人结直肠癌肿瘤干样细胞生物学特性及其与细胞自噬关系

目的:探讨人结直肠癌肿瘤干样细胞的生物特性及其与自噬发生的关系。方法:采用无血清培养法从人结直肠癌HCT116细胞中获取HCT116球细胞(结直肠癌肿瘤干样细胞);分别用克隆集落形成实验、成球实验、Transwell实验检测HCT116细胞与HCT116球细胞的增殖能力、自我更新能力及侵袭和迁移能力,用免疫荧光法检测两种细胞中自噬标志物LC3B的荧光表达,并用RT-PCR和Western blot分别检测两种细胞中LC3B及自噬相关基因ATG5、ATG7的mRNA与蛋白表达。结果:HCT116球细胞克隆形成能力、新成球能力以及侵袭与迁移能力均较HCT116细胞明显增强(均P0.05)。HCT116球细胞中LC3B的荧光表达强度较HCT116细胞明显增高(P0.05);HCT116球细胞中LC3B、ATG5、ATG7的mRNA和蛋白表达量较HCT116细胞均显明显升高(均P0.05)。结论:结直肠癌肿瘤干样细胞较结直肠癌细胞具有更强的自我更新和体外增殖能力,以及更强的侵袭和迁移能力,该生物学特性可能与其高自噬活性密切相关。     

CD133作为肝癌干细胞表面标记的初步研究

目的 研究人肝癌SMMC7721和bcl-7402细胞株中CD133的表达,探讨CD133作为肝癌干细胞表面标记的可能性.方法 采用流式细胞仪检测SMMC7721和bcl-7402细胞株中CD133的表达;免疫磁珠细胞技术分离SMMC7721和bcl-7402细胞株中CD133阳性和CD 133阴性细胞,检测其细胞周期,观察并采用单因素方差分析和u检验分析体外培养过程中CD133阳性和CD133阴性细胞的细胞形态、增殖和分化能力的差异.结果 CD133阳性细胞在SMMC7721和bcl-7402细胞株中所占比例分别为0.7%～1.0%、1.7%～8.9%;流式细胞仪检测显示两种细胞株中处于G0/G1期的CD133阳性细胞分别为85.3%、89.4%,明显高于CD133阴性细胞和未分选细胞(F=14.49,38.84,P<0.05);CD133阳性细胞体外增殖能力强于相同条件下CD133阴性细胞和未分选细胞,在1～3 d和5～7 d曲线变化更明显(F=49.32,784.04,89.91,152.83,P<0.05);体外培养过程中,CD133阳性细胞的比例逐日下降,至扩增的第15天,与未分选细胞含量相似(u=0.271,P<0.05).结论 人肝癌SMMC7721和bcl-7402细胞株中,CD133阳性细胞体外增殖和分化能力较强,CD133是肝癌干细胞的表面标记之一.     

体外培养脑胶质瘤细胞株中CD133表达的研究

目的 探讨与脑胶质瘤干细胞相关的CD133表型.方法 将无血清培养中的胶质瘤干细胞与含血清贴壁培养的胶质瘤细胞中CD133的表达进行对比.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR检测信使RNA(mRNA)水平的表达,流式细胞术及免疫荧光染色法检测蛋白水平的表达,激光共聚焦扫描成像进行CD133蛋白的亚细胞定位.结果 所有胶质瘤细胞中均存在CD133 mRNA及蛋白的表达.AC133抗体所识别的糖基化CD133-AC133分子仅分布于无血清培养中的胶质瘤干细胞,阳性细胞比例为31.8％ ～99.9％,且定位于此类细胞膜表面.AC133阴性的胶质瘤干细胞及含血清贴壁培养胶质瘤细胞中CD133蛋白的表达位于细胞内,阳性细胞比例约为22.2％～88.6％,其亚细胞定位为内质网和/或高尔基体.结论 细胞表面AC133分子,而非CD133 mRNA及细胞内CD133蛋白标记了一类胶质瘤干细胞亚群,但无血清培养环境下也存在AC133呈阴性表达的胶质瘤干细胞亚群.     

