复发性星形细胞瘤中p16蛋白及PCNA的表达及意义

目的探讨p16蛋白和PCNA在复发性星形细胞瘤中的表达及意义,并观察其复发前后的临床病理变化。方法应用免疫组化EnVision二步法对48例星形细胞瘤的原友及复发标本进行p16蛋白和PCNA检测。并运用常规HE染色,观察其病理形态改变。结果418例星形细胞瘤均呈弥漫性浸润生长。复发后恶性程度多有增高,恶性程度与复发间隔时间有关,间隔时间越短,恶性程度越高,〈6个月5例,均为Ⅳ级,6个月-1年11例,其中Ⅲ级4例,Ⅳ级7例,-2年21例,其中Ⅱ级6例,Ⅲ级15例,-3年10例,均为Ⅱ级,1例间隔时间〉3年,为Ⅱ级。免疫表型p16蛋白在48例复发性星形细胞瘤中的表达缺失率为75．0％,原发标本为56．3％,两者差异有显著性（P〈0．05）,并且缺失率随星形细胞肿瘤恶性程度增加而升高。PCNA阳性表达指数在复发标本中明显高于原发标本,两者差异有显著性（P〈0．05）。p16蛋白与PCNA的阳性表达呈负相关。结论浸润性生长及术后容易复发是其主要临床病理特征。星形细胞瘸在恶性增殖过程中发生p16蛋白缺失和肿瘤活性PCNA指数的逐渐增高,可作为评估肿瘤复发的标志。     

细胞周期蛋白E和P53蛋白在星形细胞瘤复发前后的表达及意义

目的 研究细胞周期蛋白E（cyclin E）和P53蛋白在星形细胞瘤复发前、复发后中的表达水平及其对预后的作用。方法 应用免疫组化方法检测12例复发星形细胞瘤标本中cyclin E和P53蛋白表达水平。结果 12例中cyclin E、P53蛋白在原发和复发星形细胞瘤标本中均有表达,原发星形细胞瘤的cyclin E蛋白表达小于复发星形细胞瘤,其差异有极显著意义（P〈0．01）,复发后病理级别升高组cyclin E蛋白表达面积差值明显高于未升高组,其差异有显著意义（P〈0．05）;原发瘤的P53蛋白表达小于复发瘤,其差异有显著意义（P〈0．05）,复发后病理级别升高组P53蛋白表达面积差值明显高于未升高组,其差异有显著意义（P〈0．05）;肿瘤复发间隔时间与cyclin E蛋白表达水平呈负相关（r=-0．57,P〈0．05）;cyclin E蛋白表达水平与P53蛋白表达水平之间呈正相关（r=0．58,P〈0．05）。结论cyclin E与P53蛋白与星形细胞瘤恶性进程和预后复发密切相关。     

星形细胞肿瘤中RCASl的mRNA及蛋白表达的临床意义

目的：探讨RCASl在人星形细胞肿瘤中的基因及蛋白表达，及其与肿瘤发生、发展的关系。方法：RT-PCR法检测59例新鲜星形细胞肿瘤组织及6例正常脑组织中RCASl的mRNA表达。免疫组织化学法检测71例星形细胞肿瘤及6例正常脑组织病理切片中RCASl的蛋白表达。结果：弥漫型星形细胞瘤（GradeⅡ）和间变型星形细胞瘤之间（GradeⅢ）、间变型星形细胞瘤和胶质母细胞瘤（GradeIV）之间RCASlmRNA的表达有统计学差异（P〈0．05），而RCASl蛋白表达仅在间变型星形细胞瘤和胶质母细胞瘤之间存在统计学差异（P〈0．01），RCASl蛋白表达与肿瘤级别呈正相关（r=0．573，P〈0．001）。在正常脑组织中未检测到RCASl蛋白。结论：RCASl的表达与星形细胞肿瘤的病理分级有关。星形细胞肿瘤中RCASl的表达在转录和转录后水平受到调节。[第一段]     

