Effects of nerve growth factor on neuronal nitric oxide production after spinal cord injury in rats

OBJECTIVE: To explore the protective effects of nerve growth factor (NGF) on injured spinal cord. METHODS: The spinal cord injury (SCI) model of Wistar rats was established by a 10 gx2.5 cm impact force on the T(8) spinal cord. NGF (60 microg/20 microl) was given to the rats of the treatment group immediately and at 2, 4, 8, 12, 24 hours after SCI. The level of neuronal constitutive nitric oxide synthase (ncNOS) and the expression of ncNOS mRNA in the spinal cord were detected by the immunohistochemistry assay and in situ hybridization method. RESULTS: Abnormal expression of ncNOS was detected in the spinal ventral horn motorneuron in injured rats. The levels of ncNOS protein in the NGF group were significantly lower than those in the normal saline group (P<0.05 ). The ncNOS mRNA expression was found in the spinal ventral horn motorneuron in injured rats and the expression in the NGF group was significantly decreased compared with that in the normal saline group (P<0.01). CONCLUSIONS: NGF can protect the injured tissue of the spinal cord by prohibiting abnormal expression of nitric oxide synthase and the neurotoxicity of nitric oxide.     

Effect of nerve growth factor on neuronal apoptosis after spinal cord injury in rats

OBJECTIVE: To explore the molecular mechanism of the protective effect of nerve growth factor (NGF) on injured spinal cord. METHODS: The posterior T(8) (the 8th thoracic segment) spinal cords of 60 Wistar rats were injured by impacts caused by objects (weighing 10 g) falling from a height of 2.5 cm with Allen's way. Solution with nerve growth factors (NGF) was given to 30 rats (the NGF group) through a microtubule inserted into the subarachnoid cavity immediately, and at 2, 4, 8, 12 and 24 hours after spinal cord injury (SCI) respectively. Normal saline (NS) with same volume was given to the other 30 rats (the NS group) with the same method. And 5 normal rats were taken as the normal controls. The expression of bcl-2 and bax proteins in spinal cord was detected with immunohistochemistry. The apoptotic neurons in spinal cord were measured with terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end-labeling of DNA fragments (TUNEL) staining. RESULTS: The positive expression of bcl-2 protein was strong in the normal controls, but decreased in the NS group, and increased significantly in the NGF group as compared with that of the NS group (P<0.01). The positive expression of bax protein was also strong in the normal controls, but increased in the NS group, and decreased significantly in the NGF group as compared with that of the NS group (P<0.01). Apoptotic neurons were found in the NS group, and they decreased significantly in the NGF group as compared with that of the NS group (P<0.01). CONCLUSIONS: NGF can protect the injured nerve tissues through stimulating the expression of bcl-2 protein, inhibiting the expression of bax protein and inhibiting the neuronal apoptosis after SCI.     

神经生长因子对大鼠脊髓损伤后一氧化氮合成酶含量的影响

探讨神经生长因子（ＮＧＦ）对脊髓损伤保护作用的机制。方法采用Ａｌｉｅｎ’ｓ法以２５ｇｃｍ致伤大鼠Ｔ８脊髓,经蛛网膜下腔导管分别于术后即刻、３０分钟、１、２、３、４、８、１２、２４小时各注入ＮＧＦ溶液,并与生理盐水组和正常对照组作对照。采用放射强度测定法测定一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）含量。结果与正常组相比较,ＮＯＳ含量在伤后１０分钟、１、２、４、８小时均显著升高（Ｐ＜０．０１）,ＮＧＦ治疗组与生理盐水组相比较,在伤后１０分钟、１、２、４、８小时ＮＯＳ活性明显下降（Ｐ＜０．０１）。结论ＮＧＦ通过抑制脊髓损伤后ＮＯＳ的升高效应,抑制了一氧化氮（ＮＯ）的神经毒性作用,从而保护了神经组织。     

