吡咯喹啉醌对谷氨酸诱发皮层神经元损伤的影响

目的探讨吡咯喹啉醌对谷氨酸诱发皮层神经元损伤的保护作用。方法体外原代培养新生大鼠皮层神经元，镜下观察神经元的形态变化，流式细胞仪检测细胞的凋亡情况，激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca^2 浓度的变化。毒性剂量的谷氨酸诱致皮层神经元损伤，用吡咯喹啉醌做保护研究。结果体外培养8d的皮层神经细胞用谷氨酸处理后细胞，细胞内Ca^2 快速增加，细胞以凋亡和坏死两种形式死亡，细胞的存活率降低；预先给予吡咯喹啉醌可明显减少由谷氨酸引起细胞内Ca^2 的增加，减少由谷氨酸引起的细胞死亡。结论吡咯喹啉醌对谷氨酸诱发的皮层神经元损伤具有保护作用。     

一氧化氮经钙信号转导途径诱导弓形虫速殖子凋亡

目的:为探讨胞浆Ca^2 是否为一氧化氮（Nitric Oxide,NO)诱导弓形虫速殖子凋亡的重要信号分子。方法：采用脱氧核苷酸末端转移酶（TdT)介导的缺口末端标记法（TUNEL）、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡以及应用Fura-2荧光负载技术测定胞浆游离钙浓度[Ca^2 ]i。结果：NO供体亚硝基铁氧化钠（Na2Fe(CN)5NO,SNP)诱导弓形虫速殖子凋亡过程中胞浆[Ca^2 ]i明显升高。NO清除剂，N－乙酰半胱氨酸能明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡及SNP诱导的速殖子胞浆[Ca^2 ]i升高，而不含NO的SNP为似物，铁氰化钾[K3Fe(CN)6]不能诱导速殖子凋亡及其胞浆[Ca^2 ]i升高。胞外钙螯合剂EGTA，和L型电压依赖性钙通道阻滞剂异搏定，完全或部分抑制SNP引起的速殖子胞浆[Ca^2 ]i升高，胞内钙螯合剂BAP－TA／AM及胞外钙螯合剂EGTA明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡。结论：证明NO的供体SNP诱导弓形虫速殖子凋亡主要通过促进胞外钙内流，胞浆[Ca^2 ]i升高所致。     

甘氨酸脱氧胆酸对血小板胞内Ca2+浓度的影响

有研究证明，肝硬化时血小板高度活化，血小板胞内Ca^2 浓度([Ca^2 ]i)显著增加。肝硬化时，肝脏和血液中胆汁酸浓度显著增加，胆汁酸是一种毒性物质，而肝硬化患者血小板[Ca^2 ]i增加是否与胆汁酸有关，有必要进行研究，以探讨肝硬化患者血小板活化的机制。     

胰岛淀粉样纤维对体外胰岛细胞膜的毒性作用

目的探讨胰岛淀粉样多肽（IAPP,也称胰淀素Amylin）的纤维状态胰岛淀粉样纤维（IAf）对胰岛细胞膜的毒性作用及可能机制。方法比较用可溶性IAPP和IAf孵化培养的胰岛细胞膜流动性的变化,并在黏附细胞仪570记录各组[Ca^2＋]i的动态变化;以10μmol/LIAf组为对照组,分别比较Ca^2＋通道阻断剂组、无Ca^2＋培养液组、胆固醇干预组[Ca^2＋]i的动态变化,了解[Ca^2＋]i变化与钙离子通道的关系。结果细胞膜流动性和[Ca^2＋]i在IAf组中呈剂量依赖性升高,与可溶性IAPP组及空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;而可溶性IAPP组与空白对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）。Ca^2＋通道阻断剂预处理组加10μmol/LIAf刺激后[Ca^2＋]i变化与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）,而无Ca^2＋培养液组和胆固醇预处理组加10μmol/LIAf刺激后[Ca^2＋]i变化均明显低于对照组（P〈0.01）。结论IAf可能通过改变胰岛细胞膜流动性和细胞内钙超载而导致细胞损伤,钙超载是由于外钙内流所致,其途径可能并非经过钙离子通道,可能与“淀粉样通道”形成有关。胆固醇具有拮抗此毒性的作用。     

