MDM2基因多态性与鲁西南汉族人群食管鳞癌风险关联

目的研究MDM2基因多态性在鲁西南汉族人群中的分布并分析其与食管鳞癌的相关性。方法采用聚合酶链反应一限制性内切酶片段长度多态性（FCR—RFLP）技术分析检测132食管鳞癌患者（病例组）和132非食管癌患者（对照组）MDM2SNP309的基因多态性,并比较不同基因型与食管鳞癌发病风险的关系。结果MDM2SNP309基因座位上突变等位基因频率在正常对照组和病例组分别为37．50％和45．45％,基因频率在两组间的分布无显著性差异（P〉0．05）;SNP309基因座中突变等位基因G的纯合子G／G基因型频率在对照组和病例组分别为10．61％和18．94％,频率差异具有统计学意义（P〈0．05）;MDM2SNP309的G／G基因型可增加食管鳞癌的发病风险（OR=2．27;95％CI：1．04～4．97）。结论MDM2基因SNP309位点的G／G基因型可能与鲁西南地区食管鳞癌的发病风险增高具有相关性。     

宁夏汉族人群细胞色素P4501B1 SNP rs1056836分布研究

目的研究细胞色素P450(cytochrome P450)1B1基因SNP rs1056836在宁夏地区正常汉族人群中的基因型频率、等位基因频率分布特征。方法应用等位基因特异性扩增(AS-PCR)及DNA测序法对410名宁夏汉族正常成人CYP1B1rs1056836C→G位点基因多态性的分布进行测定,并应用χ2检验比较宁夏汉族人群与我国其他地区汉族人群基因频率的分布情况。结果宁夏汉族人群CYP1B1SNP rs1056836的基因型频率分别为C/C31.9%,C/G54.9%,G/G13.2%。结论宁夏汉族CYP1B1SNP rs1056836分布频率与欧美及国内其他地区人群具有显著性差异(P<0.005),并且男女之间也存在显著性差异(P<0.005)。     

肿瘤坏死因子受体基因多态性与扩张型心肌病遗传易感性的关系

目的探讨肿瘤坏死因子受体(TNFR)基因多态性与扩张型心肌病(DCM)遗传易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测110例中国四川地区汉族DCM患者(DCM组)和110名健康对照者(对照组)TNFR基因2个单核苷酸多态性(SNP)位点的等位基因以及基因型频率,分析两位点多态性与DCM遗传易感性的关系。结果110例DCM患者中,TNFR2(+676)位点G/G纯合子基因型频率(10.9%)和G等位基因频率(43.6%)均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);TNFR1(-329)位点基因型以及等位基因频率与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05)。结论四川地区汉族人群中未发现TNFR1(-329)基因多态性与DCM易感性有关;TNFR2(+676)位点G等位基因可能与DCM的遗传易感性有关,TNFR2(+676)位点T/G多态由野生型的T转变为G,则其患DCM的风险可能会增加,G/G纯合子基因型个体较易患DCM。     

宁夏汉族群体Calpain-10基因SNP43、SNP19的分布特征

目的研究CAPN-10基因SNP43、SNP19在宁夏汉族群体中的基因型频率和等位基因频率分布特征。方法应用PCR-RFLP技术,对132例宁夏汉族人群CAPN-10基因SNP43、SNP19分布进行检测。结果宁夏汉族人群中CAPN-10 SNP43GG、GA、AA基因型频率分别为71.97%、24.24%和3.79%,G、A等位基因频率分别为84.09%和15.91%,GG基因型频率和G等位基因频率与北京、天津和云南汉族群体相近（P〉0.05）,低于辽宁、湖北和上海汉族群体,差异具有统计学意义（P〈0.01）。SNP19 11、12、22基因型频率分别为18.94%、43.18%和37.88%,1、2等位基因频率分别为40.53%和59.47%,11基因型频率和1等位基因频率与与北京、上海汉族群体相近,差异无统计学意义（P〉0.05）。与国外群体比较,中国人SNP43GG基因型频率和G等位基因频率低于亚洲的日本、韩国人群,高于欧洲高加索人及南美洲的智利和墨西哥人,差异具有统计学意义（P〈0.01）,不同国家人群SNP19位点11基因型频率和1等位基因频率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论不同种族和地域人群CAPN-10基因SNP43基因型频率和等位基因频率分布不同,具有其特有的群体遗传学特征。     

