西格列汀对高糖条件下施万细胞增殖及3-NT含量的影响

目的 观察二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制剂西格列汀对高糖条件下大鼠施万细胞(RSC96)增殖、凋亡及3-硝基酪氨酸(3-NT)含量的影响.方法 通过体外培养RSC96细胞,建立高糖条件下D-葡萄糖100 mmol/L RSC96细胞模型,予以过氧亚硝基阴离子(ONOO-)抑制剂尿酸1 μmol/L及西格列汀1 μmol/L刺激48 h后,应用CCK-8及流式细胞技术观察尿酸及西格列汀对高糖条件下RSC96细胞增殖及细胞凋亡的影响.运用ELISA法检测尿酸及西格列汀对RSC96细胞内3-NT蛋白表达的影响.结果 与正常对照组比较,高糖组抑制细胞增殖,促进细胞凋亡及胞内3-NT蛋白表达(P＜0.05);尿酸及西格列汀可促进高糖条件下RSC96细胞增殖,抑制细胞凋亡及胞内3-NT蛋白表达(P＜0.05).结论 西格列汀可能通过抑制细胞亚硝基化应激,从而增加高糖条件下RSC96细胞的增殖活性,抑制细胞凋亡,减轻高浓度葡萄糖对RSC96细胞的损伤.     

高浓度葡萄糖和高浓度胰岛素对体外培养视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素对体外培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的影响.方法 采用荧光探针技术,应用激光共聚焦显微镜动态、定量测定细胞外高钙、钙拮抗剂条件下,正常、高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素、高浓度葡萄糖+高浓度胰岛素培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的变化.结果 高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素、高浓度葡萄糖+高浓度胰岛素培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i明显升高,在细胞外高钙条件下各组[Ca2+]i均降低,在细胞外钙拮抗剂条件下各组[Ca2+]i均再次下降.结论 高浓度葡萄糖和高浓度胰岛素均能使视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i明显升高,而钙拮抗剂通过干扰细胞外钙离子进入细胞来降低[Ca2+]i.     

高糖对大鼠心肌细胞NMDA受体表达、胞内钙和超氧自由基水平的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对心肌细胞促离子型谷氨酸受体亚型NMDA受体（NMDAR）表达、胞内钙水平以及活性氧自由基产生的影响.方法 分离新生（1～3天）大鼠心室肌细胞,心肌细胞与不同浓度葡萄糖（对照组葡萄糖浓度5mmol/L,高糖组葡萄糖浓度33mmol/L）共孵育24 ～ 72h后,用Western blot法检测心室肌细胞NMDAR1和NMDAR2B亚单位的表达水平,活细胞工作站检测胞内Ca2＋水平,流式细胞术检测细胞内活性氧自由基（ROS）含量.结果 与对照组细胞相比,高浓度葡萄糖使心肌细胞的NMDAR2B的表达水平明显上调（P＜0.05）,而NMDAR1的表达则降低.经高糖处理的心肌细胞在收缩时胞内钙水平高于对照细胞,高糖处理使心肌细胞的ROS水平升高,而用MK-801选择性阻断NMDAR可明显降低由高糖所致的胞内ROS增高（与高糖组对比,P ＜0.05）.结论 高浓度葡萄糖可上调乳鼠心肌细胞NMDAR2B及下调NMDAR1的表达,并增加细胞内Ca2＋水平及ROS的生成,而阻断NMDAR可抑制ROS的生成.提示NMDAR可能参与糖尿病性心肌损害。     

芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖和细胞[Ca2+]i变化的影响

目的研究芦荟大黄素对植物血凝素(PHA)引起的大鼠T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2 浓度([Ca2 ]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖的作用和机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2 ]i。结果芦荟大黄素对PHA引起的细胞增殖有显著抑制作用,且其抑制作用与剂量有关;加入PHA引起细胞[Ca2 ]i迅速升高,并持续维持高[Ca2 ]i水平,芦荟大黄素对PHA引起的[Ca2 ]i升高有显著抑制作用,其作用途径包括阻断胞内Ca2 释放和抑制胞外Ca2 内流。结论芦荟大黄素可抑制T淋巴细胞增殖,其作用机制可能与抑制淋巴细胞内[Ca2 ]i升高相关。     

生脉注射液对高糖和糖化终末产物诱导的肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 观察生脉注射液对高糖和糖化终末产物(AGEs)诱导的肾小球系膜细胞增殖的影响.方法 用高糖和AGEs 作为刺激因子,诱导体外培养的牛肾小球系膜细胞增殖,并用MTT 比色法测定生脉注射液对系膜细胞增殖的影响.结果 生脉注射液能拮抗高糖和AGEs 诱导的肾小球系膜细胞的增殖(P<0.01).结论 生脉注射液治疗糖尿病肾病的主要靶细胞之一是肾小球系膜细胞,其对肾小球系膜细胞增殖的抑制可能是其治疗作用的重要机制.     

