羟基磷灰石纳米粒子诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡后bcl-2和bax表达的变化

目的探讨凋亡相关基因bcl-2和bax在羟基磷灰石（HAP）纳米粒子诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡后表达的变化。方法采用免疫组化法检测bcl-2蛋白和bax蛋白表达。结果不同浓度的HAP纳米粒子处理细胞24、48、72h后bcl-2蛋白的表达降低，bax蛋白的表达升高，与对照组比较均有显著性差异，并且均呈现时间和剂量依赖性。结论。HAP纳米粒子诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡，与凋亡调控基因bax表达增强、bcl-2表达减少有关。     

白花蛇舌草对H22肝癌细胞荷瘤组织bcl-2和bax蛋白表达的影响

[目的]观察H22肝癌细胞荷瘤组织bcl-2、bax蛋白的表达,探讨白花蛇舌草诱导热休克蛋白70（HSP70）表达及促进肝癌细胞凋亡的机制。[方法]将白花蛇舌草处理后的小鼠活体腹水H22肝癌细胞免疫小鼠,同时设党参对照,以HSP70单抗封闭后分为白花蛇舌草未封闭、封闭,党参未封闭、封闭及空白对照5组,然后以培养的H22肝癌细胞攻击小鼠形成荷瘤;免疫组化检测凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白的表达。[结果]荷瘤组织bcl-2、bax表达定位于胞质。白花蛇舌草、党参未封闭和封闭组bcl-2、bax表达分别显著低于和高于空白对照组;白花蛇舌草、党参未封闭组bcl-2及bax表达也分别较封闭组下调和增高,但之间差异无统计学意义。与党参未封闭及封闭组比较,白花蛇舌草组bax表达增高,而bcl-2表达差异无统计学意义。[结论]白花蛇舌草促进H22肝癌细胞荷瘤组织细胞凋亡可能与上调bax蛋白表达相关。     

RNA干扰靶向XIAP对人脑胶质瘤细胞U251的生物学行为影响

目的 采用RNA干扰技术(RNAi)抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP),观察抑制前后人脑胶质瘤细胞U251的生物学行为.方法 DNA重组技术合成针对人脑胶质瘤U251细胞XIAP基因三条siRNA(siRNA1,siRNA2,siRNA3),以脂质体2000作为载体进行转染,RT-PCR法检测XIAP的mRNA表达,选择特异性较高的siRNA,以此 siRNA为标准建立20 nmol/L、30 nmol/L、50 nmol/L3个浓度梯度,转染细胞,Western blot 检测XIAP基因的蛋白表达,选出最低有效浓度;流式细胞仪检测抑制前后细胞周期和凋亡率.结果 siRNA成功转染了人脑胶质瘤细胞U251,转染率达到80%以上;RT-PCR检测siRNA2特异性较高;Western-blot检测终浓度为30 nmol/L的siRNA抑制效率较高;流式细胞仪检测停滞在G0/G1期的细胞增多,在S期的细胞减少,并且细胞的凋亡率增加.结论 通过RNA干扰可以抑制人脑胶质瘤U251细胞XIAP的表达,促进人脑胶质瘤细胞凋亡,从而抑制细胞的生长.     

当归红芪超滤膜提取物抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达

目的 探讨当归红芪超滤膜提取物对心肌细胞凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白表达的影响.方法 用高浓度的过氧化氢(400 μmol/L)在Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞上建立细胞凋亡模型,用不同浓度的当归红芪超滤物(3.75、7.5、15 g/L)进行治疗.光镜下观察细胞形态;逆转录-多聚酶链反应和蛋白印迹法检测bcl-2、bax蛋白在心肌细胞中的表达情况.结果 与正常对照组相比,高浓度过氧化氢损伤组bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);bax mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);bcl-2/bax比值显著降低(P<0.01),差异具有统计学意义.与损伤组比较,高浓度和中浓度药物治疗组bcl-2 mRNA及其蛋白表达显著增加(P<0.05);bax mRNA及其蛋白表达显著降低(P<0.05);bcl-2/bax比值显著增加(P<0.01),差异具有统计学意义.低浓度药物治疗组则对bcl-2、bax表达无显著改变.结论 当归红芪超滤膜提取物可通过上调bcl-2/bax的比值抑制心肌细胞的凋亡,对心肌细胞具有抗凋亡的保护作用.     

