哇巴因诱发大鼠心律失常作用靶点的研究

目的　观察哇巴因对大鼠心室肌细胞动作电位时程、钾通道的作用 ,探讨哇巴因诱发心律失常的作用机制 ,为寻找新的抗心律失常药物提供依据。方法　应用全细胞膜片钳技术记录哇巴因对大鼠心肌细胞动作电位时程 (APD)、内向整流钾电流 (Ik1 )、瞬时外向钾电流 (Ito)的作用。结果　①哇巴因 5μmol/L使大鼠心室肌细胞动作电位时程从给药前的 86 .3ms± 2 5 .2ms(APD90 ) ,缩短至 58.9ms± 2 0 .8ms(n =5 ,P <0 .0 1 ,给药 1 0min) ;②哇巴因 5μmol/L可增加大鼠心室肌细胞内向整流钾电流 ,使Ik1 从 - 1 868pA± 1 88pA增加到 - 2 393pA± 367pA(刺激电压 - 1 2 0mV ,n=1 0 ,P <0 .0 1 ) ;③哇巴因 5μmol/L可增加大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流 ,使Ito从 1 2 73pA± 31 8pA增加到 1 70 7pA± 486pA(刺激电压 +60mV ,n =5 ,P <0 .0 1 )。结论　哇巴因诱发室性心律失常可能与它缩短心室肌细胞动作电位时程有关 ,而Ito的增加使二期平台期缩短 ,Ik1 的增加使三期复极加快 ,均参与了动作电位时程缩短的过程。同时增加Ik1 将影响静息膜电位 ,可能使膜反应性增强     

高浓度姜黄素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响

目的研究高浓度姜黄素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响。方法采用急性酶解分离法获得大鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术记录Ito和Ik1,观察50μmol/L姜黄素对Ito和Ik1的影响。结果 50μm/L姜黄素对Ito和Ik1通道电流的抑制率分别是(84±11)%(P<0.05)和(59±8)%(P<0.01)。它使Ito和Ik1通道电流密度-电压曲线电流幅度减小,但不改变其整流特性。结论 50μmol/L姜黄素能明显抑制大鼠心室肌细胞Ito和Ik1电流,提示其可能存在心脏毒性作用。     

槲寄生黄酮苷对大鼠心室肌细胞钾离子通道的作用

目的观察槲寄生黄酮苷对大鼠心室肌细胞钾离子通道的作用,探讨槲寄生黄酮苷抗心律失常作用机制。方法应用全细胞膜片钳技术记录槲寄生黄酮苷对大鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流(IK1)、瞬时外向钾电流(Ito)的影响。结果应用50μg/ml和250μg/ml两种浓度的槲寄生黄酮苷分别使大鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流(IK1)在实验电压-120mV时从给药前(-26.23±9.52)pA/pF减少到(-20.82±7.88)pA/pF,(-18.11±7.89)pA/pF(n=7,P<0.05);使大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)在实验电压+50mV时,从给药前(26.14±6.67)pA/pF减少到(16.41±6.23)pA/pF,(13.25±3.78)pA/pF(n=4,P<0.05)。结论槲寄生黄酮苷抑制大鼠心室肌细胞IK1,Ito可能是其抗心律失常作用的一个机制。     

兔脑微血管与大动脉内皮细胞膜离子通道的比较

目的 :观察培养脑微血管内皮细胞电生理特点 .方法 :培养脑不同部位微血管内皮细胞 ,采用全细胞膜片钳技术 ,在高钾细胞内液和高钠细胞外液条件下观察细胞静息膜电位和电压依赖性电流特点 .结果 :兔脑干、小脑和大脑皮质的微血管内皮细胞静息膜电位分别为 (15± 12 ) ,(2 0± 8)和(31± 16 )mV ,其中脑干和大脑皮层的微血管内皮细胞静息膜电位间有显著性差异 .在本实验条件下 ,乙酰胆碱 (1～ 10 0μmol·L-1)对脑微血管内皮细胞膜电位没有明显影响 ,但可引起兔主动脉和肺动脉内皮细胞膜电位去极化 ,且被阿托品 (6μmol·L-1)抑制 .超极化步脉冲条件下可以记录到一内向性整流性电流 ,去极化条件下则记录到一具有随时间激活的外向性电流 ,以上两种电流均对钾通道阻断剂TEA敏感 ;部分细胞中还可以记录到一种快速激活和快速失活且对钳制电压敏感的电流 .兔脑微血管内皮细胞电流特点与牛主动脉内皮细胞(以内向整流性电流为主 )和兔肺动脉平滑肌细胞 (以外向整流性电流为主 )的电生理特点明显不同 .结论 :兔脑不同部位微血管内皮细胞静息膜电位不同 ;可以记录到 3种类型的钾通道电流 ,其特点与牛大血管内皮细胞和兔平滑肌细胞电流明显不同     

