丹芍化纤胶囊治疗大鼠肝纤维化后肝星状细胞凋亡及细胞周期的变化

目的：观察复方制剂丹芍化纤胶囊治疗大鼠CCl4中毒性肝纤维化对HSC细胞凋亡及细胞周期的影响，以探讨丹芍化纤胶囊可能的作用机理。 方法： 雄性Wistar大鼠采用CCl4、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周，然后给予丹芍化纤胶囊（1g/kg）灌胃治疗8周。实验结束时测定肝脏指数、血清透明质酸（HA）及谷丙转氨酶（ALT）含量，光镜下观察肝组织纤维化程度，检测尿羟脯氨酸（Hyp）排出量，同时用流式细胞仪检测治疗前后肝星状细胞（HSC）凋亡并分析细胞周期各期细胞比例。 结果： 治疗组大鼠的肝脏指数、血清HA、ALT含量明显低于肝纤维化模型组；肝纤维化程度明显轻于肝纤维化模型组；尿Hyp排出量显著高于肝纤维化模型组及自然恢复组；HSC细胞凋亡、G0-G1期细胞比例明显高于肝纤维化模型组（分别为7.81±0.47/0.28±0.05，94.30±1.33/68.40±6.47,P<0.05），S期细胞比例显著低于肝纤维化模型组及自然恢复组（分别为3.11±1.27，9.83±1.81，11.87±1.92，P<0.05）。 结论： 丹芍化纤胶囊对大鼠CCl4中毒性肝纤维化有一定的治疗作用，这种治疗作用可能部分是通过抑制HSC细胞增殖及促进HSC细胞凋亡而致。     

甘草酸二铵对肝纤维化大鼠肝脏脂质过氧化与间质性胶原酶活性的影响

目的：探讨甘草酸二铵影响纤维化肝脏脂质过氧化与间质性胶原酶活性的抗肝纤维化作用机制。 方法： 以四氯化碳(CCl4)皮下注射与高脂肪低蛋白饮食复合因素诱导大鼠肝纤维化模型，而后予以甘草酸二铵口服治疗，正常大鼠与模型对照组给予等量生理盐水。HE染色与胶原染色观察大鼠肝组织炎性坏死与胶原沉积病理改变，按试剂盒方法检测血清肝功能（ALT、AST、Alb与总胆红素等）变化，检测肝组织主要过氧化损伤指标：超氧化物歧化酶（SOD）活性, 丙二醛（MDA）含量，谷胱甘肽（GSH）含量与谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，水解法测定肝组织羟脯氨酸含量，酶底物反应法分析肝组织间质性胶原酶活性变化，RT-PCR法分析肝组织Ⅰ型前胶原基因表达。 结果： 与正常大鼠相比，模型大鼠肝脏有明显胶原沉积与肝纤维化，伴有不同程度的肝细胞炎性损伤坏死；甘草酸二铵药物组明显减轻模型大鼠肝组织损伤坏死与胶原沉积等病理变化。模型大鼠肝功能指标,包括血清总胆红素含量、ALT与AST活性、白蛋白含量均明显减少（P<0.01）。药物组大鼠血清总胆红素含量、AST与ALT活性显著低于模型组（P<0.05），而白蛋白含量高于模型组（P<0.05）。此外，药物组大鼠肝组织羟脯氨酸含量(151.3±37.3 μg/g)明显少于模型组(170.9±15.3 μg/g，P<0.05)，Ⅰ型前胶原基因表达弱于模型组（P<0.05）；肝组织MDA含量(1.96±0.23 μmol/g)低于模型组(2.44±0.32 μmol/L, P<0.05)，SOD水平(19.60±0.97 NU/g)高于模型组(20.60±0.33 NU/g，P<0.05)，GSH含量(47.0±9.1 g/g)与GSH-Px活性(53.1±4.1 U/g)高于模型组(41.2±3.5 g/g；46.7±6.1 U/g，P<0.05)；肝组织间质性胶原酶活性(43.89±7.74 U)高于模型组(32.01±2.75 U，P<0.05)。 结论： 甘草酸二铵有明显抗肝纤维化大鼠肝脏脂质过氧化损伤与提高肝组织间质性胶原酶活性的作用，该作用是药物抗肝纤维化的重要机制。     