促红细胞生成素预处理在心肌缺氧复氧损伤中对凋亡相关基因表达影响的研究

目的:观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)预处理在大鼠心肌缺氧复氧损伤(hypoxia/reoxygenation,H/R)中的抗凋亡效应以及对凋亡相关基因bcl-2及bax表达的影响。方法:Wistar成年雄性大鼠60只,分为2组,分别为对照组,EPO预处理组(EPO组),每组30只,EPO组大鼠经腹腔注射5000U/kg重组人促红细胞生成素(Recombinant human erythropoietin,RHuEPO),对照组注射同体积生理盐水。2组各15只大鼠于给药24h后,检测各项指标,其余15只大鼠置于常压缺氧环境中(O27%)12h后,移至常压常氧环境中2h,予H/R损伤,之后采取心肌标本,DNA末端转移酶标记法(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡,免疫组化检测凋亡效应酶胱天蛋白酶-3(caspase-3)、凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,bcl-2)及B细胞淋巴瘤/白血病相关x蛋白(Bcl-associated x protein,bax)蛋白表达水平,计算bcl-2/bax比值。结果:H/R损伤前2组心肌细胞凋亡率,caspase-3以及bax蛋白表达水平无显著性差异(P>0.05),EPO组bcl-2蛋白表达水平、bcl-2/bax比值显著高于对照组(P<0.01)。H/R损伤后2组心肌细胞凋亡率,caspase-3、bax及bcl-2蛋白表达水平显著高于损伤前(P<0.01),而bcl-2/bax比值显著低于损伤前(P<0.01),EPO组的心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05,P<0.01),而bcl-2蛋白表达水平以及bcl-2/bax比值显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),2组bax蛋白表达水平差异无显著性(P>0.05)。结论:EPO预处理在心肌H/R损伤中具有显著的抗凋亡效应;这一效应与其上调抗凋亡基因bcl-2的表达有关。     

促红细胞生成素预处理在心肌缺氧复氧损伤中对凋亡相关基因表达影响的研究

目的：观察促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）预处理在大鼠心肌缺氧复氧损伤（hypoxia/reoxygenation,H/R）中的抗凋亡效应以及对凋亡相关基因bcl-2及bax表达的影响。方法：Wistar成年雄性大鼠60只,分为2组,分别为对照组,EPO预处理组（EPO组）,每组30只,EPO组大鼠经腹腔注射5000U/kg重组人促红细胞生成素（Recombinant human erythropoietin,RHuEPO）,对照组注射同体积生理盐水。2组各15只大鼠于给药24h后,检测各项指标,其余15只大鼠置于常压缺氧环境中（O27%）12h后,移至常压常氧环境中2h,予H/R损伤,之后采取心肌标本,DNA末端转移酶标记法（TUNEL法）检测心肌细胞凋亡,免疫组化检测凋亡效应酶胱天蛋白酶-3（caspase-3）、凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell lymphoma/leukemia-2,bcl-2）及B细胞淋巴瘤/白血病相关x蛋白（Bcl-associated x protein,bax）蛋白表达水平,计算bcl-2/bax比值。结果：H/R损伤前2组心肌细胞凋亡率,caspase-3以及bax蛋白表达水平无显著性差异（P〉0.05）,EPO组bcl-2蛋白表达水平、bcl-2/bax比值显著高于对照组（P〈0.01）。H/R损伤后2组心肌细胞凋亡率,caspase-3、bax及bcl-2蛋白表达水平显著高于损伤前（P〈0.01）,而bcl-2/bax比值显著低于损伤前（P〈0.01）,EPO组的心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达水平显著低于对照组（P〈0.05,P〈0.01）,而bcl-2蛋白表达水平以及bcl-2/bax比值显著高于对照组（P〈0.05,P〈0.01）,2组bax蛋白表达水平差异无显著性（P〉0.05）。结论：EPO预处理在心肌H/R损伤中具有显著的抗凋亡效应;这一效应与其上调抗凋亡基因bcl-2的表达有关。     