葛根素对大鼠心肌细胞离子通道的影响

目的: 探讨葛根素对大鼠心肌细胞离子通道的影响及其抗心律失常的电生理学机制. 方法: 采用Langendoff胶原酶灌注加浸泡法分离大鼠心室肌细胞,据不同细胞外灌流液将实验分5组:对照组;葛根素1.2, 2.4, 4.8和9.6 mmol/L组. 分别用膜片钳全细胞记录各组内向整流钾通道(Ik1)、瞬时外向钾通道(Ito)的电流. 结果: 在500 ms去极化的实验条件下,葛根素使不同去极化水平时的Ik1瞬间电流及稳态电流均明显下降. 随着药物剂量的增加,这种抑制作用也增强. 结论: 葛根素对大鼠心肌细胞离子通道的作用主要是抑制Ik1,且抑制呈浓度依赖性.     

参松养心胶囊干粉提取液对兔肺静脉肌袖心肌细胞动作电位和部分离子通道的影响

目的 探讨参松养心胶囊干粉提取液对兔肺静脉肌袖心肌细胞(PVC)动作电位和某些离子通道的影响,对治疗心房颤动的可能机制.方法 采用全细胞膜片钳技术的电流钳记录动作电位和电压钳制记录兔肺静脉肌袖心肌细胞动作电位、L-型钙离子通道电流(LCa-L)、内向整流钾电流(IK1)和瞬时外向钾电流(ITo),并观察不同浓度参松养心干粉提取液对动作电位和各离子通道电流的影响.结果 参松养心干粉提取液明显延长PVC动作电位时程(APD),APD90基础状态下(187±49)ms,在浓度5 mg/ml时延长至(286±76)ms(P<0.05),在浓度10 mg/ml时延长至(312±82)ms(P<0.05);参松养心胶囊干粉提取液对PVC的LCa-L、IK1,和ITo电流呈浓度依赖性抑制作用.结论 参松养心胶囊干粉通过对肺静脉多个离子通道的作用,可能对心房颤动起到治疗作用.     

异丙酚对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜外向钾通道电流的影响

目的 :研究异丙酚对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜外向钾通道电流的影响。方法 :用酶消化法获得急性分离的人肠系膜小动脉平滑肌细胞 ,采用全细胞膜片钳技术记录外向钾通道电流。结果 :在刺激电压 (Vt)- 70mV～ +70mV条件下 ,引发一外向钾电流 ,该电流可被 3mmol/LTEA阻滞 6 1%± 5 % ,异丙酚 (4 3μmol/L、86 μmol/L)分别增加外向钾通道电流幅值达 (13± 3) %和 (36± 7) %。 结论 :异丙酚增强人肠系膜小动脉平滑肌细胞外向钾通道电流 ,提示钾通道开放增加可能介导异丙酚引发的血管扩张。     

吡格列酮保护乳鼠心肌细胞与ATP敏感性钾通道表达的关系

目的探讨吡格列酮对缺氧复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡和心肌细胞ATP敏感性钾通道亚单位表达的影响。方法原代培养的sD乳鼠心肌细胞随机分为6组：溶媒组、缺氧复氧组、0．1μmol／L吡格列酮组、1．0μmol／L吡格列酮组、2．0μmol／L吡格列酮组、2．0μmol／L吡格列酮＋GW9662组（GW9662组）,药物预处理24h后建立缺氧复氧模型,利用膜联蛋白-v与溴化丙啶双染法检测心肌细胞凋亡,利用RT—PCR及Western—blot技术检测心肌细胞ATP敏感性钾通道亚单位的表达。结果0．1、1．0、2．0μmol／L吡格列酮组心肌细胞凋亡率与缺氧复氧组及GW9662组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;0．1、1．0、2．0μmol／L吡格列酮组心肌细胞线粒体ATP敏感性钾通道（mitoKATP）亚单位Kir6．1mRNA及蛋白的表达与缺氧复氧组及GW9662组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,各组细胞膜ATP敏感性钾通道（sarcKATP）亚单位Kir6．2mRNA表达间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论吡格列酮抑制缺氧复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,此保护作用可能与激活PPARγ及上调mitoKATP通道亚单位表达有关,sarcKATP未参与这种保护过程。     

