丙肝抗HCV与HCV RNA定性、荧光定量之间的关系

自从1989年丙型肝炎病毒(HCV)正式命名以来,HCV研究即成为病毒性肝炎的热点之一。丙型肝炎呈全球分布,我国整体人群的流行率约为3%,而其慢性化率高达85%,其中20%患者易发展为肝硬化,且与肝细胞癌的发生密切相关犤1犦。血清HCVRNA阳性是HCV感染的直接依据,对丙肝的早期诊断具有重要意义。本文采用常规PCR定性、实时荧光定量PCR检测丙肝患者血清HCVRNA,并与ELISA夹心法测定抗HCV的结果相比较分析,认为HCVRNA荧光定量的检出率明显高于前两者,这可能与方法学敏感性、病毒感染所处的临床阶段、基因的突变及抗病毒药物的应用相关…     

丙肝患者血清HCV RNA定量与抗-HCV检测效果分析

丙型肝炎病毒（HCV）感染严重危害人类的健康，自HCV正式命名以来，即成为病毒性肝炎研究的热点之一。HCV呈全球性分布，我国整体人群的流行率约为3％，而其慢性化率高达85％，其中20％患者易发展为肝硬化，且与肝细胞癌的发生密切相关。我们采用实时荧光定量PCR检测丙肝患者血清HCV RNA，并与ELISA夹心法测定抗-HCV的结果相比较，以便更好地监测HCV的感染，并及时进行抗病毒治疗。     

HCV RNA荧光定量PCR在抗HCV阳性者中的应用

本研究通过实时荧光定量PCR技术对抗HCV阳性者血清中HCV　RNA的测定，以确定抗HCV的感染状况，进一步探讨抗HCV与HCV　RNA检测之间的关系。     

HCV RNA荧光定量PCR法与抗-HCV ELISA法的比较

目的对HCVRNA荧光定量(FQ)PCR法和抗HCVELISA法进行比较。方法收集56份抗HCV阳性或可疑阳性标本,使用国产4个厂家和进口1个厂家ELISA试剂与HCVRNA检测结果比较。结果FQ PCR阳性的为6/56,5厂家ELISA试剂对6份抗HCV阳性的检测结果与HCVRNA结果相符。结论HCV RNA检测灵敏度和特异性高,有条件的血站实验室可同时采用PCR技术对献血者进行HCVRNA筛查。     

慢性丙肝患者唾液HCV RNA定量检测及意义研究

[目的]探讨慢性丙型肝炎（HCV）感染者唾液HCV RNA定量检测的流行病学意义及诊断价值，比较唾液中HCV RNA阳性与否和肝脏功能损伤的关系。[方法]用荧光定量PCR法对8例慢性HCV感染者唾液和血液标本中的HCV RNA进行定量检测，采用全自动生化分析仪和血凝仪进行ALT、CHE和PTA的检测。[结果]8例慢性HCV感染者唾液和血液HCV RNA阳性率分别为30％和70％，唾液中HCV RNA阳性与肝脏功能损伤的程度关系密切。[结论]在国内首次在慢性HCV感染者唾液中进行HCV RNA定量检测，实验结果表明慢性HCV感染者唾液中含有HCV，可能有一定传染性。     

丙肝患者血清HCV RNA与TNF-α之间的关系及其与肝损伤程度相关性的研究

目的 研究不同临床分型HCV感染者血清中HCV RNA与TNF-α之间的差异,探讨HCV RNA和TNF-α含量与肝损伤程度的关系.方法 收集HCV感染者45例,其中慢性肝炎轻度组11例,慢性肝炎重度组14例,肝硬化组11例,肝癌组9例,健康对照组20例.用ELISA法检测HCV IgG和TNF-α,制作标准曲线计算TNF-α含量.荧光定量PCR方法检测HCV RNA含量.血清ALT水平用HITACHI 7600型全自动生化分析仪采用速率法进行检测.HCV感染者血清HCV-RNA含量的对数值、TNF-α含量和ALT水平与正常对照组比较用t检验,各组之间的TNF-α含量和ALT水平及lg HCV RNA比较用方差分析,HCV RNA含量的对数值、TNF-α含量和ALT之间的相关性用直线相关性分析,用相关系数(r)表示.结果 丙肝患者各组之间ALT水平和TNF-α含量差异有统计学意义,F值分别为9.75和14.69,P<0.001;用t检验得出:各组丙肝患者血清TNF-α水平均明显高于健康对照组(P<0.001),t值分别为6.596,9.857,6.673和8.358;各组患者血清ALT水平均明显高于健康对照组(P<0.001),t值分别为12.031,6.61,3.971和6.857;慢性肝炎重度组、肝癌组与慢性肝炎轻度组之间ALT含量比较,差异有统计学意义(P<0.05),t值分别为3.242和3.246;慢性肝炎重度组和肝癌组HCV RNA的对数值分别为6.05±0.8和5.76±1.05,均低于慢性肝炎轻度组,t值分别为2.573和2.393,差异有统计学意义(P<0.05).ALT水平与TNF-α含量之间呈正相关,r=0.341,P<0.05.结论 不同临床类型HCV感染者血清中TNF-α和ALT含量存在差异,慢性肝炎轻度HCV感染者ALT水平明显低于其他临床类型组,HCV感染者血清ALT水平和TNF-α含量之间呈正相关.     

