多次鞘内注射CREB反义寡核苷酸对神经病理性痛小鼠脊髓NR2A表达的影响

目的 评价多次鞘内注射cAMP反应元件结合蛋白(CREB)反义寡核苷酸对神经病理性痛小鼠脊髓含2A亚基的NMDA受体(NR2A)表达的影响.方法 鞘内置管成功的C57BL/6雄性小鼠40只,体重20 ～ 25 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=10):生理盐水组(NS组)、CREB同义寡核苷酸组(S组)、CREB错义寡核苷酸组(M组)和CREB反义寡核苷酸组(A组).采用结扎坐骨神经的方法制备小鼠神经病理性痛模型,结扎坐骨神经后第1～6天,4组分别鞘内注射生理盐水5μl、同义寡核苷酸5 μg/5μl、错义寡核苷酸5μg/5μl、反义寡核苷酸5μg/5μl,1次/d.于术前1d、造模后1、3、5、7d时测定小鼠结扎侧足底的机械缩足阈值(PWMT)和热辐射刺激潜伏期(PWTL).于结扎坐骨神经后7、14 d时各取5只小鼠断头处死,取L3～5脊髓,采用Western blot和RT-PCR法测定NR2A的表达水平.结果 与基础值相比,A组小鼠结扎坐骨神经1～7d时PWMT和PWTL差异无统计学意义(P＞0.05),NS组、S组和M组PWMT和PWTL降低(P＜0.05).与NS组、S组和M组相比,A组小鼠结扎坐骨神经后7、14 d时脊髓NR2A mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).与结扎坐骨神经后7d时相比,4组结扎坐骨神经后14 d时小鼠脊髓NR2A mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05).结论 在神经病理性疼痛形成阶段多次鞘内注射CREB反义寡核苷酸可减轻神经病理性痛,其机制可能与抑制脊髓NR2A表达有关.     

不同剂量驱动蛋白17反义寡核苷酸鞘内注射对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 通过鞘内注射不同剂量驱动蛋白17(kinesin superfamily 17,KIF17)反义寡核苷酸,研究其在骨癌痛小鼠疼痛发生中的作用. 方法 55只雄性C3H/HeJ小鼠,4周～6周龄,体重20 g～25 g.用随机数字表法分为骨癌组(A组,41只)和假手术组(S组,14只).A组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射20μl含约2×105个纤维肉瘤细胞(NCTC2472)的最小必须培养基(α-minimal essence medium,α-MEM)以制备骨癌痛模型,S组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射等体积不含肿瘤细胞的α-MEM.各组小鼠于接种前(base)及接种后第4、7、10、14天进行痛行为学测试,包括自发抬足次数(the number of spontaneous flinches,NSF)和机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT).每组每个时间点各取1只小鼠断头处死,取L3-5脊髓,用免疫印迹法(Western blot)测定KIF17蛋白含量.在接种后第14天,再将剩余A组小鼠按随机数字表法分为KIF17反义寡核苷酸2.5 μg组(A1组)、KIF17反义寡核苷酸5.0 μg组(A2组)、KIF17反义寡核苷酸10.0 μg组(A3组)以及对照组(AC组),每组9只.A1组～A3组小鼠分别鞘内给予相应剂量KIF17反义寡核苷酸,S组和AC组小鼠鞘内给予生理盐水,注药容积均为5μl.给药结束后2、12、24、36、48 h每个时间点取1只小鼠处死,再行痛行为学测试和脊髓水平KIF17蛋白含量. 结果 与S组[(2.15±0.49)次、(1.80±0.39)g]和基础值[(2.08±0.34)次、(1.88±0.35)g]比较,接种后第14天,A组小鼠NSF显著增加[(11.95±0.78)次],PWMT显著降低[(0.34±0.11)g](P＜0.05);同时A组小鼠脊髓水平KIF17表达增多;与AC组和给药前比较,A1组小鼠在给药后2、12h和24 h,NSF[2 h(4.80±0.40)次]减少,PWMT[2 h(0.95±0.33)g]升高(P＜0.05),A2组和A3组小鼠在给药后2、12、24 h和36 h,NSF[2 h(2.35±0.26)、(2.53±0.21)次]减少,PWMT[2 h(1.70±0.32)、(1.73±0.40)g]升高(P＜0.05),且与A1组比较,A2组和A3组小鼠痛行为学的改善更明显,A2组与A3组各时间点小鼠NSF和PWMT比较,差异无统计学意义(P＞0.05);给药后2h,A1组～A3组小鼠脊髓水平KIF17表达减少. 结论 骨癌痛小鼠脊髓水平KIF17表达上调,鞘内给予KIF17反义寡核苷酸能有效改善骨癌痛小鼠的痛行为学,其镇痛效果和作用时间与剂量有关.     