氯苄律定对豚鼠心肌细胞钾通道的抑制作用

氯苄律定是四氢小檗碱的衍生物，具有抗心律失常作用，常规电生理发现其延长ＡＰＤ５０及减少心肌钾的丢失，本文研究它对心肌钾通道的影响。采用膜片钳全细胞记录的方法，研究氯苄律定对豚鼠心肌钾离子通道的作用。氯苄律定在３μｍｏｌ／Ｌ，１０μｍｏｌ／Ｌ和３０μｍｏｌ／Ｌ抑制延迟整流钾电流分别为１５．７％±２．４％，３６％±３％，５９％±６％，同样浓度下对内向整流钾通道无明显抑制作用。氯苄律定抗心律失常作用与抑制延迟整流钾通道有关。     

老年SD大鼠前列腺上皮细胞膜钾离子通道变化及意义

目的探讨雄性SD大鼠前列腺上皮细胞膜钾离子通道电流的变化和对钾通道阻断剂的反应。方法分别取3个月龄成年和12个月龄的老年SD大鼠的背外侧叶前列腺组织,剪成1—2mm^3大小,经消化、培养、免疫组鉴别,将形态正常、贴壁良好的腺上皮细胞用全细胞膜片钳模式记录钾通道电流。结果成年和老年SD大鼠的前列腺上皮细胞膜＋80mV钾电流密度分别为（10．84±1．54）pA／pF vs（18．48±1．7）pA／pF（n=20,P〈0．01）;钙激活型钾通道抑制剂（KCa通道）四乙胺（TEA）对老年大鼠峰电流阻断从19．1±2．9到7．2±3．2,KCa电流被抑制约63％;成年大鼠为9．5±1．8到5．4±3．1,KCa通道电流被抑制约44％。电压依赖型钾通道抑制剂4-AP（四氨基吡啶）对大鼠前列腺上皮细胞膜钾电流有显著阻断效应。结论老年大鼠的前列腺上皮细胞膜钾通道电流比成年大鼠显著增强,同时老年大鼠KCa通道电流对TEA更敏感。由此结果可推论老年大鼠的前列腺上皮细胞分泌功能是降低的。     

褪黑激素对新生大鼠海马神经元延迟整流钾电流的影响

目的 用膜片钳技术观察褪黑激素对电压门控性延迟整流钾电流(Ik)的影响,探讨褪黑激素在中枢神经系统的作用机制及其生物学意义.方法 选择7～12 d原代培养的新生Wistar大鼠海马锥体神经元,用膜片钳电压钳全细胞记录模式观察Ik的基本电生理特点,并观察不同浓度褪黑激素,包括1、10、100 nmol/L、1、10、100 μmol/L和1 mmol/L对Ik的幅度及动力学特性的影响.结果 利用海马锥体神经元的钾电流对4-AP、TEA的敏感性及电生理特性的不同可分离出激活、失活缓慢,具有强烈外向整流特性的延迟整流钾电流.褪黑激素对海马锥体神经元Ik的影响是快速、可逆、呈电压依赖性的,但对其激活曲线没有影响.褪黑激素对Ik的作用具有浓度依赖性.1～100nmoI/L的褪黑激素可逐渐递增地增加Ik幅度;1～100 μmol/L褪黑激素对Ik的增加程度随浓度增加而增大,而1 mmol/L褪黑激素的增加程度却减小.结论 褪黑激素可逆地增强体外培养新生大鼠海马神经元的Ik电流,这或许参与了神经元损伤和记忆损害的某些环节.     

