人参皂甙Rbl对阿霉素心力衰竭大鼠心肌细胞Toll样受体的影响

目的：探讨人参皂甙Rbl （Gs-Rb1）减轻阿霉素所致的慢性心力衰竭（CHF）效应是否与抑制 Toll样受体（TLRs）有关。方法：阿霉素慢性心力衰竭（CHF）大鼠随机分为阿霉素组（15例）和Gs-Rbl组（70 mg/kg · d ,17例）,另设正常对照组（10例）。乳鼠心肌细胞亦随机分为对照组、阿霉素组（1μmol/L ）和 Gs-Rbl组（1μmol/L阿霉素＋200μmol/L Gs-Rbl）。干预完毕后,评定心脏超声, Toll样受体2和 Toll样受体4蛋白和基因。结果：（1）体内、体外研究均显示,阿霉素组TLR2蛋白和mRNA表达较对照组显著升高, Gs-Rbl组TLR2蛋白[（0.593±0.018/0.344±0.024）比（0.975±0.022/0.564±0.031）]和mRNA [（0.349±0.015/0.401±0.021）比（0.576±0.029/0.853±0.043）]表达较阿霉素组显著下降, P均＜0.01;（2）不管是体内抑或是体外研究,阿霉素组TLR4蛋白和mRNA表达较对照组显著升高, Gs-Rbl组 TLR4蛋白[（0.371±0.013/0.254±0.027）比（0.654±0.032/0.519±0.013）]和mRNA [（1.140±0.021/0.503±0.022）比（1.602±0.013/0.838±0.021）]表达较阿霉素组显著下降, P均＜0.01。结论：阿霉素可能通过TLR2和TLR4促发慢性心力衰竭进程,人参皂甙Rbl改善阿霉素慢性心力衰竭效应与抑制T L R2和T L R4有关。     

自发性高血压大鼠淋巴细胞KCa3.1及其炎性因子的表达研究

目的:研究自发性高血压大鼠(SHR)外周血淋巴细胞钙激活钾通道(KCa)3.1和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的变化及其意义。方法:取SHR和正常Wistar大鼠作为实验动物,使用密度离心法分离SHR外周血淋巴细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测SHR外周血淋巴细胞KCa3.1和TNF-αmRNA及蛋白表达水平。结果:①SHR组KCa3.1mRNA[(1.302 5±0.211 7)∶(0.447 5±0.201 2),P<0.05]及TNF-αmRNA[(1.425 7±0.131 7)∶(0.383 6±0.162 6),P<0.05)]表达水平均高于对照组;②SHR组KCa3.1[(1.33±0.02)∶(0.50±0.01),P<0.05]、TNF-α[(1.02±0.04)∶(0.41±0.03),P<0.05]蛋白表达水平均高于对照组。结论:SHR淋巴细胞KCa3.1和TNF-α表达增多,提示KCa通道可能通过激活淋巴细胞释放炎性递质参与高血压的发生发展。     

人白介素-10基因转染对大鼠脑缺血再灌注损伤半影区炎性因子基因和蛋白表达的影响

目的 观察人白介素(IL)-10基因转染对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤半影区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)基因和蛋白表达的影响. 方法 建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,采用立体定向脑室内注射的方式进行转染,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测其转染效果,氯化三苯四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积,荧光实时定量PCR检测半影区TNF-α和IL-1β基因表达情况,ELISA法检测半影区TNF-α和IL-1β蛋白的含量.结果 正常对照组、缺血对照组、空质粒组和IL-10基因转染组半影区TNF-α蛋白含量分别为(0.66±0.04)、(1.16±0.26)、(1.15±0.26)ng/g和(0.84±0.05)ng/g,IL-1β蛋白含量分别为(0.37±0.05)、(1.25±0.39)、(1.21±0.58)ng/g和(0.62±0.05)ng/g.与正常对照组比较,其余各组TNF-α和IL-1β蛋白含量明显升高(P＜0.01),而IL-10基因转染组TNF-α和IL一1β含量则较缺血对照组和空质粒组显著降低(P＜0.01);正常对照组,缺血对照组、空质粒组和IL-10基因转染组半影区TNF-αmRNA的表达量分别为1.00±0.53、9.42±1.83、9.69±1.96和3.53±1.09;IL-1βmRNA的表达量分别为1.00±0.51、27.81±4.84、23.96±4.90和13.55±4.45.与正常对照组比较,其余各组TNF-α和IL-1βmRNA表达量明显升高(P＜0.01),而IL-10基因转染组TNF-α和IL-1βmRNA表达量则较缺血对照组和空质粒组显著降低(P＜0.01). 结论 人IL-10基因转染后能抑制大鼠局灶脑缺血再灌注损伤半影区TNF-α和IL-1β基因和蛋白的表达,可能是其发挥缺血脑保护作用的机制之一.     

