Ca2+对悬浮培养半夏类原球茎生长及次生代谢物累积的影响

目的 研究Ca²⁺对半夏类原球茎生长、高温胁迫及次生代谢产物量的影响。方法 以半夏叶柄为外植体,固体培养基培养获得类原球茎,悬浮培养,采用不同质量浓度Ca²⁺处理,测定类原球茎生长速率、抗逆性指标,以及生物碱、鸟苷、有机酸的量。结果 在（25±2）℃条件下培养,随Ca²⁺质量浓度增加,半夏类原球茎生长呈慢-快-慢变化趋势,质量浓度为440 mg/L时,生长速率达到最大值;不同处理半夏类原球茎中生物碱、鸟苷、有机酸量差异显著,Ca²⁺质量浓度为440 mg/L时,生物碱量最高（0.158%）,Ca²⁺质量浓度为660 mg/L时,鸟苷、有机酸累积量最高（分别为0.017 3%、0.608%）。在（35±2）℃条件下,质量浓度为0～660 mg/L,随Ca²⁺质量浓度升高,SOD、POD活性逐渐增强,Ca²⁺质量浓度为660 mg/L时,活性最高,但Ca²⁺质量浓度为880 mg/L时,SOD、POD活性均降低;不同质量浓度Ca²⁺处理MDA量变化不显著。结论 一定质量浓度的Ca²⁺能促进半夏类原球茎生长,增强抗逆性,提高有用次生代谢产物的量。     

黑曲霉菌对獐牙菜苦苷的生物转化工艺优化

目的 以獐牙菜苦苷为底物，用黑曲霉菌对獐牙菜苦苷进行生物转化，并对转化条件进行优化。方法 以獐牙菜新素生成率和獐牙菜苦苷转化率为指标，考察不同培养时间、不同碳源、不同氮源、不同种类金属离子、磷酸盐、生长因子（酵母膏）、接种量、底物加入量、不同初始pH值、不同温度条件，优化獐牙菜苦苷在黑曲霉培养液中的转化条件。结果 优化后的培养条件为：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5 g/L，酵母膏5 g/L，KH₂PO₄ 5 g/L，MgSO₄ 1 g/L，CaCl₂ 1 g/L，初始pH 6.0，接种量0.5%，底物加入量1 mg/mL，28 ℃，培养5 d。结论 黑曲霉转化獐牙菜苦苷生成獐牙菜新素的生成率稳定在8%左右。     

诱导子对黄芩毛状根生长及黄芩苷合成的影响

目的 考察诱导子对黄芩毛状根生长和黄芩苷生物合成的影响。方法 用非生物诱导子(Ca²⁺、Mg²⁺和Co²⁺)和从黑曲霉Aspergillus niger、米曲霉A. oryzae、蜜环菌Armillaria mellea中提取的真菌诱导子,与黄芩毛状根共培养;HPLC法测黄芩苷的量。结果 各诱导子对黄芩毛状根生长和黄芩苷合成有不同影响：黑曲霉诱导子和米曲霉诱导子质量浓度为40和20 mg/L时,Co²⁺浓度为1.53×10^-4 mmol/L时,黄芩苷的量从7.64%分别增至9.18%、8.81%和8.62%。结论 诱导子对黄芩毛状根次生代谢产物具有特异性,可选择性地促进某一类次生代谢产物的合成。试验证实黑曲霉诱导子、米曲霉诱导子和Co²⁺是适合黄芩毛状根代谢黄芩苷调控的诱导子。     