人前列腺癌PC-3细胞系中肿瘤干细胞的富集、鉴定以及生物学特征的初步研究

目的从人前列腺癌PC-3细胞系中分离、富集并鉴定前列腺癌干细胞,探讨具有肿瘤干细胞特性的侧群(SP)细胞与未分选的总体细胞(NST)之间的生物学行为差异。方法采用无血清培养液(SFM)悬浮细胞聚球法体外培养PC-3细胞系。以PC-3悬浮成球细胞为实验组,常规以含血清培养液(SSM)中单层贴壁培养的PC-3细胞为对照组,通过流式细胞技术检测两种细胞中CD44~+、CD133~+细胞及SP细胞比例。通过生物学功能实验比较两种细胞的增殖、血管生成、迁移、侵袭能力的差异。结果 PC-3成球细胞可以在SFM中生存并形成悬浮细胞球。PC-3悬浮成球细胞具有自我更新和分化能力,在体外可以连续、稳定传代,在SFM中滴加血清后可以分化,交替培养于SSM和SFM中可以实现与贴壁细胞之间的相互转化。PC-3悬浮成球细胞中CD44~+、CD133~+细胞及SP细胞比例均显著高于常规培养的PC-3贴壁细胞(P0.05)。相对于NST细胞,SP细胞具有更强的迁移、侵袭和血管生成能力,而SP细胞增殖能力则相对较弱。RT-qPCR和Western blot实验发现SP细胞中缺氧诱导因子2α(HIF-2α)、血管生成因子(VEGF)和基质金属蛋白酶(MMP)基因和蛋白水平均高于NST细胞。结论 PC-3悬浮成球细胞具有肿瘤干细胞特性,采用无血清悬浮细胞聚球培养法可以从PC-3细胞系中简便、高效地富集前列腺癌干细胞。从人前列腺癌PC3细胞系分离出的SP细胞的血管生成、迁移、侵袭能力均强于NST细胞,而增殖能力却弱于NST细胞。     

CD105、CD133在人肝癌细胞株HepG-2的表达情况及生物学性状的体外研究

目的 观察人肝癌细胞株HepG-2中CD105、CD133的表达情况并对不同亚群的生物学性状进行体外研究.方法 采用含10％胎牛血清的DMEM培养HepG-2.流式细胞分选仪检测CD105、CD133表达情况并分选出CD105+ CD133+、CD105-CD133+、CD105+ CD133-、CD105-CD133-亚群.CCK-8和Transwell侵袭实验分别检测各细胞亚群增殖及侵袭能力;软琼脂培养试验检测细胞成球能力.结果 四种不同细胞亚群的比例分别为99.57％,0.2％,0.2％和0.03％.CD133阳性亚群增值能力和成球能力较CD133-及未分选细胞强;而CD105+亚群侵袭能力较CD105-及未分选细胞强.结论 CD105在人肝癌细胞株HepG-2的表达与其侵袭能力有关,CD133与其增殖成球能力有关.CD105+ CD133+亚群在人肝癌细胞株HepG-2中具有干细胞特性.     

胆管癌干细胞的分离、培养及鉴定

目的:从人胆管癌细胞系QBC-939中分离具有干细胞特征的肿瘤细胞,为后续胆管癌干细胞的研究提供材料。方法:用无血清培养法及流式细胞分选法从QBC-939细胞中分离得到具有干细胞特征的CD133+Ep CAM~(high)干细胞样细胞,继续在无血清培养基中培养,观察其成球能力,并比较CD133+Ep CAM~(high)干细胞样细胞与QBC-939细胞单克隆形成率、耐药性,增殖能力,干细胞相关核转录因子OCT-4、Bmi-1、E-cadherin蛋白表达情况,以及BALB/c小鼠皮下移植后的成瘤能力。结果:在无血清培养基中,CD133+Ep CAM~(high)干细胞样细胞具有较强的成球能力。与QBC-939细胞比较,CD133+Ep CAM~(high)干细胞样细胞克隆形成率、洛铂耐药性、增殖明显增加;干细胞相关核转录因子OCT-4、Bmi-1表达明显增加,而E-cadherin表达明显降低;皮下移植瘤形成率明显增加。以上差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:从人胆管癌QBC-939细胞中分离的干细胞样细胞具有肿瘤干细胞特性,可用于胆管癌干细胞的研究。     

