罗氏cobas c702全自动生化分析仪检测系统性能验证

目的对新的检测系统罗氏cobas c702全自动生化分析仪的分析性能进行验证。方法按美国临床实验室标准化协会(CLSI)指南文件EP5-A2、EP15-A2、EP6-A2的要求,对罗氏cobas c702全自动生化分析仪的精密度、准确度、线性范围等3个性能进行验证,并与厂商声明的性能或公认的质量标准进行比较。结果该全自动生化分析仪检测的批内精密度小于1/4允许总误差(TEa),日间精密度和总精密度小于1/3 TEa,符合《医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明》中对分析性能的要求;对卫生部20份室间质控品检测结果与靶值进行比对,结果全部满分,显示准确度良好;线性范围与厂商提供的性能指标相符。结论罗氏cobas c702生化分析仪检测系统精密度、准确度及线性范围等主要性能在该实验室均达到了相关标准的要求。     

氨基酸及肉碱非衍生化串联质谱法检测程序的测量不确定度评估

目的对Waters公司ACQUITY TQD串联质谱仪及其配套试剂检测氨基酸、肉碱的程序进行测量不确定度评估,探讨评估的意义。方法按照《医学实验室——测量不确定度的评定与表达》提供的方法,用两种不同批号的试剂盒检测室内质控品各20个工作日,每个工作日在常规标本检测前、后各检测一次质控品,随机更换检测者,计算测量复现性引入的测量不确定度;统计原卫生部临床检验中心2014年和2015年进行的20次新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中的氨基酸室间质评数据、16次酰基肉碱室间质评数据,计算偏倚引入的测量不确定度;根据测量复现性引入的测量不确定度和偏倚引入的测量不确定度计算相对合成标准不确定度和相对扩展不确定度。以原卫生部临床检验中心新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中的氨基酸和酰基肉碱室间质评的允许总误差指标作为目标扩展不确定度。结果瓜氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、丙酰肉碱、辛酰肉碱、十二碳酰肉碱、十六碳酰肉碱、十八碳酰肉碱的相对合成扩展不确定度为19.1%~26.1%(k=2),小于目标不确定度;亮氨酸、酪氨酸、缬氨酸、游离肉碱的相对合成扩展不确定度为31.0%~43.3%(k=2),大于目标不确定度;异戊酰肉碱的不确定度需另行评估。结论通过氨基酸及肉碱非衍生化串联质谱法配套检测程序的测量不确定度的评估,不仅可以为持续改进检测质量提供机会,而且有助于实验技术人员正确解读检测数据及临床医师正确使用检验报告。     

非罗氏配套肌酐试剂在罗氏Modular DP生化分析仪上的性能评价

目的评价非配套血清肌酐检测试剂在罗氏Modular DP全自动生化分析仪上的分析性能。方法按美国临床实验室标准化协会（CLSI）的指南文件EP-5A2,EP-6A2,EP9-A2,EP-7A2的要求,对非罗氏配套肌酐试剂在罗氏Modular DP全自动生化分析仪上进行精密度、线性范围、与罗氏配套肌酐试剂比对、干扰性能进行验证,利用卫生部室间质量评价结果对检测准确度进行评价。结果批内精密度小于1/4允许总误差（TEa）、总精密度小于1/3TEa;40份患者标本比对相关系数r=0.9992,在医学决定水平偏倚小于1/2TEa;2013年3个批次卫生部室间质量评价成绩均为100分,总平均偏倚小于1/2TEa;线性范围、干扰性能均与厂商声明的性能指标相符。结论非配套血清肌酐检测试剂在罗氏Modular DP全自动生化分析仪上的主要分析性能能够符合质量目标要求。     

Beckman Coulter AU2700全自动生化仪的性能验证

目的对在Beckman Coulter AU2700全自动生化分析仪部分检测项目丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素(UREA)、总蛋白(TP)、氯(Cl~-)的分析性能进行验证,保证检测结果的准确可靠。方法根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)及其他相关文献对ALT、UREA、TP、Cl-的精密度、正确度、可报告范围、生物参考区间等分析性能进行验证。结果各项目批内精密度、日间精密度分别小于1/4 CLIA’88的允许总误差(1/4Tea)、1/3 CLIA’88的允许总误差(1/3Tea);正确度偏倚小于1/2CLIA’88的允许总误差(1/2Tea);ALT、UREA、TP、Cl~-线性实验相关系数2≥0.975,以上项目在厂家规定的检测范围内线性良好;生物参考区间验证结果均在设定的范围之内。结论 Beckman Coulter AU2700全自动生化分析仪所验证项目性能符合要求,该检测系统能够满足临床应用。     