南方红豆杉愈伤组织生长动力学及紫杉醇代谢动力学研究

目的 通过愈伤组织细胞生长及其紫杉醇代谢动力学的研究,筛选确定南方红豆杉愈伤组织培养生产紫杉醇的最佳培养基配方与最佳收获期。方法 以改良MS为基本培养基添加不同质量浓度的IBA、6-BA、GA₃组合诱导培养南方红豆杉愈伤组织,通过测定愈伤组织鲜质量进行生长动力学研究,采用HPLC法检测不同生长阶段愈伤组织中紫杉醇的积累量,进行紫杉醇代谢动力学研究。结果 改良MS＋0.2 mg/L IBA＋0.05 mg/L 6-BA＋0.3 mg/L GA₃、MS＋0.2 mg/L IBA＋0.01 mg/L 6-BA＋0.7 mg/L GA₃及MS＋0.2 mg/L IBA＋0.1 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L GA₃培养条件均较有利于南方红豆杉愈伤组织的诱导培养,且紫杉醇的积累量也较高,最高可达0.037 76%。结论 在添加IBA及6-BA的基础上适当增补GA₃可使南方红豆杉愈伤组织诱导提前启动,缩短出愈时间,促进生长,降低褐变程度,增加愈伤组织中紫杉醇的积累量。愈伤组织的生长曲线呈S型,紫杉醇的积累呈线型增加,是一个逐渐积累的过程,但积累到一定程度就不再增加,且伴随着愈伤组织不断褐变。     

黄芪多糖对脂多糖诱导大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的 研究黄芪多糖对脂多糖（LPS）诱导的大鼠心肌细胞肥大的保护作用。方法 新生1～2 d的SD大鼠心肌细胞培养48 h后,设对照组,模型组,黄芪多糖低、中、高质量浓度（1、10、100 mg/L）组。计算机图像分析系统测量细胞体积;RT-PCR法检测心房利钠多肽（ANP）mRNA的表达;ELISA法检测细胞肿瘤坏死因子（TNF-α）的量;采用Fluo-3/Am荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦显微镜下测定细胞内钙离子浓度（[Ca²⁺]_i）的瞬间变化。结果 与对照组相比,LPS 1 mg/L可使心肌细胞体积显著增大,ANP mRNA的表达显著增强,细胞分泌TNF-α蛋白的量显著增加,心肌细胞内[Ca²⁺]_i瞬间峰值增大（P＜0.01）。与模型组相比,黄芪多糖1、10、100 mg/L预先给药均可抑制心肌细胞体积增大;细胞产生的TNF-α显著减少,ANP mRNA的表达不同程度地减少（P＜0.05）,其中10、100 mg/L组这两项指标可恢复到对照组的水平（P＞0.05）;黄芪多糖 10 mg/L可拮抗LPS对正常心肌细胞内[Ca²⁺]_i瞬间变化幅度增大的作用（P＜0.01）。结论 黄芪多糖对LPS诱导的乳鼠心肌细胞肥大有良好的保护作用,其机制可能与抑制TNF-α的产生、降低[Ca²⁺]_i有关。     

黄芪总苷对地塞米松和β-淀粉样肽蛋白联合诱导大鼠海马神经元损伤的影响

目的 探讨黄芪总苷 (astragalosides) 对地塞米松 (Dexamethasone, DEX) 与β-淀粉样蛋白 (Amyloid β-peptide protein, Aβ) 联合诱导大鼠海马神经元损伤的影响。方法 通过检测海马神经元细胞活性,探讨黄芪总苷能否抑制 Aβ和 DEX 引起海马神经元活力下降;通过检测海马神经元胞内 Ca²⁺浓度 (［Ca²⁺］_i),探讨黄芪总苷是否通过降低 ［Ca²⁺］_i 抑制海马神经元凋亡;通过检测 P-tau-Thr231 蛋白水平,进一步探讨黄芪总苷抗 Aβ 和 DEX 引起的海马神经元毒性机制。结果 黄芪总苷 (10、20、40 μg/mL) 对体外 DEX (10 μmo/L)+Aβ_25-35 (5 μmol/L) 引起胎鼠海马神经元的损伤有保护作用 (P＜0.01);黄芪总苷能明显降低 DEX (10 μmol/L)+Aβ_25-35 (5 μmol/L) 升高的海马神经元［Ca²⁺］_i、P-tau 蛋白水平 (P＜0.05)。结论 黄芪总苷对 Aβ和 DEX 诱导的大鼠海马神经元损伤有一定的保护作用。     

原位合成四氧化三锰处理模拟核电厂含Co2+放射性废水

在硼酸体系中,以⁵⁹Co作为模拟非放射性同位素研究了原位合成四氧化三锰处理模拟核电厂放射性废水中Co²⁺的工艺条件。考察了反应时间、n(Mn²⁺):n(Co²⁺)、空气流量、反应温度以及pH对出水Co²⁺质量浓度的影响,并由正交试验L₉(4³)优化工艺条件。研究表明:在废水Co²⁺初始质量浓度10mg/L,硼酸质量浓度(以B计)1000mg/L条件下,最佳工艺条件为反应时间105min、n(Mn²⁺):n(Co²⁺)=25:1、空气流量0.7L/min、反应温度65℃以及pH10.5,在此条件下出水Co²⁺质量浓度约为5.68ng/L,去除效率大于99.99%,产物经XRD分析证明沉渣为Mn₃O₄和CoMn₂O₄混合物。     