EGF G61A多态性与食管鳞状细胞癌的关联研究

目的 研究表皮生长因子基因( )G61A 多态性与食管鳞状细胞癌发生及其临床病理特征之间的关系.方法 采用聚合酶链反应- 限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测366 例食管鳞状细胞癌患者(病例组)和400 例健康体检者(对照组) 61位点基因型和等位基因频率,分析两者组间分布及其与肿瘤临床特点之间的关系.同时,运用ELISA 法检测病例组和对照组血清EGF 水平.结果 61位点GG 基因型和G 等位基因频率在病例组和对照组中分布分别为61.2%、51.0%和79.2%、73.3%,差异均有统计学意义(P＜0.05).GG 基因型患者易发生淋巴结转移(P＜0.05).病例组血清EGF水平显著高于对照组,在两组内均以GG 基因型个体血清EGF水平高(P＜0.05).结论 61 GG 基因型和G 等位基因可能与食管鳞状细胞癌相关,而且GG 基因型患者易发生淋巴结转移.     

Bax基因P53结合位点多态性与食管鳞癌易感性的关联研究

目的探讨Bax基因P53结合位点多态性与我国西南地区食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carci-noma,ESCC)发病的关联性。方法利用SNaPshot技术检测201例食管鳞癌病例组及183例健康对照的Bax基因rs1009316位点多态性的分布情况,分析不同基因型与食管鳞癌易感性的关联。结果食管鳞癌病例组和对照组中rs1009316的CC和CT/TT基因型频率分别为59.2%、40.8%和73.2%、26.8%,CT/TT相比CC增加食管鳞癌的发病风险(OR值为1.884,95%CI为1.224～2.901),T等位基因增加食管鳞癌的发病风险(OR值1.620,95%CI为1.103～2.379)。分层分析发现,无吸烟史群体中,T等位基因(OR值为1.858,95%CI为1.050～3.288)及CT/TT基因型(OR值为2.178,95%CI为1.143～4.147)分别增加食管鳞癌的发病风险。结论在中国西南地区人群中,Bax基因P53结合区域的多态性位点rs1009316是食管鳞癌的危险因素之一。     

可溶性环氧化物水解酶基因多态性与冠心病的相关性

目的：研究中国浙江籍汉族人群中可溶性环氧化物水解酶（EPHX2）基因rs2271001位点单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）与冠心病的相关性.方法：176例冠心病患者（至少1支冠状动脉血管内径狭窄≥50％）为冠心病组,选取同期179例冠脉造影正常者作为对照组.采用PCR和基因测序方法,检测rs2271001位点的SNP.结果：在rs2271001位点上检测到3种基因型,其基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律.冠心病组EPHX2基因rs2271001位点的AG、GG、AA基因型及G、A等位基因分布频率均高于对照组（均P＜0.05）.结论：EPHX2基因rs2271001位点A/G多态性与冠心病发病存在相关性,G等位基因可能是中国浙江籍汉族人群冠心病患者患病的危险等位基因.     

HPV血清学阳性协同ATM基因的变体增加饮酒人群中食管鳞状细胞癌的发病风险

目的：探讨毛细血管扩张性共济失调症突变（ATM）基因的多态性和人乳头瘤病毒16（HPV16）感染对于食管鳞状细胞癌发病风险的协同作用。方法对303例食管鳞状细胞癌患者和304例无癌对照者的外周血标本进行ATM基因分型和HPV16的血清学检测。ATM的单核苷酸多态性（SNP）位点（rs373759,rs189037）通过荧光定量Taq‐Man技术进行基因分型,HPV16的血清学状态通过酶联免疫吸附实验（ELISA）检测。危险因素与食管鳞状细胞癌发病风险的相关性采用非条件Logistic回归模型进行统计分析。结果在饮酒人群中,rs373759的基因型与食管鳞状细胞癌的发病风险存在明显的相关性（Ptrend＝0.006）,相比于CC型,CT型的发病风险提高了1.82倍（95％CI1.10,3.01）,TT型的发病风险提高了2.50倍（95％CI1.15,5.45）;相比于rs189037的GG基因型,rs189037AG/AA型人群中食管鳞状细胞癌的发病风险有轻度提高（OR值1.64;95％CI1.00,2.68）。HPV16血清学阳性是饮酒人群（OR值1.92;95％CI1.20,3.07）和吸烟人群（OR值1.96;95％CI1.26,3.50）中食管鳞状细胞癌的易感因素。rs373759的基因型和HPV16血清学状态对于食管鳞状细胞癌的发病风险有交互作用（PG×E＝0.009,OR值2.04;95％CI1.19,3.48）。相比于HPV16阴性且rs373759CC型的人群,HPV阴性且rs373759CT/TT型的人群发病风险增高（OR值2.43;95％CI1.25,4.72）,HPV阳性且rs373759CC型的人群发病风险进一步增高（OR值2.51;95％CI1.23,5.13）,HPV16阳性且rs373759CT/TT型的人群食管鳞状细胞癌发病风险增加了3.83倍（95％CI1.93,7.61）。结论HPV16血清学阳性协同ATMrs373759的突变基因型增加了饮酒人群中食管鳞状细胞癌的发病风险。     

