人工组织神经移植物对大鼠陈旧性坐骨神经缺损(60天)的修复作用

目的 观察人工组织神经移植物对陈旧性大鼠坐骨神经缺损的修复作用.方法 切除成年SD大鼠部分左侧坐骨神经,饲养60d形成陈旧性坐骨神经缺损后,以人工组织神经移植物修复缺损,同时设自体神经修复和不修复两对照组.修复术后3个月做神经-肌复合电位、腓肠肌湿重及再生神经形态学检测.结果 人工组织神经移植物修复组实验侧的运动神经传导速度、腓肠肌湿重、移植物远侧再生神经有髓神经纤维髓鞘厚度等结果与自体神经修复组相似.不修复对照组则未记录到神经-肌复合电位,未观察到再生神经纤维结构,腓肠肌湿重明显小于人工组织神经移植组和自体神经移植组.结论 人工组织神经移植物在一定程度上能修复缺损60d的大鼠坐骨神经.     

人工组织神经移植物桥接修复缺损一月的大鼠坐骨神经

目的:用人工组织神经移植物桥接缺损1个月的大鼠坐骨神经,观察神经再生以及靶肌肉神经再支配的相关情况。方法:切除成年SD大鼠坐骨神经一段,造成1个月的神经缺损模型,用人工组织神经移植物进行桥接修复,3个月后进行神经及靶肌肉的观察。结果:术后3个月人工组织神经移植物组的复合肌动作电位、再生神经及腓肠肌的形态等和自体神经组接近,两组均明显优于缺损组。结论:人工组织神经移植物能在一定程度上修复缺损1个月的大鼠坐骨神经。     

大鼠坐骨神经缺损半个月后人工组织神经移植物修复的实验研究

为了观察人工组织神经移植物对大鼠坐骨神经非新鲜损伤的修复作用。我们在成年SD大鼠左侧股中部切除部分坐骨神经制造神经缺损模型。15d后,实验组(9只)用人工组织神经移植物修复神经缺损,自体神经修复作为阳性对照(6只),保持神经缺损为阴性对照(6只)。第二次手术后3个月,电生理学、形态学结果显示实验组的再生神经虽略差于自体对照组,但明显优于缺损对照组,腓肠肌的萎缩形态学指标变化则较接近自体对照组。实验结果表明人工组织神经移植物对已缺损15d的大鼠周围神经具有较好修复作用。     

静脉套接引导面神经定向再生实验研究

自体静脉套接或神经原位移植修复大鼠面神经短隙缺损，术后３个月应用ＨＲＰ逆行追踪法研究了周围器官与中枢核团联系的变化，结果表明３ｍｍ静脉管与３ｍｍ神经移植体一样引导再生轴突通过修复区，与神经移植体相比，３ｍｍ静脉管能促使面神经再生轴突定向再生，射体定位关系恢复胞体增大是其支配更大范围靶肌的代偿表现。     

无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建组织工程人工神经修复坐骨神经缺损

背景:作者前期已经成功将无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建组织工程人工神经,并证明可以促进周围神经再生。目的:构建组织工程人工神经,观察和验证桥接大鼠坐骨神经缺损后的神经功能恢复情况。方法:成年雄性SD大鼠60只构建大鼠坐骨神经15mm缺损模型。随机分成3组,每组20只。桥接大鼠坐骨神经缺损,实验组采用组织工程人工神经,空白对照组采用无细胞组织工程神经支架,自体神经对照组采用自体神经移植。桥接后12周通过大体观察、胫骨前肌湿质量、组织学等方法分析坐骨神经组织学及功能恢复情况。结果与结论:桥接术后12周:实验组大鼠肢体可以支撑着地,钳夹大鼠手术侧足底皮肤出现逃避反射,足底皮肤s-100蛋白染色呈阳性反应。实验组与自体神经移植组胫骨前肌湿质量比差异无显著性意义(P0.05)。实验组辣根过氧化物酶逆行示踪实验显示脊髓、后根神经节均可见数量不等的辣根过氧化物酶标记阳性细胞。实验组移植物与自体神经移植组有髓神经纤维数、髓鞘厚度、神经组织面积比较差异无显著性意义。实验结果验证了无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建组织工程人工神经修复大鼠坐骨神经缺损,可以促进神经组织学的修复重建和功能的恢复。     

