黄芪多糖诱导K562细胞γ-珠蛋白基因表达

目的 探讨黄芪多糖(APS)对K562细胞γ-珠蛋白基因表达的诱导作用.方法 以K562细胞为模型,以APS诱导的细胞为实验组,未加药细胞为空白对照,丁酸钠(NaB)处理的细胞为阳性对照,分别用联苯胺染色和RT-PCR分析联苯胺染色阳性率、Aγ-和Gγ-珠蛋白基因mRNA表达水平.结果 (1)与空白对照组相比,300 mg/L APS诱导48 h后联苯胺染色阳性率由(4.37±0.58)%升高至(15.67+1.80)%(P<0.05).300 mg/L APS诱导K562细胞48 h的联苯胺染色阳性细胞总数为(60.40±6.33)×102.与NaB组(42.02±16.42)×102相比差异有显著性意义(P<0.05).(2)与空白对照组相比,300 mg/L APS诱导48 hAγ和Gγ珠蛋白基因tuRNA表达分别增加3.59±0.16倍和5.02±0.81倍(P=0.000).结论 APS可诱导K562细胞Aγ和Gγ珠蛋白基因mRNA表达增强,具有治疗β-珠蛋白生成障碍性贫血的潜能.     

丁酸盐不同给药方式诱导K562细胞向红系分化的比较研究

目的 研究丁酸盐对血红蛋白合成的诱导作用和不同给药方式对丁酸盐诱导的K562细胞向红系分化的影响。方法 以K562细胞为体外模型，采用联苯胺染色定性技术检测细胞内血红蛋白，比较丁酸盐不同浓度、不同给药方式诱导K562细胞前后的阳性细胞率；测量波长为414nm的D(λ）值和醋酸纤维膜电泳检测药物诱导的血红蛋白含量的7变化。结果 不同浓度的丁酸盐诱导后联苯胺染色阳性细胞率（BZ％）增加4－6倍，细胞平均血红蛋白较用药前增加9－14倍；丁酸盐选择性地刺激HbF合成；单次脉冲式给药BZ％在72h达高峰，峰值在19％－28％之间，之后迅速下降，约在7－9d接近用药前水平，孵育时间的长短与BZ％上升以及上升后持续时间的长短无关；丁酸盐持续诱导的BZ％变化与一次脉冲式用药总体趋势相似；间断脉冲式用药BZ％在72h达到峰值后持续保持在20％－30％之间的水平，直至3个周期的用药结束。结论 丁酸盐可诱导珠蛋白基因表达，促进血红蛋白的合成，尤其能够选择性地刺激胎儿血红蛋白的合成增加；间断脉冲式用药能够持续诱导K562细胞向红系分化，可作为丁酸盐治疗β珠蛋白基因缺陷疾病的理想给药方式。     

低剂量羟基脲联合丁酸钠对K562细胞γ珠蛋白基因表达的作用

目的：探讨低剂量羟基脲（hydroxyurea,HU）与丁酸钠（sodium butyrate,NaB）联合诱导人白血病细胞株（K562）细胞对γ珠蛋白基因表达的作用。方法：以K562细胞株为研究对象,用不同浓度HU和／或NaB作用于K562细胞,台盼蓝拒染活细胞计数观察细胞生长;联苯胺染色了解细胞红系分化,RT—PCR测定珠蛋白基因γ-mRNA表达。结果：25μmol／L HU与100μmol／LNaB是最佳用药组合,其对细胞生长抑制率为（46．09±1．54）％,与HU100μmol/L（64．31±5．19）％、NaB500μmol／L（86．25±1．10）％比较差异有显著性（P〈0．05）;联苯胺染色阳性细胞率达（17．72±0．58）％,与HU100μmoL／L（15．72±0．27）％、NaB500μmol／L（14．32±0．74）％比较差异有显著性（P〈0．05）;与亲本细胞比较Gγ—mRNA表达上调（2．04±0．13）倍,Aγ-mRNA表达上调（1．27±0．01）倍,差异有显著性（P〈0．05）。结论：低剂量HU与NaB联合用药能使K562细胞γ珠蛋白基因表达上调,并减轻细胞生长抑制,为临床联合用药提供实验依据。     

丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达的诱导作用及机制

目的:研究丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达和胎儿血红蛋白合成的诱导作用及机制.方法:以丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72 h的K562细胞为实验组,设K562亲本细胞和SB203580(10 μmol/L)处理1 h后用丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72 h 的K562细胞为阴性对照组,设羟基脲(100 μmol/L)诱导72 h的K562细胞为阳性对照.分别提取细胞总RNA 和总蛋白.采用RT-PCR、Western blotting和联苯胺染色方法检测γ珠蛋白基因、胎儿血红蛋白和p38表达及p38磷酸化水平.结果:与K562亲本细胞和SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞相比,丁酸钠诱导的K562细胞中G-γ珠蛋白、A-γ珠蛋白和胎儿血红蛋白的表达均明显上调(P<0.05),p38 mRNA和蛋白水平表达均无明显变化(P>0.05),但p38蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.05).K562亲本细胞、SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞和丁酸钠诱导的K562细胞中联苯胺阳性细胞百分率分别为(3.2±0.4)%、(12.7±0.2)%和(36.3±0.8)%(P<0.05).结论:丁酸钠可以诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因、合成胎儿血红蛋白,p38MAPKs的激活在丁酸钠诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因中发挥重要作用.     