虫草素对阿霉素诱导的急性心力衰竭的心脏保护作用及机制

目的探讨虫草素对阿霉素诱导心功能不全、炎性反应和心肌细胞凋亡的影响。方法将小鼠80只随机分为对照1组、虫草素1组、阿霉素1组、处理1组,每组20只。虫草素1组和处理1组给予虫草素,连续4周;阿霉素1组和处理1组一次性注射阿霉素,对照组注射等量生理盐水。给予阿霉素5d后检测心功能,取材进行分子生物学检测和病理学检测。将H9C2心肌细胞分为对照2组、虫草素2组,阿霉素2组、处理2组,分别给予磷酸盐缓冲液、虫草素、阿霉素刺激、阿霉素+虫草素处理,进行分子生物学和病理学检测。结果与对照1组比较,阿霉素1组和处理1组LVEF、左心室缩短率(LVFS)及Bcl-2蛋白表达水平明显下降(P0.05),白细胞介素(IL)1β、IL-6、TNF-αmRNA表达、CD45、磷酸化NF-κB抑制蛋白(P-IκB)α、磷酸化P65(P-P65)、半胱氨酸天冬氨酸酶-3(caspase-3)、Bax蛋白表达及凋亡的心肌细胞水平明显升高(P0.05)。但与阿霉素1组比较,处理1组LVEF、LVFS明显升高[(48.0±6.9)%vs (66.0±5.5)%,(26.0±5.7)%vs (37.0±6.1)%,P0.05],炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)mRNA表达、CD45、P-IκBα、P-P65、caspase-3、Bax蛋白表达及凋亡的心肌细胞明显降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P0.05)。虫草素1组与对照1组各项指标比较,无统计学差异(P0.05)。与对照2组比较,阿霉素2组和处理2组IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达及P-IκBα、P-P65蛋白表达明显升高(P0.05);与阿霉素2组,处理2组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达及P-IκBα、P-P65蛋白表达明显下降(P0.05)。阿霉素2组显著诱导H9C2心肌细胞凋亡,处理2组心肌细胞凋亡情况明显改善。结论虫草素可以改善阿霉素诱导的心功能不全,通过抑制NF-κB信号通路降低阿霉素诱导的炎性反应和心肌细胞凋亡。     

局灶性脑缺血-再灌注大鼠脑中Küppel样转录因子2表达及核因子κB抑制剂的作用

目的探讨Küppel样转录因子2(KLF2)在大鼠局灶性脑缺血-再灌注(I/R)损伤后的表达及核因子κB(NF-κB)抑制剂的干预作用。方法取健康雄性SD大鼠60只,按照随机数字表法分为假手术组、I/R组、NF-κB抑制剂组,每组20只,采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑I/R模型,并给予NF-κB抑制剂——吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)进行干预,观察时间点为I/R后6、12、24、48 h。采用逆转录PCR及Western Blot测定缺血脑组织KLF2 mRNA及其蛋白的表达,采用ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平并进行各组间的比较。结果与假手术组比较,I/R组6、12、24、48 h缺血脑组织中KLF2 mRNA及蛋白表达水平均降低(KLF2 mRNA相对表达量分别为:0.46±0.03比0.82±0.04,0.30±0.04比0.78±0.05,0.18±0.04比0.76±0.02,0.26±0.02比0.81±0.04;KLF2蛋白相对表达量分别为:0.46±0.04比0.80±0.02,0.30±0.02比0.79±0.02,0.15±0.02比0.77±0.01,0.24±0.01比0.79±0.02),I/R后24 h达最低值,而血清TNF-α水平升高,差异均有统计学意义(均P0.05);给予NF-κB抑制剂PDTC后,I/R后6、12、24、48 h KLF2 mRNA及蛋白表达水平较I/R组出现不同程度的上调,KLF2 mRNA相对表达量分别为0.61±0.04、0.44±0.03、0.34±0.02、0.43±0.04,KLF2蛋白水平的相对表达量分别为0.60±0.02、0.43±0.02、0.33±0.01、0.44±0.03,而TNF-α含量降低,差异均有统计学意义(均P0.05)。I/R组及PDTC组各时间点脑组织中KLF2 mRNA水平与血清中TNF-α水平呈负相关(r=-0.728,P0.05)。结论脑I/R后脑组织中KLF2 mRNA表达水平降低,且与血清TNF-α水平存在负相关,其可能通过NF-κB通路介导炎性反应参与脑I/R病理过程。     

