人芽囊原虫在IMDM单相培养基中的体外培养效果观察

目的观察IMDM（Iscove＇s Modified Dulbecco＇s Medium）单相培养基对人芽囊原虫（Blastocystis hominis,B.h）的体外培养情况。方法采用IMDM单相培养基对B.h进行体外连续培养,比较不同pH值、血清浓度及接种量等条件下虫体生长繁殖情况及影响因素。结果 B.h在IMDM培养基中最适培养条件为：pH值7.0-8.0;新生牛血清含量大于10%;接种量不小于1×105个原虫/管;青、链霉素1万单位/mL,于37℃条件下厌氧培养,每3-6天转种1次,可以达到长期培养效果。结论 IMDM单相培养基更适合B.h的生长繁殖,可以用于诊断及体外长期培养。     

人芽囊原虫在IMDM单相培养基中的体外培养效果观察

目的 观察IMDM(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)单相培养基对人芽囊原虫(Blastocystis hominis,B.h)的体外培养情况.方法 采用IMDM单相培养基对B.h进行体外连续培养,比较不同pH值、血清浓度及接种量等条件下虫体生长繁殖情况及影响因素.结果 B.h在IMDM培养基中量适培养条件为:pH值7.0～8.0;新生牛血清含量大于10%;接种量不小于1×105个原虫/管;青、链霉素1万单位/mL,于37℃条件下厌氧培养,每3～6天转种1次,可以达到长期培养效果.结论 IMDM单相培养基更适合B.h的生长繁殖,可以用于诊断及体外长期培养.     

流感病毒在狗肾上皮细胞上的最优培养条件

目的优化不同亚型流感病毒在狗肾上皮细胞(MDCK)上最优培养条件,提高不同亚型流感病毒在MDCK细胞上的分离效果。方法将甲型H1N1、H3N2、Victoria、Yamagata四种亚型的流感病毒以不同的培养条件:不同培养温度、不同培养基、不同的牛血清浓度、不同L-1(对-甲苯磺酰)苯丙胺酰氯甲酮(TPCK)胰酶浓度、不同的接种量、不同的接种时间接种到MDCK细胞上,在24h、48h、72h、96h取培养物上清测血凝滴度,比较不同亚型流感病毒在MDCK细胞病变速度和病毒含量的差异。结果甲型H1N1流感病毒的最优培养温度为35℃,DMEM培养基,无牛血清,TPCK胰酶浓度为1-3μg/ml,接种300ml,不吸附或吸附1.5-3.0小时;H3N2病毒的最优培养温度为34℃,DMEM培养基,无牛血清,TPCK胰酶浓度为1μg/ml,吸附1.5小时,接种300ml;Victoria流感病毒的最优培养温度为35℃,DMEM培养基,无牛血清,TPCK胰酶浓度为0.5-2.0μg/ml,接种200ml,吸附1.5小时;Yamagata流感病毒的最优培养温度为35℃,DMEM培养基,无牛血清,TPCK胰酶浓度为1μg/ml,接种200ml,吸附1.5小时。结论根据流感病毒不同亚型来选择流感病毒的培养条件可获得更好的实验结果。     

人芽囊原虫病的初步研究

本文首次报告了人芽囊原虫病的初步研究结果。在广州市377例儿童和成人“不明原因腹泻”病例中,发现60例感染人芽囊原虫,占腹泻病例中的15.9％。其中5例大便标本经检测排除肠道致病菌和轮状病毒感染,初步证实了人芽囊原虫是致人体腹泻的病原体,并在广州地区流行。在正常人群1023人中,46人感染人芽囊原虫,人群感染率为4.5％,与腹泻病例中人芽囊原虫感染率相比,有非常正着性差异(P<0.01),提示人芽囊原虫与人体腹泻有密切关系,本文还观察了人芽囊原虫的形态,比较了检测人芽囊原虫的各种方法。根据体外培养中人芽囊原虫的药敏试验结果,对5例人芽囊原虫病例进行了药物治疗的疗效观察。     

