siMDR1基因转染人类BT325胶质瘤细胞系的表达

目的探讨siMDR1基因转染人类胶质母细胞瘤细胞BT325后细胞的表达能力。方法设计并合成siRNA质粒,取培养对数期生长良好的胶质母细胞系BT325,传代培养。将阳离子脂质体(Lipofectamine 2000)和质粒MDR1 DNA按比例共转染。瞬时对转染成功的细胞系应用抗性药物-嘌呤霉素进行筛选,筛出稳定的细胞系后,分别在荧光显微镜下分析转染情况。通过免疫细胞化学染色及图像分析对瞬时转染和稳定转染的BT325细胞进行检测,确定MDR1基因产物P-糖蛋白(P-gp)表达水平。阿霉素对瞬时转染及稳定转染的BT325耐药性进行分析。结果成功构建了逆转录病毒si RNA质粒载体,经过瞬时转染BT325细胞生长状态良好,48h表达绿色荧光最强。加入嘌呤霉素筛选后,在第8天出现单细胞克隆。免疫细胞化学染色证实瞬时转染与稳定转染BT325细胞P-gp的表达下降。细胞的转染效率为70%～80%。BT325细胞经过RNA干扰,细胞对MDR1耐药性明显下降,IC_(50)降低,细胞的耐药因子(RF)有所升高。结论siMDR1基因瞬时转染和稳定转染都可以抑制P-gp蛋白的表达,其可以作为基因治疗的重要手段。     

人脑胶质瘤细胞多药耐药性的形成及其耐药特性的研究

目的探讨人脑胶质瘤细胞多药耐药性（ＭＤＲ）的形成规律及其耐药特性。方法采用长春新碱（ＶＣＲ）在体外对人脑胶质瘤ＢＴ３２５细胞持续诱导获得了表现为ＭＤＲ特征的人脑胶质瘤细胞模型．以ＭＴＴ法测定胶质瘤细胞增殖，透射电镜行超微结构研究，通过流式细胞仪，检测培养的胶质瘤细胞与３２例术后胶质瘤新鲜组织标本中Ｐ－糖蛋白的表达。结果耐药的胶质瘤细胞ＢＴ３２５／ＶＣＲ对长春新碱的耐受程度为其亲本细胞的２４倍，对阿霉素、威猛交叉耐药，对５－氟脲嘧啶敏感。透射电镜下见ＢＴ３２５／ＶＣＲ细胞常染色质明显，线粒体丰富，粗面内质网增多。研究表明ＢＴ３２５／ＶＣＲ表现为Ｐ－糖蛋白介导的典型ＭＤＲ。胶质瘤新鲜组织标本中，Ｐ－糖蛋白表达阳性率为３７５％（１２／３２），同肿瘤的恶性程度呈正相关（Ｐ＜０．０１）。结论长春新碱能够诱导人脑胶质瘤细胞产生Ｐ－糖蛋白介导的典型ＭＤＲ。胶质瘤中多药耐药基因产物Ｐ－糖蛋白表达的阳性率同肿瘤的恶性程度呈正相关。应用流式细胞仅能早期发现耐药细胞，具有临床推广价值。     

MDR1 shRNA对人脑胶质瘤干细胞多药耐药性实验研究

目的构建多药耐药基因（MDR1）的短发卡RNA表达质粒，并检测其对胶质瘤干细胞药物敏感性的作用。方法培养脑胶质瘤干细胞；根据MDR1的DNA序列设计shRNA，用Siportxp-1脂质体法转染胶质瘤干细胞。分别采用定量聚合酶链反应（PCR）和Westernblot检测转染前后MDR1mRNA和蛋白表达情况；使用活细胞计数试剂盒（CCK-8）对转染后细胞进行药物敏感性试验，评价shRNA对多药耐药性的逆转作用。结果成功构建MDR1shRNA表达质粒，转染组MDR1mRNA表达水平有所下降（P〈0．05），转染5d组下降最明显；RT—PCR结果显示MDR1mRNA水平降低，第3、5、7d抑制率分别为78．46％±14．17％，82．02％±11．87％，79．5％±13．27％。Westernblot结果显示：shRNA转染组P-糖蛋白（P-gp）的表达降低，第3、5、7d抑制率分别为58．1％±6．5％，39．5％±5．2％，45．8％±8．6％；而药敏实验显示：阿霉素、长春新碱对转染MDRIshRNA的胶质瘤干细胞的半数抑制浓度（IC50）均有不同程度降低，且出现凋亡峰（P〈0．05）。结论MDR1短发卡RNA可在转录后水平对多药耐药进行调节，下调MDR1基因表达，提高药物敏感性，诱导细胞凋亡。     