细脚拟青霉多糖对抗四氯化碳诱导的急性肝损伤

目的：观察细脚拟青霉粗多糖（cPtPs）及其纯化多糖（PtPs）对四氯化碳（CCl4）诱导大鼠急性肝坏死的影响。方法：将Wistar大鼠分为4组（对照组、CCl4组、cPtPs +CCl4组和PtPs +CCl4组），分别用生理盐水、cPtPs和PtPs灌胃15 d，最后2 d，腹腔注射CCl4，16 h后全自动生化分析仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）和间接胆红素（IBIL）；肝组织苏木素-伊红（HE）染色观察病变程度；黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分别检测肝匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）；甲基百里香酚蓝比色法测定肝细胞线粒体中Ca2+ 浓度；免疫组织化学法检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果：与对照组比较，CCl4组血清中ALT、AST、TBIL、DBIL和IBIL的含量显著增加（P＜0.05），HE染色肝组织变性坏死累及全小叶。与CCl4组比较，PtPs+CCl4组血清中ALT、AST、TBIL、DBIL和IBIL的含量显著下降（P＜0.05）；PtPs +CCl4组HE染色病变程度较轻，变性坏死局限于肝小叶的Ⅲ区；PtPs +CCl4组胞浆中SOD活性提高， MDA水平降低（P＜0.05）；PtPs +CCl4组和cPtPs +CCl4组线粒体中Ca2+ 浓度均下降（分别为P＜0.05，P＜0.01）；PtPs +CCl4组α-SMA在肝组织的坏死区几乎无表达。结论：PtPs能显著减轻CCl4诱导的肝损伤，可能与PtPs抗脂质过氧化作用相关，效果优于cPtPs。     

TNF-α诱导的胰岛素抵抗对小鼠脂肪组织INSIG2和SCAP表达的影响

目的： 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的胰岛素抵抗（IR）对脂代谢相关基因INSIG1、INSIG2、SCAP和SREBP表达的影响。 方法：健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组,分别给予腹腔注射TNF-α（6 μg·kg-1·d-1、3 μg·kg-1·d-1和1 μg·kg-1·d-1）和生理盐水（NC组）每天2次,共7 d。采用静脉葡萄糖耐量试验（IVGTT）评价小鼠胰岛素敏感性和糖代谢的变化,用酶法测定胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸等变化,用RT-PCR法检测脂肪组织胰岛素诱导基因1和2（INSIG1、INSIG2）、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白（SCAP）和固醇调节元件结合蛋白 （SREBP）基因的RNA表达,并用Western blotting检测INSIG2蛋白的表达。结果： TNF-α 处理后,小鼠空腹血糖（FBG）、血浆胰岛素和游离脂肪酸 (FFA) 水平均明显增高（P<0.01和P<0.05）。IVGTT结果显示,TNF-α（6 μg·kg-1·d-1）组糖耐量低减,葡萄糖刺激后胰岛素释放水平明显高于其它3组。TNF-α（6 μg·kg-1·d-1）组小鼠脂肪组织中INSIG2 mRNA表达明显高于对照组（P<0.01）,其蛋白水平也明显高于对照组（P<0.05）。TNF-α（6 μg·kg-1·d-1）组小鼠脂肪组织SCAP mRNA表达也明显高于对照组（P<0.05）。两组小鼠脂肪组织INSIG1和SREPP1 mRNA表达无明显差异(P<0.05)。 结论：INSIG2和SCAP的变化可能与TNF-α 所导致的脂代谢紊乱有关。     

