Bcl-2和Bax在多巴胺诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨多巴胺诱导PC12细胞凋亡的可能机制。方法流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达率。结果多巴胺诱导PC12细胞凋亡,两者间呈明显的量效和时效关系。0.45mmol/L多巴胺作用24h,细胞的凋亡率为53.3%±3.1%。在凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达随之增高。诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)抑制剂和半胱氨酸蛋白酶3(CPP32)抑制剂对抗多巴胺诱导PC12细胞的凋亡作用与Bcl-2蛋白增加、Bax蛋白降低有关。结论Bcl-2和Bax蛋白是多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要调节蛋白,iNOS和CPP32在凋亡过程中可能具有重要作用。     

甘草苷对一氧化氮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的应用NO诱导PC12细胞制作细胞损伤模型,探讨甘草苷对PC12细胞损伤的保护作用。方法甘草苷各剂量的PC12细胞用SNAP诱导48 h后,采用MTT法测定细胞活力,LDH法测定细胞膜通透性,化学比色法测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Annexin V-FITC/PI检测PC12细胞凋亡率。结果与模型组相比,甘草苷可以使PC12细胞存活率显著增加,细胞培养上清中LDH含量显著减少,SOD活性显著升高,MDA含量显著下降,并明显降低PC12细胞凋亡率。结论甘草苷对NO诱导的PC12细胞凋亡有明显保护作用。     

奥氮平对MPP+诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨非典型性抗精神病药物奥氮平对MPP＋诱导的PC12细胞凋亡的防护作用。方法以不同浓度的MPP＋作用于培养的PC12细胞，MTT法检测PC12细胞存活率，荧光染料吖啶橙（AO）染色观察MPP＋作用PC12细胞后的凋亡变化。用不同浓度的奥氮平预处理细胞后，加入MPP＋共孵育，测MTT并AO染色，观测奥氮平的防护作用。结果在MPP＋终浓度为250μmol／L时，细胞存活率降低为60．14％，与对照组差异显著，而奥氮平（200μmol／L）的最高防护作用是79％。绪论奥氮平能拮抗MPP＋诱导的PC12细胞的凋亡。该药具有的防护作用可能与抑制MPP＋诱导的凋亡有关。     

银杏叶内酯N对PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨银杏内酯N对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法用H2O2诱导PC12细胞损伤,刺激其凋亡,给予不同剂量的受试药物干预。用MTT法检测细胞存活率;用吖啶橙染色检测银杏内酯N对PC12细胞凋亡的作用;用流式细胞术检测银杏内酯N对PC12细胞活性氧(ROS)的影响,荧光定量RT-PCR法、Western印迹法分别检测Bcl-2、Bax mRNA和相应蛋白的表达。结果银杏内酯N可对抗H2O2诱导的PC12损伤,提高存活率和抑制凋亡,降低PC12细胞ROS水平,与模型组比较均有显著差异(P<0.05);Bcl-2蛋白及mRNA表达量升高,而Bax mRNA和Bax蛋白及表达量降低,与模型组比较均有显著差异(P<0.05),且呈一定的量效关系。结论银杏内酯N可对抗H2O2的神经毒性,其机制与调节凋亡相关基因及蛋白的表达有关。     

丙酮酸对过氧化氢诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究丙酮酸对过氧化氢(H2O2)诱发小鼠嗜铬细胞瘤瘤细胞(PC12细胞)损伤的保护作用并初步探讨其保护机制.方法 将培养的PC12细胞分为三组:正常对照组;损伤组;保护组,在用H2O2处理前30 min加入丙酮酸.通过细胞形态学方法,化学比色法测定琥珀酸脱氢酶(MTT)含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放量,超氧化物歧化酶(SOD)含量和丙二醛(MDA)含量,观察丙酮酸的神经保护作用.结果 通过形态学方法,保护组细胞数显著比损伤组多,受损变圆的细胞数较少.保护组可明显降低细胞LDH释放量和细胞内的MDA含量(P＜0.01);提高MTT测定值和SOD活性.结论 丙酮酸对H2O2诱发PC12细胞损伤有显著的保护作用.     