黄芩总黄酮提取的响应面分析及其对Hela细胞作用的研究

【目的】 采用响应面分析法优选超声波法提取黄芩总黄酮的工艺条件,为工业化生产黄芩总黄酮提供理论参考;探究提取纯化后的黄芩总黄酮对Hela细胞增殖的影响,为宫颈癌的治疗提供新的应用依据。 【方法】 采用超声波法提取黄芩总黄酮,对使用Al(NO₃)₃-NaNO₂显色法测定黄芩总黄酮进行方法学考察;选取乙醇浓度、液固比、提取时间3个影响因素进行Box-Benhnken中心组合设计,利用响应面分析法(RSM)对提取工艺参数进行优化;利用优选条件提取黄芩总黄酮后采用大孔吸附树脂法对其进行纯化,用CCK-8法检测所得产物对Hela细胞的生长抑制作用。 【结果】 方法学考察结果表明本实验室采用Al(NO₃)₃-NaNO₂显色法测定黄芩总黄酮及超声提取工艺可靠;提取黄芩总黄酮最佳提取工艺为:乙醇浓度60%,液固比40 mL/g,提取时间45 min;预测值为1.776%,实际得率为1.704%,两者吻合度较高。50~800 μg/mL各组黄芩总黄酮在72 h内均抑制Hela细胞生长,呈时间和剂量依赖性,CCK-8检测结果显示48 h黄芩总黄酮的IC50为323.79 μg/mL。 【结论】 Box-Benhnken设计结合响应面分析法对黄芩总黄酮提取工艺进行优化方便、快捷,得出的参数可信度高、实用性好;纯化后的黄芩总黄酮能显著抑制Hela细胞的生长。     

凹叶厚朴叶总黄酮纯化工艺研究

[目的] 研究凹叶厚朴叶总黄酮纯化工艺。[方法] 采用大孔树脂纯化方法,考察大孔树脂静态和动态吸附对凹叶厚朴总黄酮纯度的影响,并比较凹叶厚朴叶总黄酮纯化前后的总黄酮纯度及其DPPH和ABTS体外模型的抗氧化活性。[结果] 确定最佳型号大孔树脂为HPD722大孔树脂,其对凹叶厚朴叶总黄酮具有较好的纯化作用,最佳纯化工艺为上样液浓度为0.12 g/mL,以2 BV/h上样,上样体积为5.5倍柱体积,用3.5倍柱体积10%乙醇除去杂质,再用4倍柱体积50%乙醇洗脱。凹叶厚朴叶总提物经HPD722大孔树脂纯化后总黄酮纯度由原来的27.44%提高到61.67%,且清除DPPH自由基能力纯化后[IC₅₀为(19.97±0.85) mg/L]较纯化前[IC₅₀为(44.88±1.31) mg/L]强,清除ABTS自由基能力纯化后[IC₅₀为(169.78±0.99) mg/L]较纯化前[IC₅₀为(592.2±13.14) mg/L]也得到提高。[结论] HPD722大孔树脂可以作为凹叶厚朴叶总黄酮纯化的吸附剂,为凹叶厚朴叶总黄酮资源开发提供依据。     

苦楝子多糖的提取工艺及其抗氧化活性的研究

目的 探讨苦楝子多糖的提取工艺及体外抗氧活性。方法 对影响苦楝子多糖提取的温度、时间和乙醇体积分数进行L₉(3⁴)正交试验优化,并采用超氧阴离子自由基(O^÷₂)和1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的反应体系,以维生素C为对比,研究该多糖的抗氧清除作用。结果 提取时间显著影响多糖得率,最佳工艺条件为提取温度85 ℃、醇沉体积分数70%,时间2 h。在此条件下,当料液比为1∶1,提取1次时,多糖得率可达5.89%。苦楝子多糖对O^÷₂和DPPH具有较好的清除能力,对O^÷₂的EC₅₀为2.21 mg/mL;当苦楝子多糖质量浓度为5.02 mg/mL时,其对DPPH的抑制率可超过50%。结论 由最佳提取工艺获得的苦楝子多糖具有明显的抗氧化活性。     