复方黄芪提取物抗急性肝损伤作用的研究

目的：研究复方黄芪提取物（ERAC）的抗急性肝损伤作用。方法： 分别采用D-氨基半乳糖（D-Galn）和四氯化碳（CCl4）造成急性肝损伤模型，检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性及胆红素的含量，并进行病理学检查。结果： ERAC对肝损伤引起的ALT和AST活性增加以及胆红素增高均有明显的降低作用（P<0.05）。病理组织学检查：ERAC对肝损伤引起的肝细胞变性、坏死等病变有改善作用。结论： ERAC能减轻D-Galn和CCl4所引起的肝损伤，改善肝功能。     

肝纤维化大鼠肝脏中内质网应激相关分子CHOP和TRB3的表达变化

 目的： 观察内质网应激相关分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP）和Tribbles同源蛋白3（TRB3）在四氯化碳（CCl4）致大鼠肝纤维化过程中的表达变化,探讨其在肝纤维化过程中的可能作用。方法： 体重180～200　g的雄性Wistar大鼠随机分为正常4周组、正常8周组、肝纤维化4周组和肝纤维化8周组,肝纤维化组大鼠皮下注射40%CCl4制备肝纤维化模型,分别在4周和8周处死大鼠,观察肝组织病理改变,Western blotting检测肝脏活化转录因子6（ATF6）蛋白,免疫组化、Western blotting和real-time PCR分别检测肝脏CHOP和TRB3蛋白和mRNA表达变化,TUNEL法检测肝脏细胞凋亡。结果： 肝纤维化组大鼠肝脏可见假小叶形成,p90ATF6蛋白表达量较正常组明显减少（P<0.01）,p50ATF6蛋白表达量较正常组明显增加（P<0.01）,肝细胞胞浆CHOP和TRB3蛋白及mRNA表达量较正常组显著增加（P<0.01）,细胞凋亡率较正常组显著增加（P<0.01）。结论： 内质网应激相关分子CHOP和TRB3在CCl4致大鼠肝纤维化过程中蛋白及mRNA表达水平明显增加,其变化趋势与大鼠肝细胞凋亡率一致,提示内质网应激可能通过CHOP和TRB3促进肝细胞凋亡,参与肝纤维化发生发展。     

慢性酒精摄入所致的肝细胞上皮-间充质转化参与小鼠肝纤维化形成

 目的：探讨慢性酒精摄入对肝组织病理学改变的影响及上皮-间充质转化对肝纤维化形成的作用。方法：将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组：对照组灌胃给予与酒精组等体积的蒸馏水,低剂量和高剂量酒精组分别灌胃给予2.0 g·kg -1·d -1和 4.0 g·kg -1·d -1酒精5个月。肝组织病理学改变和纤维化分别用HE和 Masson三染色观察;荧光标记的TUNEL法检测肝组织细胞凋亡;自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;肝组织成纤维细胞特异性蛋白1（FSP-1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏素表达采用免疫荧光观察;E-钙黏素、α-SMA、FSP-1、转化生长因子β 1 (TGF-β 1) 和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白表达水平用Western blotting 检测。结果：与对照组相比,小鼠酒精灌胃5个月后,血清ALT和AST活性升高;肝组织细胞凋亡增加;低剂量酒精组呈现肝脂肪变性和轻度的肝纤维化,高剂量酒精组呈现出严重的肝纤维化;肝组织丙二醛（MDA）含量升高,超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）下降;肝细胞E-钙黏素表达下降,α-SMA表达增加;低剂量酒精组肝细胞内白蛋白和FSP-1共定位,而高剂量酒精组肝细胞内只表达FSP-1;Western blotting检测结果显示,E-钙黏素表达下降,而α-SMA、FSP-1、TGF-β 1和HIF-1α蛋白表达水平升高,但是HIF-1α蛋白表达水平在高、低酒精组之间无差别。结论：慢性酒精摄入可诱导肝纤维化,部分成纤维细胞来源于肝细胞上皮-间充质转化,其机制可能与肝细胞氧化状态、TGF-β 1及HIF-1α升高有关。     