神经胶质瘤C6/VP16多药耐药细胞株的建立

目的建立神经胶质瘤C6细胞对依托泊苷(VP16)耐药细胞株C6/VP16,探讨其耐药的可能机制。方法采用浓度递增和短期大剂量药物诱导相结合的方法建立大鼠C6/VP16耐药细胞株;光镜下观察C6/VP16细胞株的形态学变化;细胞计数试剂盒-8检测C6/VP16细胞株对VP16、阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)、环磷酰胺(CTX)、替莫唑胺(TMZ)的耐药敏感性;westernblot检测多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达量变化。结果经过65代诱导培养,成功建立可操作的、重复性好的C6/VP16耐药细胞株。C6亲代细胞形态规则、大小均一,生长迅速,紧密生长,每2～3d传代;C6/VP16细胞株,突起增多,生长周期受抑制,生长变缓,每10～12d传代。VP16、TMZ、CTX、ADM和VCR作用C6亲代细胞的半生长抑制浓度(IC50)分别为(0.105±0.043)、(27.284±0.529)、(5.800±0.317)、(6.636±0.315)和(19.146±0.526)μg/ml,而作用C6/VP16细胞株的IC50分别为(0.943±0.052)、(33.251±0.288)、(32.943±0.215)、(35.251±0.126)和(35.604±0.426)μg/ml;VP16、CTX和ADM作用C6/VP16细胞株IC50较C6亲代细胞差异显著(P<0.05)。C6/VP16细胞株MRP1的表达量较亲代C6细胞明显增加(P<0.05)。结论 C6/VP16细胞株对ADM和CTX存在明显交叉耐药,而对TMZ和VCR无明显交叉耐药;多药耐药性是多种机制相互作用的结果,MRP1可能参与其中。     

转染热休克蛋白70对p38MAPK信号通路的影响

目的：探讨热休克蛋白（HSP70）在人胶质瘤细胞BT-325p38MAPK信号通路中的作用。方法：用脂质体介导法将hsp70基因导入人胶质瘤细胞BT-325中，倒置显微镜观察转染细胞的形态学及粘附性变化，紫外线照射30min后，采用免疫组化和Western-blot方法测定转染前后HSP70的表达水平及照射前后p38MAPK表达情况。结果：免疫组化和Western-blot证实hsp70基因成功转染入BT-325中，转染细胞受到紫外线照射后p38MAPK表达减弱。结论：体外转染hsp70基因可抑制紫外线照射后BT-325细胞p38MAPK的表达。     

壳聚糖氧化铁纳米颗粒包裹MDR1 shRNA与对胶质瘤细胞转染的影响

目的探讨多药耐药基因短发卡RNA（MDRl shRNA）与壳聚糖氧化铁（Fe304）纳米颗粒对胶质瘤细胞系转染的影响。方法设计并合成针对MDRl的shRNA序列与pSIREN—RetroQ质粒载体连接,提取质粒,制备壳聚糖纳米颗粒并包裹制备的质粒,测定包封率及粒径分布。培养人类胶质母细胞瘤BT325共转染,测定转染效率。结果质粒pSIREN—RetroQ—RNAi经双酶切后测序验证,与实验设计的shRNA长度相符。壳聚糖一铁纳米粒子的粒径为100～300mm。分布较均匀．包裹质粒DNA包封率为97％-99％。壳聚糖Fe304纳米粒子包裹质粒经PI试剂转染BT325细胞,在共转染24h开始表达,荧光显微镜下呈绿色荧光,48h表达最强。转染效率为70％-80％（P〈0．05）。结论MDRlshRNA表达质粒与壳聚糖Fe3O4纳米粒子结合,可提高胶质瘤细胞系BT325转染效率,转染后细胞可以正常生长,可以为进一步的靶向基因检测及治疗提供有意义的思路。     