上海市南汇区首次发现1例人芽囊原虫病

人芽囊原虫（Blastocystis hominis）是寄生在人类肠道内可致病的寄生原虫。呈全世界分布,在东南亚、南美等发展中国家尤为多见。据报道早在1899年,Perroncito就已详细描述了人芽囊原虫的形态特点,1912年Brump将其正式命名为人芽囊原虫,但长期被误认为是一种对人体无害的肠道酵母菌。     

人芽囊原虫生物学特性——形态特征、繁殖方式及与细菌的关系研究

目的观察人芽囊原虫(Blastocystis hominis,B.h)的生殖方式,对B.h与细菌的关系及相互间微环境的影响进行初步探索。方法分别对新鲜粪便标本和RPMI 1640培养基中B.h,经碘液染色和苏木素染色观察其形态,对B.h阳性的粘液便、粘液血便进行肠道常见致病菌的培养和鉴定,并通过B.h与大肠埃希菌共培养实验,观察两者相互作用。结果本研究确证了四种B.h繁殖方式:二分裂生殖、内二芽生殖、复分裂增殖及出芽生殖。半数B.h阳性标本未检出已知肠道致病菌。B.h对大肠埃希菌有一定抑制作用。结论B.h存在多种繁殖方式;B.h可能单独致病,其致病机制与微生态改变有关。     

不同培养基分离流感病毒效果及最佳培养条件

目的比较有血清培养基与无血清培养基分离流感病毒的效果,探索无血清培养基分离流感病毒的最佳条件。方法将原始标本接种于2种培养基培养的MDCK细胞,比较流感病毒分离效果。将原始标本接种于无血清培养基培养的MDCK细胞,比较MDCK细胞、样品液、接种方法、胞龄、培养温度、无血清病毒分离液含TPCK-胰酶浓度对流感病毒的影响,确定最优培养条件,红细胞凝集试验测血凝滴度。结果 2种培养基分离流感病毒的阳性率差异与血凝滴度差异有统计学意义(P0.05);无血清培养基的细胞不洗涤、24 h与48 h胞龄、直接接种、2μg/ml~3μg/ml TPCK-胰酶、34.5℃培养条件下病毒血凝滴度较高。结论无血清培养基分离流感病毒优于有血清培养基且操作简便。     

180例就诊者人芽囊原虫的感染情况调查

目的 了解人群中人芽囊原虫感染情况,为人芽囊原虫防治工作提供指导.方法 收集医院就诊者粪便,用酸醚沉淀法处理后行碘染色,在高倍镜下查找虫体、观察形态.结果 共检查了180例粪便标本,人芽囊原虫检出率为22.78%,男女受检者检出率分别为18.75%和32.69%,差异有显著性(P<0.05).受检者年龄分布为1～85岁,高发年龄为21～50岁.镜下所见的人芽囊原虫以颗粒型为主.结论 就诊病人中人芽囊原虫的感染率较高,且女性感染率高于男性.     

氯化三丁基锡对体外培养小鼠胚胎毒性研究

目的观察氯化三丁基锡的体外培养小鼠胚胎毒性。方法采用全胚胎培养技术,将8.5 d龄昆明种小鼠胚胎置入含有不同浓度氯化三丁基锡的大鼠离心血清中旋转培养48 h,观察体外培养小鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化的变化。结果氯化三丁基锡在0.05 mg/L以上时能诱发卵黄囊生长和血管分化不良,胚胎发育异常率增高;高浓度组能诱发脑小、心脏畸形(心小和心包积液)、前肢芽小或无、无后肢芽。结论体外实验条件下,氯化三丁基锡对小鼠胚胎具有胚胎毒性和致畸性。     

阴道毛滴虫长期培养传代的实验观察

目的 观察阴道毛滴虫长期传代培养的适宜条件,为教学、科研提供实验虫株. 方法制备肝浸液培养基,改良培养方法,接种培养后,观察虫的密度与培养时间、培养基体积、培养温度以及灭活血清和未灭活血清对虫株发育繁殖的影响.结果 本实验成功培养传代达3年以上,前期培养1年内,虫株适应新的生长环境.后期为培养1年后,虫株培养达到稳定,优化培养条件,培养保存时间达到16天.结论 长期传代培养阴道毛滴虫,适当降低培养温度、减少培养基内虫体的密度、增加培养基体积能有效的延长体外培养时间.     