神经生长因子对大鼠脊髓损伤后神经元凋亡的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对脊髓损伤保护作用的分子机制.方法采用Allen's法以25 gcm力致伤大鼠T8脊髓,经蛛网膜下腔导管于术后即刻、2、4、8、12、24 h各注入NGF溶液,并与生理盐水组(NS组)和正常对照组作对照,采用免疫组织化学方法和末端单位标记法(TUNEL)原位末端标记法分别检测bcl-2、bax蛋白在脊髓神经元的表达及神经元凋亡情况.结果正常组中脊髓灰质bax蛋白阳性细胞吸光度(A)值为34.51±4.47,NS组中bax蛋白表达增加,以2 h及12 h最为显著,而NGF组与NS组相比,bax蛋白表达明显减少(P＜0.01).正常组中脊髓灰质bcl-2蛋白表达的A值为19.72±2.92,NS组中bcl-2表达下降,而NGF组与NS组相比较,bcl-2蛋白表达明显增多(P＜0.01).TUNEL检测结果显示,正常对照组中未见神经元凋亡,NS组中自2 h后可见神经元凋亡,NGF组与NS组相比,神经元凋亡指数明显减少(P＜0.01).结论NGF能通过抑制bax蛋白的表达,促进bcl-2表达抑制脊髓损伤后神经元凋亡,从而保护损伤的脊髓组织,这可能是NGF对脊髓损伤具有保护作用的机制之一.     

高位脊髓损伤大鼠外周a1-肾上腺素受体敏感性的变化

目的 评价高位脊髓损伤大鼠外周a1-肾上腺素受体敏感性的变化。方法 健康雄性Wistar大鼠30只，随机分为脊髓损伤组（L组，n=24）和对照组（C组，n=6）。L组大鼠采用改良Aliens打击法建立脊髓胸。节段损伤动物模型，术后3周随机分为4个亚组（n=6），分别静脉注射苯福林1btg,／kg（P1亚组）、2μg,／kg（P2亚组）、3μg/kg（P3亚组）和4μg,／kg（P4亚组），C组亦分次分别静脉注射苯福林1、2．3和4μg／kg，观察注药前、后大鼠心率、收缩压及舒张压的变化。结果 与C组比较，L组大鼠给药前体重减轻、心率减慢，收缩压和舒张压降低。与基础值比较，C组和L组给药后心率减慢，收缩压和舒张压升高。与C组比较，L组给药后心率、收缩压、舒张压变化率增高（P〈0．05或0．01）。结论 高位脊髓损伤后，大鼠外周a1-肾上腺素受体敏感性增强。     

大鼠坐骨神经切断后VEGF及其受体flk-1在脊髓与脊神经节中的表达

目的观察大鼠坐骨神经切断后脊髓与神经节组织中血管内皮生长因子(VEGF)及其胎肝激酶-1(flk-1)受体的表达变化规律。方法取成年雄性Wistar大鼠45只，对照组5只，实验组切断双侧坐骨神经后，在术后8h、24h、72h、5d、7d、10d、14d、21d取L4～L6段脊髓与相应脊神经节组织，采用免疫组织化学方法和图像分析技术，对VEGF及其flk-1受体的表达进行检测与分析。结果大鼠正常脊髓与神经节组织中均存在VEGF及flk-1的表达，坐骨神经切断后其表达可反应性地增强，持续一段时间后迅速回落至正常水平。并且flk-1在胶质细胞及白质中的神经纤维也有所表达。结论本实验从中枢神经元的角度揭示VEGF促周围神经再生机制，为今后进一步应用VEGF治疗外周神经损伤奠定基础。     