重组腺病毒介导的BCL-X1基因过表达治疗急性肝衰竭大鼠的研究

目的明确肝细胞凋亡与急性大鼠肝衰竭模型肝组织损伤程度的关系;明确BCL—X1过表达对急性肝衰竭大鼠肝脏的治疗保护作用。方法将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、处理组三组。正常对照组及模型组给予门静脉注射生理盐水,处理组予门静脉注射重组BCL-Xl腺病毒。预处理7d后模型组及处理组予D-氨基半乳糖＋脂多糖建立肝衰竭模型,观察各组大鼠的BCL-X1蛋白的表达、ALT、AST水平、肝细胞凋亡率及死亡率。结果BCL．XI基因在处理组的表达高于在模型组中的表达;建立大鼠肝衰竭后6h,处理组的血清ALT、AST水平低于模型组（P〈0．05）。处理组的肝细胞凋亡率低于模型组（P〈0．05）。处理组的大鼠死亡率低于模型组（P〈0．05）。结论在急性肝衰竭大鼠中,肝细胞的凋亡率与大鼠的死亡率呈正相关;BCL-XI在肝组织中的过表达能减少急性肝衰竭模型大鼠的肝细胞凋亡率,降低急性肝衰竭大鼠的死亡率。     

HCV RNA载量与ALT和AST检测

我国丙型肝炎（hepatitisCvirus，HCV）感染人数约3800万，60％-85％的感染者发展为慢性肝炎，其中约20％并发肝纤维化、肝硬化等严重肝脏疾病。丙氨酸氨基转移酶（ALT）浓度，和谷草转氨酶（AST）存在于肝细胞的胞质中，在肝细胞损伤时通过细胞膜释放入血中，造成血清AfJT升高，血清ALT水平是反映肝脏组织损伤最敏感的指标之一，ALT水平越高肝脏组织损伤越重。丙肝治疗达到病毒学应答时，ALT多数都能恢复正常，停药后ALT再升高可反应病毒的复发。本文对119例病毒阳性的丙肝患者，按病毒拷贝数的对数值分为低水平≤3．00和高水平≥3.01两组，并进行了HCVRNA拷贝数和AIJT、AST结果比较分析，现报道如下。     

西酞普兰对慢性应激大鼠海马CA1、CA3区神经细胞凋亡的影响

目的：探讨西酞普兰对慢性应激大鼠海马CA1、CA3神经细胞凋亡的影响。方法: 将40只雄性SD大鼠随机分为空白、对照（生理盐水灌胃）、实验1-3组（分别以8 mg·kg-1·d-1、4 mg·kg-1·d-1、1 mg·kg-1·d-1氢溴酸西酞普兰灌胃），每组8只，采用强迫游泳制造慢性应激大鼠模型，用大鼠悬尾实验、力竭实验观察行为学，苏木素伊红（HE）染色观察CA1、CA3神经细胞凋亡，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测和尼康图像分析（NIS BR）软件测量CA1、CA3神经细胞凋亡数量及积分吸光度值。结果: 对照组静止不动时间延长、挣扎次数减少，实验组静止不动时间缩短、力竭时间延长、挣扎次数增多；对照组CA1、CA3区阳性细胞增多,CA3区阳性细胞积分吸光度值变小；各实验组阳性细胞数量减少，实验1、3组CA1、CA3区阳性细胞积分吸光度值增大。结论: 西酞普兰对慢性应激大鼠海马CA1、CA3神经细胞具有保护作用，提示西酞普兰对慢性应激引起的神经精神疾病的治疗机制，可能是通过拮抗CA1、CA3区神经细胞凋亡而起作用。     