内皮抑素抑制胶质瘤多药耐药细胞株GL15细胞磷酸糖蛋白的表达及其意义

目的 研究内皮抑素对阿霉素(ADM)诱导的大鼠胶质瘤多药耐药细胞株GL15(GL15/ADM)细胞磷酸糖蛋白(P-gp)表达的抑制作用,探讨其对胶质瘤肿瘤耐药的影响.方法 将内皮抑素质粒转染胶质瘤耐药细胞,应用免疫印迹法、荧光分光光度计和流式细胞术分别检测转染后6,12,24,48 h不同时间段P-gp表达水平及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的活性和细胞凋亡率.结果 转染后6 h即可发现P-gp表达水平活性明显降低(P<0.05),且随转染后时间的延长而递减;转染后6h即可发现caspase-3活性明显上升(P<0.05),且随时间的延长而递增;转染后6、12、24、48 h肿瘤细胞凋亡率上升,并与非转染组间有极显著性差异(P<0.01).结论 内皮抑素能通过上调Caspase-3的活性,明显抑制胶质瘤耐药细胞中P-gp表达水平和促进肿瘤细胞凋亡,有助于提高胶质瘤的综合治疗效果.     

特异性shRNA干扰人慢病毒载体抑制U251细胞株Chk1、Chk2基因的表达

目的构建针对细胞周期检测点激酶1和2(Chk1和Chk2)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,包装成慢病毒,建立稳定转染的细胞株,为探讨抑制Chk1和Chk2基因表达对脑胶质瘤细胞生物学行为调控的研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的Chk1和Chk2基因核苷酸序列,选择设计2条能转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,命名为Chk1-shRNA和Chk2-shRNA,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为blank-shRNA。并与pLKO.1-TRC质粒载体连接,转化感受态大肠杆菌,挑取阳性克隆,抽取重组质粒,使用限制性内切酶EcoRⅠ、NcoⅠ酶切电泳,DNA测序鉴定,包装慢病毒。3组重组表达慢病毒载体转染胶质瘤细胞系U251,用嘌呤霉素筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定株。逆转录酶-聚合酶连反应(RT-PCR)和Western blot分别在mRNA和蛋白水平上检测Chk1和Chk2的表达。结果重组质粒成功转化感受态大肠杆菌,经酶切琼脂糖凝胶电泳分析,结果表明寡核苷酸成功插入到预计位点,经测序鉴定,序列完全正确。嘌呤霉素对U251细胞的筛选浓度为4ug/ml,筛选出稳定转染三种质粒的U251细胞,Chk1-shRNA和Chk2-shRNA组细胞各自Chk1和Chk2的mRNA和蛋白表达水平明显低于blank-shRNA组。结论成功构建了针对Chk1和Chk2基因的shRNA慢病毒表达载体,转染后可抑制ChK1和Chk2基因的表达,为进一步研究Chk1和Chk2基因在脑胶质瘤细胞中的作用奠定了基础。     

LRIG3特异性RNA干扰真核表达载体的构建及稳定株筛选

目的构建LRIG3（leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 3,LRIG3）基因特异的RNA干扰质粒,为探讨抑制LRIG3基因表达对脑胶质瘤细胞生物学行为调控的研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的LRIG3基因核苷酸序列,选择设计2条能转录短发卡RNA（shRNA）的DNA序列,命名为LRIG3-shRNA1、LRIG3-shRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为negative-shRNA。并与pGenesil2质粒载体连接,转化感受态大肠杆菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒,使用限制性内切酶SalⅠ酶切电泳,DNA测序鉴定。3种重组表达载体转染胶质瘤细胞系GL15细胞,用G418筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定株。逆转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别在mRNA和蛋白水平上检测LRIG3的表达。结果重组质粒成功转化感受态大肠杆菌,经SalⅠ酶切琼脂糖凝胶电泳分析,结果表明寡核苷酸成功插入到预计位点,经测序鉴定,序列完全正确。G418筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil2-LRIG3-shRNA组细胞LRIG3 mRNA和蛋白表达明显低于转染pGenesil2-negative-shRNA组。结论成功构建针对LRIG3基因的特异性shRNA真核表达载体,转染细胞后可抑制LRIG3基因表达,为进一步研究其基因功能奠定了基础。     