鼠神经生长因子联合甲钴胺治疗未行激素冲击治疗的急性不完全性脊髓损伤

目的 探讨鼠神经生长因子(mNGF)联合甲钴胺在对未行激素冲击治疗的急性胸腰椎骨折合并不完全性脊髓损伤(ISCI)患者中的应用价值.方法 对2007年10月至2010年9月伤后8h未进行激素冲击治疗的急性胸腰椎骨折合并ISCI的56例患者资料进行回顾性分析,按照术后处理方法不同分为2组:mNGF联合甲钻胺组(联合组,28例)和单纯使用甲钴胺组(单纯组,28例).比较术后恢复情况,比较两组患者治疗前、治疗后1周、8周及12个月美国脊髓损伤协会(ASIA)标准的神经功能评分、日常生活活动(ADL)评分及神经功能改善率. 结果 所有患者获12 ～48个月(平均20个月)随访,无患者死亡,无创口感染;术后平均10个月植骨获融合.治疗后1周、8周及12个月两组神经功能评分及ADL评分均明显高于治疗前,除单纯组在1周时神经功能评分差异无统计学意义(P＞0.05),余差异均有统计学意义(P＜0.05),且治疗后联合组各时间点评分均优于单纯组,差异有统计学意义(P＜0.05).术后1周、8周及12个月联合组的神经功能改善率分别为32.1％ (9/28)、82.1％ (23/28)和92.9％ (26/28),均优于单纯组的25.0％ (7/28)、50.0％ (14/28)和71.4％ (20/28),其中8周和12个月差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 与单纯应用甲钻胺比较,mNGF与甲钴胺联合治疗ISCI可促进脊髓损伤的恢复,改善神经功能.     

高位脊髓损伤大鼠外周α1-肾上腺素受体敏感性的变化

目的评价高位脊髓损伤大鼠外周α1-肾上腺素受体敏感性的变化.方法健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为脊髓损伤组(L组,n=24)和对照组(C组,n=6).L组大鼠采用改良Allens打击法建立脊髓胸4节段损伤动物模型,术后3周随机分为4个亚组(n=6),分别静脉注射苯福林1μg/kg(P1亚组)、2μg/kg(P2亚组)、3μg/kg(P3亚组)和4μg/kg(P4亚组),C组亦分次分别静脉注射苯福林1、2、3和4μg/kg,观察注药前、后大鼠心率、收缩压及舒张压的变化.结果与C组比较,L组大鼠给药前体重减轻、心率减慢,收缩压和舒张压降低.与基础值比较,C组和L组给药后心率减慢,收缩压和舒张压升高.与C组比较,L组给药后心率、收缩压、舒张压变化率增高(P＜0.05或0.01).结论高位脊髓损伤后,大鼠外周α1-肾上腺素受体敏感性增强.     

骨髓基质干细胞和神经生长因子悬液移植对脊髓损伤修复的影响

目的研究骨髓基质干细胞(BMSCs)移植联用神经生长因子(NGF)对脊髓损伤修复的治疗作用。方法用改良Allen法制成SD大鼠脊髓损伤动物模型(共32只),1周后分别将DMEM、BMSCs、NGF和BMSCs NGF移植入脊髓损伤部位即制成四组(每组8只),移植1、2个月后分别采用神经核蛋白(NeuN)抗体、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体和神经丝蛋白(NF)抗体进行免疫荧光染色观察移植的BMSCs的存活及分化情况、损伤部位神经纤维的再生情况。HE染色观察脊髓损伤处空洞面积的改变情况。同时采用BBB运动评分观察大鼠运动功能恢复情况。结果移植1、2个月后,部分移植细胞呈NeuN和GFAP阳性,同时实验组可见明显的神经纤维再生。脊髓损伤处的空洞面积明显减小,差异有显著性意义(P＜0．05),BBB评分结果比对照组均有明显增高,差异有显著性意义(P＜0．05)。在BMSCs NGF组上述改变更加显著。结论BMSCs可在脊髓损伤处分化为神经元和神经胶质细胞,BMSCs和NGF能够减小脊髓损伤处的空洞面积,促进受损轴突的再生和运动功能的恢复,两者联合应用在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。     

