化痰散结方对人肺癌细胞Fas和FasL表达的影响

目的观察化痰散结方含药血清,对人肺癌SPC-A1细胞Fas和FasL的表达的影响.方法通过血清药理学方法,选择不同浓度的含化痰散结方的兔血清,与人肺癌细胞SPC-A1共同孵育不同时间后,应用倒置相差显微镜和荧光显微镜对细胞生长和凋亡状况进行形态学观察,应用SABC法检测SPC-A1细胞Fas和FasL的表达.结果人肺癌细胞经含化痰散结方的兔血清作用后,由贴壁生长而逐渐脱落,外形变圆,体积缩小,折光性增加;荧光镜下可见细胞核破碎、裂解为大小不等的凋亡小体;SABC法显示,化痰散结方含药血清可上调SPC-A1细胞Fas(P＜0.01),而且可下调SPC-A1细胞FasL的表达(P＜0.05).结论化痰散结方含药血清可诱导人肺癌细胞凋亡,其机制可能与上调SPC-A1细胞Fas和下调其FasL有关.     

化痰散结方对人肺癌细胞Fas和FasL表达的影响

目的　观察化痰散结方含药血清 ,对人肺癌SPC A1细胞Fas和FasL的表达的影响。方法　通过血清药理学方法 ,选择不同浓度的含化痰散结方的兔血清 ,与人肺癌细胞SPC A1共同孵育不同时间后 ,应用倒置相差显微镜和荧光显微镜对细胞生长和凋亡状况进行形态学观察 ,应用SABC法检测SPC A1细胞Fas和FasL的表达。结果　人肺癌细胞经含化痰散结方的兔血清作用后 ,由贴壁生长而逐渐脱落 ,外形变圆 ,体积缩小 ,折光性增加 ;荧光镜下可见细胞核破碎、裂解为大小不等的凋亡小体 ;SABC法显示 ,化痰散结方含药血清可上调SPC A1细胞Fas(P <0 .0 1 ) ,而且可下调SPC A1细胞FasL的表达 (P <0 .0 5 )。结论　化痰散结方含药血清可诱导人肺癌细胞凋亡 ,其机制可能与上调SPC A1细胞Fas和下调其FasL有关。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌H22细胞凋亡及Fas和FasL表达的影响

目的：观察扶正抑瘤颗粒含药血清诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡的作用和对细胞Fas、FasL表达的影响．方法：应用血清药理学方法，用不同剂量的含药血清与小氟肝癌细胞在体外共同孵育后，应用相差显微镜，流式细胞仪、电子显微镜对肿瘤细胞的生长和凋亡进行观察，用SABC法检测H22细胞Fas和FasL的表达结果：小鼠肝癌H22细胞经含药血清作用后，发生明显的形态学改变，相差显微镜下可见细胞体积缩小，折光性增强，染色质浓缩，核浆比例增大，密度增高，胞浆出现颗粒样物质。电镜下可见明显的凋亡形态变化，流式细胞仪可测到凋亡峰；SABC法显示，扶正抑瘤含药血清可上调小鼠H22细胞Fas的表达，而对FasL表达的影响不明显结论：扶正抑瘤颗粒能诱导H2：细胞发生凋亡，其机制可能与其上调H22细胞Fas的表达有关，     