三种增塑剂对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

目的　观察对 壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸酯二丁酯 (DBP)对乳腺癌细胞株MCF 7增殖的影响。方法　将MCF 7细胞在达尔克 (DMEM)培养液 (含 10 %小牛血清 )中采用开放式单层贴壁培养 ,开始实验前将培养细胞用磷酸盐缓冲液 (PBS)洗涤后改在无酚红DMEM (含 5 %胎牛血清 )中培养继续 4d以耗尽其内源性雌激素。实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及 3种受试物各 4个剂量组 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、3 H TdR掺入法及流式细胞术对MCF 7细胞的增殖情况进行分析。结果　与对照组相比 ,NP、BisA和DBP对细胞处理 2 4h ,分别在 96× 10 -7mol/L、96× 10 -7mol/L、96× 10 -6mol/L可促进MCF 7细胞增殖和细胞DNA合成 ,并推进G0 /G1期细胞进入S期 ,提高细胞增殖指数 ;随着培养时间延长至 96h ,3种化合物在较低浓度条件下也表现促进细胞增殖的效果。结论　对 壬基酚、双酚A和邻苯二甲酸酯二丁酯可促进雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF 7的增殖 ,可能具有雌激素样作用。     

高糖刺激对HK-2细胞脂联素受体基因及蛋白表达的影响

目的 了解体外高糖刺激对肾小管上皮细胞（HK-2）脂联素受体（adipoR）表达的影响.方法 将HK-2细胞在含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液中培养至贴壁且80%融合时,无血清培养24 h,改用含葡萄糖1、2,4、6、8 mg/ml的培养液继续培养48 h,RT-PCR及westernblot检测ad-ipoR的表达.将HK-2细胞分别在含10%胎牛血清的高糖（4 mg/ml）、低糖（1 ms/ml）DMEM培养液中培养0、12、24、48、72、96 h后提取总RNA,RT-PCR检测adipoR mRNA的表达.结果 adipoR1/R2基因在HK-2细胞上均有表达,且adipoR1（0.63±0.12）基因表达量是adipoR2（0.16±0.03）的3.9倍,差异有统计学意义（P〈0.01）.各不同浓度葡萄糖及作用时间对HK-2细胞adipoR的基因表达无明显影响（P〉0.05）.westernblot检测到HK-2细胞上adipoR1的蛋白表达,其表达量不受葡萄糖浓度的影响（P〉0.05）.结论 adipoR1/R2基因在HK-2细胞上均有表达,且以adipoR1为主,提示adipoR1在肾脏疾病中具有更重要的意义.HK-2细胞adipoR的表达不受高糖的影响.     