刚地弓形虫感染对孕鼠细胞凋亡的影响

目的 探讨刚地弓形虫对孕鼠胎盘细胞凋亡及其相关基因bax、bcl-2表达的影响。方法 建立刚地弓形虫感染的孕鼠模型，采用胎盘组织压片及病理切片，观察胎盘组织的损伤情况；采用DNA缺口末端标记技术（TUNEL）检测胎盘细胞的凋亡情况；采用免疫组织化学法（SP法）观察细胞凋亡调控基因bax和bcl-2在胎盘细胞中的表达。结果 与对照组相比，随着感染时间的延长，感染组胎盘组织压片中可见弓形虫虫体逐渐增加，HE染色可见有大量的淋巴细胞浸润及凋亡小体；TUNEL证实感染组胎盘滋养层细胞凋亡显著增强（P〈0．05）；免疫组织化学结果显示，感染组胎盘滋养层细胞凋亡相关基因bax表达显著增强、bcl-2表达减弱（P〈0．05）。结论 刚地弓形虫侵入胎盘组织，可通过上调滋养层细胞bax基因表达，下调bcl-2基因表达而诱导胎盘滋养层细胞凋亡增加，从而影响胎盘组织结构和功能，导致不良妊娠。     

非小细胞肺癌凋亡相关基因bcl-2和bax表达及其与端粒酶的关系

目的 探讨凋亡相关基因bcl-2与bax及端粒酶在非小细胞肺癌中的表达及其意义。方法 分别检测50例非小细胞肺癌细胞中bcl-2与bax表达情况及端粒酶活性，并测定人端粒酶逆转录酶(hTERT)含量。结果 凋亡相关基因bcl-2与bax的表达与细胞分化程度相关，分化程度愈高，bcl-2表达率愈低，而bax表达率愈高。bax的表达与TNM分期及N分期均相关，分期愈低，bax表达愈高，而bcl-2的表达则与分期无关。两者与细胞类型，端粒酶的表达均无相关性。结论 bcl-2/bax与端粒酶分别在不同途径上控制肿瘤细胞的凋亡，bax的表达多发生在早期非小细胞肺癌，对肺癌的早期诊断可能有一定的帮助。     

苦参素注射液联合顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响

目的探讨苦参素注射液(MI)联合顺铂(DDP)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响。方法分别采用MI、顺铂及MI联合顺铂干预SMMC-7721细胞。TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR法检测c-myc、bcl-2和bax mRNA表达,二步法免疫组化检测c-myc、bcl-2和bax蛋白表达。结果苦参素组、顺铂组和联合用药组细胞凋亡率显著上升,与对照组(不干预)比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),联合用药具有单纯相加或协同作用;联合用药组的细胞凋亡率显著增加,bax mRNA和蛋白表达显著升高,c-myc、bcl-2 mRNA和蛋白表达显著减少,与DDP单药组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论苦参素注射液联合顺铂具有单纯相加或协同诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用,其机制可能与bax基因表达上调和c-myc、bcl-2基因表达下调有关。     

小儿急性白血病bcl—2、bax蛋白的表达及临床意义

目的：检测小儿急性白血病bcl-2、bax蛋白的表达，探讨其与临床诊治、预后的关系及两基因间的相互作用。方法：采用免疫细胞化学技术分析患儿骨髓单个核细胞bcl-2、bax蛋白的表达。结果：初治组bcl-2蛋白表达较CR一和正常组显著增高；bax表达显著降低；bcl－2表达与影响预后因素间无显著相关。结论：bcl-2抑调亡作用增强和bax促凋亡作用减弱在小儿白血病的发生发展中具有重要作用，bcl－2表达可能与疗有关，bcl-2、bax共同调控白血病细胞凋亡。     