Survivin蛋白在人脑星形细胞瘤组织中的表达及意义

目的探讨凋亡抑制Survivin蛋白在人脑星形细胞瘤组织中的表达及其与脑星形细胞瘤发生、发展的关系。方法应用免疫组织化学Elivision二步法检测67例脑星形细胞瘤组织和10例对照组组织标本中Survivin蛋白的表达水平。结果对照组阳性表达率明显低于脑星形细胞瘤Ⅰ～Ⅳ级组（P〈0．01）。高分化组（脑星形细胞瘤Ⅰ～Ⅱ级组）阳性表达率为24．24％，明显低于低分化组（脑星形细胞瘤Ⅲ～Ⅳ级组）的70．59％（P〈0．01）。相关性分析结果显示，肿瘤分化高低与Survivin蛋白的表达强度呈正相关（r=0．437，P〈0．01）。结论Survivin蛋白在脑星形细胞瘤组织中呈高表达；且随脑星形细胞瘤病理级别的增高，阳性表达率和表达强度增强。Survivin蛋白在脑星形细胞瘤发生、发展过程中具有重要作用。     

P~(53)蛋白和PCNA在星形细胞瘤的表达

应用LSAB法对6O例星形细胞瘤进行P53和PCNA检测。采用Daumas－Duport’s分级法（1988）重新分级。研究结果表明，P53和PCNA与星形细胞瘤分级有密切关系（P（0．01）。P53阳性者在星形细胞瘤中，9例Ⅳ级有6例阳性，27例Ⅲ级有15例阳性，22例Ⅱ级中14例阳性，2例Ⅰ级全部为阴性。PCNA阳性者，在星形细胞瘤Ⅰ级中两例有1例限性，22例Ⅱ级中有17例阳性，27例Ⅲ级中24例阳性，9例Ⅳ级全部为阳性。统计资料表明，P53蛋白过度表达与反映细胞增殖的PCNA的表达存在显著相关性；二者均为阳性32例，均为阴性6例;P53阳性，PCNA阴性2例，P53阴性，PCNA阳性者20例（P＜0．01）。我们认为星形细胞癌中P53蛋白、PCNA的表达与肿瘤细胞的增殖密切相关，但可能有不同的侧重，即P53在控制细胞增殖和调节细胞分化方面起作用，而PC－NA则与细胞的增殖速率有关。     

PTEN蛋白在人脑星形细胞瘤中的表达及意义

目的：探讨PTEN蛋白在不同分化程度的星形细胞瘤组织中的表达。方法：应用S-P免疫组化技术检测46例星形细胞瘤中PTEN蛋白的表达。结果：人脑星形细胞瘤组织中PTEN蛋白的阳性表达率为63．4％，星形细胞瘤组织中PTEN蛋白的阳性表达低分化（Ⅲ～Ⅳ级）显著低于高分化（Ⅰ～Ⅱ级）（P〈0．01）；病理分级与PTEN蛋白的阳性表达呈负相关（r=-0．612．P〈0．01）。结论：PTEN基因突变、缺失与脑星形细胞瘤的分化程度及演进密切相关。     

Notch1和Hes1、Hes5在星形细胞瘤中的表达及其相关性研究

目的探讨Notch1受体和其下游信号分子Hes1、Hes5在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学方法检测62例人脑星形细胞瘤和7例正常人脑组织中Notch1和Hes1、Hes5表达情况。结果星形细胞瘤组Notch1、Hes1和Hes5的表达均显著强于正常脑组织组（P〈0．05）。在各级星形细胞瘤中,Notch1和Hes1的表达水平Ⅱ～Ⅲ级显著高于Ⅳ级（P〈0．05）,Hes5的表达在2组间差别无统计学意义（P〉0．05）。在星形细胞瘤组中Notch1的表达与Hes1一致性较好（k=0．503）,与Hes5的表达一致性差（k=0．216）。结论Notch1表达与星形细胞瘤的发生有关,与星形细胞瘤的病理分级无关。Notch1可能主要是通过下游分子Hes1而非Hes5发挥作用。     