The effect of carbon tetrachloride on the copper-laden rat liver

Copper is believed to be hepatotoxic in Indian Childhood Cirrhosis and Wilson's disease. However, copper-loading causes only minimal hepatic damage in animal models. The hypothesis was therefore proposed that a second hepatic insult may precipitate or perpetuate liver injury in a copper-laden liver. In non-copper-dosed rats CCl4 (10 mmol/kg, i.p.) produced elevated serum AST (809 +/- 298 IU/l, normal 20 +/- 5) and ALT (295 +/- 157 IU/l, normal 6 +/- 1) and extensive liver cell necrosis, portal tract inflammation, fat deposition, and perilobular hepatocyte ballooning. In rats whose liver copper was elevated from 75 +/- 13 to 461 +/- 13 micrograms/g by oral copper supplementation, CCl4 produced much smaller increases in AST (492 +/- 80 IU/l) and ALT (172 +/- 57 IU/l) and mild focal liver cell necrosis. Fat deposition and perilobular vacuolation were not reduced. Prior copper-loading of rats unequivocally protected against the CCl4-induced liver injury. Triglyceride accumulation, however, was apparently unaffected. The possible interactions of copper with prostaglandin-mediated inflammation and with free-radical-induced liver damage are discussed.     

The effect of carbon tetrachloride on the copper-laden rat liver.

Copper is believed to be hepatotoxic in Indian Childhood Cirrhosis and Wilson''s disease. However, copper-loading causes only minimal hepatic damage in animal models. The hypothesis was therefore proposed that a second hepatic insult may precipitate or perpetuate liver injury in a copper-laden liver. In non-copper-dosed rats CCl4 (10 mmol/kg, i.p.) produced elevated serum AST (809 +/- 298 IU/l, normal 20 +/- 5) and ALT (295 +/- 157 IU/l, normal 6 +/- 1) and extensive liver cell necrosis, portal tract inflammation, fat deposition, and perilobular hepatocyte ballooning. In rats whose liver copper was elevated from 75 +/- 13 to 461 +/- 13 micrograms/g by oral copper supplementation, CCl4 produced much smaller increases in AST (492 +/- 80 IU/l) and ALT (172 +/- 57 IU/l) and mild focal liver cell necrosis. Fat deposition and perilobular vacuolation were not reduced. Prior copper-loading of rats unequivocally protected against the CCl4-induced liver injury. Triglyceride accumulation, however, was apparently unaffected. The possible interactions of copper with prostaglandin-mediated inflammation and with free-radical-induced liver damage are discussed.     

苯扎贝特减轻小鼠糖尿病肝损伤

目的:探讨苯扎贝特(BEZ)减轻小鼠糖尿病肝病的作用及可能机制。方法:长期高能量饲料联合链脲菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病肝病模型,给予BEZ(75 mg·kg-1·d-1)灌胃4周。每周监测空腹血糖(FBG);HE染色观察肝脏形态学改变,生化试剂盒检测小鼠肝功能(丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶)、血脂(总胆固醇和甘油三酯)、胰岛素(INS)和糖化血红蛋白(HbA1c)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。RT-qPCR和Western blot方法检测肝脏过氧化物酶体增殖激活受体(PPARs)的mRNA和蛋白表达。结果:给予STZ 7 d后,小鼠FBG水平持续>11.1 mmol/L。实验结束时模型组小鼠INS、HbA1c及HOME-IR均明显增加(P<0.01),血脂升高(P<0.01);肝功能指标升高(P<0.01),病理检查见肝细胞脂肪变性及炎症细胞浸润;肝脏PPARs的mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.01)。BEZ给药明显减轻模型小鼠肝脏损害(P<0.01),降低血糖相关指标和血脂水平(P<0.05),上调PPARs的mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论:BEZ减轻小鼠糖尿病肝损伤,该作用可能与其激活PPARs有关。     