三种环境雌激素对卵巢癌PEO4细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

目的　探讨几种常见的环境类雌激素壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸二丁酯 (DBP)对人雌激素受体阳性卵巢癌细胞PEO4增殖和凋亡相关基因PCNA ,bcl 2和baxmRNA及相应蛋白质表达的影响。方法　PEO4细胞在DMEM培养液 (含 1 0 %小牛血清 )中进行常规传代培养 ,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含 5 %活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养 5d ,收集细胞 ,PBS洗涤后接种于内置血盖片的六孔板或 75ml培养瓶 ,32× 1 0 - 7mol LBisA和NP及 32× 1 0 - 6 mol LDBP对PEO4细胞分别处理 72h ,用半定量RT PCR技术观察其对核增殖抗原PCNA、bcl- 2及baxmRNA表达的影响 ,并用免疫组化方法对结果进行验证。结果　与溶剂对照组相比 ,32× 1 0 - 7mol LNP和BisA对PEO4处理 72h可促进核增殖抗原PCNA和抗凋亡基因bcl 2mRNA表达 ,但对baxmRNA的表达没有影响 ;DBP可促进PCNA的表达 ,但对bcl 2和bax的表达均没有明显的影响。随后进行的免疫组化实验结果显示 ,NP和BisA可促进Bcl 2蛋白的表达 ,并抑制Bax蛋白的表达。结论　对PCNA和bcl 2表达的影响可能是环境类雌激素调节卵巢癌细胞PEO4增殖和凋亡的重要机制之一。     

膳食雌激素影响乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的:探讨膳食中常见的两种环境类雌激素大豆异黄酮(genistein,GS)、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)影响人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的分子生物学作用机制。方法:MCF-7细胞在DMEM培养液(含10%胎牛血清)中进行常规传代培养,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含5%活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养5d,收集细胞,PBS洗涤后接种于内置血盖片的六孔板或75ml培养瓶,32×10-9mol/LZEA和75×10-6mol/LGS对细胞分别处理72h,用半定量RT-PCR技术观察GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2及baxmRNA表达的影响,并用免疫组化方法对结果进行验证。结果:与溶剂对照组相比,75×10-6mol/LGS对MCF-7细胞处理72h可显著提高baxmRNA表达而抑制bcl-2和PCNAmRNA的表达,随后的免疫组化实验也证实了这一结果;ZEA的作用效应则与GS相反。结论:膳食雌激素GS和ZEA可通过影响细胞增殖和凋亡相关调节基因PCNA、bcl-2和bax表达而调节人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡作用。     

染料木黄酮对骨形成的促进作用研究

目的:用成年人成骨细胞体外培养的方法,观察染料木黄酮(genistein,GS)对骨形成的影响。方法:将生长状态良好的第三代成骨细胞用PBS洗涤后接种于无酚红高糖DMEM培养液中(含5%经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清),实验设二甲基亚砜溶剂对照、雌二醇对照(E2)、抗雌激素它莫西芬对照(TAM)及三个GS剂量组,观察指标包括细胞增殖,碱性磷酸酶活性及细胞骨钙蛋白合成量。结果:与溶剂对照组相比,10-8mol/L E2、10-7mol/L GS和10-6mol/L GS对人成骨细胞处理48h,能够明显促进成骨细胞的增殖作用,使细胞骨钙蛋白合成量显著增加,细胞内碱性磷酸酶活性明显提高;同时,GS可保护因雌激素耗尽所造成的成骨细胞内Ⅰ型胶原蛋白降低。10-7mol/L TAM可拮抗GS对成骨细胞所产生的这些生物学效应。结论:GS具有雌激素效应,可模拟E2而刺激骨形成并保护成骨细胞因雌激素缺乏所造成的细胞内Ⅰ型胶原蛋白降低。由于这一效应可被TAM拮抗,此结果提示,GS的促进骨形成作用是通过与雌激素受体结合产生的。     

Effect of serum on the in vitro maturation of canine oocytes

The meiotic competence of canine oocytes cultured for 72 h in medium supplemented with three different concentrations (5, 10 and 20%) of anoestrous, oestrous or metoestrous bitch serum, or with 0.3% bovine serum albumin (BSA), was examined. The oestrous serum supplement had a positive effect on the resumption of meiosis, compared with the other supplements (P<0.05). The number of oocytes that reached metaphase I (MI) and metaphase II (MII) was significantly higher (P<0.05) with the oestrous serum supplement than with the anoestrous serum supplement. There were no significant differences among the three different concentrations in each serum type with respect to the proportion of oocytes that completed meiosis (MI to MII). The number of oocytes that resumed meiosis in the 10% oestrous serum supplement was significantly higher (P<0.05) than those of each concentration of the anoestrous and metoestrous serum supplements, and of the 0.3% BSA supplement. Moreover, a higher number of oocytes reached MII in the presence of the 10% oestrous serum supplement than with the 10% anoestrous serum supplement. These results suggest that supplementation of the culture medium with 10% oestrous serum is the optimal treatment for in vitro maturation of canine oocytes.     

