SDF-1α/CXCR4轴通过诱导胰腺癌上皮-间充质转化促进肿瘤迁移和侵袭

目的:探讨SDF-1α/CXCR4轴对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:应用RT-qPCR检测4种胰腺癌细胞株CXCR4 mRNA的表达。Transwell实验检测外源性SDF-1α及其受体CXCR4靶向抑制剂AMD3100对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。MTS法检测外源性SDF-1α及AMD3100对胰腺癌细胞活力的影响。Western blot法检测外源性SDF-1α及AMD3100对胰腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)相关标志物表达的影响。结果:(1) 4种胰腺癌细胞株均不同程度地表达CXCR4 mRNA,其中PANC-1细胞株表达量最高。(2)外源性SDF-1α可增强PANC-1细胞的迁移和侵袭能力,该作用可被AMD3100所阻断。(3)外源性SDF-1α处理PANC-1细胞72 h可增强细胞活力,该作用可被AMD3100阻断。(4)外源性SDF-1α通过上调SNAIL和TWIST促使PANC-1细胞发生EMT,该作用可被AMD3100所阻断。结论:SDF-1/CXCR4轴通过促进胰腺癌细胞发生EMT而促进肿瘤迁移和侵袭。     

SDF-1α/CXCR7促进BMSCs向缺血/再灌注大鼠海马CA1区迁移

目的:研究基质细胞衍生因子-1α(stromal cell derived-factor-1α,SDF-1α)及其受体CXCR7在介导骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)向大鼠脑缺血区迁移的作用。方法:BMSCs的原代培养、四血管阻断脑缺血模型制备大鼠脑缺血模型、侧脑室移植组(培养基干预组、BMSCs组和CXCR7抗体预处理BMSCs组)、免疫组织化学和免疫荧光组织化学染色方法。结果:免疫组织化学染色结果显示:在各组大鼠海马CA1区细胞内可见不同程度的呈黄色或棕黄色颗粒的SDF-1α免疫阳性产物,主要表达在细胞胞质中,CXCR7蛋白则主要表达在胞核和胞膜中;与假手术组比较,BMSCs组和CXCR7抗体预处理BMSCs组SDF-1α和CXCR7的表达均升高(P<0.05)。免疫荧光组织化学结果显示:侧脑室注射BMSCs并移植48 h后,BMSCs组、CXCR7抗体预处理BMSCs组海马CA1区均有不同程度荧光标记的阳性细胞;与BMSCs组比较,CXCR7抗体预处理BMSCs组阳性细胞数降低(P<0.05)。结论:缺血/再灌注损伤后,促进了SDF-1α及CXCR7阳性产物的表达;同时SDF-1α/CXCR7能够促进BMSCs向损伤区域的迁移。     

白藜芦醇对新生大鼠神经元缺血缺氧时SDF-1/CXCR4通路抗凋亡作用的调控机制

目的:探究白藜芦醇(RSV)对缺血缺氧诱导的新生大鼠脑神经元凋亡及基质细胞衍生因子1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)通路的作用和机制。方法:体外培养新生大鼠皮质神经元,给予氧糖剥夺(OGD)模拟新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)模型。首先将细胞随机分成4组:对照(control)组、HIE组、HIE+RSV低剂量(10μmol/L)组和HIE+RSV高剂量(50μmol/L)组。OGD处理2 h后加入相应剂量的RSV继续培养24 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白及SDF-1和CXCR4的蛋白表达水平,real-time PCR检测SDF-1和CXCR4的mRNA表达水平。然后使用CXCR4抑制剂AMD3100与RSV共同处理OGO损伤的细胞24h,检测SDF-1/CXCR4通路阻断后RSV对细胞凋亡和凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果:RSV能够抑制OGD诱导的神经元凋亡,下调活化的caspase-3和细胞色素C的水平,上调Bcl-2/Bax比值(P0.05)。与对照组相比,OGD导致SDF-1和CXCR4表达增加;与模型组相比,RSV能够上调SDF-1和CXCR4的表达(P0.05);使用AMD3100阻断SDF-1/CXCR4通路减弱了RSV抑制OGD诱导的细胞凋亡的作用。结论:RSV可抑制缺血缺氧诱导的新生大鼠神经元凋亡,其机制可能是通过上调SDF-1/CXCR4通路发挥作用的。     