补肾益气方调控Bcl-2和XIAP蛋白对早孕期人滋养层细胞凋亡的拮抗作用

目的:探讨补肾益气方对正常早孕期人滋养层细胞凋亡的调节作用及机制。方法:体外培养正常早孕期人细胞滋养层细胞,分别加入空白对照组、5%含药血清组、10%含药血清组、20%含药血清组,用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪检测含药血清作用24、48、72h后细胞的增殖活性,Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3酶活性,Western blot检测Fas、FasL、Bcl-2和XIAP蛋白表达。结果:含药血清培养24、48、72h后,细胞在490nm波长的吸光度值增加(P<0.01);sub-G1期细胞减少(P<0.01),S期细胞增加(P<0.01),G2/M期细胞明显减少(P<0.01),Caspase-3酶活性降低;含药血清对Fas和FasL表达均有上调作用,呈剂量依赖式诱导(P<0.05);Bcl-2蛋白表达水平上升,随着浓度增加,表达量也增加,同时伴随XIAP水平升高(P<0.05)。结论:补肾益气方通过提高凋亡抑制蛋白Bcl-2水平,从而增强XIAP表达,抑制Caspase-3活性,抑制细胞死亡。FasL表达水平的上调有利于母胎免疫耐受的维持。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞Fas、FasL蛋白表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞Fas、FasL表达的影响。方法:细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3I、7b型腺病毒分别攻击,并分别加入相应药物至各组细胞中;用流式细胞仪检测比较各组细胞Fas、FasL蛋白的表达。结果:病毒对照组较正常细胞组细胞中Fas、FasL表达升高,含药血清组比病毒对照组细胞Fas、FasL表达降低。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞Fas、FasL蛋白表达增高;清肺口服液可降低Fas、FasL蛋白表达,从而抑制由腺病毒引发的细胞凋亡,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

补肾明目口服液对葡萄膜炎慢性化发病机制的干预作用

目的 研究补肾明目口服液对慢性葡萄膜炎患者外周血淋巴细胞(PBL)凋亡和Fas、FasL表达活性的影响, 探讨补肾明目口服液在葡萄膜炎慢性化发病机制中的干预作用.方法 采用血清药理学方法,制取补肾明目口服液含药兔血清.运用流式细胞仪检测8例慢性葡萄膜炎患者外周血淋巴细胞在不同浓度的补肾明目口服液的含药血清(20%,10%,5%)刺激下淋巴细胞凋亡和自杀相关因子/自杀相关因子配体(Fas/FasL)表达的变化.结果 慢性葡萄膜炎患者PBL凋亡率低于正常组(P<0.05),Fas表达高于正常组(P<0.05),FasL表达与正常组差异不明显(P>0.05); 10%,20%含药血清可增加慢性葡萄膜炎患者PBL的凋亡率(P<0.01),降低Fas表达(P<0.01),升高FasL的阳性细胞率(P<0.01).结论 慢性葡萄膜炎患者PBL存在凋亡及凋亡相关蛋白表达的紊乱,中药补肾明目口服液在体外可纠正其紊乱,增高PBL的凋亡.研究为中药延缓慢性葡萄膜炎复发提供了理论基础.     

化痰散结方含药血清作用胃癌细胞系MGC803后差异表达miRNAs筛选及生物信息学分析

目的:筛选化痰散结方含药血清处理胃癌细胞系MGC803后差异表达的微小RNA(miRNAs),并进行生物信息学分析。方法:应用"下一代"测序技术(即高通量测序技术)对MGC803细胞和化痰散结方含药血清处理后的MGC803细胞进行miRNAs差异表达谱分析;结合文献报道确定4个与肿瘤相关的miRNAs,对其进行靶基因预测及信号转导通路的分析。结果:经化痰散结方含药血清处理后,miR-424～3p和miR-494～3p的表达水平明显上调,miR-33b-3p和miR-27a-5p的表达水平明显下调;生物信息学方法分析结果显示miR-424～3p、miR-494～3p、miR-27a-5p和miR-33b-3p及其靶基因参与细胞迁移、细胞周期和凋亡等通路。结论:化痰散结方含药血清可能通过调控miR-27a-5p、miR-33b-3p、miR-424～3p、和miR-494～3p的表达抑制胃癌的发生发展。     

解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas/FasL表达的影响

目的：研究解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas／FasL表达的影响。方法：SPF级Wistar大鼠84只，随机分为空白组、模型组、解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组、安宫牛黄丸组、乳果糖组，以硫代乙酰胺（TAA）皮下注射复制急性肝衰竭大鼠模型，造模前3d开始灌胃给药，2次/d，间隔12h，共给药5．5d；采用ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-α含量，Western blot法测定肝细胞TNFR1的表达量，免疫组化法检测Fas／FasL在各组肝细胞中分布的趋势及表达强度。结果：与空白组比较。模型组大鼠血清中TNF-α含量升高，肝细胞TNFR1、Fas、FasL的表达均显著增强，差异有统计学意义（P〈0．01），解毒化瘀Ⅱ方能降低血清TNF-α的含量，抑制肝细胞TNFR1、Fas/FasL的表达，呈现量效关系。并以解毒化瘀Ⅱ方高剂量组作用效果最佳。结论：解毒化瘀Ⅱ方抗肝衰竭的作用机制可能是通过干预TNF-α/TNFR1及Fas／FasL的表达，阻止死亡信号的转导，抑制肝细胞凋亡。     