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1基因特异性RNA干扰表达载体的构建、鉴定和稳定株筛选

背景：有研究表明富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,LRIG1)基因在神经胶质瘤细胞中呈低表达,LRIG1基因过表达后对神经胶质瘤细胞的 LRIG1 mRNA和蛋白表达均明显增强和抑制其生物学行为,但却很少有研究从阻断LRIG1基因的表达的角度进行论证。 目的：构建针对LRIG1基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人脑胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响。 方法：根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1和LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negative shRNA。合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列。用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15细胞的筛选浓度。将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株。Western blot检测LRIG1蛋白的表达。 结果与结论：构建的重组pGenesil2-LRIG1- shRNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明其序列插入正确。转染pGenesil2- LRIG1-shRNA1(LRIG11)细胞和pGenesil2- LRIG1-shRNA2(LRIG12)细胞LRIG1蛋白表达水平较阴性对照组pGenesil2-negative shRNA分别下降47.9%(P < 0.01)和32.8% (P > 0.05)。结果证实,实验成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体pGenesil2-LRIG1-shRNA1,其转染GL15细胞后可抑制LRIG1的表达。     

MDR1基因及P—gp在脑胶质瘤中定量表达的研究

目的检测脑胶质瘤中多药耐药基因ＭＤＲ１、ｍＲＮＡ和膜糖蛋白Ｐ－ｇｐ相对含量，确定胶质瘤的化疗敏感性。方法免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）。结果在非化疗组和短期化疗组ＭＤＲ１ｍＲＮＡ含量及Ｐ－ｇｐ表达无显著差别，但长期化疗组明显高于前两组。结论推测ＭＤＲ１基因过度表达可能是胶质瘤继发耐药的主要原因。Ｐ－ｇｐ的表达程度与ＭＤＲ１ｍＲＮＡ含量相关     

PCNA反义脱氧寡核苷酸体外抑制BT325细胞增殖的实验研究

目的 观察增殖细胞核抗原(PCNA)基因反义脱氧寡核苷酸对人多形性胶质母细胞瘤细胞增殖的影响。方法 采用人工合成的PCNA反义和正义脱氧寡核苷酸经阳离子脂质体包裹后转染人多形性胶质母细胞瘤细胞BT325。用MTT比色法检测转染后瘤细胞的生长抑制率;~3H-TdR法检测细胞DNA合成速率;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR检测PCNA mRNA表达;免疫组化方法检测PCNA蛋白表达水平。结果 PCNA反义寡核苷酸可明显抑制BT325细胞的生长;明显减慢其DNA合成速率,阻滞细胞由GO/G1期→S期,PCNA mRNA及其蛋白质表达也同时受到抑制。抑制效应在转染后12h即出现,24h达到高峰,48h后逐渐减弱。抑制作用随反义寡核苷酸浓度的升高而增强,0.8μM PCNA反义寡核苷酸的细胞生长抑制率达84.6％。同样浓度的正义寡核苷酸和脂质体则无明显的细胞生长抑制作用。结论 PCNA反义寡核苷酸在体外能明显抑制人脑多形性胶质母细胞瘤细胞BT325生长、DNA合成、mRNA和PCNA蛋白表达。PCNA基因可望成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

p16基因抑制脑胶质瘤细胞恶性增殖并诱导细胞凋亡

目的：探索p16基因在脑胶质瘤发生过程中的作用及其与脑胶质瘤细胞凋亡的关系。方法：采用脂质体,磷酸钙＋DMSO休克转染的方法,分别将外源野生型p16基因导入胶质瘤细胞株U251,SWO,观察p16基因短暂转染与长期稳定转染对胶质瘤细胞的作用,并筛选阳性克隆。同时以空载体质粒pCDNA3为对照,免疫组化,Northern杂交检测p16基因表达,对转染后细胞生长的抑制,细胞周期,凋亡及裸鼠致瘤能力的变化进行分析,结果：外源p16基因的高水平表达显著抑制了胶质瘤U251,SWO细胞的生长,克隆形成率减少,肿瘤细胞发生了G1期阻滞,p16基因短暂转染可诱导胶质瘤细胞凋亡,而长期稳定转染无明显的凋亡诱导作用。结论：外源野生型p16基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖并诱导细胞凋亡,肿瘤细胞的异质性特点与p16基因转染后的“自然选择”作用可能是p16基因长期稳定转染无明显凋亡诱导作用的主要机制。     