黄芪甲苷对EPCs中SDF-1α/CXCR4的调控作用

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)对内皮祖细胞(EPCs)中CXC趋化因子受体4(CXCR4)和基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的调控作用及其作用机制。方法:体外培养大鼠骨髓源性EPCs,观察应用AS-IV及CXCR4的特异性阻断剂AMD3100后EPCs的增殖、黏附、迁移、凋亡和管状结构形成能力的变化,并分析AS-IV对EPCs中SDF-1α及CXCR4的mRNA和蛋白,以及p-CXCR4蛋白水平变化的影响。结果:AS-IV可以显著提升EPCs的增殖、黏附、迁移和管状结构形成能力,减轻EPCs的凋亡,上调EPCs中SDF-1α和CXCR4的mRNA和蛋白及p-CXCR4蛋白的水平(P0.05);AMD3100可以阻断AS-IV对CXCR4的mRNA和蛋白及p-CXCR4蛋白水平的上调作用,但不影响AS-IV对SDF-1α的mRNA和蛋白水平的上调作用。结论:AS-IV可能通过调控EPCs中SDF-1α/CXCR4的表达而增强EPCs的生物学作用。     

新风胶囊含药血清通过抑制VEGFA/SDF-1/CXCR4通路缓解强直性脊柱炎患者血小板活化的机制

目的通过体外实验研究新风胶囊(XFC)对VEGFA/SDF-1/CXCR4通路的影响,探讨其改善强直性脊柱炎(AS)患者血小板活化的的机制。方法分离外周血单核细胞(PBMC),分为正常组(NC)、模型组(MC)、新风胶囊组(XFC)、AMD3100组,MTT法检测XFC最佳浓度,免疫荧光法检测CD62p、CD40L、PDGFA的表达,ELISA法检测TNF-ɑ、IL-1β、IL-4、IL-10、VEGFA及VEGFR的表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测SDF-1、CXCR4、VEGFA mRNA的表达,Western blot法检测SDF-1、CXCR4、VEGFA、VEGFR蛋白的表达。结果中剂量XFC在24 h时对细胞抑制作用最强。与正常组相比,模型组CD62p、CD40L、PDGFA、IL-1β、TNF-α、VEGFA、VEGFR、SDF-1、CXCR4表达均升高,IL-4、IL-10降低(P0.05,P0.01)。与模型组相比,XFC组CD62p、CD40L、PDGFA、IL-1β、TNF-α、VEGFA、VEGFR、SDF-1、CXCR4表达均降低,IL-4、IL-10升高(P0.05,P0.01)。结论 XFC具有类AMD3100样作用,通过抑制VEGFA/SDF-1/CXCR4通路的表达,下调IL-1β、TNF-α,上调IL-4、IL-10,调节免疫炎症反应,从而降低AS患者血小板活化。     

CXCR4+骨髓间充质干细胞迁移与氧化型低密度脂蛋白致内皮细胞损伤

目的 研究内皮细胞分泌的基质细胞衍生因子1(SDF-1)是否影响CXCR4+干细胞迁移功能.方法 从骨髓中分离出CXCR4+的骨髓间充质干细胞(CXCR4+BMSC),用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用MTT法检测HUVEC细胞增殖,用RT-PCR检测SDF-1α mRNA的表达,用ELISA检测SDF-1α蛋白表达,用Transwell(R)检测CXCR4+BMSC迁移.结果 ox-LDL的刺激影响HUVEC增殖,并引起SDF-1α mRNA和蛋白表达升高;含SDF-1α培养基上清能促进CXCR4+BMSC迁移,这种迁移可被CXCR4抗体抑制.结论 CXCR4+BMSC可通过SDF-1α/CXCR4轴向引起内皮细胞发生迁移运动.     