肉苁蓉多糖的免疫活性作用及机制

目的：研究肉苁蓉多糖（CDPS）的免疫活性作用及其体外免疫调节作用的机制。方法：采用噻唑蓝比色法（MTT）观察CDPS体外对ISO、DEX、TNF－β抑制小鼠胸腺淋巴细胞增殖的调节作用；采用流式细胞仪进行了CDPS对细胞周期及其胞内Ca^2 的测定。结果：CDPS在较高浓度能对ISO、DEX对淋巴细胞增殖的抑制作用，及对抗高浓度TNF－β对淋巴细胞增殖的抑制作用，协同低浓度TNF－β对淋巴细胞的增殖促进作用；100μg／ml、200μg/mlCDPS均能使分裂期的细胞明显增加；较高浓度（100μg/ml）的CDPS对小鼠胸腺细胞内Ca离子浓度有明显的促进升高作用。结论：CDPS能促进细胞进入分裂期，并推断其对小鼠胸腺淋巴细胞增殖的促进作用与其促进小鼠胸腺淋巴细胞内钙释放有关。     

含糖腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞自噬机理研究

目的:研究含糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)生长影响,探讨引发的线粒体氧自由基的产生、细胞氧自由基增加,以及炎症和自噬发生的可能机理。方法:用1.5%、2.5%和4.25%浓度的含糖低钙腹膜透析液及阳性对照鱼藤酮(Rotenone)刺激人腹膜间皮细胞48h,用流式细胞术检测人腹膜间皮细胞线粒体氧自由基产生和细胞内氧自由基变化、蛋白印迹检测NLRP3和LC3表达变化及透射电镜观察细胞器变化。结果:含糖低钙腹膜透析液在不同的浓度和不同的作用时间情况下,对HMrSV5线粒体及细胞内活性有不同的影响。随糖浓度的增加线粒体氧自由基含量明显增加。随糖浓度升高和时间延长,胞内氧自由基也明显增加;含糖低钙腹膜透析液诱导NLRP3与LC3的表达,并呈糖浓度与时间依赖性;透射电镜观察到细胞线粒体出现空泡及自噬小体的出现。结论:高糖低钙腹膜透析液可刺激HMrSV5细胞的线粒体氧自由基产生并泄露到胞质中,引发细胞炎症自噬的产生。这为基础研究及临床防治腹膜纤维化提供了一条新途径。     

茶多酚抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及相关机制研究

目的:研究晚期糖基化产物(AGEs)对大鼠血管平滑肌细胞A7R5增殖的影响及相关机制。方法:用AGEs处理A7R5细胞,相同条件BSA处理为对照组,Western blotting检测RAGE蛋白表达的变化,MTT比色法测定细胞活性。结果:AGEs处理A7R5细胞后,AGEs受体RAGE及细胞增殖水平均明显升高,但与EGCG共孵育能显著抑制AGEs诱导的RAGE表达增加及细胞增殖水平。结论:EGCG能够抑制AGEs诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖水平,这可能与EGCG抑制AGEs受体RAGE的表达相关。     

糖基化终产物对人血管平滑肌细胞表达及分泌甲状旁腺激素相关肽和血管钙化的影响

目的：观察糖基化终末产物（AGEs）对人血管平滑肌细胞表达及分泌甲状旁腺激素相关肽（PTHrP）功能的影响,探讨PTHrP影响血管平滑肌细胞钙化发生的相关机制。方法：不同浓度的AGE-BSA分别与人血管平滑肌细胞孵育相同时间后,检测各组细胞钙含量及碱性磷酸酶（ ALP）活性判断钙化程度;酶联免疫吸附法检测各组细胞PTHrP的分泌量;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测PTHrP、核心结合因子（ cbfα1）及骨形态发生蛋白2（ BMP-2）在各组细胞中的表达量。结果：随AGEs浓度增加,细胞中的钙含量及ALP活性增加（P＜0．05）,而细胞分泌的PTHrP量逐渐减少（P＜0．05）,且AGEs可促进cbfα1、BMP-2及PTHrP在血管平滑肌细胞的表达,这在较高浓度组较为显著（ P＜0．05）。结论：适当浓度的晚期AGEs可影响人血管平滑肌细胞PTHrP的表达水平及分泌量,促进钙含量增加,进而有助于血管钙化的发生。     