瘦素对人胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响

目的观察瘦素对人胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法在培养液中加入不同浓度的瘦素后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪观察细胞周期及凋亡情况,实时荧光定量PCR法检测增殖相关基因Cyclin D1和凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达情况,同时检测Caspase-3的活性。结果 MTT法显示瘦素可以促进QBC939细胞的增殖;流式细胞仪检测结果显示瘦素能明显降低G0/G1期细胞比例并提高S期细胞比例,细胞凋亡率也有明显降低;实时荧光定量PCR法显示瘦素（50 ng/ml）处理QBC939细胞24 h后,Cyclin D1mRNA的表达明显增高,Bcl-2 mRNA的表达量明显增高,而Bax mRNA的表达量下降,差异有统计学意义;而且瘦素作用QBC939细胞后能降低细胞的Caspase-3酶活性。结论瘦素可以明显的促进人胆管癌细胞QBC939从细胞周期G0/G1期向S期转换,进而促进细胞增殖,此外瘦素还可以抑制其凋亡。     

醒脑启智胶囊药物血清对缺氧诱导的PC12细胞凋亡及凋亡基因的影响

目的 探讨醒脑启智（XNQZ）胶囊药物血清对缺氧诱导的PCI2细胞凋亡及其相关基因bcl-2、bax表达的影响。方法 采用血清药理学方法，体外培养PCI2细胞，以药物血清孵化后用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）缺氧诱导，观察PCI2细胞凋亡及bcl-2、bax表达的变化。结果 缺氧诱导后，PC12细胞的bax蛋白表达上调，使细胞凋亡趋势增强。XNQZ药物血清可使bcl-2基因表达量增加，bax基因表达量降低，细胞凋亡率下降。结论 XNQZ可通过调节bcl-2、bax表达，抑制细胞凋亡，提高细胞抗损伤和修复能力，以达到对抗神经元迟发性死亡，抑制智力减退的作用，并呈现一定的剂量依赖关系。     

幽门螺杆菌体外诱导大鼠胃黏膜上皮细胞凋亡

目的:研究幽门螺杆菌(Hpylori)在大鼠胃黏膜上皮诱导细胞凋亡中的作用,并初步探讨其中凋亡相关基因表达的情况,为胃癌发病机制提供依据.方法:Hpylori超声提取液来自SydneySS-1Hpylori菌株.大鼠胃黏膜细胞OUMS-37为永生化细胞,当细胞生长至60%融合时,加入不同浓度的Hpylori超声提取液,同时设置空白,于培养的24-48h收集细胞进行形态观察.Westhernblotting检测P53蛋白表达,Northernblotting检测bax、bcl-2mRNA的表达.结果:细胞经Hpylori作用48h后在高倍镜下观察到细胞核碎裂成大小不等的块状,表现出细胞凋亡如细胞皱缩,胞浆嗜碱性,核染色质固缩致密,核染色质断裂,形成大小不等的胞内核小体,部分细胞核膜消失,核染色质聚集中细胞中央,呈现分裂期的形态学等形态学特征,对照组未出现以上特征性改变.培养细胞经过Hpylori作用后提取DNA,经15g/L琼脂糖凝胶电泳,在紫外线灯下观察呈现不连续的梯状结构电泳条带.培养细胞经过Hpylori作用后,Westhernblotting显示P53蛋白表达随Hpylori超声提取液浓度而升高,Northernblotting显示baxmRNA表达随Hpylori浓度而增加,bcl-2mRNA表达随Hpylori浓度而降低.结论:Hpylori超声提取液可在体外诱导鼠胃黏膜上皮细胞凋亡.其机制可能通过上调野生型P53蛋白和凋亡促进基因baxmRNA表达,并下调凋亡抑制基因bcl-2mRNA表达.提示Hpylori感染可通过干扰胃上皮细胞增殖与凋亡之间的平衡在胃癌病因学中发挥作用.     