低分子肝素对谷氨酸所致大鼠大脑皮层神经细胞损伤的保护作用

目的 研究低分子肝素对谷氨酸（Glu）损伤培养大鼠皮层神经细胞的保护作用.方法 体外培养大鼠皮层神经细胞,建立谷氨酸诱导损伤模型,采用MTT法检测细胞活力;测定神经细胞培养液中乳酸脱氢酶漏出率;Fura-2/AM双波长荧光分光度法测定神经细胞内钙.结果 LMWH可提高Glu损伤神经细胞的活力,降低Glu所诱导的乳酸脱氢酶释放率增高,降低神经细胞内钙离子浓度.结论 LMWH对Glu所致大鼠皮层神经细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关.     

钙离子在胃肠平滑肌收缩机制中的作用

钙离子（Ca^2 ）在胃肠平滑肌收缩机制中起重要作用。平滑肌细胞电－机械耦联主要涉及细胞膜电位改变，胞外Ca^2 内流，药物－机械耦联主要涉及胞内贮存Ca^2 的释放。Ca^2 可启动平滑肌细胞收缩蛋白之间的朴互作用，收缩张力的产生不仅与[Ca^2 ]i密切相关，而且与收缩蛋白对Ca^2 敏感性高低有关。     

全身炎症反应综合征及脓毒症患者内皮细胞功能研究

目的：研究全身炎症反应综合征(SIRS)及脓毒症(sepsis)患者循环中黏附分子E-selectin、血栓调节蛋白以及患者血清对内皮细胞通透性、细胞内游离钙离子浓度的影响，结合分析其与患者并发症之问的关系，阐明SIRS／sepsis患者内皮细胞的损伤情况及其在疾病发生发展中的作用。方法：12例SIRS患者，原发病均为急性重症胰腺炎，其中5例有明确的感染证据(sepsis组)，5例伴发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，3例伴发失血性休克。ELISA法检测患者循环中E-selectin、血栓调节蛋白sTM)水平。二室弥散系统检测内皮细胞通透性，应用激光扫描共聚焦显微系统和Fluo-3／AM荧光探针标记技术，测定内皮细胞内游离钙离子浓度[Ca^2 ]i。结果：sepsis和伴有ARDS患者B选择素明显增高。休克患者B选择素无明显增高，但sTM明显上升。SIRS患者血清作用于体外培养的内皮细胞后，内皮细胞单层通透性明显增加，但SIRS／sepsis患者内皮细胞通透性升高与细胞内[Ca^2 ]i水平明显相关，而ARDS、休克组内皮细胞通透性的升高并不伴有[Ca^2 ]i水平的增加。结论：在炎症反应不同阶段，内皮细胞功能损伤程度不同。B选择素的升高与sepsis、ARDS的发生密切相关。sTM升高则与休克的发生密切，结合内皮细胞通透性和[Ca^2 ]i的相关分析，上述内皮细胞功能的检测可作为判断病情，指导治疗和观察疗效的指标。     

钙离子浓度对鼠白血病WEHI-3细胞 Caspase-3、Caspase-12和Bcl-2表达的影响

目的：研究细胞内钙离子浓度[Ca^2 ]i的升高对鼠白血病WEHI-3细胞株中Caspase-3、Caspase-12和Bel-2表达的影响。方法：在体外培养下，经不同浓度Econazole处理的WEHI-3细胞株用荧光指示剂Fura-2／AM于双波长荧光分光光度仪上测定[Ca^2 ]i。用western blot方法检测Caspase-3、Caspase-12和Bcl-2的表达。结果：随着[Ca^2 ]i提高，Caspase-12表达逐渐增加，Bcl-2表达逐渐减弱，而Caspase-3表达不变。结论：[Ca^2 ]i的升高对WEHI-3细胞株可诱发不通过Caspase-3途径的细胞凋亡。     