转双价抗虫基因 Bt-CpTI 提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性

目的 将外源苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因 CryIA(c) 和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 CpTI 共同转入四倍体菘蓝以获得鳞翅目昆虫小菜蛾抗性。方法 构建了以 CaMV 35S 为启动子,新霉素磷酸转移酶 (Npt-Ⅱ) 为选择标记,带有 CryIA(c) 基因和 CpTI 基因的植物表达载体 pGBI121S4ABC 并转入根癌农杆菌 LBA4404。采用叶盘法遗传转化四倍体菘蓝。转基因再生植株经 PCR 和 Southern 杂交检测,并进行抗小菜蛾实验。结果 T₀ 代转化四倍体菘蓝的双基因阳性转化率达到 16.67%。Southern 杂交检测结果表明外源 CryIA(c) 基因和 CpTI 基因均已经随机整合到转基因菘蓝的基因组中。与野生对照相比,转基因四倍体菘蓝对小菜蛾显示出明显抗性。结论 转双价抗虫基因 Bt-CpTI 是提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性的有效手段。     

蔓性千斤拔根的化学成分研究

目的 研究蔓性千斤拔Flemingia philippinensis根的化学成分。方法 采用多种色谱方法进行分离纯化,运用各种波谱学方法鉴定化合物的结构。结果 从蔓性千斤拔乙醇提取物的正丁醇萃取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为3, 5, 7, 4′-四羟基-3′-甲氧基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、山柰酚-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、染料木苷（3）、芒柄花苷（4）、印度黄檀苷（5）和3′-O-甲基-香豌豆酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（6）。结论 化合物1为新的黄酮醇碳苷类化合物,命名为千斤拔苷A,化合物2和4为首次从该属植物中分离得到。     

白背叶根化学成分研究

目的 研究白背叶Mallotus apelta根的化学成分。方法 通过各种柱色谱进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果 分离得到了9个化合物,分别鉴定为β-香树脂醇乙酸酯（1）、高根二醇（2）、羽扇豆-20 (29)-烯-3β, 30-二醇（3）、对羟基苯甲酸-2α-羟基油桐酸酯（4）、α-香树脂醇乙酸酯（5）、油桐酸（6）、槲皮素（7）、3-甲氧基-4-O-β-D-葡萄糖基苯甲酸（8）、勾儿茶素（9）。结论 化合物1～4、6、8、9为首次从野桐属植物中分离得到。     

UPLC-ELSD法同时测定重楼中重楼皂苷I、II、VI、VII

目的 建立同时测定重楼中重楼皂苷I、II、VI、VII的超高效液相色谱-蒸发光散射（UPLC-ELSD）分析方法。方法 采用Waters Acquity UPLC H-Class色谱系统,ELSD检测器,BEH C¹⁸色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）,流动相为乙腈-水,以体积流量0.45 mL/min进行梯度洗脱,柱温30 ℃。结果 被测成分在线性范围内均具有良好的线性关系（r＞0.999 5）;平均回收率在98.36%～100.11%,RSD≤1.56%。结论 UPLC法分离效果及重现性好,且快速、简便,可作为重楼的质量控制方法。     

北鹤虱的化学成分研究

目的：研究北鹤虱(天名精的果实)的化学成分。方法：通过各种色谱手段（silica gel、ODS、HPLC）对北鹤虱甲醇提取物的二氯甲烷层进行分离纯化,通过¹H-NMR、¹³C-NMR等波谱技术确定化合物的结构。结果：分离并鉴定了5个倍半萜类化合物,分别为特勒内酯（1）、3-epiisotelekin（2）、11β,13-dihydro-1-epi-inuviscolide（3）、天名精内酯酮（4）、天名精内酯醇（5）。结论：化合物2、3为首次从天名精属植物分离得到。     