大鼠脊髓损伤后NgR在巨噬细胞中的表达对其吞噬作用及神经再生的影响

【摘要】 目的 体外研究大鼠脊髓损伤后表达Nogo蛋白受体（Nogo receptor, NgR）的巨噬细胞的吞噬作用及其对损伤神经元再生的作用。 方法 将髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein, MBP）分别加入表达NgR的巨噬细胞、空载巨噬细胞及正常巨噬细胞中,应用Western blot比较这3组巨噬细胞的吞噬作用。将3组巨噬细胞加入损伤神经元中培养,采用MTT法及测定乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）的含量,比较3组巨噬细胞对损伤神经元轴突再生的作用。 结果 Western blot结果显示表达NgR的巨噬细胞组吞噬作用与其他2组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。MTT比色法及LDH含量测定结果显示表达NgR的巨噬细胞组吞噬作用与其他2组比较差异有统计学意义 (P＜0.05)。 结论 NgR的表达在体外可增强巨噬细胞的吞噬作用,表达NgR的巨噬细胞可促进神经损伤后的轴突再生。     

大鼠脊髓损伤后NgR在巨噬细胞中的表达对其吞噬作用及神经再生的影响

目的体外研究大鼠脊髓损伤后表达Nogo蛋白受体（Nogo receptor,NgR）的巨噬细胞的吞噬作用及其对损伤神经元再生的作用。方法将髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）分别加入表达NgR的巨噬细胞、空载巨噬细胞及正常巨噬细胞中,应用Western blot比较这3组巨噬细胞的吞噬作用。将3组巨噬细胞加入损伤神经元中培养,采用MTT法及测定乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的含量,比较3组巨噬细胞对损伤神经元轴突再生的作用。结果Western blot结果显示表达NgR的巨噬细胞组吞噬作用与其他2组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。MTT比色法及LDH含量测定结果显示表达NgR的巨噬细胞组吞噬作用与其他2组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论NgR的表达在体外可增强巨噬细胞的吞噬作用,表达NgR的巨噬细胞可促进神经损伤后的轴突再生。     

神经生长因子对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的：证实神经生长因子（ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）对脊髓前角运动神经元有保护作用。方法：切断ＳＤ大鼠一侧坐骨神经，借助单盲端硅胶管系统在神经损伤局部给予ＮＧＦ。术后行酶组织化学检测。结果：坐骨神经切断可致腰段脊髓前角运动神经元明显损害，其表现为神经元乙酰胆碱脂酶（ａｃｅｔｙｌ－ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ，ＡｃｈＥ）活性降低和酸性磷酸酶（ａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＣＰ）活性升高，应用ＮＧＦ可显著改善上述酶学变化。结论：ＮＧＦ对受伤的脊髓前角运动神经元有保护作用     

蛛网膜下腔应用神经生长因子对鼠脊髓神经生长相关蛋白-43 mRNA表达的影响

目的　研究蛛网膜下腔注射神经生长因子 (NGF)对脊髓损伤 (SCI)组织神经生长相关蛋白 43 (GAP 43 )mRNA表达水平的影响。方法　用Allen氏重物坠落法制作鼠脊髓损伤模型。66只成年Wistar鼠随机分为 11组 ,正常组、SCI 1、4、7、10、14d组和NGF 1、4、7、10、14d治疗组 ,每组各 6只。用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测鼠损伤脊髓组织中GAP 43mRNA表达水平。结果　GAP 43mRNA在正常成年鼠脊髓中微量表达 ,SCI后表达增加且NGF治疗组较SCI组表达更为显著 (P <0 .0 5 )。术后 7d时 ,SCI组GAP 43mRNA表达达到高峰 (0 .82 5± 0 .0 16) ,14d时降至接近初始水平 (0 .419± 0 .0 18) ,但NGF治疗组GAP 43mRNA表达仍维持较高水平 (0 .787±0 .0 10 )。结论　蛛网膜下腔注射NGF可增强损伤脊髓组织GAP 43mRNA表达。     