宁夏汉族人群细胞色素P450181 SNP rs1056836分布研究

目的研究细胞色素P450（cytoehromeP450）181基因SNP rs 1056836在宁夏地区正常汉族人群中的基因型频率、等位基因频率分布特征。方法应用等位基因特异性扩增（AS—PCR）及DNA测序法对410名宁夏汉族正常成人CYP1B1rs 1056836C→G位点基因多态性的分布进行测定，并应用Χ^2检验比较宁夏汉族人群与我国其他地区汉族人群基因频率的分布情况。结果宁夏汉族人群CYP1B1SNP rs 1056836的基因型频率分别为G／C31．9％，C／G54．9％．G／G13．2％。结论宁夏汉族CYP1B1 SNP rs1056836分布频率与欧美及国内其他地区人群具有显著性差异（P〈0．005），并且男女之间也存在显著性差异（P〈0．005）。     

PCR-RFLP及HRM技术研究CYP19、COMT基因多态性与子宫内膜异位症和子宫腺肌病的关系

目的 探讨CYP19 240A/G、COMT 1947G/A位点基因多态性与滨州地区汉族妇女子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)及子宫腺肌病(adenomyosis,AM)发病的关系.方法 应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术和高分辨率溶解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术分别检测EMs、AM患者和对照组CYP19 240A/G、COMT 1947G/A位点基因多态性与EMs及AM发病的关系.结果 CYP19240A/G位点各基因型及等位基因分布频率在EMs组、AM组和对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),其中等位基因G突变EMs、AM发病风险增加,携带AG和GG基因型的患者EMs、AM发病风险增加.COMT 1947G/A位点各基因型及等位基因分布频率在EMs组、AM组和对照组相比无统计学差异(P＞0.05),携带A等位基因突变的基因型GA+ AA分别与野生型GG相比无统计学差异(P＞0.05),不能增加EMs及AM的发病风险.结论 滨州地区汉族妇女CYP19 240A/G基因多态性增加EMs和AM发病风险,COMT 1947G/A基因多态性与EMs和AM发病风险无关.     

BRM基因多态与食管鳞状细胞癌易感性的关联研究

目的:研究BRM-741位点和BRM-1321位点的插入/缺失多态与中国汉族人群食管鳞状细胞癌(ESCC)易感性的关系。方法:采用病例-对照研究,以聚合酶链反应-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,分析343例ESCC患者和362名性别、年龄等人口学特征与病例频数匹配的健康对照者的BRM-741以及BRM-1321基因型分布情况。logistic 回归分析BRM基因多态与ESCC易感性的关系。结果:BRM-741多态与ESCC的患病风险无相关性(P>0.05),而BRM-1321多态与ESCC的发生有相关性(P<0.01)。携带BRM-1321插入/插入基因型的个体发生ESCC的风险较携带BRM-1321缺失/缺失基因型者增加了94.0%(OR=1.94,95%CI=1.11~3.38)。与缺失型等位基因比较,插入型等位基因增加了35.0%的ESCC易感性(OR=1.35,95%CI=1.07~1.71)。结论:BRM-1321多态与中国汉族人群ESCC遗传易感性有关,BRM-741基因多态与中国汉族人群ESCC的患病风险无关。     

食管鳞状细胞癌易感性与MMP-9 C-1562T基因多态性的关联研究

目的研究中国西南地区人群食管鳞状细胞癌(ESCC)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因启动子区C-1562T多态性的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段多态性(PCR-RFLPs)方法检测202例ESCC患者(ESCC组)及260名健康者(对照组)MMP-9 C-1562T多态性的分布情况。结果对照组MMP-9-1562 CC、CT和TT的基因型频率分别为78.1%、21.5%、0.4%;ESCC组MMP-9-1562 CC、CT和TT的基因型频率分别为71.8%、25.7%、2.5%。对照组与ESCC组的MMP-9 C-1562T等位基因型及基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MMP-9 C-1562T基因多态性可能与中国西南地区人群ESCC的易感性无关。     

