异丙酚对新生大鼠延髓脑片吸气呼吸神经元活动的影响

目的 观察异丙酚对延髓基本呼吸中枢吸气呼吸神经元放电活动的作用规律及其可能的作用机制。方法 以改良的Kreb氏液灌流新生SD大鼠离体延髓脑片，随机分成Ⅰ～Ⅵ组(每组n=6)。Ⅰ组为对照组(modified Kreb’s Solution，MKS组)，第Ⅱ～Ⅴ组异丙酚浓度分别为5、20、50和100μmol／L持续灌流3min，第Ⅵ组给γ-氨基丁酸A受体特异性阻断剂荷包牡丹碱(bicuculline，20μmol／L)与异丙酚20μtmol／L，观察给药后l、3、5、10、15、30min时呼吸吸气神经元放电时程和峰值、呼气时程(吸气神经元放电静止期)和呼吸频率活动的变化。结果(1)第Ⅱ～Ⅴ组在l-30min内吸气神经元放电时程均表现为逐渐显著减小，15min时作用最显著，且各组与MKS灌流的对照组相比均有显著性差异。(2)RI、第Ⅱ～Ⅴ组lmin内呼气时程无显著性变化，3～30min内呼气时程均表现为显著延长，5-15min内达到其最大效应。(3)在给药后的30min内放电峰值呈现先增加然后降低的趋势，各组间放电峰值无显著性差异。(4)给予异丙酚3～30min内呼吸频率逐渐减慢，5-15min内达到其最大抑制效应，各组问呼吸频率的变化无显著性差异。(5)Ⅵ Ⅳ组的吸气时程与间给药前比无显著性差异。结论(1)异丙酚可抑制新生大鼠离体延髓脑片标本吸气神经元的放电时程，主要表现为吸气时程的缩短和呼气时程延长，且呼吸呈浓度依赖性。(2)GABAA受体在异丙酚对延髓基本呼吸中枢呼吸气吸神经元放电活动的抑制作用中可能起重要作用。     

氧化苦参碱对大鼠海马神经元细胞钠通道的影响

目的 研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对培养的新生大鼠海马神经元细胞膜钠电流作用,探讨OMT在离子通道水平的作用机制.方法 采用原代培养新生大鼠海马神经元细胞,应用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度OMT对培养8～12天的大鼠海马神经元细胞膜钠通道的作用.结果 OMT对海马神经元细胞膜钠电流有明显的抑制作用(n=20,P＜0.05),且这种作用具有浓度依赖性,OMT对钠电流作用的半数抑制浓度为(46.1±1.3)μmol/L.在30μmol/L时,OMT可使钠电流Ⅰ～Ⅴ曲线显著上移,并且改变钠电流的翻转电位,但不影响激活电位和峰电位.通道动力学显示OMT可以促进钠电流复活曲线向右移动,减慢通道由失活状态恢复到激活状态的过程,但对激活曲线和失活曲线则没有明显的作用.结论 OMT呈浓度依赖性和电压依赖性抑制大鼠海马神经元细胞膜钠电流,并且抑制钠通道的复活过程.     

氧化苦参碱对青霉素致痫大鼠海马神经递质的影响

目的观察氧化苦参碱（Oxy）对青霉素（PEN）致痫大鼠大脑海马谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）神经递质的影响。方法腹腔注射PEN制备癫痫动物模型,采用免疫组化SABC法测定腹腔内注射Oxy后癫痫大鼠海马Glu和GABA阳性细胞数目。结果腹腔注射Oxy的实验组癫痫大鼠海马Glu平均阳性细胞数低于未注射Oxy的模型组,而实验组GABA平均阳性细胞数高于模型组（P〈0．05）。结论Oxy抗癫痫作用机制与兴奋性神经递质Glu和抑制性神经递质GABA的作用有关。     