基于对SGC-7901细胞Survivin、Bcl-2基因的调控探讨益气化瘀散结方影响胃癌细胞增殖凋亡的作用机制

目的:观察益气化瘀散结方对胃癌SGC-7901细胞增殖凋亡的影响,并通过益气化瘀散结方干预后凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2的表达变化探讨其相关作用机制。方法:体外培养SGC-7901细胞,采用益气化瘀散结方含药血清干预,细胞分为空白血清组及5%、10%、20%益气化瘀散结方含药血清组,药物干预后,CCK_8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot、Real-time PCR技术检测Survivin、Bcl-2蛋白及mRNA的表达变化。结果:5%、10%、20%益气化瘀散结方含药血清组SGC-7901细胞的增殖明显下降,与空白血清组比较,10%、20%浓度组差异显著(P<0.05),48 h为实验最佳干预时间点;5%、10%、20%益气化瘀散结方含药血清均能不同程度促进SGC-7901细胞凋亡,尤以10%、20%含药血清组差异显著(P<0.05);10%、20%浓度益气化瘀散结方含药血清组Survivin、Bcl-2蛋白及mRNA表达水平下降,与空白血清组比较差异显著(P<0.05)。结论:益气化瘀散结方能抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、促进胃癌SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与降低凋亡抑制蛋白Survivin、Bcl-2的表达相关。     

参麦注射液及氨茶碱对肺气肿大鼠小气道平滑肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的；探讨参麦注射液及氨茶碱对木瓜蛋白酶致大鼠肺气肿小气道平滑肌细胞凋亡及其Fas/FasL系统表达的影响。方法：采用免疫组织化学及TUNEL法，检测气管内注入木瓜蛋白酶后肺气肿模型1、3、5、7、15、30天组和正常对照组，小气道平滑肌细胞凋亡及其Fas/FasL系统表达，以及参麦注射液和氨茶碱对其影响。结果：正常对照组小气道平滑肌细胞Fas、FasL表达很低，阳性率分别为（2．31±0．55）％、（1．28±0．47）％，气道内注入木瓜蛋白酶后，空白组小气道平滑肌细胞（SASMC）Fas、FasL表达随着注酶时间的延长而阳性率也明显增加，参麦注射液有抑制大鼠SASMC Fas 、FasL表达的作用，而氨茶碱作用不明显。同时，发现正常对照组大鼠SASMC凋亡百分率也很低（0．87±0．32）％，气道内注入木瓜蛋白酶后，空白组SASMC凋亡百分率随着注酶时间的延长而凋亡百分率也明显增加，用参麦注射液治疗后可使大鼠SASMC凋亡降低，而氨茶碱作用不明显。结论：在肺气肿形成过程中，Fas和FasL参与了小气道平滑肌细胞的凋亡调控，参麦注射液可能通过抑制炎性介质释放，影响Fas和FasL蛋白表达和减少小气道平滑肌细胞的凋亡，对肺气肿有一定的治疗作用。     

中医药治疗老年肿瘤的机理研究

目的:探讨中药抗肿瘤疗效及Fas/FasL基因在医疗中的作用。方法:将0、0.01、0.1、1μg/mL表阿霉素分别处理的肝癌细胞与有、无参芪处理的淋巴细胞一起培养,观察中药或FasL单克隆抗体介入之后抗肿瘤的实际效果;用PCR进行测定化疗药物处理的肝癌细胞Fas/FasL基因的具体表达。结果 1μg/mL表阿霉素所处理的肝癌细胞OD值要高于0、0.01、0.1μg/mL表阿霉素所处理的肝癌细胞,没有处理肝癌细胞的OD值则最高;7402肝癌细胞表达Fas和FasL基因,与0μg/mL表阿霉素干预过的7402肝癌细胞FasL表达比较,0.01、0.1μg/mL的降低,1μg/mL的增高;FasL单克隆抗体介入之后,0、0.01、0.1μg/mL表阿霉素处理的肝癌细胞OD值也高于空白对照。结论:中药抗肿瘤可减毒增效;Fas/FasL系统在抗肿瘤免疫机制中起重要作用。     