ADVIA 2400全自动生化分析仪性能验证

目的从精密度、准确性及线性范围3个方面,对ADVIA 2400全自动生化分析仪进行性能验证。方法按照美国临床实验室标准化协会(NCCLS)公布的文件标准对ADVIA 2400全自动生化分析仪进行精密度、准确性及线性范围等性能验证。结果 ADVIA 2400全自动生化分析仪检测项目钾(K)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、转肽酶(GGT)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、尿素氮(BUN)、血糖(GLU)、总蛋白(TP)、肌酸激酶(CK)、淀粉酶(AMY)批内精密度和总精密度均小于厂家精密度,这些项目偏倚均小于1/2CLIA′88允许误差范围,这些项目在厂家规定的检测范围内线性良好。结论 ADVIA 2400全自动生化分析仪性能良好,满足临床检测要求。     

尿微量白蛋白检测试剂盒性能验证

目的对Orion免疫比浊法尿微量白蛋白(m ALB)检测试剂盒的性能进行验证。方法根据中华人民共和国卫生行业标准(WS/T)492-2016文件进行精密度和正确度验证,根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)的EP6-A2文件进行线性范围验证,根据CLSI的C28-A2文件进行生物参考区间验证。结果共检测5批10个标本,批内精密度为0.7%~1.0%,批间精密度为1.5%~1.8%,小于1/4美国临床实验室修正法规1988(CLIA'88)的允许范围和1/3 CLIA'88的允许范围;正确度验证实验显示高,低两个浓度水平校正品靶值均在置信区间范围内;线性范围验证显示在6.45~151.40 mg/L呈线性;参考区间验证显示参考区间有效。结论采用Orion免疫比浊法的m ALB检测试剂盒性能良好,可以满足临床的质量要求。     

血清胰淀粉酶试剂盒方法性能评价

目的:对商品化血清胰淀粉酶试剂盒进行性能评价,判断其分析性能是否满足临床要求。方法:按照国家医学实验室认可及CAP认可要求,依照NCCLS EP5-A文件,分析P-胰蛋白酶试剂盒日内和日间精密度;用能力对比评价分析方法的准确度;按照NCCLS EP6-P文件评价分析方法的线性范围;评价分析方法的最低检测限和携带污染率;并对说明书的参考范围进行验证。结果:胰蛋白酶试剂盒的日内精密度小于1/4总分析误差,日间精密度小于1/3总分析误差;分析方法的能力比对结果合格;分析方法的线性范围符合临床要求;说明书提供的分析方法参考范围符合实验室需要;其它指标符合性能评价要求。结论:该商品化胰淀粉酶试剂盒符合实验室性能标准。     

生化分析仪精密度、准确性以及线性范围性能验证

目的对雅培Aeroset全自动生化仪的分析项目从精密度、线性范围、正确度三个方面进行性能验证,保证其检测结果的准确可靠。方法根据CLSI推荐的EP5-A2文件进行精密度验证;根据EP6-A文件进行线性范围验证;根据EP9-A2文件对Aeroset全自动生化仪与DADE Xpand生化仪进行方法学比对,验证正确度。结果 Aeroset全自动生化仪的分析项目批内精密度分别为0.13~4.18,总精密度分别为0.14~4.38,均小于厂家声称的精密度;ALT、AST、ALP、UA、UN、CR以及GLU在测定范围内都表现出良好的线性关系,r2>0.995;两仪器比对结果相关性较好,r2>0.995,且偏倚值均小于1/2CLIA′88允许误差范围。结论 Aeroset全自动生化仪及配套系统,其分析性能满足临床检测要求。建议所有的临床实验室对所使用的检测系统的分析性能进行评价,保证其检测结果的准确可靠,从而满足临床需求。     