双探针实时荧光定量检测HCV RNA的研究

目的建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,探讨解决HCV RNA定量灵敏度和特异性问题。方法对89例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行检测。结果双探针荧光定量法阳性率分别为91.0%(81例)和2.72%(6例)。两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为82.0%(73例)和0.9%(2例);79.7%(71例)和2.27%(5例)。结论双探针荧光定量提高了HCV RNA检测的灵敏度和特异性。     

荧光定量两探针法检测HCV RNA的研究

目的 建立荧光定量两探针检测HCV RNA方法.方法 对105例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本,用荧光定量两探针法和2种商品荧光定量试剂进行检测,并对检测结果进行比较.结果 荧光定量两探针法阳性率分别为89.5%（94/105）和2.3%（5/220）.两种商品荧光定量试剂阳性率分别为71.4%（75/105）和0.45%（1/220）;69.5%（73/105）和1.8%（4/220）.结论 荧光定量两探针法检测HCV RNA有较高的敏感性和特异性.     

献血者HCV RNA实时荧光定量PCR方法的建立

目的建立快速检测献血者中丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染的方法。方法利用体外转录制备的HCV RNA转录体进行病毒RNA抽提方法及抽提效率的比较;将RNA转录体与正常血清进行不同数目的混合,对最佳混合标本数进行了摸索;建立HCV荧光定量PCR方法(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR),并对献血者进行混合标本HCV核酸检测。结果确定了比较理想的病毒RNA抽提方法;用于HCV核酸检测的混合标本数为24例;建立的荧光定量PCR方法能最低检测出10个copies/ml;采取24例混合血标本方法,FQ-PCR检测HCV RNA,576例ELISA检测HCV阴性的献血者未检测出HCV RNA。结论初步建立了献血者HCV感染的混合标本荧光定量PCR检测方法。     

HCV RNA定量与丙型肝炎临床及病理的关系

目的 探讨HCV RNA定量与丙型肝炎临床及病理的关系及判断疗效。方法 采用美国PE公司生产的5700型荧光定量PCR仪，对665例丙型肝炎病毒单纯感染的慢性肝炎及肝硬化患者行HCV RNA定量检测，对部分患者行血生化及肝穿刺病理检查，用不同类型干扰素治疗。结果 慢性丙型肝炎的HCV RNA定量值比肝炎肝硬化高（P〈0．001）。20例患者的HCV RNA定量与肝脏病理分析，HCV RNA定量与肝组织炎症及纤维化无明显关系。但肝组织炎症程度与血清生化指标有一定相关性，血清丙氨酸转氨酶的高低与肝组织的炎症程度成正相关。32例用不同干扰素治疗，疗效与HCV RNA值可能有关，HCV RNA值越低，效果越好。结论 HCV RNA定量慢性丙型肝炎比肝炎肝硬化高，HCV RNA定量与肝组织炎症及纤维化无明显关系，干扰素治疗疗效与HCV RNA值可能有关。HCV RNA定量是丙型肝炎诊断和观察抗病毒治疗的一项可靠指标。     