病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ N端肽调控SDF-1α/CXCR4诱导趋化机制

目的:评价病毒巨噬细胞炎性蛋白ⅡN端肽(NT21MP)是否通过干扰SDF-1α/CXCR4信号抑制人乳腺癌细胞株SKBR3细胞的趋化作用。方法:以RT-PCR和免疫组化检测SKBR3和MCF-7两种人乳腺癌细胞中CXCR4的表达;用细胞转移实验检测在NT21MP存在或缺乏的情况下SDF-1α诱导SKBR3细胞的趋化作用;以Fluo3/AM为细胞内游离钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜测定NT21MP对SDF-1α诱导SKBR3细胞内游离钙浓度的影响;Western blot分析ERK1/2和FAK蛋白的磷酸化水平变化。结果:相对于MCF-7细胞,SKBR3细胞中CXCR4蛋白表达水平较高;经SDF-1α处理后,SKBR3的迁移能力提高,CXCR4抑制剂AMD3100可有效抑制SKBR3细胞的迁移,细胞经NT21MP预处理后,可剂量依赖性地抑制SKBR3细胞的迁移(P<0.05);NT21MP也可抑制由SDF-1α诱导的细胞内Ca2+峰值(P<0.05),而钙离子浓度升高是SKBR3细胞迁移的重要信号之一;另外,相对于阴性对照组,NT21MP也可下调SDF-1α诱导的SKBR3中信号蛋白ERK1/2和FAK的磷酸化水平(P<0.05)。结论:NT21MP可抑制SDF-1α诱导的SK-BR3细胞的迁移,可能与其上游钙离子释放和ERK1/2及FAK磷酸化阻断信号有关。     

AMD3100干预调节性T细胞迁移机制研究

CXCR4+细胞在CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞亚群中占有一定的比例。趋化因子CXCL12与细胞表面的特异性受体CXCR4相互作用,调节这些细胞的迁移和归巢等生理过程。AMD3100是一种人工合成的大环类拮抗剂,可特异性拮抗CXCR4。本研究采用磁珠亲和细胞分选术纯化BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞,并采用transwell共培养系统,研究AMD3100对调节性T细胞迁移的影响。研究发现,AMD3100以剂量依赖性模式抑制CXCR4+CD4+CD25+T细胞从transwell培养系统的上室迁移至下室,采用中和抗体阻断CXCR4可观察到相似效应。当AMD3100终浓度为2.0μg/ml时,迁移到下室的CXCR4+细胞占总数的2.2%,显著低于磷酸盐缓冲液对照组(36.2%)(P<0.01)。此外,CD4+CD25+细胞24h迁移率也显著下降(AMD3100处理组和磷酸盐缓冲液对照组分别为3.1%和35.5%,P<0.01)。提示AMD3100可特异性抑制CXCR4+CD4+CD25+细胞迁移。由于CXCR4是CXCL12的特异性受体,这一效应提示AMD3100可削弱CXCL12的作用。此外,由于AMD3100处理后可使CD4+CD25+细胞24h迁移率下降,提示这种拮抗剂有可能短时间内削弱调节性T细胞的功能。     

过表达CXCR4/CXCR7影响人脐带间充质干细胞迁移和增殖

目的探讨SDF-1/CXCR4及SDF-1/CXCR7对人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)迁移和增殖活性的影响。方法用Ad-EASY腺病毒质粒系统分别构建表达CXCR4和CXCR7的重组腺病毒,感染h UC-MSCs后用FCM分别检测细胞膜的CXCR4和CXCR7受体的表达,Transwell法检测细胞迁移,MTT检测h UC-MSCs增殖活性,以及在H2O2诱导细胞毒性作用对细胞存活的影响。结果成功构建表达人源的CXCR4和CXCR7的重组腺病毒,感染后h UC-MSCs细胞膜上的CXCR4/CXCR7受体阳性表达率分别达到93.7%和78.5%(P0.01),高表达CXCR4和CXCR7均显著增强SDF-1诱导的h UC-MSCs细胞迁移,其中CXCR7效应稍弱;高表达CXCR7而不是CXCR4显著提高SDF-1诱导的h UC-MSCs增殖活性和氧化应激状态下的细胞存活率(P0.05)。结论 CXCR4/CXCR7均参与介导了SDF-1诱导的h UC-MSCs细胞迁移作用,同时CXCR7还介导了SDF-1诱导的h UC-MSCs增殖和H2O2处理损伤的保护。     