ISO15189:2012与临床实验室定量检测程序分析性能评价

目的根据国际标准化组织(ISO)15189:2012要求,建立适用于临床实验室定量检测程序分析性能评价的实验方案,对Beckman Coulter IMMAGE 800检测系统进行性能评价。方法参照美国临床和实验室标准化委员会(CLSI)的有关文件及相关文献,结合工作实际,设计验证方案,对Beckman Coulter IMMAGE800检测系统6个常规检测项目的正确度、精密度、分析测量范围(AMR)、临床可报告范围(CRR)和生物参考区间5个性能指标进行评价,并与厂家提供的分析性能或公认的质量指标进行比较。结果 IMMAGE 800特定蛋白分析仪各项目的相对偏倚在0.88%~3.25%,均小于规定的允许偏倚;各项目批内精密度在1.07%~4.00%范围内,均小于原卫生部临检中心能力验证(PT)/室间质量评价(EQA)的1/4TEa质量要求,各项目批间精密度在1.39%~6.17%范围内均小于PT/EQA的1/3TEa质量要求;各项目的回归方程斜率均在0.97~1.03范围内,r20.995,线性良好;各项目临床可报告范围能够满足临床检测需求;各项目引用的参考区间合适。结论 Beckman Coulter IMMAGE 800特定蛋白分析仪在正确度、精密度、分析测量范围、临床可报告范围和生物参考区间5个方面验证合格,能满足实验室需求。该研究验证方案和实验方法简便易行,对规范实验室建设和实验室认可具有重要意义。     

罗氏cobas c 702全自动生化分析仪性能验证

目的对罗氏cobas 8000全自动流水线的生化模块c 702的主要性能进行验证。方法根据《医学实验室质量和能力认可准则》及其他相关文献,评价c 702的检测项目TBIL、TP、ALT、GGT、UREA、GLU、Cl-、TRIG的精密度、正确度、线性范围。结果罗氏c 702检测各项目的批内精密度均小于1/4TEa,批间精密度均小于1/3TEa;正确度偏倚均小于1/2TEa;线性范围均为临床可接受。结论罗氏c 702生化模块所验证项目性能符合要求,能够满足临床应用;《临床化学设备线性评价指南》的多项式线性评价方法计算简单,可操作性强,具有较好的临床实用性。     

串联质谱检测干血滤纸片氨基酸方法的建立

目的　建立可靠的串联质谱技术检测干血滤纸片中氨基酸方法,以便用于氨基酸代谢紊乱疾病的筛查和诊断。方法　取含不同浓度氨基酸(苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、瓜氨酸和缬氨酸)的血滤纸片,用含已知量相应氨基酸内标的甲醇萃取,盐酸正丁醇衍生后,用串联质谱仪检测血片中氨基酸谱及其浓度。分析该方法的精确性、样品回收率及浓度相关性。结果　氨基酸批内和批间变异系数分别为6. 3% ~9. 7%、9. 9% ~14. 3%。低浓度回收率为92% ~100%,中等浓度回收率为94% ~104%,高浓度回收率为98% ~107%。不同浓度的氨基酸实测浓度与加入浓度之间的相关系数为0. 999 0~0. 999 9。结论　串联质谱技术检测干血滤纸片中氨基酸能够达到较高的精确性、准确性和回收率,为临床进行氨基酸分析提供了一项新技术,可用于新生儿遗传代谢病筛查、高危儿童遗传代谢病的诊断及其他与氨基酸代谢有关的疾病诊治。     

Analysis of dicarboxylic acids by tandem mass spectrometry. High-throughput quantitative measurement of methylmalonic acid in serum, plasma, and urine.

BACKGROUND: Methylmalonic acid (MMA) is a dicarboxylic acid whose concentration can be increased in blood and urine in patients with an inborn error of metabolism or vitamin B(12) deficiency. We developed a method for the selective analysis of dicarboxylic acids that exploits the high specificity of tandem mass spectrometry (MS/MS) and the substantial difference in fragmentation patterns of the isomers methylmalonic (MMA) and succinic acid (SA). METHODS: Dicarboxylic acids were extracted from samples with methyl-tert-butyl ether and derivatized with butanolic HCl to form dibutyl esters. The derivative was injected into the liquid chromatography (LC)-MS/MS system using TurboIonSpray (nebulizer-assisted electrospray) ionization and quantified by the multiple reaction monitoring mode of MS/MS. RESULTS: The assay for MMA was linear up to 150 micromol/L. The total imprecision was < or =7.5% at both low and high concentrations. The limits of quantification and detection were 0.1 and 0.05 micromol/L, respectively. The degree of interference from SA could be predicted from the branching ratios of the major product ions. CONCLUSIONS: The method is specific for dicarboxylic acids. The LC-MS/MS analysis for MMA requires minimal chromatographic separation and takes <60 s per sample. The entire analysis, including sample preparation, for a batch of 100 specimens can be performed in <4 h.     