丙肝患者在治疗过程中血清RNA与抗HCV定量检测及其生化指标的相关性研究

目的比较不同实验诊断方法在丙型肝炎(丙肝)检测中的应用价值,了解丙型肝炎病人在治疗过程中HCV-RNA含量与血清ALT、前白蛋白、胆红素等生化指标变化的相关性。并探讨HCV RNA定量与ALT、PA、TBIL指标之间的关系。方法对57例丙型肝炎分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、增强化学发光法(CIA)和荧光定量聚合酶链反应(RFQ-RT-PCR)进行检测,应用AU2700型自动生化仪及其生化检测试剂检测全部标本ALT、PA、TBIL指标。结果ELISA、CIA及PCR方法检测样本丙肝阳性率分别为77.2%、78.9%和84.2%;三组χ2检验没有统计学意义,HCVRNA含量呈阳性的样本中,ALT异常率与HCVRNA含量间呈正相关P<0.01,而ALT数值的变化与HCV RNA含量并无相关性(P>0.05)。PA在治疗前后升高差异显著(P<0.05),可与HCVRNA、ALT联合监测丙肝治疗过程中肝功变化。结论 ELISA诊断试剂盒较CIA法检测丙肝抗体同样具有较高的灵敏度和准确性,在临床诊断中联合PCR检测HCVRNA能提高HCV感染诊断的阳性率;HCVRNA含量反映了病毒复制的活跃程度和患者的病程变化,并且在丙肝治疗进程中能与ALT、PA联合监测疗效。     

两种荧光定量法检测HCV RNA结果的比较

目的建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,分析其定量检测HCV RNA的灵敏度和特异性以及HCV RNA含量与患者病情的相关性。方法选取100例抗HCV抗体阳性患者,包括慢性肝炎患者45例、肝硬化患者30例、肝癌患者25例的样本,用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行HCV RNA检测,另观察近期196例抗HCV抗体阳性和48例抗HCV抗体阴性样本荧光定量PCR HCV RNA含量与肝功能的相关关系。结果荧光定量双探针法阳性率为93％（93／100）;两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为84％（84／100）和79％（79／100）,经卡方检验差异有统计学意义（P〈0．05）。196例中抗HCV与HCV RNA阳性一致率为57．1％（116／196）,其中伴肝功能改变49．0％（96／196）。HCV RNA含量与AST和ALT异常程度无显著相关性（P〉0．05）,相关系数分别为0．4293及0．3899。HCV RNA高拷贝数患者肝功能异常率为85．2％（69／81）,低拷贝数者肝功能异常率为40．9％（47／115）,经卡方检验,X^2=38．63,差异有统计学意义（P〈0．001）。结论双探针荧光定量提高了HCV RNA检测的灵敏度和特异性,HCV RNA含量与患者肝功能损伤程度无明显相关性。     

体液HCV RNA定量检测与分析

1　材料与方法1.1　标本来源　住院患者1.2　定量PCR试剂合　深圳匹基生物技术开发有限生产的FluorogenicPCRKit1.3　仪器　美国B10 RAD生产的iCyclerTM1.4　方法　参照说明书2　结果2 .1　 12 0份血清HCVRNA定量检测均为阳性 2 .79× 10 3～9.78× 10 8拷贝 ml2 .2　 12 0份血清HCVRNA阳性患者的唾液尿液HCVRNA检测结果表 1　 12 0例丙型肝炎患者唾液和尿液标本nHCVRNA( +) ( % )HCVRNA(copies ml)范围唾液 12 0 86( 72 ) 1.5 6× 10 3～ 7.98× 10 8尿液 12 0 94( 78) 1.87× 10 3～ 8.79× 10 82 .3　用IFNα治疗…     

不同保存条件对血清荧光定量HCV RNA检测的影响

目的了解不同的保存条件对血清标本HCVRNA检测结果的影响。方法实时定量荧光聚合酶链法(FQ-PCR)检测已确诊的HCV患者30例。结果血清标本-20℃存放7d HCV RNA检测结果、加RNA酶抑制剂-20℃保存7d及-20℃反复冻融3次的HCV RNA检测结果差异无统计学意义。结论血清标本-20℃保存7d,加RNA酶抑制剂-20℃保存7d,-20℃反复冻融3次,不影响HCV RNA的检测结果。HCV RNA检测结果重复性不好,应该考虑内、外源性等RNase的降解作用及所用试剂的特异性、敏感性、重复性等因素的影响。     

HCV RNA定量检测方法进展

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）引起的病毒性传染病。HCV由于基因组的结构和表型特征而归属于黄病毒家簇单股正链RNA病毒，其病毒核酸（HCV RNA）的检测是诊断HCV感染敏感的特异于段。HCV RNA定量检测可用于血液及血液制品安全性监测、HCV发病机制及预后的研究、     