系统性红斑狼疮患者T细胞TCR/CD3复合物介导的信号传导研究

目的：证实系统性红斑狼疮（SLE）患者T细胞功能异常是否与其生物化学信号传导异常有关。方法：用CD3单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联刺激T细胞并用Thapsigargin和依地酸（EGTA）干预后，分别用粘附细胞仪连续观察10min T细胞[Ca^2 ]i的变化，并评价[Ca^2 ]i反应与CD3分子和三磷酸肌醇（InsP3）生成量的相关性。结果：正常人和SLE患者T细胞[Ca^2 ]i反应的基准值相似（P＝0．105）；SLE患者高峰者，平台值T细胞的[Ca^2 ]i反应明显高于正常对照（P＜0．001，P＜0．001），加入Thapsigargin后二者[Ca^2 ]i反应差异无显著性，而加入EGTA后二者[Ca^2 ]i反应差异有显著性，二者的T细胞CD3阳性率和InsP3生成量差异无显著性（P＝0．665，P=0．537）。结论：SLE患者T细胞TCR／CD介导的信号传导途径存在异常，SLE患T细胞功能异常可能是因细胞内生物化学信号传导途径异常所致。     

急性脑血管病患者血小板胞浆游离钙浓度测定的意义

采用钙荧光指示剂Fura-2AM，对32名健康对照组和53例急性脑血管病患血小板静息状态胞浆游离钙浓度([Ca^2 ]i)进行测定。结果显示：脑出血和脑梗塞急性期患血小板[Ca^2 ]i明显高于恢复期和健康对照组(P<0．01)；脑出血和脑梗塞急性期患血小板[Ca^2 ]i分别与平均动脉压和梗塞灶体积呈高度正相关(r=0．926和0．906，P<0．01)。提示脑出血患的血压升高和维持可能与血小板[Ca^2 ]i升高有关；脑梗塞患存在血小板的活化过程，降低血小板[Ca^2 ]i可能有利于控制梗塞灶的发生和发展。     

巨噬细胞在泡沫细胞化过程中的Ca2+变化

我室曾用Ｃ＿（５７）ＢＬ／６Ｊ品系小鼠腹膜巨噬细胞与１０ｍｇ·Ｌ￣（－１）氧化低密度脂蛋白孵育４天，建立了出现在早期动脉粥样硬化损伤中的巨噬细胞源性泡沫细胞的病理细胞模型，本文报道应用Ｃａ￣（２＋）荧光指示剂技术及ＮＡＤＨ氧化偶联差光谱变化的分析方法，检测了前述培养的泡沫样细胞的胞浆Ｃａ￣（２＋）水平及膜上Ｃａ￣（２＋）依赖性ＡＴＰ酶活性。发现泡沫样细胞内的Ｃａ￣（２＋）水平为对照组细胞的２．７倍，膜上Ｃａ￣（２＋）依赖性ＡＴＰ酶活性为后者的２４％。实验结果提示，在巨噬细胞源性泡沫细胞的形成过程中，伴随着缓慢的Ｃａ￣（２＋）内流或释放，这可能与膜上Ｃａ￣（２＋）通道的持续开放及后期Ｃａ￣（２＋）依赖性ＡＴＰ酶的钝化有关。     

血管紧张素Ⅱ1型受体胞外第二环肽抗体对大鼠血管平滑肌细胞质游离钙水平的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1受体)细胞外第二环肽抗体对培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)细胞质游离钙水平的影响。方法采用酶联免疫吸附测定法检测高血压患者血清中抗AT1受体抗体,亲和层析法提取阳性血清中的AT1受体细胞外第二环肽抗体。同时应用AT1受体胞外第二环肽主动免疫大鼠并提取抗体。将血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),患者及大鼠的AT1受体胞外二环肽抗体分别刺激钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载培养原代大鼠VSMC,观察荧光强度变化来检测细胞质游离钙水平变化。结果患者及大鼠血清中提取的AT1受体第二环肽抗体均刺激培养VSMC使细胞质游离钙水平升高,作用与AngⅡ类似。进一步实验发现抗体的激动效应能够被AT1受体胞外第二环肽的抗原表位序列及AT1受体拮抗剂氯沙坦阻断。结论针对AT1受体胞外第二环肽抗体具备激动效应,通过激动AT1受体刺激细胞质钙离子浓度增高,提示该抗体在高血压发病机制中起重要作用。     