蛋白激酶B抑制剂对糖尿病大鼠视网膜血管新生和炎症反应抑制作用的研究

目的研究蛋白激酶B(Akt)抑制剂抑制DR大鼠视网膜血管新生与炎症反应,以减轻DR大鼠视网膜病变的作用机制。方法 54只无眼部疾病SD大鼠随机分为正常对照组(NC,n=18),其余大鼠采用腹腔注射STZ建立DR模型后,随机分为DR组和Akt抑制剂组(Akt组),经干预后,DR组最终入组13只,Akt组最终入组12只。眼部解剖后对视网膜组织进行检测,评估Akt抑制剂对血管新生和炎症的影响。Western blot法检测磷酸化Akt(p-Akt)、血管内皮生长因子α(VEGF-α)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)和磷酸化p38(p-p38)的蛋白表达水平,HE染色法观察视网膜整体形态及视神经节细胞数目,免疫组织化学法检测VEGF-α表达,ELISA法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)。结果与NC组比较,DR组视网膜组织中p-Akt、VEGF-α、p-p38和p-NF-κB p65的蛋白表达升高[(0.23±0.04)vs(0.75±0.05),(0.41±0.04)vs(4.82±0.61),(0.21±0.03)vs(0.83±0.11),(0.08±0.03)vs(0.32±0.04),P0.01];DR组视网膜组织中VEGF-α表达、TNF-α和IL-1β含量均升高[(22.35±1.75)%vs(80.23±4.16)%,(202.78±23.54)vs(1578.49±123.46)pg/ml,(48.54±11.79)vs(923.42±42.63)pg/ml,P0.01]。与DR组比较,Akt组视网膜厚度增加、视网膜神经节细胞数目增多[(39.83±1.64)vs(43.94±2.05)μm,(48±7)vs(63±9)个,P0.01],VEGFα表达、TNF-α和IL-1β含量均降低[(80.23±4.16)%vs(39.46±3.78)%,(1578.49±123.46)vs(763.45±47.78)pg/ml,(923.42±42.63)vs(315.59±56.79)pg/ml,P0.01]。结论 Akt抑制剂可能通过抑制视网膜血管新生与炎性反应,以减轻大鼠DR发展。     

雨蛙素诱导的急性胰腺炎体外细胞模型的信号转导通路研究

目的 观察急性胰腺炎(AP)体外细胞模型Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)信号转导通路及细胞因子表达的变化,探讨其机制.方法 应用雨蛙素处理大鼠胰腺外分泌细胞株AR42J细胞建立AP体外模型,再用雷帕霉素(RPM)及AG490干预.采用Western blotting检测细胞JAK1、磷酸化JAK1(P-JAK1)、STAT1、P-STAT1及TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达水平;RT-PCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达;台盼蓝染色测定细胞存活率.结果 未经雨蛙素处理的AR42J细胞的JAK1、P-JAK1、STAT1、P-STAT1及TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白的相对表达量分别为0.09±0.04、0.14±0.08、0.21±0.09、0.12±0.12、0.10±0.02、0.08±0.03、0.02±0.02.雨蛙素处理后,AR42J细胞上述蛋白的表达呈时间依赖性增加,24 h时的表达量分别为0.53±0.09、0.53±0.13、0.56±0.09、0.55±0.10、0.25±0.04、0.25±0.09、0.27±0.07,均较雨蛙素未处理组显著增加(P＜0.05).再分别应用RPM和AG490抑制24 h后,细胞TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达量显著降低到0.17±0.03和0.17±0.01、0.15±0.05和0.14±0.07、0.19±0.04和0.19±0.05,它们的mRNA表达量也显著降低(P值均＜0.05);RPM和AG490抑制组的细胞存活率分别为(72.4±11.2)%、(69.7±9.8)%,均显著高于单用雨蛙素处理细胞组的(42.2±12.3)%(P＜0.05).结论 JAK1/STAT1信号通路早期参与雨蛙素诱导的AP细胞促炎症细胞因子释放.早期抑制JAK1/STAT1信号通路有利于控制AP的炎症反应.     