羊耳菊花的化学成分研究

目的 研究羊耳菊花Inula cappa的化学成分。方法 采用系统溶剂提取法结合各种色谱分离技术、理化性质和光谱数据鉴定结构。结果 从羊耳菊花中共分离得到10个化合物,分别鉴定为木栓酮（1）、乙酸羽扇豆醇酯（2）、豆甾醇（3）、ineupatorolide B（4）、cleomiscosin C（5）、木犀草素（6）、3, 4-二羟基苯甲酸（7）、芹菜素（8）、fortuneletin（9）、luteolin 4′-methyl ether（10）。结论 化合物2、4、5、7、9、10为首次从该植物中得到。     

嗜肺军团菌mip/flaA二联优势抗原表位基因融合表达载体的构建及表达

目的 选取嗜肺军团菌mip/flaA优势抗原表位基因,构建mip/flaA二联优势抗原表位基因融合表达载体,并在原核系统中表达,为后续制备嗜肺军团菌蛋白疫苗提供初步的实验基础。方法 运用生物信息学方法对Mip和FlaA蛋白的二级结构和表面特性如理化性质、亲水性、可塑性、抗原指数以及胞外区等方面进行分析,选择其活性表位可能存在的区域为优势抗原表位区。通过PCR扩增和T4连接酶构建pET-mip、pET-flaA和pET-mip/flaA优势抗原表位基因融合表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达。结果 Mip和FlaA都存在多个潜在的抗原表位位点,选取其优势抗原表位区域进行克隆和表达获得成功,并成功表达了mip/flaA二联优势抗原表位融合蛋白。结论 DNA Star软件和Expasy在线蛋白分析系统能够成功预测嗜肺军团菌Mip和FlaA 抗原的表位;选取其优势抗原表位成功构建了pET-mip/flaA二联原核表达载体,并高效表达。     

酸浆化学成分的研究

目的 研究酸浆Physalis alkekengi var. franchetii的活性成分。方法 酸浆的宿萼经乙醇渗漉提取,提取物经硅胶、Sephadex LH-20色谱分离,并通过理化常数和波谱学方法鉴定化合物结构。结果 分离鉴定了11个化合物,分别为β-谷甾醇(Ⅰ)、酸浆苦素A(Ⅱ)、酸浆苦素B(Ⅲ)、酸浆苦素O(Ⅳ)、酸浆苦素L(Ⅴ)、酸浆苦素M(Ⅵ)、胡萝卜苷(Ⅶ)、商陆素(Ⅷ)、5,4′,5′-三羟基-7,3′-二甲氧基黄酮醇(Ⅸ)、木犀草素(Ⅹ)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅺ)。结论 化合物Ⅸ为新化合物,命名为酸浆黄酮醇(physaflavonol)。     

金钗石斛茎的化学成分研究

目的 对金钗石斛Dendrobium nobile茎的化学成分进行研究。方法 采用正相及反相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱及制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据波谱数据进行结构鉴定。结果 分离得到11个化合物,分别鉴定为石斛碱（1）、石斛醚碱（2）、邻苯二甲酸丁酯（3）、松脂素（4）、N-反式桂皮酸酰对羟基苯乙胺（5）、N-反式阿魏酸酰对羟基苯乙胺（穆坪马兜铃酰胺,6）、N-顺式阿魏酸酰对羟基苯乙胺（7）、N-反式香豆酰酪胺（8）、N-顺式香豆酰酪胺（9）、山药素III（10）、二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯（11）。结论 化合物3、5～9均为首次从该植物中分离获得,其中化合物9为首次从石斛属植物中分离获得。     

布渣叶的化学成分研究

目的 研究布渣叶Microcos paniculata的化学成分。方法 采用硅胶、Sephadex LH-20、大孔树脂等柱色谱及制备液相色谱等方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质、波谱数据等鉴定结构。结果 从布渣叶的醋酸乙酯和正丁醇萃取部位分离并鉴定了12个化合物,分别为异鼠李素（1）、表儿茶素（2）、黑麦草内酯（3）、去氢吐叶醇（4）、香草酸（5）、丁香酸（6）、咖啡酸甲酯（7）、对羟基苯甲酸（8）、对香豆酸（9）、木栓醇（10）、豆甾醇（11）、β-谷甾醇（12）。结论 化合物3～7、9～12均为首次从该属植物中分离得到,其中化合物3和4为首次从该属植物中分离得到的单萜类化合物。