白介素-24通过干扰CXCL12/CXCR4轴抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的 探究白介素-24(IL-24)靶向CXCL12/CXCR4轴抑制宫颈癌细胞迁移及侵袭的作用机制。方法 体外培养正常子宫颈上皮细胞HcerEpic及宫颈癌细胞系Hela、Siha、Caski、C-33A,应用RT-PCR与Western blot检测上述细胞中CXCR4的mRNA和蛋白表达水平。将Hela细胞分为Control组(细胞正常培养,无任何特殊处理)、CXCL12组(细胞用100 ng/mL CXCL12处理)、CXCL12+LV-NC组(细胞感染LV-NC后使用100 ng/mL CXCL12处理)、CXCL12+LV-IL-24组(细胞感染LV-IL-24后使用100 ng/mL CXCL12处理)、CXCL12+AMD3100组(联合使用100 ng/mL CXCL12及1μg/mL AMD3100处理细胞)、CXCL12+AMD3100+LV-IL-24组(细胞经LV-IL-24感染后联合100 ng/mL CXCL12与1μg/mL AMD3100处理)。划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测各组宫颈癌细胞的迁移、侵袭能力;Western blot检测CX...     

SDF-1/CXCR4轴通过调控间充质干细胞定向分化修复缺氧缺血性脑损伤

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(stromalcell-derivedfactor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCchemokinereceptor4,CXCR4)轴调控间充质干细胞定向分化、修复缺氧缺血性脑损伤的作用。方法:大鼠间充质干细胞(ratmesenchymalstemcells,rMSCs)经缺氧培养不同时点(0h、6h、12h、24h、48h、72h)或SDF-1α(10μg/L)孵育后,采用RT-PCR、Westernblotting和流式细胞术检测其表面CXCR4表达的变化;建立大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,运用RT-PCR和Westernblotting检测造模后不同时点(1d、3d、5d、7d、14d、21d)大鼠脑部海马组织中SDF-1αmRNA转录和蛋白表达的改变情况;用AMD3100(CXCR4拮抗剂)拮抗rMSCs表面CXCR4后,免疫细胞化学和Westernblotting检测rMSCs诱导向神经细胞分化中神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)等神经细胞特异性标志物的阳性率及表达变化情况。结果:低氧培养6h及12h的rMSCsCXCR4mRNA及蛋白表达水平均较常氧培养组明显增加(P<0.01),10μg/LSDF-1α孵育后rMSCs的CXCR4表达水平明显增加(P<0.01);缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α蛋白表达显著增加(P<0.01);5mg/LAMD3100处理后的rMSCs在向神经细胞诱导分化中NSE和GFAP蛋白的表达明显减少。结论:微小剂量的SDF-1α可诱导低氧培养的rMSCs表面CXCR4的表达,而在缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α表达增加,从而使SDF-1/CXCR4轴的生物学效应得以增强;CXCR4拮抗的rMSCs在分化中神经细胞特异性标志物NSE和GFAP的表达降低,表明SDF-1/CXCR4轴在rMSCs定向神经分化修复缺血缺氧脑损伤中具有重要的调控作用。     

SDF-1/CXCR4增强骨髓间质干细胞的造血支持作用

目的探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXCR4在骨髓间质干细胞(MSCs)支持CD34 造血干/祖细胞(HSPCs)扩增中的作用。方法在长期培养基(LTC)中,以大鼠骨髓MSCs作为饲养层体外扩增骨髓CD34 细胞,每周分别加入SDF-1、SDF-1抗体或CXCR4抗体至5周。计算CD34 细胞数和集落形成细胞(CFC)数,以评价造血支持功能。为评估SDF-1/CXCR4对CD34 细胞增殖周期的影响,进行了杀伤试验以计算增殖指数。流式细胞术检测MSCs和CD34 细胞中SDF-1与CXCR4的表达;ELISA检测MSCs和CD34 细胞培养基中SDF-1的含量。结果CD34 细胞数、CFC数和增殖指数在加入SDF-1后明显增加(P<0.01),加入SDF-1抗体或CXCR4抗体后明显减少(分别为P<0.05,P<0.01)。CD34 细胞表面表达CXCR4,MSCs则不表达;MSCs细胞内表达SDF-1,而CD34 细胞不表达。在MSCs培养基中检测到SDF-1,在CD34 细胞培养基中未发现。结论SDF-1/CXCR4在骨髓MSCs支持HSPCs扩增中起重要作用。     