半枝莲提取物对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响及其抑瘤作用

目的 探讨中药半枝莲提取物(ESB)的抗肝癌作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法 将接种H22肝癌细胞的小鼠分为模型组、ESB高、中、低剂量组(12、6、3 g/kg)、5-氟尿嘧啶组(5-Fu组),另设正常对照组,连续给药10d.观察小鼠瘤重、体质量、胸腺指数和脾指数;并检测各组淋巴细胞增殖活性、NK细胞活性及脾细胞IL-2分泌量.结果 ESB中、高剂量可明显抑制荷瘤小鼠移植瘤的生长,抑瘤率分别为28.68%、36.98%.而且能明显增加小鼠胸腺指数和脾指数(P<0.01),而5-Fu组胸腺指数和脾指数明显降低.模型组荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性、NK细胞活性及分泌IL-2能力均明显低于正常对照组(P<0.05).与模型组比较,5-Fu组荷瘤小鼠的NK细胞活性和脾细胞IL-2分泌量进一步降低(P<0.05).而ESB高剂量组三者均得到明显改善.ESB中剂量治疗使荷瘤小鼠的NK细胞活性增强,与模型组比较差异显著(P<0.05).结论 ESB可明显抑制H22移植瘤的生长,改善荷瘤小鼠的免疫功能.     

AGEs与葡萄糖浓度对血管内皮细胞增生的影响

为研究非酶促糖化终末产物(AGEs)和不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞增生的影响,用氚标记胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入法,测定不同浓度葡萄糖、AGEs以及抗氧化剂(维生素E)对血管内皮细胞增生的影响。结果:11mmol/L葡萄糖加AGEs(5 mg/L)、30 mmol/L葡萄糖、11 mmol/L葡萄糖+AGEs+维生素E组的血管内皮细胞的2 h~3H-TdR掺入量分别为对照组的4.69倍(P<0.01)、2.15倍(P<0.05)和1.46倍(P<0.05)。提示:高糖和AGEs均能直接刺激血管内皮细胞增生,高糖及AGEs同时存在时更为明显,而抗氧化剂维生素E则抑制内皮细胞增生。     

Effects of advanced glycation end products on renal fibrosis and oxidative stress in cultured NRK-49F cells

Background Advanced glycation end products （AGEs） play a critical role in the development of diabetic nephropathy. Reactive oxygen species （ROS） may play a critical role in AGEs induced growth factor expression. In this study, the effects of AGEs on transforming growth factor β1 （TGF-β1）, connective tissue growth factor （CTGF） and fibronectin （Fn） mRNA expression and oxidative stress in cultured NRK-49F cells were examined. Methods NRK-49F cells were incubated with medium containing different doses of AGEs （50, 100 or 200 μg/ml） for 24 hours, or with AGEs 100 μg/ml for different times （0, 12, 24 or 48 hours）. Cells in the serum-free medium or medium containing 25 mmol/L glucose were controls. Cells were treated with 25 mmol/L glucose and 100 μg/ml AGEs for 24 hours to determine the effects between AGEs and glucose. We clarified the role of antioxidant by pretreating cells with N-acetylcysteine （10 mmol/L）, ginkgo biloba extract （50 or 100 mg/L） for 24 hours and with 100 μg/ml AGEs for further 24 hours. Alamarblue dye assay was used to analyze cell growth; intracellular ROS generation was measured by flow cytometry; intracellular glutathione by fluorescence spectrophotometry; expressions of TGF-β1, CTGF and Fn mRNA by semiquantitative RT-PCR. Results AGEs significantly increased the expressions of TGF-β1, CTGF, Fn mRNA and intracellular ROS generation, and decreased the glutathion level in NRK-49F cells in dose- and time-dependent manners. High glucose and AGEs together significantly increased the expression of TGF-β1, CTGF and Fn mRNA, compared with AGEs and high glucose separately. Preincubation with N-acetylcysteine or ginkgo biloba extract increased GSH level, suppressed AGEs-induced oxidative stress and TGF-β1, CTGF and Fn mRNA overexpression. Conclusions AGEs can significantly increase expression of TGF-β1, CTGF, Fn mRNA in NRK-49F cells through enhancement of oxidative stress. The accumulation of AGEs may play a pivotal role in the pathogenesis of tubulointerstitial fibrosis in diabetic nephropathy. Suppression of AGEs induced TGF-β1, CTGF and Fn mRNA overexpression in renal fibroblasts through inhibition of oxidative stress may be a mechanism underlying effect of ginkgo biloba extract in diabetic nephropathy. In addition, antioxidant therapy may help prevent AGEs accumulation and its induced damage.     