康莱特注射液对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响及机制

目的观察薏苡仁注射液(康莱特注射液)对人肺腺癌细胞A594凋亡的影响,并探讨康莱特抗肺腺癌细胞的作用及机制。方法体外培养人肺腺癌细胞株A549,分别加入5,10,15,20,25 mL/L康莱特注射液,对照组加等量生理盐水,孵育48 h后,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期的变化;20 mL/L康莱特注射液孵育48 h后,收集细胞,FCM测定细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、免疫印迹(Western blot)法分别测定Caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白的表达情况。结果康莱特注射液处理后,G1期的细胞均显著增加,S期细胞明显减少;20 mL/L康莱特注射液处理A549细胞48 h后,细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白表达显著升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降,Bcl-2/Bax比值显著降低。结论康莱特注射液可通过上调A549细胞Caspase-3、Fas和FasL的表达,降低Bcl-2/Bax比值,诱导其凋亡,产生抗肿瘤作用。     

补肾、活血类复方对老年大鼠T细胞凋亡相关基因表达调控模式的比较研究

目的：探讨两个补肾复方（右归饮和补肾益寿胶囊）及活血复方下调老年大鼠T细胞凋亡的基因调控模式。方法：用TUNEL标记的流式细胞检测和荧光实时定量RT－PCR技术，研究老年大鼠和年轻大鼠T淋巴细胞抗凋亡和促凋亡基因（Fas、FasL、Bcl-2、Bax、TNFR1、TNFR2)的表达以及凋亡级联反应中半胱氨酸蛋白酶（如Caspase8和Caspase3)活性的差异，及比较两个补肾方和活血复方对老年大鼠T细胞抗凋亡和促凋亡基因表达的调控以及对Caspase活性的影响。结果：两个补肾复方均能够有效地降低老年大鼠T细胞的过度凋亡，下调FasL及TNFR1基因的转录和Caspase8及Caspase3的活性。而活血复方对于T细胞的过度凋亡无显著作用。结论：激活诱导的T细胞过量凋亡与肾虚密切相关，两个补肾复方均可下调促凋亡基因FasL和TNFR1的转录，从而抑制老年大鼠过度的T细胞凋亡，是补肾法所特有的对老年T细胞凋亡相关基因的调控模式。     

补中益气汤对甲状腺功能减退大鼠心肌细胞凋亡及 Fas, FasL和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:研究补中益气汤对甲状腺功能减退(甲减)大鼠心肌细胞凋亡及Fas,FasL和Caspase-3蛋白表达的影响.方法:采用Kolaja法制备大鼠甲状腺功能减退模型.健康Wistar大鼠120只随机分成正常对照组、模型组、补中益气汤组(18.9 g·kg-1)、左旋甲状腺素钠L-T4组(9.45μg·kg-1),各组灌胃给药56 d.光镜和电镜下观察心肌形态学和超微结构变化,TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组化检测凋亡相关基因蛋白Fas,FasL,Caspase-3的表达,ELISA法测定血清促甲状腺激素(TSH),放射免疫分析法测定血清总三碘甲状腺原氨酸(Tr3)及总甲状腺素(TT4).结果:与正常组相比,模型组心肌细胞凋亡指数及Fas,FasL,Caspase-3的表达均达高峰,心肌细胞结构损伤严重,经治疗后补中益气汤组(12.10±0.73)和L-T4组(29.26±2.10)的心肌细胞凋亡指数降低,Fas,FasL及Caspase-3的阳性表达均下降,且补中益气汤组的疗效优于L-T4组(P＜0.05).结论:甲减引起心肌细胞凋亡增多,Fas,FasL,Caspase-3表达升高,而补中益气汤可明显降低心肌细胞凋亡指数,下调Fas,FasL及Caspase-3的表达,说明补中益气汤对甲减的心肌损害有干预保护作用.     