雷公藤内酯醇诱导胰腺癌细胞凋亡及对5-脂氧合酶和凋亡基因表达的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(TL)在胰腺癌化学预防和治疗中的应用价值。方法采用人胰腺癌细胞株SW1990作为研究对象,MTT法和吖啶橙(AO)染色分别检测SW1990细胞的增殖和凋亡,采用半定量RT-PCR法检测5-脂氧合酶(5-LOX)mRNA、bcl-2 mRNA和bax mRNA的表达。结果10μg/ml的TL对SW1990细胞生长的抑制率达30%以上,0.1μg/mlTL处理24h后,SW1990细胞凋亡指数达38.5%,显著高于对照组的14.97%。5-LOX、bcl-2、bax mRNA表达从0.7160±0.0251,0.2446±0.0311和0.0260±0.0065分别变化为0.2400±0.0316,0.0700±0.0158和0.0700±0.0158。结论TL能抑制胰腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,其凋亡机制可能与下调5-LOXmRNA和bcl-2mRNA、上调bax mRNA基因表达有关。     

Apoptosis of human pancreatic cancer cells induced by Triptolide

AIM： To investigate apoptosis in human pancreatic cancer cells induced by Triptolide （TL）, and the relationship between this apoptosis and expression of caspase-3＇ bcl-2 and bax. METHODS： Human pancreatic cancer cell line SW1990 was cultured in DMEM media for this study. MTT assay was used to determine the cell growth inhibitory rate in vitro. Flow cytometry and TUNEL assay were used to detect the apoptosis of human pancreatic cancer cells before and after TL treatment. RT-PCR was used to detect the expression of apoptosis-associated gene caspase-3＇ bcl-2 and bax. RESULTS： TL inhibited the growth of human pancreatic cancer cells in a dose-and time-dependent manner. TL induced human pancreatic cancer cells to undergo apoptosis with typically apoptotic characteristics. TUNEL assay showed that after the treatment of human pancreatic cancer cells with 40 ng/mL TL for 12 h and 24 h, the apoptotic rates of human pancreatic cancer cells increased significantly. RT-PCR demonstrated that caspase-3 and bax were significantly up-regulated in SW1990 cells treated with TL while bcl-2 mRNA was not. CONCLUSION： TL is able to induce the apoptosis in human pancreatic cancer cells. This apoptosis may be mediated by up-regulating the expression of apoptosisassociated caspase-3 and bax gene.     

Apoptosis of human primary gastric carcinoma cells induced by genistein

AIM: To investigate the apoptosis in primary gastric cancer cells induced by genistein, and the relationship between this apoptosis and expression of bcl-2 and bax. METHODS: MTT assay was used to determine the cell growth inhibitory rate in vitro. Transmission electron microscope and TUNEL staining were used to quantitatively and qualitatively detect the apoptosis of primary gastric cancer cells before and after genistein treatment. Immunohistochemical staining and RT-PCR were used to detect the expression of apoptosis-associated genes bcl-2 and bax. RESULTS: Genistein inhibited the growth of primary gastric cancer cells in dose-and time-dependent manner. Genistein induced primary gastric cancer cells to undergo apoptosis with typically apoptotic characteristics. TUNEL assay showed that after the treatment of primary gastric cancer cells with genistein for 24 to 96 h, the apoptotic rates of primary gastric cancer cells increased time-dependently. Immunohistochemical staining showed that after the treatment of primary gastric cancer cells with genistein for 24 to 96 h, the positivity rates of Bcl-2 proteins were apparently reduced with time and the positivity rates of Bax proteins were apparently increased with time. After exposed to genistein at 20 micromol/L for 24, 48, 72 and 96 respectively, the density of bcl-2 mRNA decreased progressively and the density of bax mRNA increased progressively with elongation of time. CONCLUSION: Genistein is able to induce the apoptosis in primary gastric cancer cells. This apoptosis may be mediated by down-regulating the apoptosis- associated bcl-2 gene and up-regulating the expression of apoptosis-associated bax gene.     