丙泊酚对乳腺癌MCF-7细胞CXCR4/CXCR7表达和体外迁移的影响

目的:探讨丙泊酚对人乳腺癌MCF-7细胞CXC趋化因子受体(CXCR)4/CXCR7的表达及其对MCF-7细胞体外迁移能力的影响。方法:人乳腺癌MCF-7细胞随机分为对照组、脂肪乳组、丙泊酚3 mg/L组和丙泊酚8 mg/L组。用划痕实验和Transwell小室趋化实验测定细胞的迁移能力;采用RT-qPCR法测MCF-7细胞CXCR4/CXCR7的mRNA表达水平;采用Western blot法测定MCF-7细胞CXCR4/CXCR7的蛋白表达水平;用MTT检测细胞的活力。结果:与对照组比较,3.8 mg/L丙泊酚组24 h划痕愈合率降低(P0.05),趋化指数降低(P0.05);Western blot结果显示3.8 mg/L丙泊酚组的CXCR4/CXCR7蛋白表达水平降低(P0.05),但mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学显著性;此外,MTT实验显示各组细胞活力的差异无统计学显著性。结论:丙泊酚可抑制CXCR4/CXCR7蛋白表达水平,降低体外培养的乳腺癌MCF-7细胞的迁移能力。     

SDF-1/CXCR4信号通路参与骨形态发生蛋白2在诱导骨髓间充质干细胞迁移的作用北大核心

背景：SDF-1/CXCR-4生物轴对多种细胞的趋化能力,使其在多种组织的再生过程中发挥着重要的调控作用,但其是否参与介导骨形态发生蛋白2在骨修复过程中骨髓间充质干细胞归巢目前尚不清楚。目的：探索SDF-1/CXCR4信号通路在骨形态发生蛋白2诱导小鼠骨髓间充质干细胞迁移中的作用。方法：取对数生长期骨髓间充质干细胞,分别以0,50,100,200μg/L SDF-1,0,50,100,200μg/L骨形态发生蛋白2以及50μg/L AMD3100进行干预,诱导细胞迁移并Transwell检测。结果与结论：骨髓间充质干细胞的迁移数量与SDF-1和骨形态发生蛋白2密切相关,并且与SDF-1和骨形态发生蛋白2的浓度成正比,当联合使用SDF-1和骨形态发生蛋白2时,细胞迁移数较单独使用时增多,当质量浓度为200μg/L时,骨髓间充质干细胞迁移数量最多,并呈＂巢穴＂样分布。阻断剂AMD3100明显抑制骨形态发生蛋白2诱导骨髓间充质干细胞迁移,但当增加骨形态发生蛋白2浓度达到一定量时,骨髓间充质干细胞迁移数随着骨形态发生蛋白2浓度的增加而增多。提示SDF-1/CXCR4信号通路参与骨形态发生蛋白2诱导骨髓间充质干细胞的迁移。     