高糖对小鼠足细胞表型转化的诱导作用及机制探讨

目的观察高糖对小鼠足细胞表型转化的诱导作用,并探讨其机制。方法将传代培养后的小鼠足细胞随机分为A、B、C三组,A组常规培养,B组加入终浓度为30 mmol/L的葡萄糖、C组加入终浓度为30 mmol/L的葡萄糖及10μmol/L的蛋白质酪氨酸激酶(JAK2)特异性阻断剂α-氰-(3,4-二羟基)-N-苄基肉桂酰胺(AG490)进行培养,48 h后收集细胞,采用Western blot法检测足细胞中自身标志物人肾病蛋白(Nephrin)、间充质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及磷酸化蛋白质酪氨酸激酶(p-JAK2)蛋白,采用RT-PCR检测足细胞中的Nephrin、α-SMA mRNA。结果 A组足细胞中Nephrin、α-SMA、p-JAK2蛋白积分光密度值分别为0.96±0.01、0.21±0.02、0.39±0.01,B组分别为0.58±0.01、0.66±0.07、0.71±0.02,C组分别为0.87±0.04、0.35±0.02、0.41±0.04;A组足细胞中Nephrin、α-SMA mRNA的相对表达量为1.53±0.04、0.57±0.01,B组分别为0.82±0.09、0.89±0.03,C组分别为1.30±0.04、0.78±0.03。B组与A组比较,P均<0.05;C组与B组比较,P均<0.05。结论高糖可通过激活JAK/STAT信号途径诱导足细胞发生表型转化。     

STAT1/SOCS1在高迁移率族蛋白1诱导的大鼠滑膜细胞中的表达

目的 探讨高迁移率族蛋白(HMGB)1对滑膜细胞增殖的影响及机制.方法 ①常规培养的滑膜细胞,随机分为正常对照组和肿瘤坏死因子(TNF)-α组,培养6、12 h和24 h,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)免疫细胞化学法(ICC)检测HMGBI mRNA及蛋白在滑膜细胞中的表达变化;②常规培养的滑膜细胞,随机分为正常对照组、HMGB1组,分别培养6、12 h和24 h,RT-PCR检测磷酸化信号转导和转录激活因子(p-STAT1)mRNA表达;ICC和流式细胞术(FCM)检测p-STAT1、细胞激酶信号抑制剂(SOCSl)蛋白的表达;ICC检测PCNA蛋白的表达.结果 ①TNF-α刺激6、12、24 h显著上调HMGB1mRNA的表达[0.86,0.92,1.06 vs 0.70,P<0.01];其蛋白表达亦增强,HMGB1蛋白不仅表达于细胞核,而且出现于胞质中;② HMGB1作用6、12、24 h显著增强STAT1 mRNA及蛋白的表达量[0.30,0.69,1.05 vs 0.24,P<0.01]及[1.34±0.09,1.55±0.16,1.74±0.13 vs 1.00±0.15,P<0.01];SOCS1蛋白量分别为1.43±0.10、1.58±0.05和1.24±0.15,呈先升高后下降.③ p-STAT1与SOCS1蛋白表达呈负相关(r=-0.484,P=0.04).结论 HMGB1是滑膜细胞增殖过程中的重要细胞因子,其可能通过上调STAT1的表达和活性,促进细胞增殖.     