δ阿片受体激动剂对NGl08—15细胞延迟整流钾通道的双向调节作用

目的 观察δ阿片受体激动剂DPDPE对NGl08—15细胞膜上延迟整流钾通道的调节作用。方法 将NGl08—15细胞膜电位钳制在—90mV,给予时程为150ms的阶跃脉冲刺激,由—50mV逐渐增至 80mV,每次递增10mV,记录到一系列外向延迟整流钾电流,记录给予不同浓度S阿片受体激动剂DPDPE前后的钾电流变化,比较其作用与给药浓度的关系,同时观察阿片受体拮抗剂纳洛酮(NAL)和特异性δ阿片受体拮抗剂纳曲酮(NTI)对δ阿片受体激动剂DPDPE的阻断效应。结果 δ阿片受体激动剂DPDPE在高浓度(≥10^-6mo1/L)时,对钾通道产生兴奋性作用;而低浓度(≤10^-7mol/L)时,对延迟整流钾通道产生抑制作用,且作用均随着时间的延长而逐渐增强。结论 δ阿片受体激动剂DPDPE对延迟整流钾通道的作用具有双向调节作用。     

Possible function of outward potassium currents in isolated Deiters’cells of guinea pig cochlea

Objective To study potassium currents in isolated Deiters’ cells of guinea pig cochlea and explore possible function of potassium current in Deiters’ cell.Methods The whole cell patch clamp recording technique was used to study potassium currents of Deiters’ cells in normal external solution and solutions with different K(+) concentrations. We also studied the effects on reversal potentials and outward potassium currents. Results Isolated Deiters’ cells possess voltage dependent, outwardly rectifying ion channels, which are K(+) selective. 50mmol/L K(+) and 150mmol/L K(+) in external solution reduced I［K-max］ from (10.06±2.2)nA (n=13) in normal external solution to (6.43±1.67)nA (n=6, P&lt;0.05) and (5.49±1.33)nA (n=6, P&lt;0.05), respectively. While the amplitude of tailcurrents decreased from （468.76±61.76）pA in 5mmol K(+) external solution to （224.74±35.89）pA (P&lt;0.05) in 50mmol/L K(+) and to （-911.59±78.17）pA (P&lt;0.01) in 150mmol/L K(+) external solution. Conclusions Outwardly rectifying potassium in Deiters’ cells could buffer extracellular K(+) in the small space between Deiters’ cells and outer hair cells or neural fibers and participate in the diffusion of K(+) from endolymph to perilymph.     

一种有效记录人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法

目的：探讨一种有效记录人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法,使细胞内环境保持稳定,改善常规全细胞膜片钳破膜所造成的封接不稳定。方法：以人肠系膜动脉平滑肌细胞为研究对象,采用穿孔全细胞膜片钳技术,记录人肠系膜动脉平滑肌细胞上大电导钙激活钾通道（big-conductance Ca2＋-activated potassium channels,BKCa）宏观电流以及自发性瞬时外向电流（spontaneous transient outward currents,STOCs）。结果：采用这种穿孔全细胞膜片钳技术,能有效记录到人肠系膜动脉平滑肌细胞上BKCa和STOCs。结论：穿孔膜片钳技术是一种简便而有效的记录全细胞电流的实验方法,该方法的建立为今后更深入的研究提供实验基础。     

芪玄益心胶囊对糖尿病大鼠缺血心室肌细胞动作电位及瞬时外向钾电流的影响

[目的]探讨芪玄益心胶囊对糖尿病(DM)大鼠急性缺血心肌瞬时外向钾电流的影响,从细胞通道水平探讨该药的治疗机制。[方法]以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射致胰腺损伤合并舌下静脉注射垂体后叶素使冠状动脉收缩,建立DM急性心肌缺血动物模型,采用全细胞膜片钳技术,记录芪玄益心胶囊对单个大鼠心室肌细胞动作电位(AP)相关指标及对瞬时外向钾电流1(I_to1)的影响。[结果]芪玄益心胶囊高剂量组心室肌细胞动作电位相关指标、瞬时外向钾电流密度较模型组明显改善,同模型组比较具有显著意义(P<0.05)。[结论]芪玄益心胶囊能够加大I_to1的开放,并推测芪玄益心胶囊抗心肌缺血的作用与开放瞬时外向钾电流,改善动作电位,进而产生类似缺血预处理的心肌保护作用密切相关。     