胃癌CD133阳性细胞亚群肿瘤起始细胞样特性的检测

目的 探讨人胃癌细胞CD133＋亚群的分选及其特性的鉴定.方法 对50例胃癌原发灶和癌旁胃黏膜组织标本行免疫组织化学染色及Western blot检测CD133蛋白的表达.采用流式细胞仪检测不同分化胃癌细胞系CD133所占百分比,免疫磁珠法分选CD133＋细胞亚群,悬浮培养并观察其生长特性,并检测CD133阳性细胞裸鼠皮下接种致瘤能力.单细胞克隆观察单个CD133＋细胞生长特性,半定量反转录聚合酶链反应法鉴定相关干细胞标记的表达.结果 CD133蛋白多定位于胃癌原发灶黏膜及黏膜下层的肿瘤细胞膜表面,其相对表达量高于癌旁胃黏膜组织（P＜0.05）.不同分化程度的人胃癌细胞系KATO-Ⅲ、SGC-7901、AGS及MKN-45中CD 133＋亚群所占相对百分比为（28±2）％、（17±2）％、（6±2）％及（4±2）％.人胃癌细胞系KATO-Ⅲ分选后阳性组中CD133＋亚群比例分别为（91±3）％;培养1周后,达到（95±2）％,并不断增殖形成细胞球.而且其增殖能力强于阴性细胞[群体倍增时间分别为（21±3）h和（40±8）h,P＜0.05].CD133阳性组和未分选组细胞裸鼠皮下接种时成瘤率分别为100％和80％;而CD133阴性组不成瘤,CD133阳性组移植瘤平均体积及重量均大于未分选组（P＜0.05,P＜0.05）.单克隆形成实验示单个CD133＋细胞可形成新的细胞克隆.半定量RT-PCR检测示其表达干细胞标记物Oct-4、Nanog、Sox-2、Musashi-1及EGFR.结论 体外可成功分离、纯化和扩增人胃癌细胞CD133＋亚群,其具有自我更新、增殖能力及较强的致瘤能力,并表达部分干细胞相关基因.     

PIWIL2在人膀胱移行细胞癌肿瘤干细胞样细胞中的表达及意义

目的 研究PIWIL2在人膀胱癌肿瘤干细胞样细胞(CSLC)中的表达和意义,探讨PIWIL2在靶向肿瘤干细胞治疗中的作用.方法 用无血清悬浮培养法从人膀胱移行细胞癌细胞株BIU-87中分离获得悬浮细胞球,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD133和CD44的表达,免疫磁珠分选系统分离CD133+CD44+细胞;分别采用T...     

mi R-711在介导结肠癌干细胞生物学行为恶化中的作用

目的探讨miR-711对结肠癌干细胞细胞侵袭、转移、增殖及上皮间质转化的作用。方法采用流式细胞仪从人结肠癌细胞株HT-29中分选肿瘤干细胞。miR-711-mimics、miR-NC转染结肠癌干细胞。qRT-PCR检测各组细胞miR-711 mRNA表达;MTT检测细胞增殖能力;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western Blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白量表达。结果结肠癌细胞株HT-29细胞CD44+/CD133+百分比最高(29.90%);miR-711过表达组细胞miR-711水平高于空载组和空白组(P0.05);miR-711过表达组细胞增殖、侵袭及迁移能力低于空载组、空白组,差异有统计学意义(P0.05);miR-711过表达组E-cadherin蛋白水平高于空载组、空白组,N-cadherin、Vimentin蛋白水平低于空载组、空白组,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论过表达miR-711可抑制结肠癌干细胞侵袭、转移、增殖及上皮间质转化。     