p27基因多态性与食管癌的关联研究

目的探讨p27基因第109密码子的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)发生及淋巴结转移的影响。方法采用基于医院的病例-对照研究方法,收集202例食管癌患者和265例健康对照个体,采集静脉抗凝血5mL,同时收集病史、个人史、肿瘤家族史。以蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法提取外周血白细胞DNA,分别采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)-片断长度分析和PCR-限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism analysis,RFLP)方法检测p27基因第109密码子SNP位点的基因型。结果ESCC组的p27基因第109密码子的多态性基因型和等位基因型分布与健康对照组无显著性差异(P>0.05)。根据吸烟状况分层分析发现,p27的基因型及等位基因型频率在吸烟及非吸烟的患者和健康个体中均无显著性差异(P>0.05)。根据有无淋巴结转移进行分层分析表明,p27基因多态性在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组之间无显著性差异(P>0.05),所以p27基因多态性与淋巴结转移的风险性无关。结论p27基因第109密码子的多态性基因型和等位基因型不单独影响ESCC的发生和发展。p27基因第109密码子的多态性与ESCC患者淋巴结转移的风险性无关。     

PPAR-γ2 基因-C34G、NADPH氧化酶p22phox亚基基因-C242T多态性与幽门螺杆菌感染的交互作用和 食管鳞状细胞癌的关系

目的探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体-γ2（PPAR-γ2）基因-C34G、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶 p22phox亚基基因-C242T多态性与幽门螺杆菌（H. Pylori）感染的交互作用和食管鳞状细胞癌（ESCC）的关系。方法选择我院 2010年5月~2015年3月收治的ESCCBroderⅠ级、BroderⅡ级和BroderⅢ级患者各200例,以200例健康体检者作为对照组,以 上述各组患者的外周血白细胞为样本,利用PCR-RFLP检测PPAR-γ2 基因-C34G和NADPH氧化酶p22phox亚基基因-C242T 多态性。采用14C-UBT 检测受检者H. Pylori 与14C 结合的每分钟衰变数（DPM）以判断H. Pylori 感染情况。采用非条件 Logistic 回归对-C34G、-C242T 多态性与H. Pylori 感染的交互作用进行分析。结果-C34G（CG）和-C34G（GG）基因型者患 ESCC的风险均显著增加,-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型者患ESCC的风险也显著增加。基因突变的协同分析发现-C34G （GG）和-C242T（TT）基因型在ESCC发生、发展存在正向的交互作用,另外在-C34G（CG）和-C242T（TT）之间、-C34G（CG） 和-C242T（CT）之间及-C34G（GG）和-C242T（CT）之间均存在正向交互作用（γ均大于1）。H. Pylori感染者患ESCC的风险性均 明显增高。H. Pylori感染与-C34G（CG）、-C34G（GG）、-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型与均有正向交互作用（γ均大于1）。 结论携带-C34G（CG）、-C34G（GG）、-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型的个体属ESCC高危险人群,这些基因型和H. Pylori感染 的交互作用促进了ESCC的发生、发展,应当采取根除H. Pylori或调控基因表达的措施以达到有效预防LSCC的目的。     

食管鳞状细胞癌PLCE1基因多态性与吸烟、饮酒及体质量指数的相关性

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)PLCE1基因多态性rs2274223位点与吸烟、饮酒、体质量指数的相关性。方法选取7 673例患者(汉族)和11 013例正常者PLCE1基因多态性rs2274223位点基因分型资料(基因分型采用Sequenom芯片),比较各组间基因型和等位基因频率的分布。结果病例组与对照组间PLCE1基因多态性rs2274223位点基因型和等位基因频率分布,差异有统计学意义(P<0.05),AG、GG基因型是ESCC的遗传危险因子。rs2274223在吸烟/不吸烟、饮酒/不饮酒及各级BMI人群中都与ESCC有相关性(P<0.05),但吸烟、饮酒、BMI对rs2274223的效应无明显影响。结论 PLCE1基因多态性、rs2274223遗传多态性与ESCC的易感性相关,但与吸烟、饮酒、体质量指数无明显相关性。     

食管鳞状细胞癌C20orf54基因多态性与吸烟、饮酒及体质量指数的相关性研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)C20orf54基因多态性rs13042395位点与吸烟、饮酒、体质量指数的相关性。方法选取7 673例患者和11 013例正常者C20orf54基因多态性rs13042395位点基因分型资料(基因分型采用sequenom芯片)。比较各组间基因型和等位基因频率的分布。结果病例组与对照组间C20orf54基因多态性rs13042395位点基因型和等位基因频率分布,差异具有统计学意义(P<0.05),C20orf54T等位基因降低ESCC患病风险(P=1.21E-11,OR=0.86,95%CI=0.82～0.90)。C20orf54基因多态性位点rs13042395在吸烟/不吸烟、饮酒/不饮酒及各级BMI人群中未观察到与ESCC的相关性。结论 C20orf54基因多态性、rs13042395遗传多态性与ESCC的易感性相关,与吸烟、饮酒、体质量指数无明显相关性。     

γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病中MDM2的表达研究

目的:观察MDM2在γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病组织细胞中的表达变化,探讨MDM2在辐射致癌中的作用及可能的分子机制.方法:用γ射线照射BALB/c小鼠诱发白血病发生,建立辐射致癌动物模型;分别应用Western印迹分析和原位杂交(ISH)技术,从蛋白水平和mRNA水平检测小鼠胸腺和骨髓组织中MDM2的表达情况;运用免疫沉淀技术检测MDM2蛋白的磷酸化水平;PCR-SSCP及银染技术用于检测基因突变.结果:癌变组和辐射未癌变组胸腺细胞/骨髓细胞MDM 2蛋白表达水平都高于对照组(P＜0.05);而癌变组和辐射未癌变组之间MDM2蛋白水平无明显差异.在γ射线照射后早期辐射组骨髓MDM 2蛋白表达水平也明显高于对照组.ISH结果显示:癌变组织中MDM2阳性反应和阳性率均明显高于对照组.在癌变组组织中发现有MDM2磷酸化比其他组都明显升高(P＜0.05).辐射组和对照组均未检测到基因突变.结论:MDM 2可能参与γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病的发生和发展过程,作用机制可能与过表达及高磷酸化所致活性增强有关.MDM2的基因突变在辐射致小鼠白血病发生中不起主要作用.     

鼠双微粒体-2基因和突变型p53基因表达与肝癌细胞增殖和凋亡关系的研究

目的　探讨鼠双微粒体 2 (murine double minute 2, MDM2) 基因和突变型 p53 基因表达及其与肝癌细胞增殖和凋亡的相关关系。方法　应用免疫组织化学、原位分子杂交和 TUNEL 方法检测原发性肝细胞癌组织中MDM2基因和突变型 p53基因表达与肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡情况, 并分析 MDM2 基因和 p53 基因表达与肝细胞癌组织学分级、类型、增殖和凋亡的相关关系。结果　①MDM2蛋白和mRNA 、p53蛋白和mRNA 在肝细胞癌组织中阳性表达率明显高于癌旁肝组织和正常肝组织 (均P<0 .05); MDM2 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级和类型无相关关系 (均P>0 05); p53 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级具有相关关系 (P<0 .05)。②肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡的阳性率分别为 100%和 50%, 两者相比差异有极显著性意义 (P< 0 .01); MDM2mRNA 和 p53 mRNA阳性表达与肝癌细胞增殖均具有相关关系 (均P<0. 05), 但与肝癌细胞凋亡均无相关关系 (均P>0. 05)。结论　MDM2 和 p53的蛋白和mRNA在肝细胞癌组织中呈过表达状态, MDM2 基因和 p53基因过表达在肝细胞癌发生、增殖和分化中起重要作用。     

siRNA对骨肉瘤细胞MDM2的表达及细胞增殖的抑制作用

目的: 研究siRNA对人骨肉瘤U20S细胞MDM2基因表达及肿瘤细胞增殖的抑制作用。 方法: 构建可表达针对MDM2的siRNA质粒(PGCsilencer^TM-MDM2-siRNA)。转染siRNA MDM2(简称siMDM2),阴性对照质粒到U20S,并设只加转染试剂作空白对照组,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting法检测siMDM2对MDM2基因和蛋白表达的抑制作用,并用MTT法检测siMDM2对细胞增殖的抑制作用。 结果: RT-PCR结果显示,转染siMDM2-1和 -2组MDM2的mRNA表达量分别下调到空白对照组的32.61%和39.06%;Western blotting结果显示,转染siMDM2-1和 -2组蛋白表达量下调到空白对照组的35.76%和42.20%;转染阴性对照质粒的MDM2基因和蛋白与转染试剂组比较差异均无显著性(P>0.05)。MTT结果显示,转染siMDM2后细胞生长受到明显抑制,与转染试剂组比较差异具有显著性(P<0.05),阴性对照组抑制率与转染试剂组比较差异无显著性(P>0.05)。结论：siRNA可以有效地抑制U20S细胞中MDM2的表达,并抑制细胞增殖。