几丁糖与聚乳酸合成生物材料修复周围神经缺损

背景：单纯几丁糖材料制成的神经导管机械强度较差,易于塌陷,不利于再生神经的生长。 目的：观察几丁糖与聚乳酸复合物修复大鼠周围神经缺损的可行性。 方法：取30只SD大鼠,制作单侧坐骨神经缺损模型,随机均分为3组,分别采用自体神经、硅胶导管及几丁糖与聚乳酸复合导管修复神经缺损,修复后12周,观察桥接神经外观、表面粘连情况及有无神经瘤生成等,检测大鼠神经传导速度、动作电位波幅及潜伏期,苏木精-伊红染色观察坐骨神经桥接物中段神经再生轴突数量及再生神经横截面积,称量大鼠完整小腿三头肌湿质量。 结果与结论：修复后12周,3组再生神经均通过5 mm神经缺损间隙,硅胶管组形成神经瘤,其余两组均未出现神经瘤;自体神经组再生神经直径大于几丁糖-聚乳酸组、硅胶管组(P < 0.05),几丁糖-聚乳酸组再生神经直径大于硅胶管组(P < 0.05);几丁糖-聚乳酸组、自体神经组可见排列整齐的高密度再生轴突,再生轴突数量多于硅胶管组(P < 0.05),且神经传导速度、动作电位波幅、小腿三头肌湿质量显著大于硅胶管组(P < 0.05),潜伏期低于硅胶管组(P < 0.05)。表明几丁糖-聚乳酸复合导管可促进缺损周围神经的再生。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

无细胞神经支架复合骨髓间充质干细胞构建组织工程人工神经修复坐骨神经缺损

背景：作者已经成功制备了无细胞神经移植物,并且复合骨髓间充质干细胞构建组织工程人工神经桥接大鼠坐骨神经缺损。 目的：无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建组织工程人工神经修复大鼠坐骨神经缺损后运动功能的恢复。 方法：成年雄性SD大鼠构建大鼠坐骨神经15 mm缺损模型,分别应用组织工程人工神经、组织工程神经支架或自行神经桥接坐骨神经缺损。桥接后20周再生神经电生理学测定,手术侧胫骨前肌湿质量、腓肠肌组织学及透视电镜分析。 结果与结论：桥接20周后,组织工程人工神经与自体神经移植组胫骨前肌湿质量比较,差异无显著性意义(P > 0.05),神经干传导速度为(30.56±2.15)m/s。结果提示,无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建的组织工程人工神经桥接大鼠坐骨神经缺损后,可以促进再生神经运动功能的恢复。     

脱细胞异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损促进神经-肌结构重建和功能恢复的实验研究

目的 探讨脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损对神经-肌结构重建和功能恢复的作用。方法用脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经10mm缺损;称量术后12周、24周实验组手术侧胫骨前肌湿重,并与对照组术侧该肌湿重进行比较;用电生理学方法检测再生神经传导速度及其对胫骨前肌的再支配作用;用AChE和AChE结合镀银染色观察胫骨前肌内神经和运动终板的再生。结果 术后12周、24周实验组胫骨前肌湿重与对照组相比无显差异;再生神经传导速度与对照组相比,也无显差异;术后12周肌内见有AChE阳性反应的运动终板;24周运动终板AChE阳性反应加深,并整齐地排列于胫骨前肌的中上部形成终板带,经结合镀银染色后可见再生的神经束及其发出的分支与运动终板相连;肌电显示再生神经已支配胫骨前肌的运动。结论 脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损具有促进神经一肌结构重建和运动功能恢复的作用。     

脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察脱细胞处理的同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的作用。方法 用组织工程学方法制备的大鼠同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损，并对再生神经进行电生理学功能测试，光镜、电镜观察移植物内的再生神经，并进行统计分析。结果 术后13周内，动物未见炎症及排斥反应。用脱细胞处理的同种异体神经移植物修复神经缺损，再生神经的传导功能、纤维数量、轴突直径、有髓纤维占有的面积与自体神经移植对照及计量学上统计分析均无显著性差异。结论 脱细胞处理的同种异体神经移植物具有良好的组织相容性，它对缺损的坐骨神经再生有促进作用。     

辣根过氧化物酶逆行示踪评价无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞对坐骨神经缺损大鼠运动神经元的作用