脑胶质瘤中Survirvin、微血管密度的表达及其相关性研究

目的探讨Survirvin蛋白、微血管密度（MVD）在人脑胶质瘤中的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测5例正常脑组织和43例胶质瘤组织中Survirvin、MVD的表达。结果Survirvin蛋白在正常脑组织中无表达，在43例胶质瘤组织中蛋白阳性表达26例，阳性率60．5％。Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级间的表达有显著性差异（P〈0．05），同时Survirvin的表达与MVD密切相关（r=0．704，P〈0.01）。结论Survirvln蛋白异常表达在肢质瘤的发生中起重要作用，并与肿瘤血管形成及肿瘤的病理分级密切相关。     

膀胱移行细胞癌中FHIT、p21^wafl/cip1基因的表达

目的通过测定脆性组氨酸三联体基因（FHIT）及p21^wafl/cip1基因在膀胱移行细胞癌组织、正常膀胱组织中的表达，探讨FHIT基因以及p21^wafl/cip1基因与膀胱癌的关系及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法对43例膀胱移行细胞癌（BTCC）组织及14例正常膀胱组织中的FHIT基因及p21^wafl/cip1基因的蛋白表达进行检测。结果Fhit蛋白与p21^wafl/cip1蛋白在正常膀胱组织中的表达明显高于膀胱癌组织（P〈0．05）；Fhit蛋白表达与肿瘤的分期、分级无相关性（P〉0．05），而p21^wafl/cip1蛋白的表达与之有相关（P〈0．05）；Fhit蛋白的表达在GI期肿瘤、浅表性肿瘤中明显低于在正常膀胱组织中的表达（P〈0．05），而p21^wafl/cip1蛋白的表达在上述组织比较中差异无显著性；Fhit蛋白的表达在初发肿瘤中与复发肿瘤中差异无显著性，而p21^wafl/cip1蛋白的表达在上述两种组织比较差异有显著性（P〈0，05）。Fhit蛋白与p21^wafl/cip1蛋白的表达没有相关性。结论FHIT基因可能成为早期诊断膀胱移行细胞癌的指标。p21^wafl/cip1基因可能成为估计膀胱移行细胞癌的恶性程度及肿瘤侵袭性、预后的指标。FHIT基因、p21^wafl/cip1基因在膀胱移行细胞癌的发生、进展中可能没有协同性。     

CyclinD1和PTEN在人脑星形细胞瘤中的表达及临床意义

目的探讨CyclinD1和PTEN在人脑星形细胞瘤中表达及其与病理分级的关系以及表达的相关性。方法免疫组化SP法检测60例I～Ⅳ级人脑星形细胞瘤和10例正常脑组织标本中CyclinD1和PTEN的表达。结果①CyclinD1、PTEN在人脑星形细胞瘤组中阳性表达率分别为55％和45％,而在正常脑组织组中阳性表达率分别为0和100％。从星形细胞瘤Ⅰ、Ⅱ级组,Ⅲ级组到Ⅳ级组,CyclinD1的阳性表达率呈增高趋势,而PTEN的阳性表达率呈降低趋势。②运用Spearman等级相关检验证实病理分级和CyclinD。标记指数呈正相关（rs=0．653,P〈0．05）,和PTEN标记指数呈负相关（rs=-0．754,P〈0．05）。人脑星形细胞瘤中CyclinD1和PTEN的表达呈负相关（rs=-0．461,P〈0．05）。结论CyclinD1和PTEN的表达情况可作为脑星形细胞瘤的诊断和恶性程度评估的参考资料。     

鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定

目的建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法。方法通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化。超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定。结果本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯。与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了最优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05mol/L醋酸溶液。结论为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。     

肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达及意义

目的　探讨肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达及其与临床病理因素的关系。方法　应用免疫组织化学S P法检测 6 2例肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达。结果　肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达阳性率分别为 5 3.2 %和6 4 .5 % ,PCNA蛋白表达阳性肺癌Fhit蛋白阳性率明显低于PCNA蛋白表达阴性肺癌 (P <0 .0 1)。Fhit蛋白和PCNA蛋白在肺癌中表达与肺癌的分化程度、淋巴结转移、3年生存期均密切相关 ,PCNA蛋白与肺癌病理类型亦有关。结论　Fhit蛋白和PC NA蛋白异常表达与肺癌发生、发展密切相关 ,二者相互抑制 ,呈明显负相关     