异丙酚对新生大鼠延髓脑片吸气呼吸神经元活动的影响

目的观察异丙酚对延髓基本呼吸中枢吸气呼吸神经元放电活动的作用规律及其可能的作用机制。方法以改良的Kreb氏液灌流新生SD大鼠离体延髓脑片,随机分成Ⅰ~Ⅵ组(每组n=6)。Ⅰ组为对照组(modified Kreb's solution, MKS组),第Ⅱ~Ⅴ组异丙酚浓度分别为5、20、50和100 μmol/L持续灌流3 min,第Ⅵ组给γ-氨基丁酸A受体特异性阻断剂荷包牡丹碱(bicuculline,20 μmol/L)与异丙酚20 μmol/L,观察给药后1、3、5、10、15、30 min时呼吸吸气神经元放电时程和峰值、呼气时程(吸气神经元放电静止期)和呼吸频率活动的变化。结果(1)第Ⅱ~Ⅴ组在1~30 min内吸气神经元放电时程均表现为逐渐显著减小,15 min时作用最显著,且各组与MKS灌流的对照组相比均有显著性差异。(2)Ⅲ、第Ⅱ~Ⅴ组1 min内呼气时程无显著性变化,3~30 min内呼气时程均表现为显著延长,5~15 min内达到其最大效应。(3)在给药后的30 min内放电峰值呈现先增加然后降低的趋势,各组间放电峰值无显著性差异。(4)给予异丙酚3~30 min内呼吸频率逐渐减慢,5~15 min内达到其最大抑制效应,各组间呼吸频率的变化无显著性差异。(5)Ⅵ Ⅳ组的吸气时程与间给药前比无显著性差异。结论(1)异丙酚可抑制新生大鼠离体延髓脑片标本吸气神经元的放电时程,主要表现为吸气时程的缩短     

氯丙烯对原代培养的大鼠脊髓神经元的影响

目的：研究氯丙烯对脊髓神经元细胞形态的影响。方法：取新生4d Wistar大鼠的脊髓，原代培养12d后氯丙烯染毒，用相差显微镜观察脊髓神经细胞的形态变化。结果：随氯丙烯浓度的增加，脊髓神经细胞贴壁细胞数目减少，细胞突起变短、断裂成串珠状，最后破碎消失。结论：氯丙烯具有神经毒性，可引起脊髓神经细胞形态学改变和死亡。     

新生大鼠大脑皮层神经元原代培养方法

目的：介绍一种简单、生长良好的大脑皮层神经元的培养方法。方法：急性分离新生鼠大脑皮层制作单细胞悬液进行原代培养,观察培养神经元的生长形态,并用免疫荧光化学法对其进行鉴定。结果：培养的神经元细胞清晰,光晕明显,生长良好,免疫荧光鉴定结果表明该方法培养的细胞纯度较高,能够达到实验研究的要求。结论：该培养方法简单、可靠,是神经元培养的良好方法。     

新生大鼠海马神经元的原代培养与鉴定

目的:探讨建立简便高效的大鼠海马神经元原代培养的纯化方法。方法:(1)离体培养新生24 h内SD乳鼠海马神经元,每天在倒置相差显微镜下进行神经元的形态学观察;(2)MTT法检测培养不同时间段神经元的活力变化,并绘制生长曲线;(3)纯化培养9 d神经元利用免疫荧光染色法检测β-微管蛋白Ⅲ(β-tublinⅢ)的表达率。结果:(1)倒置相差显微镜下观察原代培养的海马神经元,刚分离种植时可见神经细胞为圆形,24 h大多数细胞贴壁,3 d细胞突起增大、增粗,培养5~7 d神经元胞体丰满,突起交织成的网络更密集,培养14~16 d后,神经元开始退化;(2)生长曲线结果发现海马神经元体外培养经历了4个时期,即生长潜伏期、对数生长期、平台期、生长停滞期;(3)经β-tublinⅢ鉴定海马神经元纯度为(93.0%±2.5%)。结论:本实验方法步骤简便,可获得纯度较高的海马神经元,为研究与海马神经元相关的疾病提供了实验基础。     