RNA干扰技术联合抑制AKT1和COX-2表达对U251胶质瘤细胞增殖的影响

目的 探讨应用RNA干扰(RNAi)技术抑制U251恶性胶质瘤细胞株AKT1和COX-2表达后,在体外对U251细胞增殖的抑制作用.方法 构建靶向AKT1和COX-2的RNAi重组腺病毒表达载体(rAd-A+C)转染至U251细胞.应用Realtime PCR检测AKT1和COX-2 mRNA水平的变化;应用Western blot检测AKT1和COX-2蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析;应用MTr法和流式细胞术评价肿瘤细胞的增殖活性.结果 rAd-A+C可显著抑制U251细胞AKT1和COX-2的表达;与对照组和无义序列处理组(rAd-HK)比较,Western blot分析结果显示下游相关因子PCNA、Cyclin D1表达下降,而p53表达上调;细胞周期分析结果表明rAd-A+C处理组进入S期的细胞数较对照组减少了7.0%～7.8%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示rAd-A+C处理组细胞生长抑制率＞58%.结论 靶向AKT1和COX-2的RNAi技术可显著抑制U251细胞AKT1和COX-2表达,在体外对U251细胞增殖活性产生明显抑制作用.因此,RNAi重组腺病毒表达载体介导的基因治疗可成为胶质瘤靶向治疗的新策略.     

Gli1 is a potential target for alleviating multidrug resistance of gliomas

Although chemotherapy plays an important role in combined treatment of human gliomas, it fails to bring about satisfactory outcomes in a number of patients. One of the major obstacles in this treatment is the development of multidrug resistance (MDR) during treatment. Regulation of MDR in the context of gliomas is poorly understood, and clinical efforts to inhibit it have not been fruitful. Activation of the Hedgehog (HH) pathway has been shown to contribute to the growth, maintenance and relapse of various cancers. As data were not available on the role of Gli1 expression in glioma progression, we analyzed the correlation between Gli1 expression and tumor recurrence after chemotherapy in 60 glioma samples. The effects of inhibiting or activating the HH pathway on sensitizing or rendering glioma cell lines resistant to VCR, VP16, CDDP and ACNU, which are widely used in clinical chemotherapy, were determined. Additionally, the impact of the HH pathway on the expressions of MDR1, MRP1, MVP, MGMT, Bcl-2 and Survivin genes was determined. Our results indicate that overexpression of Gli1 is correlated with glioma recurrence after chemotherapy. We further show that the HH pathway activity can promote clonogenic survival of glioma cell lines in chemotherapy. Additionally, we found that blocking the HH pathway enhanced cytotoxicity of chemotherapeutic agents in glioma cells, through down-regulating the expressions of MDR1, MRP1, MVP, MGMT, Bcl-2 and Survivin genes. Taken together, these results suggest that Gli1 plays a dominant role in chemoresistance of glioma cells, and that suppression of Gli1 expression might be a valid therapeutic option for overcoming MDR and for increasing the success of chemotherapy.     

锌指蛋白A20 RNAi载体的构建及筛选

目的我们前期的实验结果显示A20 mRNA和蛋白在人脑胶质瘤组织及细胞系（U251、U87、BT325）中高表达，本研究拟构建A20RNAi载体，并检测其对U251细胞A20表达的抑制作用。方法构建三种针对人A20基因的真核干涉表达载体，以脂质体法将其分别转染人脑胶质瘤细胞系U251，以RT-PCR、蛋白印迹法检测各干涉载体对U251细胞中A20mRNA和蛋白表达的抑制作用。结果成功构建三种针对A20基因的RNAi载体，经RT-PCR、蛋白印迹检测筛选出对A20基因干涉效果最佳的载体，命名为pSilencer3．1-A20R1。结论成功构建A20基因干涉载体，为进一步探讨A20与脑胶质瘤恶性增殖、血管形成以及抗凋亡的关系奠定实验基础。     