IL-24对乳腺癌细胞CXCR4表达及肿瘤细胞侵袭、迁移及凋亡能力的影响北大核心CSCD

目的:探究过表达IL-24对乳腺癌细胞CXCR4表达及肿瘤细胞侵袭、迁移及凋亡的影响与机制。方法:免疫组织化学染色(IHC)检测乳腺癌与癌旁正常乳腺组织CXCR4与其配体CXCL12表达,并分析其相关性;Western blot检测CXCR4在人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-453和MDA-MB-231中的表达;采用慢病毒稳转技术在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中过表达IL-24,免疫荧光显微镜、RT-PCR和ELISA检测感染效率;将细胞分为5组:LV-IL-24组(感染过表达IL-24慢病毒)、LV-NC组(感染阴性对照慢病毒)、AMD3100组(采用CXCR4/CXCL12轴阻滞剂AMD3100进行培养)、LV-IL-24+AMD3100组(采用AMD3100进行培养的感染过表达IL-24慢病毒的细胞)、阴性对照组(正常培养的MDAMB-231细胞);Transwell、划痕实验和Annexin V-FITC细胞凋亡实验检测上述各组细胞侵袭、迁移及凋亡;Western blot检测各组细胞CXCR4、AKT与mTOR蛋白磷酸化水平及凋亡相关蛋白Bax与cleaved-Caspase-3表达。结果:CXCR4与CXCL12在乳腺癌组织中的表达均显著高于正常乳腺组织,且二者表达呈正相关;与MCF-10A细胞相比,CXCR4在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-453及MDA-MB-231中表达明显增加(P<0.05),以MDA-MB-231最为显著(P<0.01)。转染过表达IL-24的慢病毒后,MDA-MB-231细胞IL-24 mRNA与蛋白表达均显著增加(P<0.05);与阴性对照组相比,LV-IL-24组、AMD3100组和LV-IL-24+AMD3100组细胞侵袭、迁移能力均显著降低(P<0.05),而凋亡率明显提高(P<0.05),LV-IL-24+AMD3100组变化最为显著(P<0.01);Western blot结果显示,与阴性对照组相比,LV-IL-24组、AMD3100组和LV-IL-24+AMD3100组细胞CXCR4、AKT与mTOR蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),而凋亡相关蛋白Bax与cleaved-Caspase-3表达明显增加(P<0.05),LV-IL-24+AMD3100组变化最为显著(P<0.01)。结论:乳腺癌细胞中过表达IL-24可抑制CXCR4表达,通过下调PI3K/AKT/mTOR信号通路降低肿瘤细胞侵袭、迁移能力,促进其凋亡,联合使用CXCR4/CXCL12阻滞剂AMD3100可显著提高IL-24的上述抑癌效应。     

SDF-1/CXCR4轴活化诱导内皮祖细胞增殖、迁移及管型形成

目的观察趋化因子SDF-1促内皮祖细胞增殖、迁移和管型形成的作用。方法用免疫细胞化学检测内皮祖细胞SDF-1和CXCR4表达;用MTT法、Millicell趋化法及Matrigel体外三维成型法分别检测不同浓度的趋化因子SDF-1促内皮祖细胞增殖、迁移和管型形成。并应用CXCR4受体抑制剂AMD3100观察上述指标的变化。结果免疫细胞化学显示内皮祖细胞表达SDF-1和CXCR4蛋白。SDF-1可促进内皮祖细胞的增殖、迁移和体外小管样结构的形成。AMD3100可抑制SDF-1的诱导作用。结论SDF-1/CXCR4轴在内皮祖细胞参与血管新生中可能发挥重要作用。     

低浓度H_2O_2预处理增强骨髓间充质干细胞活力

目的探讨过氧化氢(H_2O_2)预处理增强骨髓间充质干细胞(BMSCs)存活和抗凋亡能力的作用及机制。方法分离、培养、鉴定小鼠BMSCs。观察不同低浓度H_2O_2处理BMSCs 48 h后细胞的增殖,以及SDF-1及其受体CXCR4、CXCR7的表达;其次,观察经50μmol/L H_2O_2预处理BMSCs 12 h后,再经500μmol/L H_2O_2作用,或同时加入CXCR7抗体作用48 h,用Hoechst33342染核观察BMSCs凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、CXCR4、CXCR7和信号通路Akt/m TOR关键蛋白的表达。结果 25、50μmol/L H_2O_2能有效促进BMSCs增殖;50、100μmol/L H_2O_2能显著上调SDF-1、CXCR4、CXCR7表达;50μmol/L H_2O_2预处理干细胞能显著增强迁移能力,而CXCR7抗体能阻断此效应;50μmol/L H_2O_2预处理干细胞可显著抑制500μmol/L H_2O_2引起的损伤,凋亡细胞核由30.97%±3.71%降至16.23%±2.51%(P0.01),但仍然显著高于对照组(4.67%±2.37%)(P0.01);同样,预处理能显著下调Bax、上调Bcl-2表达(P0.05),上调Akt/m TOR通路关键蛋白磷酸化,CXCR7抗体则阻断此效应。结论H_2O_2预处理通过CXCR7受体活化Akt/m TOR信号通路增强干细胞存活和抗凋亡能力。     