皮质发育障碍模型大鼠海马区阳离子-氯离子转运体基因表达变化的研究

目的探讨阳离子-氯离子转运体NKCCl（内向Na^＋,K^＋-2Cl^-协同运输）、KCC2（外向K^＋-Cl^-协同运输）mRNA在皮质发育障碍致痫机制中的作用。方法在SD大鼠孕17d腹腔内注入卡莫司汀（BCNU）制作皮质发育障碍模型;Nissl染色观察P60 d仔鼠病理变化;P60 d用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测两组雄性仔鼠海马区NKCC1、KCC2 mRNA的表达。结果Nissl染色显示海马区域异位细胞异常聚集。实验组海马区NKCC 1mRNA表达明显上调（NKCC1／肌动蛋白的比值,实验组0．70±0．13、对照组0．48±0．09,P〈0．01）,KCC2 mRNA表达明显下调（KCC2／肌动蛋白的比值,实验组0．54±0．10、对照组0．81±0．15,P〈0．01）。结论NKCC1 mRNAE调和KCC2 mRNA下调的共同作用可能与皮质发育障碍致痫密切相关。     

神经干细胞原代培养及GABA能神经元的诱导分化

目的探讨神经干细胞(NSC)的原代培养及γ-氨基丁酸(GABA)能神经元的诱导分化、鉴定。方法取出生1~3dSD大鼠全脑,分离、培养NSC并诱导分化了GABA能神经元,用免疫荧光染色进行鉴定。结果培养24h后,由单细胞发展成2~4细胞神经球,随时间延长球体增大,神经球均有Nestin阳性细胞;用含10%血清分化液分化1d后,神经球开始贴壁,伸出细长突起,部分可和周边神经球伸出的突起连接。神经球周边见大量散在贴壁的双极或多极细胞,免疫荧光染色可见NSE、GABA阳性细胞。加了分化液的实验组GABA阳性细胞分化率为(30·25±2·12)%,而对照组分化率为(1·14±1·39)%。结论成功从新生大鼠脑组织中分离、培养了NSC,并能较大比率分化GABA能神经元。     

新生大鼠耳蜗螺旋神经节神经元的原代培养

[目的]建立原代细胞培养大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)的方法.[方法]选择出生后5d的SD大鼠的SGN进行原代细胞培养,采用免疫细胞染色法进行细胞学鉴定.[结果]新生SD大鼠SGN在原代培养条件下获得良好的细胞形态及表型分化,表现出稳定的神经元可塑性.[结论]原代细胞培养方法可获得状态良好的SGN细胞.     

苦参碱抑制大鼠肺成纤维细胞增殖及其机制

目的观察苦参碱(Mat)对大鼠肺成纤维细胞增殖及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)表达的影响.方法体外培养新生Wistar大鼠的肺成纤维细胞,倒置显微镜下观察活细胞形态;四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞分析仪测定细胞周期;免疫荧光测定FN的蛋白含量.结果不同浓度苦参碱处理36 h后,细胞MTT-OD值呈递减趋势,S期细胞百分率下降,G0/G1期百分率上升,FN的表达下降,且成剂量依赖性,与空白组相比,差异有显著性(P＜0.01).结论苦参碱可抑制大鼠肺成纤维细胞增殖,其作用与降低FN表达有关.     

甲状腺激素对大鼠脑皮质发育期突触体素表达的影响

目的探讨甲状腺激素（TH）对发育关键期大鼠大脑皮质突触体素（syn）表达的作用和影响。方法选用甲巯咪唑（MM）复制甲状腺机能减退大鼠模型,实验分成正常对照组（n=42）和甲减组两组（n=36）,收集出生后第0,4,7,14,21,30,120天的正常、甲减组仔鼠脑组织。采用原位杂交组织化学法检测发育关键期仔鼠大脑皮质突触体素的表达变化情况。结果正常对照组syn mRNA在生后不同发育阶段的表达变化明显且具有层状分布的特点。生后第0天表达很低,在第4天表达最高。以后表达逐渐下降,至第30天表达水平基本接近于成年鼠水平（P120d）。甲减组synmRNA表达在各时点均明显低于正常对照组（P〈0.001）。甲减组syn mRNA表达高峰延迟3d,在出生后第7天达到高峰。结论在脑发育关键期,甲状腺激素水平的异常改变了大脑皮质突触体素的表达,进一步影响了其突触的发生及相关神经回路的建立,出现神经元的旷置或错误神经通路,阻碍了脑发育与其功能的成熟。     