局灶性脑缺血-再灌注大鼠脑中Kuppel样转录因子2表达及核因子κB抑制剂的作用

目的：探讨Kuppel样转录因子2（KLF2）在大鼠局灶性脑缺血-再灌注（I／R）损伤后的表达及核因子κB（ NF-κB）抑制剂的干预作用。方法取健康雄性SD大鼠60只,按照随机数字表法分为假手术组、I／R组、NF-κB抑制剂组,每组20只,采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑I／R模型,并给予NF-κB抑制剂———吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（ PDTC）进行干预,观察时间点为I／R后6、12、24、48 h。采用逆转录PCR及Western Blot测定缺血脑组织KLF2 mRNA及其蛋白的表达,采用ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子α（ TNF-α）水平并进行各组间的比较。结果与假手术组比较,I／R组6、12、24、48 h缺血脑组织中KLF2 mRNA及蛋白表达水平均降低（ KLF2 mRNA相对表达量分别为：0.46±0.03比0.82±0.04,0.30±0.04比0.78±0.05,0.18±0.04比0.76±0.02,0.26±0.02比0.81±0.04;KLF2蛋白相对表达量分别为：0.46±0.04比0.80±0.02,0.30±0.02比0.79±0.02,0.15±0.02比0.77±0.01,0.24±0.01比0.79±0.02）,I／R后24 h达最低值,而血清TNF-α水平升高,差异均有统计学意义（均P<0.05）;给予NF-κB抑制剂PDTC后,I／R后6、12、24、48 h KLF2 mRNA及蛋白表达水平较I／R组出现不同程度的上调,KLF2 mRNA相对表达量分别为0.61±0.04、0.44±0.03、0.34±0.02、0.43±0.04,KLF2蛋白水平的相对表达量分别为0.60±0.02、0.43±0.02、0.33±0.01、0.44±0.03,而TNF-α含量降低,差异均有统计学意义（均 P<0.05）。I／R组及PDTC组各时间点脑组织中KLF2 mRNA水平与血清中TNF-α水平呈负相关（ r=—0.728,P<0.05）。结论脑I／R后脑组织中KLF2 mRNA表达水平降低,且与血清TNF-α水平存在负相关,其可能通过NF-κB通路介导炎性反应参与脑I／R病理过程。     

TNF-α对肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的作用

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肠上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1定位和表达的影响,探讨TNF-α增加肠上皮细胞屏障通透性的作用机制.方法:Caco-2细胞(20-30代)应用含有2 mmol/ L谷氨酰胺、20%胎牛血清的DMEM培养液培养7d,细胞生长达到融合后加入不同浓度的TNF-α(0,10,100μg/L)继续培养24h,提取细胞蛋白制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架,Western blot检测磷酸化和非磷酸化的claudin-1蛋白含量,并应用间接免疫荧光法检测claudin-1的定位,实时定量PCR技术检测claudin-1 mRNA的表达.结果:免疫荧光染色可见对照组claudin-1沿细胞膜分布,呈蜂巢状线性荧光,10μg/L TNF-α引起claudin-1荧光信号减弱,并呈锯齿状异常分布;Western blot分析显示claudin-1蛋白有两种表达形式,一种为20 kDa(非磷酸化claudin-1),主要存在于NP-40可溶性蛋白样品中;另一种为25 kDa(磷酸化claudin-1),只存在于NP-40不溶性蛋白样品中.TNF-α不影响20 kDa claudin-1蛋白的表达,但可使25 kDa claudin-1蛋白表达下降且具有浓度依赖性(10,100μg/L:0.31±0.02.0.24±0.05 vs 0.43±0.09 P>0.05,P<0.05);实时定量PCR结果显示不同浓度的TNF-α(10,100μg/L)作用24h或100μg/L TNF-α作用不同时间(4,8和24h)与正常对照组相比均不能引起claudin-1 mRNA的改变.结论:TNF-α对Caco-2细胞紧密连接蛋白claudin-1 mRNA的表达没有影响,但可以引起有功能的磷酸化claudin-1蛋白表达减少.     