高糖及晚期糖基化终末产物环境对血管内皮细胞血管样结构形成的影响

目的观察高浓度葡萄糖和晚期糖基化终末产物（AGEs）干预对体外培养血管内皮细胞的损伤后愈合、血管样结构形成能力和相关血管化调控因子表达的影响。方法根据培养液中添加不同浓度的葡萄糖和AGES-BSA,将体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分为高糖组（30mmol／LD-葡萄糖）、AGEs组（150mg／LAGE-BSA）、高糖＋AGEs组（30mmol／LD-葡萄糖＋150mg／LAGE-BSA）和正常组（5mmol／LD-葡萄糖）,另设甘露醇组（30mmol／L甘露醇）,电子细胞基质阻抗判断法（ECIS）测定HUVECs损伤模型增殖曲线,倒置显微镜下观察HUVECs在Matrigel基质中血管样结构的形成情况;ELISA法检测细胞培养上清液中血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素-2（Ang-2）的表达,荧光显微镜下观察HUVECs中血管生成素受体Tie2的表达。结果ECIS法测定结果显示：各组HUVECs增殖曲线形态相似,反映愈合率的斜率无明显差别。倒置显微镜观察发现：高糖组、AGEs组和高糖＋AGEs组形成血管样结构的长度显著小于正常组（P〈0．05或P〈0．01）。ELISA检测结果显示：与正常组比较,高糖组、AGEs组和高糖＋AGEs组细胞培养上清液中Ang-2水平显著升高,VEGF水平显著降低（P〈0．05）。荧光显微镜观察发现：Tie-2受体在正常组HUVECs的细胞膜和细胞质中均有表达,在AGEs组的HUVECs中仅表达于细胞核中。结论在高糖和（或）AGEs环境下,血管内皮细胞血管样结构形成能力受到抑制,其机制可能与Ang-2表达上调、VEGF表达下调以及Tie-2受体在细胞内不同部位的差异性表达有关。     

糖基化终产物对小鼠胚胎成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的：探讨糖基化终产物（AGEs）对NIH Swiss小鼠胚胎成纤维细胞（NIH/3T3）中结缔组织生长因子（CTGF）基因表达的影响,并观察氨基胍（AG）、葛根素（Pue）对NIH/3T3中CTGF mRNA表达的干预作用。方法：葡萄糖和牛血清白蛋白（BSA）共同孵育制备AGEs,运用荧光法测定AGEs水平。用不同浓度葡萄糖（20、50和80 mmol•L^-1）制备的AGEs培养NIH/3T3细胞24 h;用50 mmol•L^-1葡萄糖制备的AGEs培养NIH/3T3细胞0、6、12、24和48 h。观察AG和不同浓度Pue（0.25、0.5、1.0和1.5g•L^-1）的干预作用。应用RT-PCR检测NIH/3T3中CTGF mRNA的表达。结果：与BSA对照组比较,用20、50和80 mmol•L^-1葡萄糖制备的AGEs培养24 h后,NIH/3T3中CTGF mRNA表达增高（P<0.01）,以50 mmol•L^-1最明显。与0 h比较,同一浓度葡萄糖制备的AGEs培养6、12、24及48 h后,NIH/3T3中CTGF mRNA的表达增高（P<0.01）,以24 h最明显。与50 mmol•L^-1葡萄糖制备的AGEs培养24 h比较,AG和不同浓度的Pue干预后NIH/3T3中CTGF mRNA的表达明显降低（P<0.01）。结论：AGEs能增强NIH/3T3中CTGF基因表达,且与孵育AGEs的葡萄糖浓度和作用时间有关,提示AGEs可能促进糖尿病并发症纤维化的发展,AG和Pue可抑制AGEs促纤维化的病理过程。     

晚期糖基化终产物对高糖诱导NRK-52E细胞的转分化作用

目的：探讨晚期糖基化终产物（AGEs）对高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E的转分化干预作用。方法：大鼠肾小管导管上皮细胞株设空白组（不给葡萄糖）、高糖组（25mmol/L葡萄糖）、AGEs干预组（100mg/LAGEs）、高糖AGEs干预组（100mg/LAGEs＋25mmol/L葡萄糖）,培养72h后,用Westernbolt检测转化因子β1（TGF-β1）、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶2（MMP2）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及甲状旁腺素相关肽（PTHrP）在NRK-52E细胞的表达,活性氧（ROS）含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果：高浓度葡萄糖上调TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA以及PTHrP表达,AGEs显著上调高浓度葡萄糖状态下TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA和PTHrP表达,提高ROS含量。结论：AGEs可以促进高浓度葡萄糖诱导肾小管导管上皮细胞转分化。     