川芎嗪对大鼠脑梗塞区细胞Ca~(2 )影响的实验研究

本实验用雄性大白鼠24只随机分成三组:A组(n=8)为对照组,在MCAO前30分钟静注蒸馏水;B组(n=8)在MCAO前30分钟静注川芎嗪lmg/kg;C组(n=8)在MCAD后40分钟静注川芎嗪lmg/kg。用钙离子选择性微电极观察脑梗塞区细胞外Ca~(2 )动态变化。结果显示B组脑梗塞区细胞外Ca~(2 )下降明显低于A组(P<0.05);C组给药前后自身对照脑梗塞区细胞外Ca~(2 )回升不显著(P>0.05)。提示缺血前30分钟用药川芎嗪能预防脑缺血区细胞外Ca~(2 )进入细胞。     

缺氧预处理对缺氧复氧乳鼠心室肌细胞游离钙的影响

观察缺氧预处理对缺氧复氧乳鼠心室肌细胞游离钙的影响。建立培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。设正常对照组(A组)、缺氧复氧组(B组)、缺氧预适应组(C组)。经Flou-3/AM负载染色后,采用流式细胞分析技术,测定细胞内钙离子浓度;利用膜片钳技术,观察L型钙通道和钠钙交换电流的变化。结果:①与A组比较,B组可显著增加细胞内的游离钙离子浓度(P<0.01);L型钙电流密度明显下降,I-V曲线上移,半数失活电压(V1/2)减小,ICa,L失活曲线明显左移,而Na+/Ca2+交换电流显著增加。②与B组比较,C组可减轻缺氧再灌注时[Ca2+]i增加(P<0.01);可减轻再灌注对L型钙电流的抑制,使I-V曲线下移程度减轻,V1/2增加及稳态失活曲线的右移;减少Na+/Ca2+交换电流的增加;③与A组比较,C组钙内流和Na+/Ca2+交换电流有轻度增加(P<0.05)。结论:缺氧预处理使缺氧/复氧造成的[Ca2+]i增高的程度减轻,是通过抑制Na+/Ca2+交换电流的增加实现的。     

大鼠肝细胞内与自由基代谢有关的生化指标增龄性变化

本文对不同年龄组大鼠肝细胞中 MDA、Mn-SOD、GSH、GPX、Ca~(2 )、Mg~(2 )-ATPase 的含量分别进行观察。结果显示,肝细胞膜和胞液的 MDA 均随增龄而呈递增趋势,其中尤以膜 MDA 升高明显,与青年组相比,膜 MDA 在中年组和老年组均显著升高(P<0.05);胞液 Mn-SOD 的活力则随增龄呈递减趋势,但各组间无统计学差异;GSH 含量和 GPX 活力随增龄的改变趋势相同,与青年组相比,中年组GSH 和 GPX 均显著升高(P<0.01),而从中年到老年其水平则显著下降(P<0.05或0.01),但仍明显高于青年组(P<0.05或0.01);膜 Ca~(2 ),Mg~(2 )-ATPase 的活力从青年到中年显著上升(P<0.05),从中年到老年该酶活力则明显下降(P<0.05),甚至略低于青年组。本文认为上述化合物均可以用来作为研究细胞衰老的客观指标。     

类缺血再灌注损伤对体外培养神经干细胞活性和胞内钙浓度及增殖的影响

目的观察类缺血再灌注损伤对体外培养的胚胎小鼠纹状体神经干细胞活性、胞内Ca2+浓度以及增殖的影响。方法将体外培养的小鼠神经干细胞分为类缺血再灌注组、药物预处理组(1μmol/L氟桂利嗪)和对照组。前两组进行类缺血处理并分别于再灌注0、30 min、1、2、3 h检测细胞内Ca2+浓度,于03、0 min、12、、31、2、24、36、486、0 h检测细胞活性,对照组在相同时间点检测细胞活性,比较3组间细胞内Ca2+浓度及细胞活性的差异。结果类缺血再灌注后神经干细胞内游离Ca2+浓度显著升高,在相同时间点药物预处理组胞内Ca2+浓度均低于类缺血再灌注组,其中0、30 min1、h时有显著性差异(P<0.05);类缺血再灌注后细胞活性降低,在相同时间点药物预处理组细胞活性均高于类缺血再灌注组,其中03、0 min、1、2 h时差异显著(P<0.05)。再灌注后12~60 h类缺血再灌注组和药物预处理组的细胞增殖率明显高于对照组(P<0.01)。结论类缺血再灌注可以导致胞内Ca2+浓度升高及神经干细胞活性的降低,氟桂利嗪预处理可抑制胞内Ca2+的升高,减轻神经干细胞的损伤;另外类缺血再灌注后存活的神经干细胞的增殖能力增强。     