CXCR4在溃疡性结肠炎小鼠蛋白C系统变化中的作用

目的:蛋白C系统(PCS)是血管内皮功能重要的介导者,而微血管内皮细胞是参与溃疡性结肠炎(UC)最重要的非免疫细胞,本研究旨在探讨趋化因子受体CXCR4在UC病理过程中PCS变化的作用。方法:动物实验分为对照组和UC模型组,进行大体积分、组织病理学积分及溃疡指数评估;测定各组结肠组织和血浆中髓过氧化物酶(MPO)、环氧合酶-2(COX-2)、基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的mRNA水平及活性;检测各组结肠CXCR4、β-arrestin、p-JNK、内皮细胞蛋白C受体(EPCR)和血栓调节蛋白(TM)的水平及分布;观察蛋白C(PC)和蛋白S(PS)的活性。分离、培养、鉴定结肠微血管内皮细胞,分为对照组、SDF-1α组、CXCR4沉默组和CXCR4过表达组,观察各组细胞EPCR、TM、β-arrestin和p-JNK的蛋白水平,以及PC、PS和激活的蛋白C(APC)活性。结果:与对照组比,模型组小鼠大体积分、组织病理学积分及溃疡指数升高(P0.05)。结肠组织和血浆MPO、COX-2、SDF-1α和MCP-1 mRNA水平和活性显著升高(P0.01)。结肠组织CXCR4、β-arrestin和p-JNK的蛋白水平上调,EPCR表达下调,血浆PC和PS活性明显降低(P0.05或P0.01)。CXCR4过表达进一步加重SDF-1α对结肠黏膜微血管内皮细胞PCS的抑制,同时进一步升高β-arrestin和p-JNK的蛋白水平(P0.05)。结论:UC时PCS被抑制,CXCR4参与其中,其可能的机制是CXCR4在UC病理过程中介导趋化因子通过β-arrestin-JNK信号通路进一步影响血管内皮细胞功能,从而抑制PCS。     

SDF-1/CXCR4信号轴通过NF-κB通路诱导人退变髓核细胞凋亡

目的探讨趋化因子SDF-1/CXCR4信号轴对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的调控作用及其分子机制。方法将术中摘取的椎间盘标本根据Pfirrmann退变程度分为正常组和退变组。用免疫组织化学法、定量PCR和Western blot等检测SDF-1和CXCR4的表达。用退变椎间盘髓核原代细胞培养,取第3~5代的细胞给予10 ng/mL SDF-1刺激、CXCR4-siRNA转染及NF-κB特异性抑制剂PDTC(20μmol/L)等不同处理,Western blot和q-PCR验证转染效率和信号通路上靶蛋白(基因)的表达;Annexin V/PI检测细胞凋亡率;细胞免疫荧光检测NF-κB的重要基团P65的核转移情况。结果 SDF-1和CXCR4在退变椎间盘组织中表达显著升高(P0.05);SDF-1可以诱导退变髓核细胞的凋亡,但在CXCR4的表达受到沉默后,SDF-1的促凋亡作用被抑制(P0.05);加入SDF-1的诱导后,磷酸化P65的表达水平明显增高(P0.05),P65向核内移位;用PDTC抑制NF-κB活性后,SDF-1促凋亡作用明显减弱(P0.05)。结论 SDF-1/CXCR4信号轴促进髓核细胞凋亡的机制可能与Akt/NF-κB信号通路相关。     

趋化因子受体CXCR4在人肺癌高转移细胞株的表达和意义

目的：以人肺癌高、低转移细胞株95D、95C为研究对象，研究趋化因子受体CXCR4的表达及其在肿瘤细胞体外转移潜能中的作用和意义。方法：采用RT-PCR检测95D、95C细胞CXCR4 mRNA的表达情况；以PMA活化肿瘤细胞，研究CXCR4 mRNA表达水平与细胞活性状态的关系；应用钙离子内流实验验证其表达是否具有功能；通过趋化实验观察CXCR4特异性配件SDF-α和裸鼠组织匀浆液对95D细胞的趋化迁移作用；通过MTT法测定95D细胞对SDF-1α作用的增殖反应。结果：95D细胞功能性地高表达趋化因子受体CXCR4，且其表达水平与细胞活性状态有关；CXCR4特异性配件SDF-1α和裸鼠肺、淋巴结组织匀浆均可在体外趋化95D细胞的迁移，SDF-1α还可促进95D细胞的增殖。结论：95D细胞功能性高表达趋化因子受体CXCR4可能与人肺癌细胞株95D的体外高转移潜能有关。