K562细胞7种珠蛋白基因mRNA水平的研究

目的：研究K562细胞α、β、Gγ、Aγ、ζ、ε、δ珠蛋白基因mRNA水平。方法：采用RT-PCR在相同条件下同时扩增成功7种珠蛋白mRNA，比较K562细胞内各珠蛋白mRNA水平。结果：α基因簇中α-mRNA水平明显高于ζ-mRNA,β基因簇mRNA表达水平依次为Gγ、Aγ、ε、δ，K562细胞不表达β-珠蛋白mRNA。结论：转录后水平的调控可能在K562细胞α基因簇的表达中起重要作用，β-基因簇各珠蛋白mRNA水平和蛋白质水平基本相符。     

丁酸盐不同给药方式诱导K562细胞向红系分化的比较研究

目的研究丁酸盐对血红蛋白合成的诱导作用和不同给药方式对丁酸盐诱导的K562细胞向红系分化的影响。方法以K562细胞为体外模型,采用联苯胺染色定性技术检测细胞内血红蛋白,比较丁酸盐不同浓度、不同给药方式诱导K562细胞前后的阳性细胞率;测量波长为414nm的D(λ)值和醋酸纤维膜电泳检测药物诱导的血红蛋白含量的变化。结果不同浓度的丁酸盐诱导后联苯胺染色阳性细胞率(BZ%)增加4～6倍,细胞平均血红蛋白较用药前增加9~14倍;丁酸盐选择性地刺激HbF合成;单次脉冲式给药BZ%在72 h达高峰,峰值在19%~28%之间,之后迅速下降,约在7~9d接近用药前水平,孵育时间的长短与BZ%上升以及上升后持续时间的长短无关;丁酸盐持续诱导的BZ%变化与一次脉冲式用药总体趋势相似;间断脉冲式用药BZ%在72 h达到峰值后持续保持在20%~30%之间的水平,直至3个周期的用药结束。结论丁酸盐可诱导珠蛋白基因表达,促进血红蛋白的合成,尤其能够选择性地刺激胎儿血红蛋白的合成增加;间断脉冲式用药能够持续诱导K562细胞向红系分化,可作为丁酸盐治疗β-珠蛋白基因缺陷疾病的理想给药方式。     

苦参碱诱导K562细胞合成γ珠蛋白

目的 体外研究苦参碱对K562细胞γ珠蛋白合成的影响.方法 以K562细胞为体外模型,采用联苯胺染色方法确定苦参碱诱导K562细胞血红蛋白表达增加的剂量效应和时间效应,进一步应用Western blotting技术检测血红蛋白F(αγ2)水平.结果 0.1mg/ml苦参碱作用于K562细胞,在96h联苯胺染色阳性细胞率达到15.67%;Western blotting检测到血红蛋白F表达增加.结论 苦参碱在体外可诱导K562细胞γ珠蛋白合成增加,从而使血红蛋白F增加.苦参碱具有与阳性对照丁酸钠相似的诱导γ珠蛋白合成增加的作用.     

FQ—RT—PCR法检测β地中海贫血患者β与γ珠蛋白mRNA水平的研究

目的 :探讨 β地中海贫血患者中 β与γ珠蛋白mRNA水平及意义。方法 :用FQ RT PCR技术检测 2 7例 β地中海贫血患者和 2 5例正常对照组外周血中 β与γ珠蛋白mRNA水平。结果 :重型 β地中海贫血患者中γ/ (β+γ)mRNA比值 (70 83±2 2 1 7% )显著高于轻型 β地中海贫血患者 (0 99± 1 0 1 % )及正常对照组 (1 5 5± 4 1 4 % ) (P <0 0 0 1 )。轻型 β地中海贫血患者及正常对照组的γ/ (β +γ)mRNA比值两组比较无明显差别 (P >0 0 5 )。结论 :(1 )FQ RT PCR技术是一种敏感性强、特异性强、定量准确的新方法 ,适合于血红蛋白珠蛋白mRNA水平的定量测定。 (2 )γ/ (β+γ)mRNA比值增高是重型β地贫病人的特征之一。对 β地中海贫血患者珠蛋白mRNA水平的研究对β地中海贫血的临床疗效观察具有重要意义     

异丁酰胺选择性活化人γ－珠蛋白基因的转录

目的 研究本室合成的异丁酰胺对于μＬＣＲＡγψβδβＭＥＬ稳定转化子中珠蛋白基因表达的影响作用。方法 转化子细胞在含不同浓度异丁酰胺的细胞培养基中生长４ｄ后,用ＲＮａｓｅ保护分析法测定人Ａγ－、β－及鼠α－球蛋白基因的表达水平。结果 异丁酰胺可诱导人γ－、β－、及鼠α－珠蛋白基因的表达,且有一定的剂量相关性,对人γ基因的诱导能力显著强于对人β－基因的诱导,在一定的异丁酰胺浓度范围（２．５￣５ｍｍｏ     

K562细胞7种珠蛋白基因 mRNA水平的研究

目的研究K562细胞α、β、Gγ、Aγ、ζ、ε、δ珠蛋白基因mRNA水平。方法采用RT-PCR在相同条件下同时扩增成功7种珠蛋白mRNA,比较K562细胞内各珠蛋白mRNA水平。结果α基因簇中α-mRNA水平明显高于ζ-mRNA,B基因簇mRNA表达水平依次为Gγ、Aγ、ε、δ,K562细胞不表达B-珠蛋白mRNA。结论转录后水平的调控可能在k562细胞α基因簇的表达中起重要作用,B基因簇各珠蛋白mRNA水平和蛋白质水平基本相符。