音乐对大鼠海马GABAA受体表达的作用

目的研究音乐刺激对海马神经元GABAA受体表达的影响.方法在大鼠生长发育的不同时期,给予音乐刺激,用免疫组织化学和PCR技术及图像分析系统定量研究音乐刺激后,大鼠海马神经元GABAA受体及其编码该受体的mRNA的表达.结果音乐刺激后,大鼠海马神经元GABAA受体免疫染色的光密度比对照组增加,在CA1区分别从对照组(32.21±4.23)增加到持续音乐组(44.72±6.21),生后音乐组(43.61±6.12),胎期音乐组(34.34±4.54);编码受体的mRNA表达相对量增加,从对照组(0.67±0.23)增加到持续音乐组(0.99±0.34),生后音乐组(0.92±0.32),胎期音乐组(0.73±0.25),这些变化以持续音乐刺激组最明显,生后音乐刺激组次之,胎期音乐刺激组和对照组最弱.结论音乐刺激能增强大鼠海马神经元GABAA受体及编码该受体的mRNA表达,其增强作用具有刺激时间依赖性关系.     

音乐对大鼠海马 GABAA受体表达的作用

目的研究音乐刺激对海马神经元GABAA受体表达的影响.方法在大鼠生长发育的不同时期,给予音乐刺激,用免疫组织化学和PCR技术及图像分析系统定量研究音乐刺激后,大鼠海马神经元GABAA受体及其编码该受体的mRNA的表达.结果音乐刺激后,大鼠海马神经元GABAA受体免疫染色的光密度比对照组增加,在CA1区分别从对照组(32.21±4.23)增加到持续音乐组(44.72±6.21),生后音乐组(43.61±6.12),胎期音乐组(34.34±4.54);编码受体的mRNA表达相对量增加,从对照组(0.67±0.23)增加到持续音乐组(0.99±0.34),生后音乐组(0.92±0.32),胎期音乐组(0.73±0.25),这些变化以持续音乐刺激组最明显,生后音乐刺激组次之,胎期音乐刺激组和对照组最弱.结论音乐刺激能增强大鼠海马神经元GABAA受体及编码该受体的mRNA表达,其增强作用具有刺激时间依赖性关系.     

新生大鼠前扣带皮层神经元的原代培养

目的建立新生大鼠前扣带皮层(ACC)神经元的体外培养方法,并进行纯度和生长状态检测。方法从新生鼠ACC分离出神经元,采用低浓度胰酶长时间消化、阿糖胞苷处理、差速培养等方法进行体外原代培养。在培养的第7天,应用兔抗大鼠微管相关蛋白2(MAP2)对培养的神经元进行纯度鉴定,利用微量滴定(MTT)法测定培养第7~12天ACC神经元的生长状态。结果从新生大鼠ACC分离的神经元,培养至第5天,可见多数细胞长出2个以上突起且呈多极形态并交织成网;第7天神经元有多种形式的接触,互相迁移靠拢,部分神经元聚集成团。MAP2细胞免疫荧光染色结果表明,ACC神经元阳性率大于80%,MTT结果显示,培养第7~9天的ACC神经元可保持较好的生长状态,之后细胞活性降低。结论新生大鼠ACC神经元可进行体外原代培养,纯度和活力检测表明,培养第7~9天的神经元可作为ACC神经元相关研究的体外细胞模型。     