背景:作者前期将无细胞神经移植物与骨髓间充质干细胞复合培养,成功构建了组织工程人工神经。目的:应用辣根过氧化物酶(HRP)神经逆行示踪技术对无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建的神经移植复合体桥接大鼠坐骨神经缺损后运动神经元的保护作用进行评价。方法:成年清洁级健康雄性SD大鼠,随机分成3组:①实验组:采用复合骨髓间充质干细胞的无细胞神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损。②空白对照组:采用无细胞神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损。③自体神经对照组:采用自体神经移植桥接大鼠坐骨神经缺损。术后12周应用辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术对脊髓前角运动神经元的再生进行评价。结果与结论:术后12周脊髓前角运动神经元再生评价结果显示:实验组优于无细胞神经移植物组,而与自体神经移植物组相比差异无显著性意义。证实无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建组织工程人工神经修复大鼠坐骨神经缺损,对大鼠脊髓运动神经元具有保护作用,可能达到与自体神经移植相似的效果。     

复合他克莫司聚乳酸-乙醇酸缓释导管修复大鼠胫神经缺损

背景：虽然单纯聚乳酸-乙醇酸导管修复大鼠神经缺损可部分恢复大鼠神经功能,但神经直径、再生纤维数量、髓鞘成熟度及功能恢复上均较自体神经移植差。 目的：观察复合他克莫司的聚乳酸-乙醇酸缓释导管修复大鼠胫神经缺损的可行性。 方法：制作SD大鼠右侧胫神经缺损模型,随机分为3组,分别植入自体胫神经、单纯聚乳酸-乙醇酸导管及复合他克莫司的聚乳酸-乙醇酸缓释导管修复。植入后3,6,12周行坐骨神经功能指数检查、电生理检查、组织学观测、腓肠肌湿质量测量。 结果与结论：植入后第6,12周复合他克莫司的聚乳酸-乙醇酸缓释导管组、自体胫神经组坐骨神经功能指数检查、电生理检查、组织学观测、腓肠肌湿质量测量结果优于单纯聚乳酸-乙醇酸导管组(P < 0.05),自体胫神经组、复合他克莫司的聚乳酸-乙醇酸缓释导管组比较差异无显著性意义。说明复合他克莫司的聚乳酸-乙醇酸缓释导管桥接修复大鼠胫神经缺损可明显促进断端神经的再生,在晚期功能恢复上取得接近自体神经移植的效果。 关键词：聚乳酸-乙醇酸;他克莫司;神经导管;大鼠;坐骨神经 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.12.003     

Collagen filaments as a scaffold for nerve regeneration

This article describes repair of peripheral nerve defect using collagen filaments instead of tubes. Many tube-shaped nerve guides induce regeneration of severed peripheral nerve axons within a limited distance. Substantial regeneration of nerve axons has not been reported without a tubular conduit. Here we show the regeneration of peripheral nerve axons along filaments of collagen without a tube. Cables of collagen filaments were grafted to repair 20-mm defects of rat sciatic nerves. Nerve autografts and collagen tubes were grafted as controls. The mean number and the mean fiber diameter of regenerated myelinated axons were approximately 4800 and 3.3 microm in the distal end of the nerve autograft at 8 weeks postoperatively while in the distal end of the collagen-filaments nerve guide, they were approximately 5500 and 2.3 microm. Collagen tubes failed to bridge the nerve defect. Histologic studies suggest that nerve axons regenerated substantially along the collagen filaments.     

PNGF导管复合骨髓间充质干细胞修复大鼠12 mm坐骨神经缺损

目的　观察RGD多肽接枝聚（乳酸-羟基乙酸-L-赖氨酸）/聚乳酸/β-磷酸三钙/神经生长因子（PRGD/PDLLA/β-TCP/NGF,PNGF）缓释导管复合骨髓间充质干细胞(Bone marrow derived mesenchymal stem cells, BMSCs)构建组织工程化人工神经,修复大鼠12 mm坐骨神经缺损的效果。  方法    雄性Wistar大鼠30只, 随机分为3组,每组10只,左后肢制作12 mm坐骨神经缺损模型,分别行单纯PNGF导管桥接（A）、PNGF导管复合BMSCs桥接（B）、自体神经移植（C）,所有大鼠左侧为实验侧,右侧为正常自身对照侧。术后3个月行大体观察、坐骨神经功能指数、电生理检测、小腿三头肌湿重恢复率测量、新生神经及靶肌肉组织学观察等检测坐骨神经功能恢复情况。  结果　术后3个月取材时见导管管壁变薄,表面血管化良好,管内有再生神经通过,直径较正常神经细。坐骨神经功能指数的检测结果显示PNGF导管复合BMSCs高于单纯PNGF导管组（P＜0.05）,PNGF导管复合BMSCs组神经传导速度恢复率、小腿三头肌湿重恢复率、有髓神经纤维数量和直径均优于单纯PNGF导管组（P＜0.01）,取得与自体神经移植组相似的效果。  结论　PNGF缓释导管复合BMSCs桥接修复大鼠坐骨神经缺损, 能够有效促进神经再生, 效果接近自体神经移植。     