小干扰RNA对川崎病血清诱导血管内皮细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的 观察川崎病急性期血清对血管内皮细胞摹质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响以及MMP-9小干扰RNA(siRNA)对上述过程的调节作用.方法 构建MMP-9 siRNA质粒,脂质法转染血管内皮细胞(ECV-304).ECV-304细胞培养分为川崎病血清+siRNA阴性对照组、正常血清组、川崎病血清+MMP-9 siRNA1组、川崎病血清+MMP-9 siRNA2组、川崎病血清+人血丙种球蛋白组、川崎病血清组.应用逆转录聚合酶链式反应检测MMP-9 mRNA的表达,免疫印迹法检测MMP-9蛋白的表达.结果 川崎病血清组和川崎病血清+siRNA阴性对照组的MMP-9 mRNA、MMP-9蛋白表达分别是2.49±0.03、1.20±0.04和2.45±0.03、1.15±0.03,均较正常血清组(1.21±0.03、0.52±0.03)明显增高(均P<0.01).川崎病血清+MMP-9 siRNA1组(0.78±0.03、0.31±0.02)、川崎病血清+MMP-9 siRNA2组(0.74±0.04、0.28±0.04)及川崎病血清+人血丙种球蛋白组(1.58±0.03、0.88±0.04)的MMP-9 mRNA、MMP-9蛋白表达与川崎病血清组及川崎病血清+siRNA阴性对照组比较均明显减少(均P<0.01).结论 川崎病急性期血清能诱导血管内皮细胞的MMP-9表达增高,可能参与川崎病冠状动脉损伤的发生.构建的MMP-9 siRNA能显著抑制MMP-9 mRNA和蛋白的表达.     

人参皂甙Rbl对心力衰竭大鼠心肌细胞钙调控的影响

目的 探讨人参皂甙Rbl(ginsenosides Rbl,Gs-Rb1)改善心力衰竭(heart failure,HF)是否与心肌细胞的钙调控有关.方法 将阿霉素诱导的HF大鼠随机分为HF组(n=16)和Gs-Rbl组[70 mg/(kg·d),n=18],另随机选取同龄大鼠作为对照组(n=10).干预结束并完成心脏...     

探析慢性心衰患者血压变异性与血栓前状态的相关性

目的:探讨慢性心力衰竭(CHF)患者血压与血栓前状态(PTS)的相关性。方法:从2010年4月至2013年2月入住我科的患者中选择心功能为NYHAⅡ级的96例纳入CHF组,再选择90例心功能正常的患者纳入正常对照组,检测两组白天、夜晚以及24h的血压,及PTS相关指标,并对二者进行相关性分析。结果:与正常对照组比较,CHF组夜间舒张压[nDBP,(80.53±7.73)mmHg比(84.74±8.74)mmHg],白昼收缩压标准差[dSSD,(11.87±4.98)mmHg比(14.97±5.12)mmHg]、夜间收缩压标准差[nSSD,(11.62±4.83)mmHg比(15.05±5.42)mmHg]和24h收缩压标准差[24hSSD,(12.98±3.22)mmHg比(15.75±5.08)mmHg]明显升高(P<0.01);血浆血管性假血友病因子[vWF,(75.64±6.83)IU/dl比(90.75±7.32)IU/dl]、D-二聚体[(0.31±0.03)g/L比(0.73±0.13)g/L]和纤溶酶原激活物抑制物-1[PAI-1,(22.33±1.14)μg/L比(27.46±1.15)μg/L]水平显著升高(P均<0.01)。CHF患者中,24hSSD与vWF和血小板α颗粒膜蛋白-140(GMP-140)呈显著正相关(r=0.403,0.452,P均<0.05),24h舒张压标准差(24hDSD)、夜间舒张压标准差(nDSD)与GMP-140呈显著正相关(r=0.421,0.413,P均<0.05),其他时段血压变异性与PTS指标均无显著相关性(P均>0.05)。结论:慢性心衰患者血压变异性显著升高,血栓前状态指标水平显著上升,二者呈显著正相关。     

槐耳清膏对缺氧结肠癌SW480细胞VEGF及HIF-1α表达的影响

目的: 观察槐耳清膏对体外培养人结肠癌SW480细胞系VEGF和HIF-1α表达的影响.方法: 体外培养人结肠癌SW480细胞48 h, 随机分为常氧对照组(NC组)、低氧对照组(HC组)和低氧槐耳组(HH组), HH组RPMI 1640培养基含槐耳清膏(终浓度1 g/L). 半定量RT-PCR检测SW480细胞VEGF和HIF-1α mRNA表达水平, Western blot检测两者蛋白表达水平.结果: HH组和HC组VEGF、HIF-1α mRNA表达水平均显著高于NC组(4.71±0.07, 4.54±0.02 vs 1.19±0.03;5.68±0.07, 5.58±0.05 vs1.21±0.05, 均P<0.05), 但HH组与HC组比较无统计学差异. HC组VEGF、HIF-1α蛋白表达均显著显著高于NC组(0.66±0.03 vs 0.38±0.02;0.58±0.04 vs 0.31±0.03, 均P<0.05), 与HC组比较, HH组VEGF和HIF-1α蛋白表达均显著下降(0.37±0.03, 0.30±0.05, 均P<0.05).结论: 槐耳清膏通过下调人结肠癌SW480细胞内HIF-1α和VEGF蛋白表达抑制肿瘤生成.     