紫菜多糖PY4对免疫细胞增殖的影响

目的：分析紫菜多糖的性质,测定其对免疫细胞增殖的影响。方法：将纯化得到的紫菜多糖PY4,用紫外和红外光谱进行鉴定。采用体外培养方法测定了PY4对小鼠骨髓细胞,脾 脏细胞,胸腺细胞的生长以及混合淋巴细胞反应的影响。结果：在骨髓细胞,脾脏淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的增殖试验中给药组与对照组之间有非常显著的差异,而混合淋巴细胞反应中两者没有差异。结论：多糖PY4对小鼠骨髓细胞,脾 脏淋巴细胞和胸腺淋巴细胞增殖有一定的抑制作用,而对混合淋巴细胞反应没有明显的影响。     

银杏叶注射液对牛视网膜毛细血管周细胞的保护作用

目的：研究糖基化终产物（AGEs）和银杏叶注射液对体外培养的牛视网膜毛细血管周细胞增殖、细胞周期和转化生长因子β（TGF-β）表达的影响,观察银杏叶注射液对周细胞的保护作用。方法：应用MTT比色分析法、流式细胞术及免疫荧光检测等方法进行分析。 结果：银杏叶注射液能促进AGEs作用下周细胞的增殖,浓度125~400 mg•L^-1的银杏叶能明显促进AGEs作用下周细胞的增殖（P<0.01）,呈剂量依赖性。银杏叶注射液能明显抑制AGEs对周细胞细胞周期的影响及其促进凋亡的作用,使周细胞S期细胞减少,G₂-M期细胞增多,凋亡细胞数下降（P<0.01）,并能降低AGEs诱导周细胞TGF-β的表达。结论：AGEs可通过氧化应激对视网膜微血管周细胞产生损伤,应用抗氧化剂银杏叶注射液可以减少AGEs对周细胞的毒性作用。     

铜绿假单胞菌外毒素A对小鼠脾淋巴细胞的作用

①目的 了解铜绿假单胞菌外毒素A（PE）对小鼠脾淋巴细胞的作用。②方法 用培养法和MTT法测定PE作用后小鼠脾淋巴细胞的转化率和增殖率。③结果 PE可使小鼠脾淋巴细胞转化率增高，但不能刺激淋巴细胞的增殖。④结论 PE在一定的浓度下具有增强细胞免疫功能的作用。     

应用流式细胞仪判断正常及肝硬化过程脾脏对肝脏Kupffer,Ito和实质细胞DNA和RNA含量影响

由细胞培养和肝硬化模型获得经脾条件(液)处理的Kuppffer、Ito和肝实质细胞,应用流式细胞仪(FCM)测定三种细胞DNA与RNA的相对含量,经统计学处理不同组间的差异,以判断脾脏对正常肝脏是否具调控作用以及对肝硬化形成促进作用的具体环节。结果发现:①脾脏对Kupffer细胞在生理状态下促进增殖(DNA合成增加),限制Pr等物的产生(RNA转录减少);在肝硬化形成过程即促进增殖又促进其生物合成;②对Ito细胞生理状态下抑制增殖,促进生物合成;在肝硬化过程脾脏的调控方式未变,但作用力更强;③对肝实质细胞在生理状态下促进其增殖与生物合成,但在肝硬化形成过程脾脏对实质细胞本身未见明显影响。提示肝硬化过程脾脏影响Kupffer和Ito细胞的增殖与生物合成是脾脏促进肝硬化形成的主要方式。     

奥曲肽对食管癌细胞株Eca9706增殖的影响

目的 研究奥曲肽对食管癌细胞株Eca9706增殖的影响。方法 将不同浓度的奥曲肽加入食管癌细胞．用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应。^3H-胸腺嘧啶核苷(^3H-TdR)掺入实验测定对DNA合成的影响,显微镜下观察细胞形态变化，流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果 奥曲肽对Eca9706细胞的生长及DNA合成均有抑制作用。显微镜下可见明显的细胞病变，细胞变圆、变小、脱落，FCM显示奥曲肽作用后，G0／G1期细胞增多，S期、G2／M期细胞减少。结论 奥曲肽能明显抑制食管癌细胞株Eca9706的DNA合成，并能形成G0／G1期阻滞，使细胞存活率下降，表明奥曲肽显著抑制Eca9706的增殖。