淋病奈瑟菌基因分型的研究进展

淋病奈瑟菌是引起淋病的病原体.淋病奈瑟菌基因分型方法在淋病奈瑟菌疫苗的研究、制定流行病学控制措施和淋病的治疗上均起到重要的作用.常见基因分型方法如:opa分型、脉冲电场凝胶电泳、por分型、随机扩增多态性DNA分型、多位点序列分型等.由于不同基因分型方法有着其各自不同的优点和不足,依据不同的需要,可选择合适有效的基因分型方法以达到实验的要求.     

淋病奈瑟菌外膜蛋白PorB的克隆表达与鉴定

目的　构建表达淋病奈瑟菌外膜蛋白PorB重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白。方法　用PCR方法从淋病奈瑟菌WHO标准株E株基因组扩增出PorB基因片段 ,插入 pUCm T载体中 ,序列测定正确后 ,将其亚克隆到表达载体 pQE3 0中 ,进一步测序正确后在大肠杆菌M 15中表达。 结果　获得淋病奈瑟菌PorB蛋白基因 ,经序列测定与GenBank公布的序列同源性高达 99% ;表达蛋白经SDS PAGE分析 ,相对分子质量与预期大小一致 ;重组蛋白经Western印迹法鉴定 ,在 3 4kD位置有特异条带 ,PorB蛋白在宿主菌中高表达。结论　基因重组表达的融合蛋白将有利于进一步研究淋病奈瑟菌外膜蛋白PorB的功能 ,并有可能用于淋病预防疫苗的研制     

淋病奈瑟菌对头孢菌素和阿奇霉素耐药性的研究进展

世界范围内出现了淋病奈瑟菌对一线治疗抗菌药物低敏、耐药的情况,尤其是对广谱头孢菌素和阿奇霉素的耐药性已经引起了人们的担忧。许多地区均出现了淋病奈瑟菌对广谱头孢菌素和（或）阿奇霉素高水平耐药的报告,为淋病联合治疗方案敲响了警钟。淋病奈瑟菌的耐药机制复杂,主要涉及到抗菌药物靶点的改变、药物内流减少和外排增加。各机制之间还存在某些依赖或协同效应。对淋病奈瑟菌耐药性的深入研究,有助于指导临床合理使用抗菌药物,延缓淋病奈瑟菌的耐药趋势。     

淋病奈瑟球菌的耐药性分析

目的:对228例淋病患者淋病奈瑟球菌的耐药性进行探讨分析。方法:对淋病奈瑟球菌采用纸片扩散法(K-B法)进行检测,对β内酰胺酶采用头孢硝噻吩纸片法进行检测。结果:228株淋病奈瑟球菌中,来自宁海县中医医院的有72株,其中β内酰胺酶检测阳性的有19株;来自湖州市妇幼保健院的有156株,其中β内酰胺酶检测阳性的有41株。所有检测为阳性的菌株在228株菌株中占26.32%。来自所有的淋病奈瑟球菌菌株对5种抗菌药物的耐药性有明显的区别,菌株对四环素、青霉素和环丙沙星的耐药性比较高,对头孢曲松、大观霉素的耐药性比较低一些。结论:根据研究数据,在临床上应当避免使用四环素、青霉素等作为抗菌的首选药物,应适当选取头孢曲松、大观霉素作为临床治疗淋病奈瑟球菌感染的首选药物。     

淋病奈瑟菌毒力岛基因的检测

目的 了解淋病奈瑟菌毒力岛(PAIs)在质粒及染色体上的分布情况.方法 采用碱裂解法提取63株淋病奈瑟菌的质粒及染色体DNA,PCR扩增各PAIs基因(atlA,traG,traH).结果 共检出4.2kb,7.4kb,39.5kb,42.5kb四种质粒,总检出率为88.89%(56/63);以63株淋病奈瑟菌的染色体...     

淋病奈瑟菌表面蛋白A真核表达载体的构建及表达

目的构建淋病奈瑟菌外膜蛋白———奈瑟菌表面蛋白A(neisseria surface protein A,NspA)的真核表达载体并使其在真核细胞中表达。方法用PCR方法扩增NspA基因,将扩增的产物连接于测序载体pUCm-T上,并构建重组体pcDNA3.1(+)/NspA。以脂质体法转染RAW264.7和COS-7细胞,用RT-PCR检测NspA mRNA的水平,免疫组化染色法检测蛋白表达。结果扩增的目的基因包括了全段NspA基因,长度约525bp。以脂质体转染RAW264.7和COS-7细胞后,用RT-PCR和免疫组化染色法检测表明,细胞可转录和表达NspA。结论成功构建了重组真核表达载体pcD-NA3.1(+)/NspA,并在真核细胞中得到表达,为研究此蛋白的免疫原性以及淋病基因疫苗的研制提供了物质基础。     