ATP对大鼠三叉神经节神经元瞬时外向钾电流(IA)的快速作用

目的 通过大鼠三叉神经节(TG)神经元体外培养及全细胞膜片钳技术, 观察ATP对大鼠TG神经元上电压敏感性钾离子电流IA的调节及可能的机制。方法 雄性SD大鼠TG神经元急性分离,体外培养4 h后进行全细胞膜片钳记录。结果 在TG神经元上ATP可以诱导三种型式的电流, 即T型、S型和B型。ATP可以抑制T型神经元IA(P<0.05),这种作用可以被P2X3受体拮抗剂TNP-ATP拮抗, 在S型神经元上ATP对IA无作用。在ATP未能诱导出内向电流的TG神经元, ATP仍然对IA有抑制作用, 而且这一作用可以被P2Y受体的拮抗剂suramin拮抗。结论 ATP对分离培养的TG神经元上IA可以起到抑制作用, 这一作用可能通过P2X3受体或P2Y受体来完成, 但ATP对IA电流的作用机制目前尚不十分清楚。这一研究将为进一步阐明神经病理性痛的发生机制提供实验依据, 为临床治疗提供理论基础。     

肾上腺髓质素对脓毒性休克大鼠心肌细胞外向钾电流的影响

目的 研究肾上腺髓质素(ADM)对脓毒性休克大鼠心肌细胞外向钾电流的影响.方法 成年大鼠腹腔注射脂多糖(LPS,10 mg/kg)4 h后,分离心室肌细胞.用全细胞膜片钳的方法 记录瞬时外向钾电流(I_(to)),稳态钾电流(I_(ss))和ATP敏感钾电流(I_(K,ATP)).结果 LPS处理对I_(to)和I_(ss)无影响.休克心肌细胞I_(K,ATP)密度[(2.66 ± 0.56)pA/pF(n=12)]较正常心肌细胞值[(0.27 ± 0.08)pA/pF(n=14)]明显增加(P＜0.01).ADM受体拮抗剂ADM-(22-52)可使增加的I_(K,ATP)得到明显的恢复[(0.69 ± 0.21)pA/pF(n=11),P＜0.01 vs LPS 组].而ADM-(22-52)与100 μmol/L氨基胍联合处理几乎可完全取消I_(K,ATP)的增加.结论 脓毒性休克大鼠心肌细胞I_(K,ATP)被激活.ADM 与NO共同参与了脓毒性休克大鼠心肌细胞I_(K,ATP)的激活.     

甲基汞对豚鼠耳蜗外毛细胞外向钾电流的影响

目的：观察甲基汞对豚鼠耳蜗外毛细胞侧膜K+电流的影响,探讨甲基汞耳毒性的离子机制。 方法：采用全细胞膜片钳技术分别观察汞污染度为1/1000 LD₅₀ 、1/100 LD ₅₀、1/10 LD₅₀对外毛细胞Ca²⁺敏感外向I_K（Ca）电流的影响。 结果：汞中毒后I_K（Ca）幅值分别为（1.48±0.28）、（1.36±0.16） 和（1.22±0.13）nA,与正常对照组相比分别下降了8%、16%和25%（P<0.05）。 结论：甲基汞以浓度依赖方式抑制Ca2+敏感的外向K+电流,使I_K(Ca)幅值降低,最后导致听觉机能下降。这可能是甲基汞中毒的耳毒性机制之一。     

丹参素异丙酯对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜钙激活钾通道影响的研究

目的研究丹参素异丙酯[β-（3,4-二羟基苯基）-α-羟基丙酸异丙酯]对单个人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜上钙激活钾通道的影响。方法取急性酶分离的人肠系膜动脉平滑肌细胞,用膜片钳技术记录其全细胞电流,在全细胞记录模式下,观察不同浓度丹参素异丙酯对全细胞钙激活钾电流的影响。结果①比较含三种不同钙浓度电极内液所记录到的外向电流,发现电流密度随钙浓度增加而增加;②丹参素异丙酯采用两种浓度：5mol/L、10mol/L;用药后5min两组IKCa增幅改变值分别为（13±3）和（36±7）;③丹参素异丙酯使IKCaI-V曲线（I-V Curve）上移,用药后5min两组IKCa峰值电流密度增幅最大值分别为（19±2）和（40±3）。结论丹参素异丙酯具有激活钙激活通道,促进K＋外流的作用,且有浓度依赖性,浓度高者作用更为明显。其促进K＋外流的作用可能是其血管舒张的离子基础。