Chitosan/polyglycolic acid nerve grafts for axon regeneration from prolonged axotomized neurons to chronically denervated segments

Peripheral nerve regeneration for long-term delayed injuries is usually unsatisfied. Here we attempted to use a chitosan/polyglycolic acid (PGA) artificial nerve graft to bridge a long-term delayed 10-mm defect in SD rats based on the previous studies on the graft used for immediate repair of 30-mm-long dog sciatic nerve defects and for clinical treatment of a 35-mm-long median nerve defect at elbow of a human patient. In this study, for experimental groups, the rat sciatic nerve had been transected leaving a 10-mm defect, which was maintained for 3 or 6 months before implantation with the chitosan/PGA artificial nerve graft. The animals non-grafted or grafted with autograft served as negative or positive control group. In experiment groups, nerve regeneration with functional recovery was achieved as measured by electrophysiological and histological techniques, although differences in the quantity and the quality of the regenerated nerve were observed between the 3- and 6-month delayed subgroups. The results showed that: (1) a few denervated Schwann cells survived and sustained their ability to myelinate axons at least 6 months, and (2) the atrophic denervated muscle could be reinnervated by regenerated axons through new muscle-nerve connections. These observations provide the possibility of guiding regenerated axons from survived axotomized neurons to distal nerve stump by the chitosan/PGA artificial nerve graft.     

Use of a newly developed artificial nerve conduit to assist peripheral nerve regeneration across a long gap in dogs

There is now considerable evidence that peripheral nerves have the potential to regenerate if an appropriate microenvironment is provided. However, there are only a few reports of the successful use of artificial nerve conduits to repair major nerve defects more than 30 mm in length. In this study, we examined nerve regeneration across a long gap in the dog peroneal nerve using a novel artificial nerve conduit developed by our group. The conduit consists of a polyglycolic acid (PGA) collagen tube filled with laminin coated collagen fibers. In 12 dogs, the nerve conduit was implanted across an 80 mm gap in the left peroneal nerve. Three months after surgery, compound muscle action potentials (CMAPs) and somatosensory evoked potentials (SEPs) were detected. Evaluation of locomotor function revealed obvious limping for up to 3 months, but no marked difficulty in walking by 6 months. Microscopic observation of the regenerated nerve segment at 12 months showed numerous myelinated nerve fibers, which were smaller in diameter and enclosed in a thinner myelin sheath than normal axons. These results suggest that our artificial nerve conduit has potential usefulness in enhancing peripheral nerve regeneration, even across large gaps.     

合成可生物降解神经导管修复损伤周围神经：生物相容性良好

背景：临床对周围神经损伤进行修复治疗的时候,可以利用自体神经进行治疗或者利用不同材质的神经导管进行治疗。 目的：探索合成可生物降解材料神经导管在周围神经损伤修复中的应用效果。 方法：48只新西兰大白兔,随机等分为3组,自体神经移植组、硅胶导管组和可降解神经导管组。各组动物切除10 mm坐骨神经,构建坐骨神经缺损动物模型,并分别利用自体神经、硅胶导管以及可降解神经导管进行坐骨神经修复。 结果与结论：造模后3周,硅胶导管组兔运动神经传导效果、小腿三头肌肌肉湿质量恢复率比自体神经移植组差,但可降解神经导管组兔运动神经传导效果、小腿三头肌肌肉湿质量恢复率与自体神经移植组接近。造模后12周时,自体神经移植组中存在大量呈均匀排列的有髓神经纤维,可降解神经导管组中可见大量分布不均匀的再生有髓神经纤维,而硅胶导管组中存在少量呈不均匀排列的髓神经纤维。表明合成可生物降解材料神经导管在周围神经损伤修复中可以获得与自体神经较为接近的良好效果。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤可提高小鼠同种异体坐骨神经移植效率