淋病奈瑟菌对头孢曲松耐药性及敏感性降低机制的研究进展

头孢曲松为目前治疗淋病的首选药物之一,国内外淋球菌耐药监测均发现淋球菌对头孢曲松敏感性降低,并已发现少数散发的头孢曲松耐药株。淋球菌对头孢曲松敏感性降低主要由染色体介导,目前大多数研究主要关注三个方面：一是抗生素作用靶位点的改变,影响抗生素与淋球菌的结合产生耐药;二是细菌细胞膜孔蛋白的改变,导致膜通透性降低产生耐药;三是外排系统的改变,导致细菌外排作用增强产生耐药。涉及的基因有penA、ponA、porB和mtrR等。     

淋病奈瑟菌NGO2105蛋白Passenger结构域的克隆表达、多克隆抗体制备及定位分析

目的拟原核表达淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的Passenger结构域并制备多克隆抗血清,初步分析其保守性及亚细胞定位。方法 PCR扩增Passenger结构域编码基因并克隆入pCold TF原核表达质粒中,重组质粒转化大肠杆菌E.coil DH5α,通过PCR和测序鉴定后,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌中诱导表达目的蛋白,纯化目的蛋白后免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体。Western blot分析NGO2105蛋白在临床分离菌株中的保守性。采用流式细胞技术分析淋病奈瑟菌中NGO2105蛋白Passenger结构域细胞定位。结果成功表达出可溶形式的NGO2105蛋白Passenger结构域,重组蛋白免疫小鼠后可获得效价达到5.12×10~5的多克隆抗血清,Western blot分析显示Passenger抗血清能与不同临床分离菌株中的NGO2105蛋白特异性反应,流式细胞技术分析显示Passenger结构域定位于淋病奈瑟菌菌体表面。结论成功获得可溶形式表达的Passenger蛋白及其多克隆抗体,NGO2105蛋白在临床分离的淋病奈瑟菌中有较好的保守性。亚细胞定位分析提示NGO2105蛋白为一种膜蛋白,其Passenger结构域定位于菌体表面,本研究可为进一步研究淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的结构与功能奠定实验基础。     

酶联一步法快速检测淋病奈瑟菌

淋病是最常见的性传播性疾病,据Juliusschachter[1]等报道,在美国每年有几百万人感染淋病奈瑟菌。近几年来我国淋病奈瑟菌感染患者剧增,对家庭及社会造成一定危害,因此及时诊断和治疗越来越受到人们的重视。我们采用酶联一步法对509例临床样品进行淋病奈瑟菌检测,结果较满意,操作简便,仅40多分钟可判断结果。现将方法和结果报告如下。材料和方法一、材料　1.菌株:淋病奈瑟菌标准菌株(NG29107购于军事医学科学院)和4株菌落1-型临床分离株。其它为肠球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、醋酸钙不动杆菌、奇异变形杆菌、绿脓假单胞菌、金黄色葡…     

淋病奈瑟菌129株耐药性分析

目的监测海口地区淋病奈瑟菌对常用抗生素的耐药状况。方法收集本院性病门诊2004年11月--2007年6月患者泌尿生殖道分泌物中分离的淋病奈瑟菌共129株，用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度（MIC），用纸片酸度法测定β-内酰胺酶。结果产青霉素酶淋病奈瑟菌（PPNG）阳性28株（21．71％），高水平耐四环素淋病奈瑟菌（TRNG）阳性45株（34．88％）；环丙沙星耐药127株（98．45％），大观霉素和头孢曲松未发现耐药菌株。结论海口地区的淋病奈瑟菌对环丙沙星的耐药性较高，未发现对大观霉素和头孢曲松耐药的菌株，持续开展常规耐药性监测十分重要。     

淋球菌耐药性质粒的转移性研究

目的研究淋病奈瑟菌(简称淋球菌)所携带的质粒与耐药性之间的关系。方法对淋球菌耐药株所携带的质粒进行质粒消除实验,并以此消除的质粒转化感受态的大肠杆菌,比较耐药质粒消除和转化前后菌株的耐药性变化情况。结果在亚致死浓度的十二烷基磺酸钠(SDS)作用下,淋球菌的耐药质粒可以被部分消除(仍然携带42.5kb的质粒)或者完全消除,且消除子在消除前后对抗生素的耐药性发生不同程度的改变;而耐药质粒在不同种属的菌株之间可进行传递,淋球菌的耐药质粒可以传递给感受态的大肠杆菌,筛选出的转化子分别携带含有tetM基因的42.5kb四环素耐药质粒和携带含有TEM-1基因的7.4kb青霉素耐药质粒,转化子可产生对相应抗生素的耐药性。结论淋球菌耐药质粒在介导菌株对抗生素的耐药性起着重要作用,并且可以不同菌株间进行传递。     