Synergistic effect of oxymatrine and angiogenesis inhibitor NM-3 on modulating apoptosis in human gastric cancer cells

AIM: To investigate the synergistic effect of oxymatrine(OM) and angiogenesis inhibitor NM-3 on modulatingapoptosis in human gastric cancer cell lines SGC-7901,MKN-45, MKN-74. METHODS: Human gastric cancer lines SGC-7901,MKN-45, MKN-74 were treated with OM in the absenceand presence of NM-3. The inhibitory rates weredetected by MTT assay. Synergistic effect of OM andNM-3 on the growth of survivin, bcl-2, bax and p53 inSGC-7901 cells were examined by semiquantitative RT-PCR and Western blotting, and their growth inhibitoryeffects were also observed on SGC-7901 tumor xenograftin nude mice.RESULTS: OM combined with NM-3 exhibited asynergistic inhibitory effect on the growth of SGC-7901,MKN-45 and MKN-74 cells in a time-dependent manner.Twenty-four hours after treatment with OM, NM-3 aloneand their combination, mRNA expression of survivin andbcl-2 in SGC-7901 cells decreased, p53 mRNA expressionincreased. OM (4 g/L) combined with NM-3 significantlyincreased the expression of p53 mRNA and decreasedthe expression of survivin and bcl-2 compared witheither agent alone (193% ± 34% vs 129% ± 12%;44% ± 18% vs 92% ± 18%; 36 ± 17% vs 93% ± 23%,P < 0.05). Western blotting showed that the synergisticeffect of OM and NM-3 on protein translation of survivin,bcl-2 and p 53 was in accordance with their mRNAs.Furthermore, OM/NM-3 combination obviously exhibitedantitumor growth effect in xenografted human gastriccancer cells SGC-7901 compared with either agent alone.CONCLUSION: OM combined with NM-3 has synergisticinhibitory effects on human gastric cancer cells in vitro and can suppress the growth of xenografted human gastric cancer cells SGC-7901 in vivo.     

海生素对体外白血病K562细胞的抑制作用及其机制

目的探讨海生素对体外白血病K562细胞的抑制作用及机制。方法将0.1、1、10、100、1000μg/ml的海生素分别作用于K562细胞24、48 h,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果海生素作用后K562细胞抑制率明显高于对照组,且呈现浓度及时间依赖性。K562细胞bcl-2蛋白表达下调,bax蛋白表达上调。结论海生素可抑制K562细胞的生长,其机制可能为通过下调bcl-2蛋白表达,增加bax蛋白的表达,诱导细胞凋亡。     

Flavopiridol对人尤文肉瘤VH-64细胞株增殖与凋亡的影响

目的观察小分子细胞周期蛋白激酶抑制剂Flavopiridol（FP）对人尤文肉瘤VH-64细胞株增殖与凋亡的影响,初步探讨FP对尤文肉瘤的体外抗肿瘤活性。方法将FP作用于VH-64细胞株,光学显微镜观察其形态变化,MTT法测定FP对VH-64细胞增殖的抑制率,流式细胞仪及DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡, Western blot检测bcl-2、bax和caspase-8的蛋白表达变化。结果MTT实验显示,FP对VH-64细胞株增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间及浓度依赖特点;琼脂糖凝胶电泳及流式细胞计数分析表明,FP可诱导细胞凋亡,并导致G0／G1期阻滞;免疫印迹检测显示,FP对bel-2及bax的表达无影响,但活性型caspase-8表达被上调。结论FP可诱导人尤文肉瘤VH-64细胞株凋亡,其作用不依赖于bcl-2／bax基因的变化,caspase-8路径的激活可能为其机制之一。