文题释义： 细胞自噬：指细胞在受到创伤、饥饿、缺氧、感染等应激状态下的一种自我保护机制,这一过程可以无选择性地发生于所有真核细胞中,真核细胞通过自噬作用清除老化的细胞器和蛋白,以此来维持细胞生长发育的平衡。自噬过程主要的诱发因素是饥饿,即细胞营养物质的缺乏,此外也可通过一些感染、损伤、特定的蛋白如热休克蛋白、细胞因子等选择性地引发。 华勒氏变性：是指周围神经损伤后,残留的轴突及髓鞘结构迅速发生退化、崩解、吸收的过程。这一复杂过程有多种细胞因子及炎症细胞参与,是周围神经损伤后最重要的病理变化过程之一,影响损伤后续的修复再生。 背景：近年最新研究表明,华勒氏变性的发生与许旺细胞的自噬活动密切相关,对许旺细胞自噬活动进行调控,可以显著影响华勒氏变性的发生发展,从而改变后续的轴突再生及髓鞘化过程。 目的：在同种异体神经移植中对移植片段的细胞自噬过程进行抑制,观察是否影响移植后的修复效率。 方法：获取8只雌性C57BL/6J小鼠(购自北京维通利华)坐骨神经片段16条,分2组,分别于含自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤的培养基及普通培养基中处理72 h。取16只雌性C57BL/6J小鼠,建立左侧坐骨神经缺损模型,实验组(n=8)植入含自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤培养基处理过的坐骨神经片段,对照组(n=8)植入普通培养基处理的坐骨神经片段,术后2,4,6,8周,记录坐骨神经指数;术后8周取再生坐骨神经段,分别进行苏木精-伊红染色、免疫荧光染色、甲苯胺蓝染色、透射电镜观察等。动物实验通过北京协和医学院动物伦理委员会批准。 结果与结论：①实验组术后8周的坐骨神经指数高于对照组(P < 0.05),其余时间点两组间比较差异无显著性意义(P > 0.05);②苏木精-伊红染色显示,实验组神经组织完整,对照组神经组织可见大面积空洞;③免疫荧光染色显示,实验组可见较完整的神经束结构,对照组未见完整的神经束结构;④甲苯胺蓝染色显示,实验组可见有髓神经纤维和部分再生无髓神经纤维,对照组仅见少量有髓神经纤维与新生无髓轴突;⑤透射电镜显示,实验组髓鞘厚度及有髓纤维直径均大于对照组(P < 0.05);⑥结果表明应用3-甲基腺嘌呤处理移植前神经片段,可抑制许旺细胞自噬,有助于保留移植物髓鞘结构完整性,促进轴突再生及功能的恢复。 ORCID: 0000-0002-6259-2668(徐筑秋) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

Morphological analysis of peripheral nerve regenerated by means of vein grafts filled with fresh skeletal muscle

Clinical data have shown that a vein segment filled with fresh skeletal muscle can be considered a good autologous grafting conduit for the repair of peripheral nerve lesions. In this study, the long-term morphological organization of rat sciatic nerve fibers regenerated along a muscle-vein-combined graft conduit is further analysed by light and electron microscopy. Regenerated nerve fibers were organized into fascicles of various sizes that were clearly delimited by perineurial-like shells made by long and thin cytoplasmic processes of perineurial-like bipolar cells and by densely packed collagen fibrils. Grafted skeletal muscle fibers were still detectable among nerve fiber fascicles. However, in spite of the persistence of skeletal muscle along the graft, regenerated nerve fibers showed a good morphological pattern of regeneration, providing further evidence that the muscle-vein-combined grafting technique represents an effective surgical alternative to the classical fresh nerve autograft for the repair of peripheral nerve defects.     

Morphological analysis of peripheral nerve regenerated by means of vein grafts filled with fresh skeletal muscle

Clinical data have shown that a vein segment filled with fresh skeletal muscle can be considered a good autologous grafting conduit for the repair of peripheral nerve lesions. In this study, the long-term morphological organization of rat sciatic nerve fibers regenerated along a muscle-vein-combined graft conduit is further analysed by light and electron microscopy. Regenerated nerve fibers were organized into fascicles of various sizes that were clearly delimited by perineurial-like shells made by long and thin cytoplasmic processes of perineurial-like bipolar cells and by densely packed collagen fibrils. Grafted skeletal muscle fibers were still detectable among nerve fiber fascicles. However, in spite of the persistence of skeletal muscle along the graft, regenerated nerve fibers showed a good morphological pattern of regeneration, providing further evidence that the muscle-vein-combined grafting technique represents an effective surgical alternative to the classical fresh nerve autograft for the repair of peripheral nerve defects.