大鼠脊髓损伤后胶质细胞生长因子的mRNA表达变化

目的：探讨胶质细胞牛长凼子（glial growth factor，GGF）在大鼠脊髓损伤后的表达变化及意义。方法：采川改良Allen’s脊髓损伤打击模型，用逆转录聚合酶链式反应法（RT-PCR）检测胚胎大鼠脊髓内、正常成年大鼠脊髓内以及脊髓损伤后不同时间点伤段脊髓组织中GGF的mRNA表达结果：GGF在成年大鼠正常脊髓内低水平表达，在胚胎脊髓中高水平表达。大鼠脊髓损伤后GGF的mRNA表达持续降低，在脊髓损伤后5d达到最低峰，之后GGF的mRNA表达可逐渐恢复。结论：GGF在脊髓乍长发育中起重要作用：大鼠脊髓损伤后GGF的表达降低可能与脊髓损伤后少突胶质细胞大量死亡或凋亡有关．与脊髓损伤后轴突无法再生、脱髓鞘的髓鞘再生困难有关。     

骨髓间充质干细胞表达神经营养因子及治疗脊髓损伤的研究

目的　研究大鼠骨髓间充质干细胞 (BMSC)表达脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经生长因子 (NGF)以及BMSC移植对脊髓损伤的治疗作用。方法　取大鼠骨髓培养BMSC并传代 ,进行CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色鉴定。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测BM SC中BDNF和NGFmRNA的表达。用NYU方法建立大鼠脊髓损伤模型 ,将 15 0 0 0个BMSC注射到损伤脊髓中。 1～ 5周后进行BBB运动功能评分 ,观察BMSC在脊髓中的迁移 ,进行NF、GFAP和Gal C免疫荧光检测。结果　BMSC贴壁生长 ,免疫细胞染色CD44 (+ )、CD45 (-)和CD71(+ ) ,表达BDNF和NGFmRNA。移植BMSC后脊髓损伤的大鼠运动功能改善 ,5周后BBB评分从对照组的 (11.6± 1.7)分提高到 (15 .4± 2 .2 )分。BMSC在脊髓内向头、尾两侧迁移约 5mm ,未检测出向神经细胞诱导转化。结论　BMSC表达神经营养因子BDNF和NGF ,移植后能促进大鼠脊髓损伤的运动功能恢复。     

cAMP诱导大鼠脊髓损伤后神经再生

目的观察在体给入环磷酸腺苷(cyclic adinosine monophosphate,cAMP)对大鼠脊髓损伤后神经再生的作用。方法56只SD大鼠制成脊髓T10背侧半切断损伤模型,随机分为六组。各组分别在脊髓损伤局部、大脑运动皮层和T6蛛网膜下腔内给入cAMP或生理盐水。动物存活6周后处死,制作脊髓组织切片,通过免疫组化染色观察损伤区局部神经丝的分布;通过皮质脊髓束和脊髓顺行追踪观察皮质脊髓束和脊髓神经纤维的再生;通过动物后肢运动BBB评分观察后肢运动功能恢复的程度,并以此来评价治疗措施的脊髓损伤修复效果。结果用三种方式给入cAMP,损伤区神经丝沿脊髓纵轴延伸分布,但未与尾端重新连接。在蛛网膜下腔给入cAMP无明显的脊髓神经再生;在损伤区局部和大脑运动皮层给入cAMP,损伤区可见大量脊髓再生纤维,包括部分皮质脊髓神经纤维再生。各组动物在术后4～5周均恢复正常行走,BBB评分超过20分。结论在脊髓损伤局部和在大脑运动皮层给入cAMP能诱导大鼠脊髓损伤后神经再生,但尚不能达到有效促进实验动物后肢运动功能的效果。     