不同耐药淋球菌菌株IR基因突变与mtrC基因转录水平的差异性比较

目的：研究不同耐药淋球菌菌株多传递耐药（mtr）系统反向重复序列（IR）区基因突变与mtrC基因转录水平的差异性,进一步探索mtr系统介导耐药的机制。方法：采用琼脂稀释法测定抗生素对菌株的最小抑菌浓度（MIC）,PCR扩增含IR区的目的基因并对扩增产物测序,同时采用反转录（RT）-PCR检测mtrC基因mRNA表达水平的变化。结果：5株敏感株及5株仅耐青霉素菌株无IR区基因突变,16株多重耐药菌株中IR区均有碱基A／T缺失。敏感株mtrC转录水平显著低于耐药株（P〈0．05）,而耐药菌株组中IR区碱基突变组mtrC转录水平显著高于无突变组（JP〈0．05）。结论：淋球菌染色体mtrR启动子区域的IR区基因突变会引起mtrC基因转录增加,进而提高奈瑟淋球菌的耐药性。     

HPV6型E6与结核杆菌HSP70融合基因的构建及原核表达

目的构建HPV6型E6抗原与结核杆菌HSP70的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序正确后,再通过PCR方法扩增HPV6型E6基因片段,测序后插入HSP70基因的5′端,构建HPV6E6与结核杆菌HSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-E6-HSP70;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α,进行诱导表达和分离纯化。结果成功地构建了pGEX-E6-HSP70原核表达质粒,诱导表达产物与抗GST抗体在113 kD处有很强的交叉反应;大肠杆菌超声破碎后的上清液用SDS-PAGE检测到表达的蛋白多为可溶性融合蛋白;经GST融合蛋白表达系统纯化,得到了E6与结核杆菌HSP70的可溶性融合蛋白。结论成功获得HPV6型E6与结核杆菌HSP70的融合蛋白,为研究HPV6型E6与结核杆菌HSP70融合蛋白疫苗在尖锐湿疣治疗中的作用提供了材料。     

淋球菌抗生素耐药谱和质粒图谱研究

目的 为了解广州地区淋球菌的性素耐药谱和质粒谱。方法 采用琼脂稀释法测定了５种抗生素对８９株淋球菌的最小抑菌浓度（ＭＩＣ）和碱裂解法分析１０６株菌的质粒衅谱。结果 ２株为产β－内酰胺酶菌株（ＰＰＮＧ）,３株为质粒介导的高度耐四环素菌株９ＴＲＮＧ０;环丙沙星耐药率较高（６２．９％）,青霉素次之（５９．５％）,头孢三嗪和壮观霉素未发现耐药菌株。质粒检出率为９０．６％,其中２．６Ｍｄ隐蔽质粒携带率为８５．６％,４．５ＭｄＲ质粒为６７．８％,２４．５Ｍｄ结合质粒为３３．８％。质粒谱型以２．６Ｍｄ＋４．５Ｍｄ和２．６Ｍｄ＋４．５＋ｉ２４．５Ｍｄ多见,分别为３７．７％和２５．４％。结论 表明了广州地区淋球菌抗生素耐药谱和质粒图谱,有助于淋病的治疗和防治。     

上海地区淋球菌临床分离株对不同抗生素的敏感性分析

目的了解上海地区淋球菌临床分离株对抗生素的敏感性。方法收集临床淋球菌80株,采用琼脂平皿稀释法测定青霉素、头孢曲松、四环素、多西环素、氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、阿奇霉素和壮观霉素对淋球菌的最低抑菌浓度(MIC),用纸片酸度法测定β-内酰胺酶,并根据检测结果进行聚类分析。结果所有菌株均对头孢曲松和壮观霉素敏感;其中87.5%对青霉素耐药,88.7%对四环素耐药,产青霉素酶的淋球菌(PPNG)和高水平耐四环素的淋球菌(TRNG)分别占45%和18.8%;对阿奇霉素的耐药率为94.7%;对氧氟沙星、洛美沙星和环丙沙星的耐药率分别为97.5%,95.0%和95.0%;依据监测结果将菌株分成四类,将抗生素分成三类。结论所检测的上海地区80株淋球菌临床分离株的耐药性较为严重,应加强淋球菌耐药性的连续性监测。     