大鼠生后伏膈核细胞形态的发育变化

目的 探讨大鼠生后伏膈核细胞形态的发育变化规律。方法 选取出生后1个月内不同时期的大鼠，分别进行尼氏染色和免疫组化染色，借助于计算机辅助图像分析系统，测量不同组别大鼠伏膈核的细胞密度、细胞直径并比较树突的发育特征。结果 细胞直径随年龄呈增长趋势，至出生后30d（PD30）已基本接近成年水平。细胞密度在出生后0－15d（PD0－PD15）呈下降趋势，之后基本不再变化。在发育过程中，主树突、次级树突和末梢树突的数目不断增多，树突棘密度显著增高。结论 出生后一段时期内伏膈核细胞在形态上仍要经过一个不断成熟和完善的过程，不同发育阶段其形态差异非常显著，这一特征对理解伏膈核的发育具有重要意义。     

苦参碱对阿霉素诱导的肾小球硬化大鼠STAT3信号分子的影响

目的:动态观察苦参碱对阿霉素诱导的肾小球硬化大鼠STAT3分子及其抑制分子PIAS3变化的影响,探讨苦参碱在肾脏纤维化发病进程中的作用及其机制.方法:45只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组及试验组各15只,用单侧肾切除加1 wk后尾静脉注射阿霉素(5 ms/ks)的方法建立肾小球硬化大鼠模型,为模型组;只行手术不注射阿霉素为对照组;造模后即予苦参碱100 ms/(ks·d)灌胃干预治疗为试验组.于2,4,6 wk分批处死每组各5只大鼠,采用免疫组化检测肾脏STAT3、转化生长因子β1(TGF-131)表达,实时荧光定量PCR技术观察STAT3,PIAS3 mRNA表达.结果:第6 wk时,模型组肾小球硬化指数(71.7 4±11.2)%高于对照组(17.6 ±2.5)%及试验组(44.9±8.9)%(P<0.01);模型组TGF-β1 在肾皮质表达(2.196±0.394)%多于对照组(0.017±0.005)%及试验组(0.750 ±0.089)%(P<0.01),并呈逐渐升高趋势;模型组STAT3蛋白(19.58±2.66)%表达较对照组(7.64 ±1.25)%增高(P<0.01),试验组(14.90±1.66)%较模型组(19.58 ±2.66)%降低(P<0.01);模型组STAT3 mRNA表达为5.06 ±0.26倍于对照组,高于试验组的3.49±0.39倍(P<0.01),而PIAS3 mRNA呈相反趋势.结论:苦参碱有抑制肾小球硬化进展的作用,其作用机制可能为下调JAK/STAT通路信号分子STAT3及上调其抑制分子PIAS3的表达,降低TGF-β1的蛋白水平,从而延缓肾小球硬化进程.     

LASS1基因在鼠脑皮层中的表达研究

目的 探讨LASS1基因在大脑衰老中的作用。方法 分别从胎鼠、新生鼠、1月龄、3月龄、6月龄、11月龄、18月龄和24月龄鼠大脑皮层组织提取总RNA，RT—PCR扩增获得LASSI的cDNA片段并植入pGEM-T载体，以重组质粒载体为定量标准模板，采用Taqman荧光探针，一步法实时定量RT—PCR检测LASS1 mRNA表达，并以肌动蛋白基因（B—actin）和18S rKNA基因作为看家基因。结果在胎鼠至青壮年鼠（1—3个月龄）发育过程中大鼠脑皮层LASS1表达水平呈上调趋势，之后随年龄增长逐渐下降；β—actin表达量在胎鼠厦新生鼠明显高于成年鼠和老年鼠；18S rRNA基因表达相对稳定。结论成功建立了大鼠LASS1基因表达的荧光实时定量RT—PCR检测方法；大鼠脑皮层中LASS1基因转录水平随年龄变化呈现相应的规律性，这将为进一步研究该基因在衰老过程中的作用提供实验室依据；同时，作为看家基因用于衰老研究，18Sr RNA较β-acfin基因更为可靠。