RNA干涉CD44基因抑制脑胶质瘤细胞U251的增殖与侵袭性研究

目的通过合成靶向分化抗原簇44(CD44)基因的siRNA片段,下调CD44在脑胶质瘤细胞U251中的表达,揭示其在胶质瘤增殖、迁移和侵袭中所起的作用。方法根据CD44基因序列设计并合成的siRNA片段转染U251细胞,利用荧光实时定量(qRT-PCR)检测细胞中CD44基因mRNA水平的变化;蛋白印迹实验(Western blot)检测CD44基因蛋白水平的变化;四甲基偶氮唑蓝染色(methyhhiazolyl tetrazolium,MTT)法检测U251细胞增殖;单细胞划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验检测U251细胞的迁移与侵袭能力变化。结果体外合成的CD44-siRNA能有效抑制U251细胞中CD44基因在mRNA水平与蛋白水平的表达(P0.05),并抑制细胞的增殖(P0.05)和迁移侵袭能力(P0.05)。结论 CD44-siRNA能够有效抑制U251脑胶质瘤细胞的增殖及其迁移侵袭力,为以CD44为靶点的肿瘤基因治疗奠定了基础。     

质粒介导外源性微小RNA干扰PTTG1表达抑制恶性人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭

目的 观察垂体瘤转化基因1(PTTG1)在恶性人脑胶质瘤U251细胞增殖和侵袭中的作用.方法 设计并合成2对靶向PTTG1 mRNA的寡核苷酸片段,将其连接pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体构建表达微小RNA真核载体MIR-1、MIR-2;将连接产物转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定;脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,同时设转染阴性对照序列的阴性对照组(转染Neg组)和空白组;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)分析PTTG1 mRNA抑制效牢:Western印迹测定PTTG1蛋白的表达量改变:MTT法检测U251细胞增殖的改变:Matrigel侵袭实验检测U251细胞侵袭力的改变.结果 转染后,转染MIR-2组PTTG1 mRNA较空白组和转染Neg组下降为87.6%,PTTG1蛋白表达明显少于其他组:转染MIR-2组U251细胞不同时间点生长抑制率为10.7%～34.7%;Matrigel侵袭实验结果 示MIR-2组穿过人工基底膜U251细胞数减少.相对百分率为12.3%±1.0%,明显低于空白组(24.7%±1.4%)和转染Neg组(24.0%±2.0%),差异有统计学意义(P＜0.05).结论人脑胶质瘤U251细胞的PTTG1表达可被质粒导入的外源性微小RNA有效抑制,进而抑制细胞增殖,逆转恶性胶质瘤U251细胞侵袭、浸润.     

Potential role of drug transporters in the pathogenesis of medically intractable epilepsy

Summary:  The pathogenesis underlying pharmacoresistance in epilepsy is unclear. One of the candidate mechanisms that has attracted growing interest is the limitation of antiepileptic drug (AED) access to the seizure focus by a range of efflux transporters, the prototype of which is P-glycoprotein (P-gp). P-gp is encoded by the multidrug resistance ( MDR1 or ABCB1 ) gene. Predominantly expressed in organs with excretory functions and at blood–tissue barriers, P-gp is thought to act as a physiologic defense by extruding xenobiotics from mammalian cells and affording protection of sensitive organs. The high level of P-gp in the cerebrovascular endothelium is believed to contribute to the functionality of the blood–brain barrier. Overexpression of P-gp causes multidrug resistance in certain cancers. It has been hypothesized that overexpression of P-gp and other efflux transporters in the cerebrovascular endothelium, in the region of the epileptic focus, also may lead to drug resistance in epilepsy. This hypothesis is supported by the findings of elevated expression of efflux transporters in epileptic foci in patients with drug-resistant epilepsy, induction of expression by seizures in animal models, and experimental evidence that some commonly used AEDs are substrates. Conflicting reports suggest a possible association between variants of the MDR1 gene and medical intractability in epilepsy. Further studies to delineate the exact role, if any, of P-gp and other efflux transporters in drug-resistant epilepsy are warranted.