阳江地区淋球菌质粒谱与耐药性关系研究

目的 研究阳江地区淋球菌流行株质粒谱与耐药性的关系。方法 应用碱裂解和溶菌酶双重处理100株淋球菌流行株，进行质粒抽提及质粒谱分型研究。利用K-B法测定淋球菌流行株对10种抗生素的敏感性。结果 检出4种不同分子量的质粒，其中分子量为4．2kb、7．4kb和39．5kb的质粒检出率较高，分别为66．00％、58．00％和41．00％。质粒谱型共12型，以7．4kb 4．2kb、39．5kb 7．4kb 4．2kb、39．5kb 4．2kb3型为主，分别占21．00％、17．00％和15．00％；耐药谱型42型，以CPLX^R、TCR CPLX^R、CPLX^R CP^R菌株为主，分别占12．00％，、12．00％和7．00％。将3型主要的耐药谱与相应的质粒谱进行比较。结果 CPLX^R菌株以39．5kb 4．2kb质粒谱为主；TC^R CPLX^R菌株以7．4kb 4．2kb质粒谱为主；CPLX^R CP^R菌株以7．4kb和39．5kb 7．4kb 4．2kb质粒谱为主。结论 阳江地区淋球菌流行株的质粒谱与其相应的耐药谱之间有一定的关系。     

淋病奈瑟菌外膜Porin I蛋白基因的构建、表达和鉴定

目的：构建、克隆淋病奈瑟菌外膜PorinI(PI)蛋白基因，并进行表达、纯化和鉴定。方法：用PCR法克隆淋病奈瑟菌外膜PI蛋白基因，再与pGEX-4T-2载体连接成表达重组体pGEX-4T-2/PI；经大肠杆菌P2392表达后，用SDS-PAGE、切胶、电洗脱回收等方法纯化GST-PI融合蛋白；然后用特异性淋球菌外膜PI蛋白的单克隆抗体进行斑点免疫层析试验鉴定该蛋白。结果：成功地获取了pGEX-4T-2/PI表达重组体，经诱导表达后能获得高表达的GST-PI融合蛋白，其相对分子质量为60000；斑点免疫层析试验显示其淋病奈瑟菌外膜PI蛋白特异性的。结论：本研究将有利于进一步研究淋病奈瑟菌外膜PI蛋白的功能。     

淋球菌对头孢菌素类药物敏感性的检测

目的评估药敏纸片琼脂扩散法（K-B法）检测淋球菌对三代口服头孢菌素类药物敏感性的符合率。方法中国医学科学院皮肤病研究所性病科门诊收集的100株淋球菌临床分离菌株。采用K-B法检测淋球菌对头孢克肟、头孢泊肟、头孢布坦3种药物的敏感性;Etest法检测淋球菌对头孢克肟、头孢泊肟的敏感性;最低抑菌浓度琼脂稀释法（MIC法）检测淋球菌对头孢布坦的敏感性。结果K-B法和Etest法对头孢克肟敏感菌株的检测率分别为92．0％和100％;K-B法和Etest法对头孢泊肟敏感菌株的检测率分别为94．9％和100％;K-B法和MIC法对头孢布坦敏感菌株的检测率分别为93．0％和95．3％。结论K-B法对3种药物敏感菌株的检测率与Etest或MIC法检测结果差异无统计学意义。     

威海地区抗淋球菌药物敏感性研究

目的:研究威海地区淋病奈瑟菌(简称淋球菌)对抗菌药物的敏感性。方法:用淋球菌快速定量检测法,检测82株淋球菌对15种抗菌药物的体外药物敏感度,同时应用纸片扩散法(Kirby-Bauer法)进行对照。结果:82株淋球菌中检出11株PPNG菌株(13.41%)。耐青霉素的淋球菌耐药性已达62.2%。用纸片法测得四环素、青霉素和红霉素的耐药率分别为58.5%、52.4%和92.1%。1.2%的菌株耐大观霉素(MIC≥64μg/mL),但所有菌株均对头孢曲松敏感。对环丙沙星的耐药率为74.4%(MIC≥1μg/mL),对头孢噻甲羧肟及头孢呋肟的耐药率均为11.0%(MIC≥32μg/mL)。结论:头孢曲松及大观霉素对淋球菌抗菌活性最强,可作为首选药。     

汕头市淋球菌耐药菌株和质粒图谱测定

目的：了解本地区淋球菌耐药菌株的流行情况。方法：用琼脂稀释法测定菌株对抗菌剂敏感性。采用纸片酸度法检测产β－内酰胺酶菌株（PPNG）。用碱裂解法检测质粒。结果：检测了173株淋球菌。青霉素、环丙沙星和四环素耐药率分别为87．9％、90．2％和66．5％，PPNG检出率4％，质粒检出率90．2％。质粒介导的高度耐四环素菌（TRNG）11．5％。结论：青霉素、四环素、环丙沙星治疗淋病的作用已很差。淋球菌对大观霉素和头孢曲松钠较敏感。