人胆囊癌SGC996细胞株侧群细胞的分离与体外培养

目的 分选人胆囊癌细胞株SGC996的侧群细胞,并行体外培养,初步验证其干细胞的特性.方法 应用流式细胞仪分选人胆囊癌细胞株SGC996的侧群细胞和主群细胞,将两群细胞分别在有血清和添加干细胞因子的无血清培养液条件下培养.应用噻唑蓝(MTT)法检测两群细胞在血清培养条件下的增殖能力.结果 人胆囊癌细胞株SGC996的侧群细胞分选比例仅为1.0％,在维拉帕米阻断后降至0.1％.侧群细胞在无血清培养液中能形成干细胞样“肿瘤球”,但主群细胞在该条件下生长能力较差,甚至死亡.MTT结果显示,在有血清培养条件下,侧群细胞在第5、6、7天的吸光度值分别为1.26±0.15、1.73±0.18、2.21±0.17,较主群细胞的0.95±0.06、1.31±0.10、1.86±0.11,各组差异均有统计学意义(t=3.30、3.54、3.03,P＜0.05).结论 人胆囊癌细胞株SGC996中存在侧群细胞,这群细胞在体外培养能形成干细胞样“肿瘤球”,表现出更强的体外增殖能力,为胆囊癌干细胞进一步研究提供理论基础.     

Biological and Genetic Characteristics of Tumor-Initiating Cells in Colon Cancer

Background Human prominin-1 (PROM1, CD133) was used as a marker to detect stem cells (progenitor cells) and cancer stem cells (tumor-initiating cells) in various tissues. The purpose of this study was to investigate the biological and genetic characteristics of tumor-initiating cells in colon cancer with both in vitro and in vivo analyses. Methods The CD133 expression of 12 colon cancer cell lines was evaluated. CD133⁺ cells were isolated by flow cytometry and examined for in vivo tumor formation, in vitro proliferation, colony formation, and invasion ability. Additionally, we used microarray analysis to compare gene expression profiles between CD133⁺ and CD133^– isolated cells. Results CD133⁺ cells were found in 5 of 12 colon cancer cell lines. Isolated CD133⁺ cells from the HT29 colon cancer cell line exhibited a higher tumorigenic potential than CD133^– cells in the in vivo tumor formation assay. Furthermore, it was shown that CD133⁺ cells are more proliferative and have higher colony-forming and invasive abilities than CD133^– cells in vitro. Microarray analysis found differential gene expression correlating with CD133 expression. Conclusions It was confirmed that CD133⁺ cells in colon cancer are useful markers for the detection of tumor-initiating cells. Intimate biological and genetic features of CD133⁺ cells in colon cancer cell lines were also revealed. The biological characteristics of CD133⁺ cells and differentially expressed genes in these cells will help elucidate more details of tumor-initiating cells in colon cancer. Electronic supplementary material The online version of this article (doi: ) contains supplementary material, which is available to authorized users     

microRNA-224在结肠癌细胞中的表达及意义

目的：探讨microRNA-224（miR-224）对结肠癌细胞中的表达及意义。 方法：用real-time PCR检测4种结肠癌细胞株（Caco-2、HCT116、HT-29、LoVo）和正常结肠黏膜组织中miR-224的表达水平;将HCT116细胞分别转染miR-224模拟物和阴性对照组序列,以未处理的HCT116细胞作为空白对照,用real-time PCR法检测各组细胞miR-224的表达水平,用MTT法和平板克隆实验法检测各组细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测各组细胞周期情况。 结果：4种结肠癌细胞株miR-224的表达均明显高于正常结肠黏膜组织（均P<0.05）;与空白对照组HCT116细胞比较,miR-224模拟物转染组HCT116细胞miR-224的表达水平明显升高,增殖活力明显增强,细胞克隆数量明显增高（均P<0.05）;细胞周期G1到S期转换的趋势增强（P=0.074）;阴性对照组序列转染组HCT116细胞的各项指标差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：miR-224在结肠癌细胞中表达上调,miR-224可能通过促进细胞增殖与细胞周期的演进,而在结肠癌发生发展的过程中发挥促癌基因的作用。     