神经毒素在脊髓损伤中的作用

目的 探讨神经毒素兴奋性氨基酸（ＥＡＡ）和神经肽在脊髓损伤的作用。方法 应用高效液相色谱法检测脊髓损伤后伤段组织中谷氨酸（Ｇｌｕ）天门冬氨酸（Ａｓｐ）两种ＥＡＡ的含量变化；应用放射免疫分析技术测定脊髓损伤段组织中神经肽之一强腓肽ＤｙｎＡ１－１３含量的变化；观察了蛛网膜下腔注射Ｇｌｕ，ＤｙａｎＡ１－１３兴奋性氨基酸受体拮抗剂３－（２－羧基哌嗪）丙基－１－磷酸（ＣＰＰ），ＤｙｎＡ１－１３抗血清（Ａｎ－     

小剂量格列本脲对大鼠急性脊髓损伤后继发性损害的影响

目的 探讨格列本脲对大鼠脊髓损伤后继发性损害的保护作用.方法 90只SD大鼠随机分为3组,每组30只,即单纯椎板切除组(对照组)、脊髓损伤组(损伤组)与脊髓损伤后格列本脲治疗组(治疗组).HE染色及电镜观察脊髓损伤后病理变化;免疫组织化学法检测脊髓损伤后45min、6 h、24 h、3 d、7 d的磺脲类药物受体1(sulfonylurea receptor type 1,SUR1)表达变化,利用IPP 6.0软件对SUR1的表达进行定量分析.采用BBB评分评价大鼠后肢功能的恢复.并对大鼠血糖进行定量检测.结果 HE染色显示:脊髓损伤后脊髓出血和胶质细胞增生随时间延长而加重,治疗组的组织出血、小胶质细胞增生和中性粒细胞浸润均较损伤组轻.电镜观察:治疗组的炎症细胞浸润、髓鞘板层结构破坏及线粒体肿胀程度等均较损伤组明显减轻.免疫组织化学染色显示:除45 min时SUR1尚未表达外,其余各时间点治疗组的SUR1表达均较损伤组弱.术后24 h,损伤组SUR1表达达高峰,此后随时间逐渐下降.三组各时间点的SUR1平均光密度经单因素方差分析,差异有统计学意义.治疗组大鼠BBB评分明显高于损伤组大鼠,各组差异有统计学意义.治疗组大鼠的血糖稍下降,但三组差异并无统计学意义.结论 格列本脲治疗能显著减轻脊髓的继发性损伤,促进脊髓功能恢复.格列本脲通过抑制SUR1的表达而发挥脊髓保护作用.     

Expression of vascular endothelial growth factor and its fetal liver kinase-1 receptor in spinal cord and dorsal root ganglia after neurotomy of sciatic nerve in rats

egenerationofinjured peripheralnervesiscloselyrelatedtosomegrowthfactorssecretedbycentralneurons .Vascularendothelialgrowthfactor (VEGF)isapotentangiogenicfactor ,which possessesspecificmitogenicactivityforvascularendothelialcells ,stimulatestheformationofnascentbloodvesselsandenhancesvascularpermeability .1RecentevidencesindicatethatVEGFcanalsoactdirectlyonneuronstoinduceneurotrophiceffects.Forexample ,VEGF promotestheproliferationofculturedcerebralcorticalneurons ,stimulatestheaxonaloutg…     

胚胎脊髓组织移植联合应用神经生长因子对损伤脊髓再生修复的形态学影响

选择胎龄为１４～１５天的大鼠胚胎脊髓植入成年大鼠半横断的脊髓损伤腔，同时局部应用神经生长因子。术后２～８个月，用组织学、免疫细胞化学、辣根过氧化酶示踪及超微结构的检查方法证实，移植组织在宿主脊髓内的存活率为９０％，并且分化成熟，具有正常的神经组织结构特征，大多数移植物充满损伤腔，与宿主脊髓形成良好的融合，移植组织与宿主组织出现新的纤维联系，使脊髓损伤的两端恢复了解剖的连续性。