Survivin、Her-2、P16和PTEN在膀胱癌中的表达及意义

目的研究Survivin、Her2、P16和PTEN蛋白在膀胱癌中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学SP法检测43例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱组织中以上4种蛋白的表达。结果4种蛋白在膀胱癌中的表达与在正常膀胱黏膜比较差异均有显著性意义(均为P<0.01)。不同临床分期间Her2和PTEN表达的差异具有显著性意义(P<0.05);不同病理分级间Survivin、Her2和PTEN表达的差异具有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。Her2和Survivin蛋白表达间存在正相关(r=0.821,P<0.05)。结论Her2和Survivin的高表达是膀胱癌预后不良的指征;P16可作为早期诊断的标记物;PTEN则可作为膀胱癌预后不良的独立性指标。     

子宫腺肌病中PTEN和Akt的表达及其相关性研究

目的探讨子宫腺肌病病灶中10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(PTEN)和蛋白激酶B（PKB/Akt）的蛋白表达情况,旨在为子宫腺肌病的发生发展以及治疗提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法检测子宫腺肌病异位内膜(30例)、在位内膜（27例）、正常子宫内膜(20例)的腺上皮细胞和间质细胞中PTEN、Akt、磷酸化Akt （P Akt）蛋白的表达并进行比较。结果PTEN蛋白在腺上皮细胞中的表达,正常子宫内膜表达高于在位内膜和异位内膜（P＜0.05,P＜0.01）,子宫腺肌病在位内膜的表达高于子宫腺肌病异位内膜的表达（P＜0.01);Akt、P Akt蛋白在子宫腺肌病异位内膜的腺上皮细胞中的表达强度高于在位内膜（P＜0.05）和正常子宫内膜(P＜0.01),其在位内膜腺上皮细胞中的表达强度高于正常子宫内膜(P＜0.01)。PTEN蛋白在间质细胞中的表达,正常子宫内膜明显高于子宫腺肌病的在位内膜和异位内膜（P＜0.05）,但在位内膜与异位内膜之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）;Akt、P Akt蛋白在间质细胞中的表达,异位和在位内膜明显高于正常内膜,异位内膜和在位内膜两组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。PTEN与Akt、PTEN与P Akt在子宫腺肌病异位内膜、在位子宫内膜和正常子弓内膜中的表达均呈负相关（r＝-0.444;r＝-0.546）。结论PTEN蛋白表达在子宫腺肌病的在位、异位内膜中减少;Akt、P Akt蛋白表达增加。PTEN蛋白低表达不能有效的抑制Akt的激活,从而对子宫腺肌病的发生与发展起重要的作用。     

P53、Caspase-3和凋亡调节蛋白FasL在乳腺癌的表达及其意义

目的:通过在人乳腺癌组织和癌旁(相对正常)乳腺组织中观察p53、Caspase-3和FasL凋亡调节蛋白的表达,探讨p53、Caspase-3及FasL在乳腺癌疾病发生、发展过程中的作用及关系,为提高生物治疗乳腺癌疾病提供一定的实验依据。方法:运用免疫组织化学方法检测21例收集于手术切除患者的乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织中的p53、Caspase-3及FasL。结果:P53蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为61.9%明显高于癌旁组织(相对正常)乳腺组织的0%;而Caspase-3蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为38.0%明显低于癌旁乳腺组织的80.9%;FasL蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为57.1%明显高于癌旁乳腺组织的19.0%。结论:在乳腺癌发生、发展过程中p53、Caspase-3和FasL蛋白发挥着既独立又协同的作用。     