早期胰岛素治疗对糖尿病大鼠骨骼肌细胞胆固醇调节元件结合蛋白-1c表达的影响

目的 探讨早期胰岛素治疗对糖尿病大鼠骨骼肌细胞内胆固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)表达的影响及可能的分子机制.方法 将7～8周龄高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素诱导的雄性糖尿病SD大鼠24只按随机数字表法分为4组:正常对照组、未治疗糖尿病组、胰岛素组、格列齐特组,每组各6只.通过real-time PCR和Western blot法检测骨骼肌细胞SREBP-1c mRNA和核内成熟型蛋白表达水平、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达、信号转导及转录活化子3磷酸化(Tyr705)(p-STAT3)蛋白表达水平.结果 与对照组(3.7±1.1)比较,糖尿病大鼠骨骼肌细胞SREBP-1c mRNA(7.3±2.6)和核内蛋白(3.3±0.4)、TNF-α(0.44±0.03)及P-STAT3蛋白(0.50 ±0.08)表达水平显著上调,早期胰岛素治疗则下调了SREBP-1c mRNA(4.1±1.8)和核内蛋白(2.7±0.3)表达、TNF-α(0.19±0.22)及P-STAT3蛋白(0.29±0.03)表达,差异有统计学意义(P<0.05).结论 早期胰岛素治疗抑制骨骼肌细胞内脂质合成通路中关键转录分子的表达,可能是骨骼肌内脂质沉积减少的机制之一.     

大黄酸对肿瘤坏死因子-α诱导的脐静脉内皮细胞黏附作用影响的观察

目的 观察不同剂量的大黄酸(Rhein)对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)黏附作用的影响. 方法 将HUVECs分为单纯HUVECs组、单纯TNF-α 40 ng/ml(TNF-α)组、Rhein100 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml(Rhein100)组、Rhein 50 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml(Rhein50)组、Rhein 10 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml (Rhein10)组.采用Western blot和RT-PCR检测HUVECs细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的蛋白和mRNA的水平.采用人单核细胞株(THP-1)和HUVECs的黏附性实验检测内皮细胞的黏附功能. 结果 与TNF-α组比较,Rhein100、Rhein50、Rhein10组ICAM-1蛋白相对表达量下降[(2.88±0.04)vs(1.27±0.32),(1.28±0.17),(1.32±0.25),P＜0.05或P＜ 0.01];Rhein100和Rhein50组ICAM-1 mRNA的水平下降[(2.12±0.24)vs(1.19±0.17),(1.26±0.23),P＜0.05或P＜0.01];在黏附性实验中,Rhein100组HUVECs所黏附的单核细胞数目下降[(1.28±0.07)vs(1.07±0.14),P＜0.01]. 结论 Rhein能抑制TNF-α所诱导的HUVECs的ICAM-1的过度表达,可能是Rhein对HUVECs的保护机制之一.     

肝复康对肝纤维化大鼠肝组织整合素α5β1/FAK信号通路的调节作用

目的研究整合素α5β1/FAK信号通路在肝纤维化中的作用以及中药肝复康对此通路的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、肝复康大剂量、中剂量和小剂量治疗组,皮下注射10%CCl4制备肝纤维化模型,自第9周起,给予肝复康灌胃治疗至第20周。采用免疫组化法检测大鼠肝组织整合素α5和整合素β1的表达情况;采用RT-PCR法检测FAK mRNA水平。结果模型组大鼠肝组织整合素α5表达水平(0.50±0.01)比正常对照组(0.23±0.13)明显增高(P<0.01),而肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.35±0.03、0.33±0.01、0.38±0.02)比模型组明显降低(P<0.01);模型组大鼠肝组织整合素β1表达水平(0.44±0.02)比正常对照组(0.27±0.01)明显增高(P<0.01),肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.37±0.01、0.34±0.01、0.39±0.01)表达水平较模型组明显降低(P<0.01);模型组动物FAK mRNA水平(0.73±0.01)比正常对照组(0.11±0.02)明显增高(P<0.01),而肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.33±0.03、0.28±0.01、0.18±0.01)比模型组明显降低(P<0.01)。结论整合素α5β1/FAK信号通路的激活在肝纤维化中发挥重要作用,肝复康治疗肝纤维化作用的机制可能与抑制整合素α5β1/FAK通路的信号转导有关。     