丹参酮IIA对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究丹参酮IIA(tanshinone ⅡA, Tan ⅡA)对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的抗氧化、保护作用及其可能的作用机制。 方法 将C57BL/6J小鼠随机分成正常组、CCl4组以及Tan ⅡA保护组(Tan ⅡA 20 mg/kg+CCl4),每组10只。腹腔注射CCl4构建小鼠急性肝损伤模型。计算各组小鼠的肝脏指数,检测血清AST和ALT活性,测定肝组织SOD活性及GSH、MDA含量,HE染色观察肝组织病理变化,免疫组织化学法和Western blot检测肝组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。 结果 与CCl4组相比,Tan ⅡA保护组肝脏指数显著下降(P<0.01),血清AST(P<0.01)和ALT活性降低(P<0.05),肝组织SOD活性(P<0.01)及GSH含量升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05),肝组织病理变化得到显著改善。同时,Tan ⅡA使肝组织p-PI3K和p-Akt表达水平明显升高(P<0.01),显著诱导Nrf2转位入核(P<0.01),促使其下游靶蛋白HO-1表达水平明显升高(P<0.01)。 结论 Tan ⅡA能够显著改善CCl4诱导的急性肝损伤,其机制可能与PI3K/Akt/Nrf2/HO-1信号通路有关。     

参附注射液对肝脏缺血再灌注大鼠iNOS和NO水平的影响

目的探讨参附注射液(SF)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤肝组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血清一氧化氮(NO)的影响。方法32只Wistar大鼠随机分为参附实验组(SF组)和肝缺血再灌注组(IR组)。SF组腹腔注射参附注射液(10ml·kg-1),IR组大鼠给予相同剂量的生理盐水。两组均采用Pringle's法阻断肝门缺血15min再灌注1h、3h,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及NO水平,并应用免疫组织化学法测定肝组织中iNOS表达。结果大鼠肝脏缺血15min再灌注1h和3h,SF组血清ALT、AST以及NO水平低于IR组(P<0.05),SF组肝组织iNOS阳性产物平均吸光度值、阳性面积百分率(%)明显低于IR组(P<0.05)。结论参附注射液抑制iNOS的表达,减少过量NO的生成,可能是其对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用机制之一。     

Hepatoprotective effect of the natural fruit juice from Aronia melanocarpa on carbon tetrachloride-induced acute liver damage in rats.

The fruits of Aronia melanocarpa are rich in anthocyanins--plant pigments with anti-inflammatory and antioxidant activity. We studied the effect of the natural fruit juice from A. melanocarpa (NFJAM) on carbon tetrachloride (CCl4)-induced acute liver damage in rats. Histopathological changes such as necrosis, fatty change, ballooning degeneration and inflammatory infiltration of lymphocytes around the central veins occurred in rats following acute exposure to CCl4 (0.2 ml kg(-1), 2 days). The administration of CCl4 increased plasma aspartate transaminase (AST) and alanine transaminase (ALT) activities, induced lipid peroxidation (as measured by malondialdehyde (MDA) content in rat liver and plasma) and caused a depletion of liver reduced glutathione (GSH). NFJAM (5, 10 and 20 ml kg(-1), 4 days) dose-dependently reduced the necrotic changes in rat liver and inhibited the increase of plasma AST and ALT activities, induced by CCl4 (0.2ml kg(-1), 3rd and 4th days). NFJAM also prevented the CCl4-induced elevation of MDA formation and depletion of GSH content in rat liver.     

脑益康对D-半乳糖损伤的海马神经元的保护作用

目的：观察脑益康对D-半乳糖（D-gal）诱导的海马神经元损伤的作用。方法:制备脑益康含药血清。应用D-gal诱导海马神经元损伤,MTT法测定细胞活力,生化法测定细胞单胺氧化酶-B（MAO-B）、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力,RT-PCR法检测细胞bax和bcl-xl mRNA的表达。结果:脑益康含药血清可显著提高细胞活力和ATP酶活力,降低MAO-B活力,上调bcl-xl mRNA的表达,降低bax mRNA的表达。结论:脑益康可通过提高ATP酶活力,降低MAO-B活力,抑制细胞凋亡,对D-gal处理的海马神经元起到保护作用。     