左旋多巴和多巴胺对PC12细胞的毒性及其他抗帕金森病药物的神经保护作用

目的　研究左旋多巴和多巴胺对PC12细胞的毒性作用以及抗帕金森病 (PD)药物的神经保护作用。　方法　通过体外大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞培养 ,采用溴化 3(4 ,5 二甲基噻唑基 2 ) 2 ,5 二苯基四唑 (MTT)细胞活性检测和流式细胞仪观察不同剂量左旋多巴和多巴胺对PC12细胞的毒性作用 ,以及抗PD药物 (金刚烷胺、培高利特和司来吉兰 )能否拮抗左旋多巴和多巴胺的细胞毒性。　结果　MTT显示左旋多巴和多巴胺使PC12细胞活性降低 ,与剂量、时间相关 (P <0 0 1) ;流式细胞仪显示左旋多巴和多巴胺使PC12细胞发生凋亡 ,呈剂量依赖性 (P <0 0 1)。金刚烷胺、培高利特和司来吉兰均能保护PC12细胞活性 ,免受左旋多巴和多巴胺的影响 (P <0 0 1) ,并能抑制左旋多巴和多巴胺引起的PC12细胞凋亡 (P <0 0 5 )。　结论　大剂量左旋多巴和多巴胺对PC12细胞产生毒性损害 ,金刚烷胺、培高利特和司来吉兰能拮抗左旋多巴和多巴胺对PC12细胞的毒性效应 ,具有神经保护作用。     

醒脑启智胶囊药物血清对缺氧诱导的PC12细胞凋亡及凋亡基因的影响

目的 探讨醒脑启智（XNQZ）胶囊药物血清对缺氧诱导的PCI2细胞凋亡及其相关基因bcl-2、bax表达的影响。方法 采用血清药理学方法，体外培养PCI2细胞，以药物血清孵化后用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）缺氧诱导，观察PCI2细胞凋亡及bcl-2、bax表达的变化。结果 缺氧诱导后，PC12细胞的bax蛋白表达上调，使细胞凋亡趋势增强。XNQZ药物血清可使bcl-2基因表达量增加，bax基因表达量降低，细胞凋亡率下降。结论 XNQZ可通过调节bcl-2、bax表达，抑制细胞凋亡，提高细胞抗损伤和修复能力，以达到对抗神经元迟发性死亡，抑制智力减退的作用，并呈现一定的剂量依赖关系。     

一氧化氮诱导细胞凋亡

细胞调亡（apoptosis）也称为编程性细胞死亡（progr。mDedcelld6。th），是多细胞有机体为保持自身组织的稳定，调控自身细胞的增殖和死亡之间的平衡，由基因控制的细胞主动性死亡过程“’。它以质膜发泡、细胞质固缩、核染色体裂解和调亡小体的形成为特征，因此与病理情况下的细胞坏死有本质的区别。细胞调亡参与诸多生理与病理过程，如胚胎发育、衰老造血细胞的清除、肿瘤发生与人类免疫缺陷清江（HTV）就染等。细胞调亡过程受细胞外微环境因素和细胞内遗传物质的调控．其中，一氧化氛（NO）作为反应性氛中间物（RNI）的代表，是各种…     

aFGF对Aβ25-5诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）对β淀粉样肽25-35（AB25-35）诱导凋亡PC12细胞凋亡的保护作用。方法采用MTT比色法分析细胞存括率，Hoechst 332582-PI荧光染色法检测细胞凋亡，RT-PCR方法检测PCI2细胞Bax和Bcl-2基因mRNA的表达，Western印迹检测PC12细胞Bax和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量（10、20、30mg／L）aFGF预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗AB25-35引起的细胞凋亡，提高PC12细胞的存括率，减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂，降低Bax基因mRNA表达及蛋白表达，增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论aFGF可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用，其机制可能与下调凋亡基因Bax和上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关。     

羊膜上皮细胞对6-OHDA所致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨羊膜上皮细胞（HAEC）对6-羟基多巴胺（6-OHDA）所致PC12细胞损伤的保护作用机制.方法 采用MTT检测、AO活体荧光素标记和流式细胞仪检测技术,观察加入终浓度分别为30、40、50 μmol/L的6-OHDA 24 h后,HAEC培养液上清对6-OHDA所致的P C 12细胞损伤的保护作用.结果 随着6-OHDA浓度的增大,PC12细胞活力逐渐降低,受损伤细胞的数量逐渐增加,终浓度为50 μmol/L的6-OHDA损害组可见细胞凋亡样改变;HAEC培养液上清可明显拮抗6-OHDA的毒性作用,使PC12细胞的存活率增加,受损伤细胞的数量降低.结论 HAEC培养液上清能拮抗6-OHDA所致的PC12 细胞损伤.     

