）技术检测DCLK1长、短亚型表达对PANC-1细胞增生能力的影响;Western blotting法检测DCLK1对丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）通路的影响;利用c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）通路特异性抑制剂SP600125处理DCLK1稳转细胞,检测JNK通路抑制对胰腺癌细胞增生能力的影响。结果 DCLK1长、短亚型的过表达显著促进胰腺癌细胞的增生能力（P<0.05）,并且促进MAPK通路中JNK的磷酸化水平以及JNK通路靶分子CMYC、CD44和CyclinD1的表达（P<0.05）,而对MAPK通路中细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）和p38的磷酸化无明显影响（P>0.05）;SP600125抑制JNK的磷酸化,可以显著降低DCLK1对JNK通路的激活以及对胰腺癌细胞的促增生能力（P<0.05）。结论 DCLK1长、短亚型均可以通过激活JNK通路促进胰腺癌细胞的增生能力。     

应激活化蛋白激酶在大鼠缺血后适应中的变化及其对细胞凋亡影响的研究

目的:探讨应激活化蛋白激酶(JNK MAPK)在大鼠缺血后适应中的变化,并进一步分析其对细胞凋亡的影响.方法:60只SD大鼠随机分为假手术(Sham)、缺血再灌注(R/I)、后适应(Post)、JNK抑制剂(IJNK)、JNK激活剂+后适应(Ani+Post)和JNK激活剂(Ani)6组,建立急性心肌梗死再灌注和缺血后适应模型,在再灌注开始前5min经颈静脉注射抑制剂(SP600125,6mg/kg)和激动剂(anisomycin,2mg/kg).再灌注6h后处死取心肌组织测定磷酸化JNK(P-JNK)、TNFα、Caspase-8、Bcl-2、Bax,并提取胞浆测定其中细胞色素c(Cyt-c);各组其余大鼠再灌注24h后测定血流动力学,抽血测定心肌酶,取心脏进行TUNEL凋亡检测或使用伊文氏蓝-三苯基氯化四氮唑法检测心肌梗死面积.结果:后适应组可显著改善缺血对左室压力最大上升/下降速度、心率血压积的抑制,限制心肌梗死面积,减轻细胞凋亡和坏死,抑制了P-JNK的生成(1 12±0 21 vs 1 90±0 32,P<0 05);同时,伴随TNFα和Caspase-8表达显著减少,Bcl-2的升高和Bax的降低,胞浆Cyt-c(0 33±0 04 vs 1 00±0 11,P<0 05)含量明显减少.IJNK组可以模拟后适应在信号分子的上述变化,从而表现出显著的心肌保护作用[凋亡指数:(6 23±2 43)% vs (18 22±5 10)%,P<0 05;心肌梗死面积:(23 44±6 34)% vs (42 31±8 21)%,P<0 05].反之,Ani+Post则因为JNK激活剂的应用,部分抵消了后适应的保护效应,在心肌酶、心肌凋亡和梗死面积方面表现出保护作用的减弱[凋亡:(14 12±2 00)% vs (18 22±5 10)%,P>0 05;心肌梗死面积:(35 27±5 28)% vs (42 31±8 21)%,P>0 05].结论:后适应可以抑制JNK MAPK在再灌注损伤中的磷酸化,并通过P-JNK MAPK的减少抑制TNFα细胞受体途径和Bcl-2/Bax线粒体途径,从而减少细胞凋亡.