CD133<Superscript>+</Superscript>CD44<Superscript>+</Superscript> Population Efficiently Enriches Colon Cancer Initiating Cells

Background  Previous reports have demonstrated that CD133⁺ cells or CD44⁺ cells might be cancer initiating cells (CIC) of colon cancer. However, the association between the two cell types is unclear. In this study, we evaluated the tumorigenicity of each population of human colon cancer divided by CD133 and CD44 using non-obese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mice. Methods  Using the colon cancer cell lines HT29 and Caco2 we evaluated the change of expression status of CD133 or CD44 by a treatment with sodium butyrate (NaBT) that can induce cellular differentiation. Next, we prepared ten clinical samples of colon cancer and analyzed the expression and tumorigenicity of CD133 and CD44. Results  With NaBT treatment, CD44 expression was greatly downregulated in both HT29 and Caco2 (HT29: nontreatment versus treatment; 77.8% versus 0.6%, Caco2: 14.0% versus 0.4%, respectively), more than CD133 expression (HT29: nontreatment versus treatment; 90.1% versus 67.7%, Caco2: 98.9% versus 76.3%, respectively). In clinical samples, the percentages of CD133⁺ cells and CD44⁺ cells varied from 0.3% to 82.0% (mean 35.5%), and from 11.5% to 58.4% (mean 30.0%), respectively. Subcutaneous injection of CD133⁺ or CD44⁺ cells made a tumor in all mice (3/3 and 4/4, respectively). The combined analysis of CD133 and CD44 revealed that only the CD133⁺CD44⁺ population had the ability to produce a tumor (3/3). Conclusion  The findings demonstrate that, at present, the CD133⁺CD44⁺ population may be the best to identify tumor initiating cells of human colon cancer. Naotsugu Haraguchi: Awardee of Research Resident Fellowship from the Foundation for Promotion of Cancer Research (Japan) for the 3^rd Term Comprehensive 10- Year Strategy for Cancer Control.     

吉非替尼对结肠癌细胞的生长抑制作用与PTEN表达的关系

目的 观察表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对人结肠癌细胞的生长抑制作用,探讨这种作用与结肠癌细胞PTEN表达的关系.方法 应用体外药物敏感实验检测吉非替尼对6种人结肠癌细胞系的生长抑制作用;应用RT-PCR检测不同结肠癌细胞中PTEN mRNA水平;应用Western blot 检测结肠癌细胞中PTEN蛋白表达水平.结果 吉非替尼在体外对6种结肠癌细胞系的生长抑制作用差异很大(F=325.51,P＜0.05).吉非替尼作用浓度为1 μmol/L时,Lovo细胞系抑制率达34%,对吉非替尼最为敏感,其半量抑制浓度(IC50)＜10 μmol/L;HT29和SW480为中度敏感(10μmol/L＜IC50＜100 μmol/L);而HCT116、LS174T和SW620不敏感,其IC50＞100 μmol/L.各个细胞系中PTEN mRNA和PTEN蛋白均有表达.结论 吉非替尼对结肠癌细胞的生长抑制作用与PTEN mRNA和PTEN蛋白表达水平无明显相关,即PTEN表达状态还不能作为预测结肠癌对吉非替尼敏感性的可靠生物学指标.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株HCT-8和HT29的抑制作用及影响机制