依赖天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的肝细胞凋亡在肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨肝硬化大鼠肝缺血/再灌注(I/R)损伤是否与肝细胞凋亡相关及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性变化与肝细胞凋亡的关系。方法:Pringle法复制肝I/R模型,将肝硬化大鼠随机分为2组:A组:单纯肝门阻断;B组:血流阻断+抑制剂:N-苯甲基氧化碳酰-缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-氟化丙酮(ZVAD-fmk)15mg/kg;取无肝硬化大鼠,作单纯肝门阻断为C组。各组肝门阻断时间均为30min,再灌注72h。比较3组的血清天冬氨酸转氨酶(AST)、肝组织的caspase-3活性和肝细胞凋亡数。结果:A组大鼠肝组织caspase-3活性、肝细胞凋亡数在再灌注后6h达高峰,分别为(18.1±1.8)μmolAMC·h^-1·g^-1(tissue)和20.9%±4.9%,与I/R前的(6.6±2.0)μmolAMC·h^-1·g^-1(tissue)和0.5%±0.3%相比,P＜0.01。肝细胞凋亡数、caspase-3的活性随灌注时间的延长而减低,两者随时间的变化一致。3组中A组肝损伤最严重,表现为再灌注后6h血清AST最高,与B、C组比较有显著差异,大鼠7d生存率只为62.5%。进一步研究表明,再灌注后6h,A组的肝组织caspase-3活性、肝细胞凋亡数亦明显比B、C组高。结论:肝细胞凋亡是肝硬化大鼠肝I/R损伤的主要病理改变。肝细胞凋亡的发生可能主要依赖于肝组织caspase-3活性的改变,抑制caspase-3能明显减轻肝I/R损伤。肝硬化肝脏比无硬化肝脏对缺血损伤敏感性高的病理机制与依赖caspase-3的肝细胞凋亡密切相关。     

Tolerance of aged Fischer 344 rats against chlordecone-amplified carbon tetrachloride toxicity

We have investigated the effects of chlordecone 1(CD)+CCl4 combination in adult (3 months), middle aged (14 months), and old aged (24 months) male Fischer 344 (F344) rats. After a non-toxic dietary regimen of CD (10 ppm) or normal powdered diet for 15 days, rats received a single non-toxic dose of CCl4 (100 microl/kg, i.p., 1:4 in corn oil) or corn oil (500 microl/kg, i.p.) alone on day 16. Liver injury was assessed by plasma ALT, AST, and histopathology during a time course of 0-96 h. Liver tissue repair was measured by [3H-CH3]-thymidine (3H-T) incorporation into hepatic nuclear DNA and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) immunohistochemistry. Hepatomicrosomal CYP2E1 protein, enzyme activity, and covalent binding of 14CCl4-derived radiolabel were measured in normal and CD fed rats. Exposure to CCl4 alone caused modest liver injury only in 14- and 24-month-old rats but neither progression of injury nor mortality. The CD+CCl4 combination led to 100% mortality in 3-month-old rats by 72 h, whereas none of the 14- and 24-month-old rats died. Both 3- and 14-month-old rats exposed to CD+Cl4 had identical liver injury up to 36 h indicating that bioactivation-mediated CCl4 injury was the same in the two age groups. Thereafter, liver injury escalated only in 3-month-old while it declined in 14-month-old rats. In 24-month-old rats initial liver injury at 6 h was similar to the 3- and 14-month-old rats and thereafter did not develop to the level of the other two age groups, recovering from injury by 96 h as in the 14-month-old rats. Neither hepatomicrosomal CYP2E1 protein nor the associated p-nitrophenol hydroxylase activity or covalent binding of 14CCl4-derived radiolabel to liver tissue differed between the age groups or diet regimens 2 h after the administration of 14CCl4. Compensatory liver tissue repair (3H-T, PCNA) was prompt and robust soon after CCl4 liver injury in the 14- and 24-month-old rats. In stark contrast, in the 3-month-old rats it failed allowing unabated progression of liver injury. These findings suggest that stimulation of early onset and robust liver tissue repair rescue the 14- and 24-month-old F344 rats from the lethal effect of the CD+CCl4 combination.