TNF-α对肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的作用

目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肠上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1定位和表达的影响,探讨TNF-α增加肠上皮细胞屏障通透性的作用机制.方法Caco-2细胞(20-30代)应用含有2 mmol/L谷氨酰胺、20%胎牛血清的DMEM培养液培养7d,细胞生长达到融合后加入不同浓度的TNF-α(0,10,100 μg/L)继续培养24h,提取细胞蛋白制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架,Western blot检测磷酸化和非磷酸化的claudin-1蛋白含量,并应用间接免疫荧光法检测claudin-1的定位.实时定量PCR技术检测claudin-1 mRNA的表达.结果免疫荧光染色可见对照组claudin-l沿细胞膜分布,呈蜂巢状线性荧光,10μg/L TNF-α引起claudin-1荧光信号减弱,并呈锯齿状异常分布;Western blot分析显示claudin-1蛋白有两种表达形式,一种为20 kDa(非磷酸化claudin-1),主要存在于NP-40可溶性蛋白样品中;另一种为25 kDa(磷酸化claudin-1),只存在于NP-40不溶性蛋白样品中.TNF-α不影响20kDa claudin-1蛋白的表达,但可使25 kDaclaudin-1蛋白表达下降且具有浓度依赖性(10,100 μg/L0.31±0.02,0.24±0.05 vs 0.43±0.09P＞0.05,P＜0.05);实时定量PCR结果显示不同浓度的TNF-α(10,100μg/L)作用24 h或100 μg/LTNF-μ作用不同时间(4,8和24 h)与正常对照组相比均不能引起claudin-1 mRNA的改变.结论TNF-α对Caco-2细胞紧密连接蛋白claudin-1 mRNA的表达没有影响,但可以引起有功能的磷酸化claudin-1蛋白表达减少.     

二甲双胍对2型糖尿病模型大鼠肾组织色素上皮衍生因子表达影响的研究

目的观察二甲双胍(MET)对T2DM模型大鼠肾组织色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响,探讨MET对DKD的保护机制。方法高脂饲料喂养结合腹腔注射小剂量STZ建立T2DM大鼠模型并随机分为糖尿病模型(T2DM)组、MET组[MET,300 mg/(kg·d)]和格列本脲(GLY)组[GLY,5 mg/(kg·d)],并设正常对照组(NC)。检测各组FPG、HbA_1c,UAlb、尿肌酐(Ucr)、尿PEDF水平和肾小球基底膜厚度(GBMT);免疫组织化学法检测肾组织PEDF蛋白表达,Western blot法检测肾组织PEDF蛋白水平;荧光定量PCR检测肾组织PEDF mRNA表达。结果与NC组比较,T2DM组PEDF的mRNA、蛋白相对表达量降低[(7.11±0.30)vs(0.33±0.03)、(1.07±0.01)vs(0.40±0.01),P0.05],FPG、HbA_1c、UACR、PEDF/Ucr(UPCR)和GBMT升高(P0.05)。与T2DM组比较,MET组PEDF的mRNA、蛋白相对表达量升高[(0.33±0.03)vs(3.10±0.67)、(0.40±0.01)vs(0.80±0.04),P0.05],UACR、UPCR和GBMT降低(P0.05);与GLY组比较,MET组PEDF的mRNA和蛋白相对表达量升高[(1.76±0.67)vs(3.10±0.67)、(0.61±0.15)vs(0.80±0.04),P0.05],UACR、UPCR、GBMT降低(P0.05)。结论 MET可增加T2DM大鼠肾组织PEDF表达,降低尿蛋白排泄,改善肾脏病理结构,其机制可能与肾脏保护作用有关。