毛细管电泳-激光诱导荧光法分离四种神经递质类氨基酸的条件优化

目的探讨毛细管电泳分离神经递质类氨基酸的影响因素。方法采用毛细管电泳法分离4种神经递质类氨基酸的荧光素异硫氰酸酯(FITC-AAs)衍生物,分析电泳缓冲液、表面活性剂以及衍生条件对分离的影响。结果电泳缓冲液的组成、浓度、pH值、表面活性剂以及衍生条件对4种FITC-AA衍生物分离有很大影响,在以75 mm ol/L,pH 9.42硼酸盐含100 mm ol/LSDS为电泳缓冲液,50 mmol/LpH 9.8硼酸盐为衍生缓冲液,4种FITC-AA衍生物20 min内得到很好分离。结论通过条件优化,毛细管电泳-激光诱导荧光技术分离神经递质类氨基酸的分离效果能得到很大提高。     

Development of a method for rapid quantitation of amino acids by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MSMS) in plasma.

A new analytical method has been developed and is proposed for the rapid determination of eighteen common amino acids, including tryptophan, in plasma and dried blood spots, by liquid chromatography coupled with ionspray tandem mass spectrometry. Potentially the method can include other amino acids and can be used for the diagnosis of metabolic disease. The use of the ionspray tandem mass spectrometry approach permits extremely rapid chromatographic separation of all amino acids requiring less than four minutes for the analysis of each sample, after a simple sample preparation procedure. The chromatographic separation of the analytes was achieved using a CN normal phase column and a water/acetonitrile/trifluoroacetic acid mobile phase at flow rate of 1 ml/min. The mass spectrometer was operated in multiple reaction monitoring mode, where each analyte had its own unique precursor and product ion setting. The quantitative analysis of amino acids was achieved using as internal standards just two representative isotopically labeled amino acids: D4-Ala and D5-Phe. Calibration is made externally by using aqueous solutions with the same labelled amino acids as internal standards. The high specificity of tandem mass spectrometry coupled with a fast chromatographic process is suitable for the rapid and reliable assay of metabolically significant amino acids. The liquid chromatography-tandem mass spectrometry method is more effective than other published tandem mass spectrometry methods at distinguishing isobaric amino acids like Leu, Ile and HO-Pro and certainly far more rapid than HPLC or ion-exchange chromatographic methods.     

Automated assay for the determination of methylmalonic acid, total homocysteine, and related amino acids in human serum or plasma by means of methylchloroformate derivatization and gas chromatography-mass spectrometry

BACKGROUND: The combined measurement of methylmalonic acid (MMA) and total homocysteine (tHcy) in serum or plasma is useful in diagnosing and distinguishing between cobalamin and folate deficiencies. We developed and validated an isotope-dilution gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) method with automated sample workup for the determination of MMA, tHcy, and the related amino acids Met, total cysteine (tCys), Ser, and Gly in serum or plasma. METHODS: Serum or plasma samples (100 microL) were treated with a reductant (dithioerythritol), deproteinized with ethanol, and derivatized and extracted in a single step by the addition of methylchloroformate and toluene. All liquid handling was performed in 96-well (1 mL) microtiter plates by a robotic workstation. The N(S)-methoxycarbonyl ethyl ester derivatives were analyzed by GC-MS in the selected-ion monitoring mode. RESULTS: Detection limits (signal-to-noise ratio, 5:1) were between 0.03 micromol/L (MMA) and 10 micromol/L (Ser, tCys). The assay was linear to 100 micromol/L for MMA and tHcy and to 1000 micromol/L for Met, tCys, Ser, and Gly. The within-day CVs ranged from 0.7% to 3.6% (n = 20), and the between-day CVs from 2.1% to 8.1% (n = 20). The recovery was between 79% and 99% for the different analytes. CONCLUSION: This assay combines a simple and automated sample preparation with selective and sensitive GC-MS analysis and is well suited for the combined measurement of MMA, tHcy, and the related amino acids.     