Nitric oxide inhibits myocardial apoptosis by preventing caspase-3 activity via S-nitrosylation

Two protein signaling systems, phosphorylation and S-nitrosylation, influence most aspects of cellular physiology. S-nitrosylation, which generates a nitrosothiol linkage on cysteine residues, is caused by nitric oxide (NO). NO is believed to act as an anti-apoptotic agent by inhibiting caspase activity in cardiomyocytes, but there is little direct evidence for this. We investigated whether apoptosis inhibition by NO involved S-nitrosylation of caspases in doxorubicin (DOX)-induced myocardial apoptosis. Cardiomyocytes were treated with 1 micromol/l of DOX to induce apoptosis. Pretreatment with an NO donor, S-nitroso-N-acetyl-penicillamine (SNAP) reduced the apoptosis. This effect was attenuated by treatment with 100 micromol/l of mercury dichloride (HgCl2), which is an agent of denitrosylation. After 24 h DOX-treatment, SNAP reduced the increased caspase-3 activity by 63%, and this effect was reversed by treatment with HgCl2. Immunoblot analysis showed that accumulation of the cleaved caspase-3 protein, an active form that induces apoptosis was inhibited significantly by SNAP. To elucidate nitrosothiol formation on caspase-3 by NO, we did several experiments. First, we prepared an immunoprecipitate of caspase-3 and measured the concentration of NO released from the precipitated complex by HgCl2. Second, S-nitrosylated proteins, purified by immunoprecipitation of caspase-3, were biotinylated and the biotin concentration was estimated by immunoblotting. Third, dual immunofluorescent staining was done with antibodies for S-nitrosocysteine and caspase-3. Results showed that formation of nitrosothiol in caspase-3 in DOX-treated cardiomyocytes with SNAP was increased significantly compared with untreated cardiomyocytes. We reported here that exogenous NO produces an anti-apoptotic effect by suppression of caspase activity via S-nitrosylation in cardiomyocytes.     

复方丹参注射液对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的　探讨复方丹参注射液 (ISM)对 H2 O2 诱导的 PC1 2细胞凋亡的保护作用机制。方法　在 H2 O2 诱导 PC1 2细胞凋亡模型的基础上 ,采用 MTT比色分析测定细胞存活率 ,Hoechst- PI荧光染色和流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况 ,RT- PCR检测 par- 4和 caspase- 3基因 m RNA表达 ,Western blot检测 par- 4蛋白表达和 caspase- 3P2 0活性片段 ,比色法检测 caspase- 3相对活性。结果　不同剂量 ISM预处理 1 h可提高 PC1 2细胞存活率 ,降低 par- 4和 caspase- 3的 m RNA表达以及 Par- 4的蛋白表达 ,caspase- 3 P2 0活性片段和 caspase- 3相对活性减少 ,但变化不明显。结论　 ISM可剂量依赖性地对抗 H2 O2的神经毒性作用 ,其机制可能与凋亡基因 par- 4表达有关 ,与 caspase- 3的关系尚需进一步探讨。     

可溶性β-淀粉样蛋白25-35致PC12细胞凋亡的实验研究

目的：探讨水溶性β－淀粉样蛋白25－35（Aβ25－35）致PC12细胞死亡发生的可能机制。方法：采用MTT法分析Aβ25－35对细胞活性的影响；采用电镜，DNA电泳判Aβ－25－35致PC12细胞死亡的类型，应用免疫细胞化学和蛋白杂交检测P53蛋白是否参与细胞的损伤，结果：MTT法检测显示随着Aβ25－35浓度的增加，细胞活性呈剂量依赖性降低（分别为0．91，0．75，0．65，0．58，0．54，0．41），电镜及DNA电泳显示细胞凋亡相关特征，加入Aβ25－35后免疫细胞化学和蛋白杂交示P53蛋白表达而对照组呈阴性。结论：水溶性Aβ－25－35在形成淀粉样纤维沉积前即可导致PC12细胞凋亡，P53蛋白参与细胞凋亡的发生。     

应用AFM研究淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的机制

目的 利用原子力显微镜(Atomic force microscopy,AFM)对淀粉样蛋白(Aβ25 ～35)处理前后细胞全貌和表面超微结构进行成像分析,为进一步了解Aβ25-35诱导的细胞膜损伤机制提供可视化的依据.方法 用不同浓度的Aβ25 ～ 35处理PCl2细胞,CCK-8实验检测细胞活性,流式细胞术分析细胞凋亡,AFM对细胞进行表面超微结构成像和粒径分布分析.结果 CCK-8实验表明,随着Aβ25 ～35蛋白浓度的增加,细胞活性明显下降,特别是Aβ25 ～35 25 μmol/L时细胞活性明显低于正常组.流式细胞术分析细胞凋亡,Aβ25 ～35浓度在15 μmol/L(低浓度诱导组)时,细胞凋亡率为(5.60±0.61)％;但在25 μmol/L时(高浓度诱导组),细胞凋亡率达到(16.17±0.79)％(P＜0.01),可见,随Aβ25 ～35浓度增加,细胞凋亡越明显;AFM分析细胞形貌和超微结构,随着Aβ25～35蛋白浓度增加,细胞塌陷更严重,细胞表面孔洞增加,颗粒物质粒径减小,细胞膜损伤程度更大.结论 AFM分析数据表明,诱导组细胞活性下降,出现细胞凋亡,细胞膜受到损伤.     