至生胶囊调节食管癌造模大鼠细胞凋亡及Fas, FasL蛋白表达的研究

目的:观察至生胶囊对食管癌造模大鼠细胞凋亡及Fas,FasL蛋白表达的影响,从分子生物学角度分析其作用机制。方法:选用健康Wistar大鼠,除空白组外,其余大鼠均ip甲基戊基亚硝胺(MANA)5 mg.kg-1,1次/周,连续18周造模。末次注射后将造模大鼠随机分为模型组、至生胶囊高(0.75 g.kg-1)、中(0.5 g.kg-1)、低(0.25 g.kg-1)剂量组、西药替加氟组(20 mg.kg-1),ig,1次/d,连续4周。原位末端标记法(TUNEL)检测对食管癌癌细胞凋亡的促进作用;免疫组化法检测大鼠食管细胞中Fas,FasL蛋白的表达。结果:至生胶囊可明显促进食管癌细胞的凋亡,高、中、低剂量组、化疗组均促进凋亡,与模型组比较均有统计学意义(P<0.05),高、中剂量组疗效明显优于化疗组、低剂量组(P<0.05),且呈一定量效关系。各药物治疗组Fas表达阳性率均有不同程度的升高,FasL表达阳性率均有不同程度的降低。结论:至生胶囊能促进食管癌细胞凋亡,其作用机制可能与其提高Fas表达、降低FasL表达有关;至生胶囊促进食管癌细胞凋亡及调节Fas,FasL表达的作用存在一定的量效关系,至生胶囊高剂量此种作用优于替加氟。     

莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与Fas/FasL途径的相关性研究

目的 研究莱菔硫烷对人肝癌HepG2细胞Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响,探讨其诱导HepG2细胞凋亡过程中Fas/FasL途径的作用.方法 Caspase-8试剂盒检测莱菔硫烷对HepG2细胞Caspase-8活性的影响;流式细胞仪检测莱菔硫烷对HepG2细胞中Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响.结果 莱菔硫烷10、20、40 μmol/L作用于HepG2细胞48 h,可显著升高HepG2细胞Caspase-8活性(P＜0.01);可使HepG2细胞Fas、FasL蛋白的表达显著升高(P＜0.01);莱菔硫烷20、40 μmol/L时,可显著提高Bid蛋白的表达(P＜0.01),上述作用均呈剂量相关性.结论 激活Fas/FasL途径可能是莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的重要机制之一.     

中药异位宁对子宫内膜异位症模型大鼠Fas/FasL基因表达影响的实验研究

目的：通过研究异位宁对Fas/FasL蛋白表达的影响来阐述异位宁治疗子宫内膜异位症的作用机制。方法：取雌性Wistar大鼠,随机分为5组,正常对照组、模型对照组、异位宁高、低剂量组及西药丹那唑对照组;造模成功后各给药组灌胃给药1个月后,观察各组子宫内膜局部组织中Fas及FasL蛋白的表达情况。结果：治疗后异位宁高、低剂量组以及西药对照组Fas、FasL表达增多,染色较深,与模型组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：异位宁具有诱导Fas、FasL基因表达,提高异位内膜凋亡能力,使异位病灶得以萎缩、消失的作用。     

益气化瘀法对体外培养子宫肌瘤细胞增殖凋亡相关蛋白表达影响的研究

目的:研究具有益气化瘀功效的中药复方化瘤方对体外培养子宫肌瘤细胞增殖相关蛋白(PCNA)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Fas/Fas-L)表达的影响。方法:制备化瘤方、宫瘤宁、米非司酮药物血清,采用免疫细胞化学方法检测药物作用后增殖细胞核抗原(PCNA),凋亡相关基因(Bcl-2)蛋白、Fas及其配体Fas-L变化。结果:3种药物血清均能明显下调PCNA、Bcl-2、Fas及其配体Fas-L蛋白在肌瘤细胞中的表达(P<0.001)。结论:中药复方化瘤方通过降低PCNA蛋白表达,直接抑制子宫肌瘤细胞增殖;调节Bcl-2、Fas-L蛋白表达诱导子宫肌瘤细胞凋亡。