绿色荧光蛋白-小鼠纤维介素蛋白融合基因表达载体的构建和表达

目的：构建绿色荧光蛋白(GFP)和小鼠纤维介素蛋白(mfgl2)的融合蛋白表达载体，在仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达，为mfgl2的RNA干扰体外研究提供简便的判断手段。方法：用PCR从mfgl2cDNA文库中扩增出mfgl2cDNA片段，插入到GFP表达载体pEGFP—N2中GFP基因序列的上游，构建成GFP—mfgl2融合基因表达载体pEGFP—mfgl2，将该载体转染到CHO细胞后24—48h，通过荧光显微镜观察并摄片。结果：扩增出长约1．3kb的基因片段，经双酶切鉴定和测序鉴定无误；重组载体转染CHO细胞后，在荧光显微镜下可观察到GFP的表达。结论：成功构建了pEGFP．mfgl2融合基因表达载体；重组载体可在CHO细胞中表达出GFP—mfgl2融合蛋白，为下一步进行mfgl2RNA干扰研究提供了简便的判断手段。     

WWOX与c-jun在胃癌中表达及其临床意义

目的研究WWOX与c-jun在胃癌中表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测60例原发性胃癌及其癌旁组织中WWOX与c-jun蛋白的表达情况。结果胃癌组织中WWOX蛋白阳性表达率(28.3%)显著低于在癌旁组织中的表达率(81.7%)(P<0.01)。胃癌组织中c-jun蛋白阳性表达率(68.3%)显著高于其癌旁组织中的表达率(23.3%)(P<0.01)。WWOX蛋白的阳性表达与肿瘤的分化程度有关(P<0.05),与其他临床病理参数无关。c-jun蛋白阳性表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05)。两者的表达存在相关性(χ2=4.96,P<0.01)。结论WWOX蛋白和c-jun蛋白在胃癌组织和癌旁组织的表达均有明显的差异,WWOX蛋白在胃癌中低表达,而c-jun蛋白在胃癌中高表达。     

cAMP—依赖性蛋白激酶的提纯及活性测定

用ＤＥＡＥ－纤维素层析和羟基磷灰石层析方法,从牛心中提取了ｃＡＭＰ－依赖性蛋白激酶。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定分子量为３８ｋＤａ,并测定了其活性,为ｃＡＭＰ代谢途径的研究打下了基础。     

Ki67、P53蛋白在人喉组织中的表达及临床意义

目的 探讨Ki67和P53蛋白表达在人喉癌发生、发展及预后中的作用.方法 采用免疫组织化学Envision法检测182例喉不同病变组织标本(喉癌141例,喉癌前病变18例,声带息肉15例和癌周正常喉组织8例)中Ki67和P53蛋白的表达.结果 Ki67、P53在人喉癌组织中表达阳性率均显著高于喉癌前病变、声带息肉组织及癌周正常喉组织(P＜0.01);中晚期(Ⅲ～Ⅳ期)、伴颈淋巴结转移及术后3年或5年死亡的喉癌组织中PD4、Ki67阳性表达率均显著高于早期(Ⅰ～Ⅱ期)、无颈淋巴结转移及3年或5年存活病例(P＜0.01或0.05);Ki67和P53蛋白在人喉癌组织中联合表达阳性率显著高于喉其他不同病变组织中联合表达阳性率(P＜0.01).结论 Ki67和P53联合表达与人喉癌的发生、发展及预后有一定的相关性.     

肾上腺皮质肿瘤细胞中Fas、Fas-L、HLA-DR蛋白的表达及其意义

目的观察Fas、Fas—L、HLA-DR蛋白在肾上腺皮质肿瘤中的表达，探讨其在肾上腺皮质肿瘤免疫逃逸中的作用及意义。方法采用免疫组化SP法检测55例肾上腺皮质腺瘤和17例肾上腺皮质腺癌Fas、Fas—L、HLA-DR蛋白的表达，应用Mias99图像分析系统对检测结果进行分析。结果①Fas、HLA-DR在肾上腺皮质癌中表达减少，其阳性细胞率、平均吸光度值和阳性染色面积均明显低于肾上腺皮质腺瘤（P〈O．01）；②Fas-L在肾上腺皮质癌中表达增多，其阳性细胞率、平均吸光度值和阳性染色面积均明显高于肾上腺皮质腺瘤（P〈0．01）。结论①Fas／Fas-L系统与HLA—DR可能在肾上腺皮质肿瘤的免疫逃逸机制中发挥重要作用；②Fas、HLA—DR可作为判别肾上腺皮质良、恶性肿瘤的指标。