Glutamate receptor activation triggers a calcium-dependent and SNARE protein-dependent release of the gliotransmitter D-serine

The gliotransmitter D-serine is released upon (S)-alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid/kainate and metabotropic glutamate receptor stimulation, but the mechanisms involved are unknown. Here, by using a highly sensitive bioassay to continuously monitor extracellular D-serine levels, we have investigated the pathways used in its release. We reveal that D-serine release is inhibited by removal of extracellular calcium and augmented by increasing extracellular calcium or after treatment with the Ca(2+) ionophore A23187. Furthermore, release of the amino acid is considerably reduced after depletion of thapsigargin-sensitive intracellular Ca(2+) stores or chelation of intracellular Ca(2+) with 1,2-bis(2-aminophenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetate-acetoxymethyl ester. Interestingly, D-serine release also was markedly reduced by concanamycin A, a vacuolar-type H(+)-ATPase inhibitor, indicating a role for the vesicular proton gradient in the transmitter storage/release. In addition, agonist-evoked D-serine release was sensitive to tetanus neurotoxin. Finally, immunocytochemical and sucrose density gradient analysis revealed that a large fraction of D-serine colocalized with synaptobrevin/VAMP2, suggesting that it is stored in VAMP2-bearing vesicles. In summary, our study reveals the cellular mechanisms subserving D-serine release and highlights the importance of the glial cell exocytotic pathway in influencing CNS levels of extracellular D-serine.     

血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠肝细胞内Ca2+及线粒体膜电位的影响

目的观察血脂康胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠肝细胞内Ca2 浓度及线粒体膜电位的影响。方法采用胶原酶消化法分离载脂蛋白E基因敲除小鼠肝细胞,体外原代培养8天后,加入含10%血脂康血清的培养基,48 h后以Flou-3/AM和JC-1为探针,应用激光共聚焦显微镜测量肝细胞内Ca2 浓度和线粒体膜电位。结果血脂康可明显降低载脂蛋白E基因敲除小鼠肝细胞内Ca2 浓度,与对照组比较差异有显著性(P<0.01);同时,血脂康可明显提高载脂蛋白E基因敲除小鼠肝细胞线粒体膜电位(P<0.05)。结论血脂康可降低载脂蛋白E基因敲除小鼠肝细胞内Ca2 浓度,提高线粒体膜电位,这可能是血脂康对抗高脂血症发生和发展的重要机制之一。     

缺血再灌注不同时间点大鼠海马细胞内Ca~(2+)含量比较

目的研究脑缺血再灌注损伤中大鼠海马神经细胞内Ca~(2+)含量的变化,检测环磷腺苷葡胺(MAC)预处理对其的影响。方法将SD大鼠60只按实验分为正常组(5只)、假手术组(5只)、缺血再灌注组(再灌注组)和MAC预处理组(预处理组)。再灌注组和预处理组又分为再灌注后2、24、48、72 h和7天5个时间点,每个时间点5只大鼠,线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,流式细胞仪检测缺血侧海马神经细胞内Ca~(2+)的含量,观察MAC预处理对细胞内Ca~(2+)含量变化的影响。结果与假手术组比较,再灌注组2 h细胞内Ca~(2+)含量开始增高,24、48 h Ca~(2+)含量达到高峰(P0.01),72 h Ca~(2+)含量开始下降,7天Ca~(2+)含量进一步降低,但仍高于假手术组水平;与再灌注组比较,预处理组缺血再灌注2 h Ca~(2+)含量差异无统计学意义,24、48、72 h Ca~(2+)含量显著降低(P0.01)。结论细胞内Ca~(2+)含量增高为缺血再灌注损伤的病理机制之一,MAC预处理能有效抑制细胞内Ca~(2+)含量增高,在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中起到保护作用。