全国新生儿遗传代谢病串联质谱筛查氨基酸检测项目的西格玛水平分析

目的对全国新生儿遗传代谢病串联质谱筛查氨基酸项目的检测性能进行西格玛水平的分析,以发现检测中存在的问题,提高临床实验室质量水平。方法利用国家卫生健康委临床检验中心开发的软件平台收集2019年4月全国临床实验室新生儿遗传代谢病串联质谱筛查氨基酸检测项目的室间质量评价(EQA)和室内质量控制(IQC)数据,检测项目包括苯丙氨酸、瓜氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、亮氨酸和缬氨酸。用EQA数据估计偏倚(bias),IQC数据估计不精密度水平,并利用公式σ=(TEa-bias)/CV计算各个氨基酸检测项目的西格玛度量值。结果回报苯丙氨酸、瓜氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、亮氨酸和缬氨酸EQA和IQC数据的实验室数目分别为156、154、156、156、156和157家。6种氨基酸检测项目的σ水平分布相似。大部分实验室的σ水平在0~3之间,比例均大于50%,其中缬氨酸项目的比例最高,为61.78%。3≤σ<6的实验室约为30%~40%。对于所有氨基酸检测项目来说,σ≥6的实验室比例均小于10%,其中比例最高的为苯丙氨酸,达7.69%。结论目前我国新生儿遗传代谢病串联质谱筛查氨基酸检测项目的整体σ水平较低。实验室还需进一步改善检测性能,以获得更高的σ水平,提高检验结果的质量。     

Selective determination of hydroxyproline in urine by high-performance liquid chromatography using precolumn derivatization

A method to measure total hydroxyproline in human urine was developed. Primary amino acids were derivatized with ortho-phthaldialdehyde, followed by derivatization of imino acids with 9-fluorenylmethyl chloroformate. The fluorescent 9-fluorenylmethyl chloroformate derivatives were separated by reversed phase high-performance liquid chromatography. 3,4-Dehydroproline was used as internal standard. Calibration curves for hydroxyproline and internal standard were linear from 1 to 200 pmol injected. Both within- and between-run precision were below 3.2%. Analytical recovery of hydroxyproline added to urine samples was 99.2 +/- 2.6%. Values for excreted hydroxyproline were determined by analysis of urine samples from adult volunteers. The hydroxyproline/creatinine ratio was found to be 15.8 +/- 4.6 mmol/mol (range 7.0-27.3) with no significant sex-related difference.     

高效毛细管电泳分离氨基酸部分影响因素的探讨

目的探讨高效毛细管电泳分离氨基酸的有关影响因素。方法用毛细管电泳法对20种常见氨基酸的2,4—二硝基氟苯(DNFB)衍生物进行了分离研究,分析缓冲液浓度、pH值、有机溶剂及表面活性剂对分离的影响。结果缓冲液浓度、pH值及有机溶剂对氨基酸的DNFB衍生物分离有很大的影响,而表面活性剂基本对其无影响。在优化条件下,17种氨基酸除亮氨酸、异亮氨酸外均达到基线分离。结论以浓度为30 mmol/L、pH值9.9的硼砂溶液含15%异丙醇为运行缓冲液,分离氨基酸DNFB衍生物效果最佳,分离时间30 m in,出峰17个。     

评价尿液生化指标的分析性能

目的对尿液生化指标的分析性能进行评价，判断其分析性能是否满足临床要求。方法按照国家医学实验室认可及美国病理学家协会（CAP）认可要求，依照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP5-A文件，用Olympus 400生化分析仪测定尿液钠（Na^＋）、钾（K^＋）、氯（Cl^-）、钙（Ca^2＋）、镁（Mg^2＋）、磷（P）、糖（Glu）、尿酸（UA）、微量总蛋白（mTP）的日内和日间精密度；用能力对比（PT）评价检测方法的准确度；按照NCCLS EP6-P文件评价检测方法的线性范围；评价检测方法的最低检测限和携带污染率；对参考范围进行验证。结果Na^＋、K^＋、Cl^-、Ca^2＋、Mg^2＋、P、Glu、UA、mTP的日内精密度低于1／4总允许误差（TEa），日间精密度低于1／3TEa；检测方法的阳结果合格；检测方法的线性范围符合临床要求；参考范围验证合格；其他指标符合性能评价要求。结论尿液生化指标的分析性能符合实验室性能标准。