植物雌激素对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的 :　探讨植物雌激素大豆异黄酮 (genistein,GS)和玉米赤霉烯酮 (zearalenone,ZEA)对乳腺癌细胞株 MCF- 7增殖的影响。方法 :　雌激素依赖性 MCF- 7细胞在 DMEM培养液(含小牛血清 1 0 % )中采用开放式单层贴壁培养 ,于加受试物前 5 d将细胞用 PBS洗涤后改为无酚红高糖 DMEM(含 5 %经活性碳 -葡聚糖苷处理的胎牛血清 ,CDT- FBS)培养 ,实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及两种受试物各四个剂量组 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、3H- Td R掺入法及流式细胞术对 MCF- 7细胞的增殖情况进行分析。结果 :　与溶剂对照组相比较 ,GS(96μmol/ L,2 4h)可明显抑制 MCF- 7细胞增殖和细胞 DNA合成 ,并将细胞周期阻滞在 G2 / M;8μmol/ L GS处理96 h也能产生类似的抑制效果。 96 nmol/ L ZEA处理 2 4 h可明显促进 MCF- 7细胞增殖和细胞DNA合成 ,并将细胞周期由 G0 / G1向 S期推进 ,提高细胞分裂增殖指数。结论 :　ZEA和 GS均属环境雌激素 ,但对乳腺癌细胞 MCF- 7增殖产生的影响不同 ,ZEA可促进 MCF- 7增殖 ,而 GS能够抑制 MCF- 7细胞的增殖 ,即 GS具有用于癌症预防及有关保健食品开发的价值     

染料木黄酮对人成骨细胞凋亡的影响

目的: 观察染料木黄酮(Gen)对人成骨细胞凋亡的影响。方法: 将体外分离到的人骨膜成骨细胞在高糖DMEM(含10 %小牛血清)中进行纯化扩增至第三代,然后接种于无酚红高糖DMEM培养液中(含10 %经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清,CDT-FBS),4 d后用0.25 %的胰蛋白酶消化、收集细胞,用PBS洗涤2次后,用于各项实验。指标包括:流式细胞仪分析细胞凋亡比例,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂条带,免疫组化观察Gen对Bax、Bcl-2及caspase-3表达的影响。结果: 无雌激素(E2)血清培养可诱导成骨细胞发生凋亡(45.7 %),加入10-8 mol/L E2、10-6 mol/L 和10-5 mol/L Gen对细胞处理48 h,成骨细胞凋亡率分别降低到15.3 %、36.3 %及28.4 %(P<0.05)免疫组化结果表明,同E2类似,Gen可抑制Bax和capsase-3的表达,而促进Bcl-2蛋白的表达。结论: 染料木黄酮可能是通过影响雌激素受体途径而发挥其骨保护作用的。     

大鼠海马神经细胞在含硒介质中的生长及存活研究

目的 研究硒对大鼠海马神经细胞生长、存活及突起发育的影响。方法 利用新生大鼠海马神经细胞原代培养技术,培养液内加入不同浓度的硒（62．5、125．0、187．5μg／L）和碘加硒,观察有血清和无血清条件培养下海马神经细胞的生长、存活数;同时还测量了接种后4个不同观测点的平均最长突起长度。结果 硒不仅对海马神经细胞早期突起生长有显著的促进作用,在接种16、24、36、48h后有明显突起伸长趋势,咯硒组与对照组相比平均增加15－20μm,而且无论有无血清,硒均能延长神经细胞存活时间,提高存活率。结论 硒对海马神经细胞的早期突起生长、存活有重要作用。