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对结肠癌细胞株HCT－8细胞和HT29细胞增殖的抑制作用,研究其对HESl与JAGl基因表达的影响。方法体外培养HCT-8细胞和HT29细胞,采用不同浓度的EGCG（10、20、35mg／L）对其进行干预,MTT法检测EGCG对HCT-8细胞和HT29细胞增殖的抑制作用：用流式细胞仪检测EGCG对HCT-8细胞和HT29细胞细胞凋亡和细胞周期的影响。实时荧光定量PCR检测EGCG干预后的HCT-8细胞和HT29细胞的HESl与JAGl基因的表达情况。结果EGCG对HCT-8细胞和HT29细胞增殖及凋亡均有影响,3个EGCG浓度对HCT-8增殖抑制率分别为（28．894±5．076）％,（34．903±1．794）％和（39．028±0．105）％;对HT29的增殖抑制率分别为（14．682±4．244）％、（22．429±3．847）％和（29．840±5．076）％。EGCG能将HCT-8细胞阻滞在G／M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制其细胞增殖。EGCG可下调两株细胞HESl的基因表达,但差异均无统计学意义（P〉0．05）：EGCG能上调两株细胞JAGl的基因表达,但只有HCT．8细胞的基因表达差异有统计学意义（O．201±0．018比0．440±0．077．P=0．029）。结论EGCG对体外培养的HCT-8细胞和HT29细胞的增殖有明显抑制作用．且能诱导细胞凋亡和影响细胞周期。其作用机制可能与上调JAGl的基因表达有关。     

化疗对CD133+结肠癌细胞的作用效果

目的 观察化疗前后结肠癌细胞株HT29、SW620中CD133+结肠癌细胞的数量变化,探讨化疗对CD133+结肠癌细胞的作用效果.方法 取对数生长的结肠癌细胞株HT29、SW620,采用80 mg/L 5-氟尿嘧啶(5-Fu)和25 mg/L奥沙利铂(Oxaliplatin)分别作用8 h,并设对照组,利用CD133抗体进行标记后再用流式细胞仪进行检测,观察化疗前后CD133+细胞的比例.结果 流式细胞仪检测结肠癌细胞株HT29,80 mg/L 5-Fu处理8 h组中CD133+肿瘤细胞为45.00%,与未处理组(32.80%)比较结果差异有统计学意义(P＜0.01);25 mg/L奥沙利铂处理8 h组中CD133+肿瘤细胞为55.30%,与未处理组和80 mg/L 5-Fu处理8 h组比较结果差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞仪检测结肠癌细胞株SW620,80 mg/L 5-Fu处理8 h组中CD133+肿瘤细胞为47.10%,与未处理组(33.90%)比较结果差异有统计学意义(P＜0.01);25 mg/L奥沙利铂处理8 h组中CD133+肿瘤细胞为56.50%,与未处理组和80 mg/L 5-Fu处理8 h组比较结果差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CD133+结肠癌细胞能明显抵抗化疗.

Abstract：

Objective To observe the changes of quantity of CD133 + cells in HT29 and SW620 cell lines before and after chemotherapy, and detect the effect of chemotherapy on CD133 + cells. Methods HT29 and SW620 cells in logarithmic growth phase were separately treated with 80 mg/L 5-fluorouracil(5-Fu) and 25 mg/L oxaliplatin for 8 h, and analyzed by flow cytometry after being marked by CD133 antibody. The proportion of CD133 + cells before and after chemotherapy was measured. Results For HT29 cells, the proportion of CD133 + cancer cells in the group treated with 80 mg/L 5-Fu for 8 h was 45.00% with the difference being remarkable ( P ＜ 0. 01 ) compared to the non-treatment group ( 32. 80% ). The proportion of CD133 + cancer cells in the group treated with 25 mg/L oxaliplatin for 8 h was 55.30% with the difference being remarkable ( P ＜ 0. 01 ) compared with both the non-treatment group and the group treated with 80 mg/L 5-Fu for 8 h. For SW620 cells, the proportion of CD133 + cancer cells in the group treated with 80 mg/L 5-Fu for 8 h was 47. 10% with the difference being remarkable ( P ＜0. 01 ) compared with the non-treatment group (33.90%). The proportion of CD133 + cancer cells in the group treated with 25 mg/L oxaliplatin for 8 h was 56. 50% with the difference being remarkable ( P ＜ 0. 01 ) compared with both the non-treatment group and the group treated with 80 mg/L 5-Fu for 8 h. Conclusion CD133 positive colon cancer cells have anti-chemotherapy activity obviously.     