复方益智散对PC12细胞增殖和抗凋亡作用

目的观察复方益智散对体外培养PC12细胞增殖和抗活性氧(reactive oxygen species,ROS)氧化损伤作用。方法SD大鼠60只,随机分为对照组、复方益智散大、中、小剂量组和复方丹参片组,每组12只。通过血清药理学方法制备含药血清,以过氧化氢(H2O2)作为ROS,应用四氮唑蓝比色法、流式细胞术法和DNA凝胶电泳法观察复方益智散对正常生长PC12细胞的增殖和抗ROS凋亡损伤作用。结果复方益智散中剂量和高剂量组能显著提高正常生长PC12细胞的存活数(P<0.01);各剂量组均能有效对抗100μmol/L H2O2引起的细胞存活率下降和细胞凋亡率升高(P<0.01),减轻DNA片断化现象,复方益智散的抗凋亡效果好于复方丹参片。结论复方益智散具有良好的神经营养和神经保护作用,其机制可能与提高细胞的清除ROS能力和抗氧化酶活力有关。     

三羟基异黄酮对转染APP695基因PC12细胞凋亡和功能的影响

目的以APP695MT基因转染PC12细胞为细胞模型,研究三羟基异黄酮(GST)对模型细胞凋亡和功能的影响。方法用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、APP695转染组、GST干预组。应用激光共聚焦显微技术检测PC12细胞凋亡率,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量。结果 APP695转染组与对照组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.01),CA分泌量明显降低(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较细胞凋亡率降低(P<0.01),CA分泌量均明显增加(P<0.01)。结论 GST可降低APP695MT基因转染引起的PC12细胞凋亡率,同时也可提高CA的分泌量,对转染细胞有一定的保护作用,并能改善其生理功能。     

转录因子FoxO3a对PC12细胞朊蛋白管家基因表达调控的影响

目的探讨叉头转录因子O亚型(FoxO)3a对PC12细胞朊蛋白管家基因(PRNP)表达调控的影响。方法以PC12细胞为研究对象,采用siRNAs沉默基因实验、实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹检测PRNP转录及蛋白表达水平。通过双荧光素酶(Luc)报告基因检测试验检测Luc活性,进而评估启动子的活性。结果 FoxO3a基因沉默后,S1探针(S1)组PRNP基因表达明显上升(P<0.05);S1组FoxO3a基因被沉默后,朊蛋白(PrP)蛋白表达显著升高,与基因水平一致;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与基础对照组(pGL3-Basic+pRL-Tk)相比,阳性对照组(pGL3-Control+pRL-TK)FLuc/Rluc值明显提高(P<0.01),实验组Ⅰ(pGL3-PNRP+pRL-TK)FLuc/Rluc也显著高于基础对照组(P<0.01);当pGL3-PNRP质粒、pcDNA3.1-FoxO3a高表达质粒与海肾荧光素酶pRL系列(pRL-TK)质粒共转入细胞内,48 h后,与实验组Ⅰ相比,实验组Ⅱ(pGL3-PNRP+pcDNA3.1-FoxO3a+pRL-TK)的FLuc/RLuc值明显下降(P<0.01)。结论 FoxO3a可以负调控PRNP基因的表达,这种调控是通过结合PRNP基因启动子区域而抑制其转录来实现的。     

JNK信号转导通路在β-淀粉样蛋白25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用机制

目的研究β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡的机制以及c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125的保护作用，探讨在Aβ25-35细胞毒性中JNK—c-Jun信号转导通路的可能作用机制。方法在培养的PC12细胞中加入Aβ25-35共孵育，用磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V)方法和流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡，用免疫印迹法检测不同时间点的JNK及c-Jun蛋白活性。结果PC12细胞经过Aβ25-35处理后发生凋亡，呈时间依赖性细胞生存率下降，免疫学方法检测显示细胞在Aβ25-35处理早期出现磷酸化JNK和磷酸化c-Jun的表达增高，且这一过程可被SP600125抑制。流式细胞仪检测显示在使用SP600125后，细胞生存率上升，差异具有统计学意义。结论体外PC12细胞培养显示Aβ25-35可诱导细胞凋亡，SP600125对Aβ25-35的细胞毒性具有保护作用，JNK—c-Jun信号转导通路可能参与了上述细胞毒作用机制。