丙型肝炎患者抗HCV IgM、IgG及HCV RNA的检测

丙型肝炎患者抗ＨＣＶＩｇＭ、ＩｇＧ及ＨＣＶＲＮＡ的检测南通市传染病防治院（２２６００６）吴月平本文试用ＳＰＡ吸收结合免疫酶法检测丙肝患者血清中的ＩｇＭ抗体。经阻断试验和２－巯基乙醇耐性试验及与ＨＣＶＲＮＡ结果的相关性分析证明本法检出的抗体系丙肝特异性...     

丙肝患者治疗前后HCV RNA与抗-HCV及丙氨酸氨基转移酶水平的分析

目的分析丙型肝炎患者治疗前血清HCV RNA、抗-HCV和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及治疗后HCV RNA和ALT水平的变化规律。方法对87例丙型肝炎患者血清进行实时荧光定量法(PCR)检测HCV RNA、ELISA法检测抗-HCV和酶速率法检测ALT浓度水平,并对所得数据进行统计学分析。结果丙型肝炎患者血清抗-HCV抗体滴度显著高于健康对照组,大部分患者的ALT水平均有显著性升高;HCV RNA含量与ALT水平具有显著相关性(r=0.673,P0.01),而与抗-HCV的S/OD值无显著相关性(r=0.122,P0.05);在治疗早期,患者HCV RNA含量在第2天显著性下降,而ALT浓度呈一过性上升。结论在HCV诊断与疗效观察中,血清HCV-RNA、抗-HCV和ALT指标各有利弊,3者有机结合在正确诊断和预测肝脏损伤及早期疗效观察中具有重要的临床意义。     

HCV患者年龄、抗体和HCV RNA与血清分型的关系

目的 采用建立的丙型肝炎病毒(HCV)血清分型技术,探讨HCV患者年龄、抗体(S/CO)和HCV RNA与血清分型的关系.方法 收集HCV慢性感染患者血清200例,定量检测HCV RNA、抗-HCV,同时进行血清分型,并进行统计分析.结果 200例慢性丙肝患者的血清抗-HCV抗体均为阳性,S/CO＞ 3.5,HCV RNA滴度在1.12×103～9.29×107 copies/ml.其中血清1型102例,2型58例,混合型2例,分型率为81.00％.采用Student t检验分析年龄、抗体S/CO、HCV RNA与分型之间的关系,t值分别为1.842 9,0.446 7,1.778 2,P均＞0.05,无统计学意义.结论 HCV患者年龄、抗体(S/CO)和HCV RNA滴度对血清分型结果没有影响.     

丙肝抗-HCV检测与荧光定量PCR HCV-RNA检测结果对比分析

目的 对比分析丙型肝炎酶联免疫吸附试验(EHSA)法和荧光定量PCR HCV-RNA检测血清中抗-HCV与HCV-RNA的结果.方法 采集130例慢性丙肝患者的血清,用ELISA法和荧光定量PCR HCV-RNA法进行检测.结果 130例慢性丙肝患者分别为抗-HCV(+)组92例检出率为70.8％(92/130),抗-HCV(-)组38例检出率为29.2％ (38/130),HCV-RNA检测分别为92例中有69例病毒含量≥104 IU/ml,检出率为75％ (69/92)和38例中有5例病毒含量≥104 IU/ml,检出率为13.2％ (5/38).两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 联合检测抗-HCV与HCV-RNA可提高丙肝患者的检出率,通过测定结果的对比,抗-HCV诊断丙肝患者有漏诊现象,荧光定量PCR HCV-RNA的特异性高,敏感度强,是临床诊断丙型肝炎的重要依据.     

混合血浆荧光定量PCR法筛查献血者HCV RNA的初步研究

目的 研究用荧光定量PCR方法检测混合血浆中的HCV RNA。方法 用12人份混合血浆为基本单元提取HCV RNA，逆转录，四份逆转录产物混合上样于HCV PCR扩增反应体系，用PE5700荧光定量PCR仪检测。HCV RNA质控品检测灵敏度。结果 检测4128份标本中1例HCV RNA阳性，HCV RNA冻干质控品检测灵敏度为105IU／ml。结论 48人份混合血浆荧光定量PCR法可用于血液筛查。