长链非编码RNA MLK7-AS1在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响

背景与目的:长链非编码RNA(lncRNA)MLK7-AS1是一种新发现的与多种肿瘤发生发展密切相关的lncRNA,但其在结肠癌中的表达及其作用尚未见报道。因此,本研究旨在探讨lncRNA MLK7-AS1在结肠癌中的表达以及其对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法:用qRT-PCR检测lncRNA MLK7-AS1在21对结肠癌组织与相对应的癌旁组织手术标本以及在不同结肠癌细胞系(SW480、HCT116、SW620、DLD1、HT29、LOVO)与正常结肠上皮细胞(NCM460)中的表达。将结肠癌细胞转染lncRNA MLK7-AS1过表达质粒后,分别用MTS、平板克隆试验、流式细胞术、Western blot及qRT-PCR分别检测细胞活力、克隆形成能力、细胞周期以及细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果:lncRNA MLK7-AS1在结肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织;在各结肠癌细胞株中表达水平明显高于正常结肠上皮细胞(均P<0.05)。将lncRNA MLK7-AS1表达量相对较低的SW480与HCT116转染lncRNA MLK7-AS1过表达质粒后,两种细胞的细胞活力和克隆形成能力均显著增强(均P<0.05);G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增加(均P<0.05);细胞周期相关蛋白cyclin D1和CDK6的表达水平均明显上升(均P<0.05)。结论:lncRNA MLK7-AS1在结肠癌中高表达,其高表达可以促进结肠癌细胞增殖,其机制可能与上调细胞周期相关蛋白cyclin D1及CDK6表达有关。     

与放疗抵抗相关的长链非编码RNA在不同放疗敏感性结直肠癌细胞株中的表达

目的 筛选与结直肠癌细胞放疗敏感性相关的长链非编码RNA（lncRNA）.方法 将HT29、SW480、RKO、Lovo和HCT116等5株结直肠癌细胞梯度照光后行克隆形成实验,通过细胞存活率（SF2值）来检测5株细胞的放疗敏感性差异;利用高通量lncRNA芯片筛选在SW480、RKO和Lovo细胞株中两两比较表达差异均大于2倍的lncRNA,并通过实时定量PCR进一步检测所选lncRNA在5株结直肠癌细胞中的表达差异.结果 5株结直肠癌细胞放疗敏感性由低至高（即SF2值由高至低）依次为HT29 （0.83±0.03）、SW480 （0.69±0.02）、RKO （0.53±0.02）、Lovo （0.47±0.05）和HCT116（0.32±0.03）（P＜0.01）.lncRNA芯片筛选得到5种与结直肠癌细胞放疗敏感性相关的lncRNA基因,其中R05532、NR_015441和NR_033374基因表达水平与细胞放疗抵抗呈正相关（均P＜0.01）,而NR_073156和AA745020基因表达水平与细胞放疗抵抗无明显相关性（均P＞0.05）.结论 R05532、NR_015441和NR_033374三种lncRNA可能成为结直肠癌细胞放疗敏感性的预测分子,其高表达提示放疗抵抗。     

肾癌中CD133＋细胞和CD133-细胞生物学特性差异的研究

目的：研究人肾癌细胞系786-O和OS-RC-2中CD133＋细胞和CD133-细胞的生物学特性差异。方法：应用流式细胞仪检测肾癌细胞系786-O和OS-RC-2中CD133的膜表达状况;以免疫磁珠法将CD133＋细胞和CD133-细胞分离纯化,比较两者在光镜下的形态、生长特点、体外增殖能力、长期分化能力及体外克隆形成率的差异;流式细胞术分析两者细胞周期分布的变化,采用MTT法分析两者对化疗药物顺铂（DDP）（10、20、50、80／Lg／ml）敏感性的差别。结果：786-O和0S-RC-2均有CD133的少量表达,表达率为（8．12±0．86）％、（6．83±0．20）％,CD133＋细胞和CD133-细胞相比具有较强的体外增殖、克隆形成及长期分化能力;细胞耐药性实验表明CD133＋细胞、CD133-细胞对50bcg／m1DDP敏感性差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：肾癌细胞系中CD133＋细胞具有肾癌干细胞的部分特征,能否作为肾癌干细胞的表面标志还需要进一步的实验加以明确。