神经痛大鼠脊髓胶质细胞源性神经营养因子参与多巴胺D2受体激动剂对痛觉过敏的调制作用

目的 研究鞘内注射多巴胺D2受体激动剂喹吡罗对坐骨神经慢性压迫损伤大鼠脊髓水平胶质细胞源性神经营养因子表达的影响,探讨其介导抗伤害作用的可能机制. 方法 实验1：采用完全随机分组方法将30只成年雄性SD大鼠制作坐骨神经慢性压迫损伤（chronic constriction injury of sciatic nerve,CCI）模型分为5组（每组6只）：CCI＋生理盐水（NS组）、CCI＋喹吡罗0.1 μg（Q0.1组）、CCI＋喹吡罗1μg（Q1组）、CCI＋喹吡罗5 μg（Q5组）、CCI＋喹吡罗10 μg（Q10组）,分别在建模后第7天鞘内注射0.1、1、5、10 μg喹吡罗,NS组单次鞘内注射生理盐水10μl.于给药前及给药后0.5、1、2、4、8、16h测定大鼠术侧后足机械缩足反射阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）和热缩足反射潜伏期（paw withdrawal thermal latency,PWTL）.实验2：将54只成年雄性SD大鼠制作CCI模型,并采用完全随机分组方法分为3组（Q5组、Q10组、NS组,每组18只）：Q5组、Q10组分别在建模后第7天鞘内注射5、10μg喹吡罗后0.5、1、2、4、8、16h处死取材,NS组单次鞘内注射生理盐水10μl;另取6只正常大鼠作为模型对照组（M组）,另取6只正常大鼠作为对照组（C组）.采用免疫印迹法测定脊髓背角胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic fact,GDNF）蛋白表达的变化. 结果 实验1：与NS组比较,Q0.1组注药后各时间点PWMT和PWTL差异无统计学意义（P＞0.05）,Q1组注药后2 h PWMT[（4.3±1.5）g]及PWTL[（13.2±1.6）s],Q5组注药后1,2、4 h PWMT[（4.7±1.6）、（5.3±1.6）、（4.7±2.1）g]和PWTL[（14.0±1.7）、（15.2±1.5）、（13.4±1.6）s],Q10组注药后1、2、4 h PWMT[（6.0±1.3）、（7.3±1.0）、（5.3±2.1）g]和PWTL [（15.3±1.8）、（17.5±1.2）、（14.9±1.7）s]明显升高（P＜0.05）.实验2：与C组比较,M组GDNF表达（0.95±0.09）明显升高（P＜0.05）.与M组和NS组比较,GDNF的表达Q     

鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸对大鼠神经病理性痛的疗效

目的 探讨鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸对大鼠神经病理性痛的疗效.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为5组(n=12):假手术组(S组)、C7脊神经压迫组(N组)、C7脊神经压迫+鞘内注射PSD-93误义寡核苷酸10 μg组(M组)、C7脊神经压迫+鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸5 μg组(AJ组)和C7脊神经压迫+鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸10 μg组(A2 组).N组、M组、A1组和A2组用60 g无创微血管夹压迫大鼠右侧C7脊神经15 min,制备神经病理性痛模型,经枕骨大孔鞘内置管,术毕当日开始给药,每日1次,连续4 d.于术前2 d(T0)和术后1、3、5、7 d(T1-4)测定机械痛阈和、热痛阈;T2和T4时分别处死6只大鼠,取C7脊髓,免疫组化法测定脊髓背角PSD-93蛋白表达.结果 与S组比较,N组、M组和A1组T1-4时机械痛阈及热痛阈降低,N组和M组T2,4时脊髓背角PSD-93蛋白表达上调(P＜0.05);与N组和M组比较,A1组T1,2时、A2组T1～4时机械痛阈及热痛阈升高,A1组T2时、A2组T2,4时脊髓背角PSD-93蛋白表达下调(P＜0.05);与A1组比较,A2组T1-4时机械痛阈及热痛阈升高,T2,4时脊髓背角PSD-93蛋白表达下调(P＜0.05).结论 鞘内注射PSD-93反义寡核苷酸可减轻大鼠神经病理性痛.     

单次鞘内注射mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂对骨癌痛小鼠痛行为学的影响

目的 探讨单次鞘内注射mLin 10-PDZ1(PSD-95,Drosophila disks-large,ZO-1)结构域小肽抑制剂对骨癌痛小鼠痛行为学的影响. 方法 40只雄性C3H/HeJ小鼠完全随机分为肿瘤组(T组)32例和假手术对照组(S组)8例.将含有2×105个纤维肉瘤细胞NCTC2472的最小必需培养基(α-MEM)接种到T组小鼠右侧股骨远端骨髓腔,建立骨癌痛模型；S组小鼠骨髓腔注入不含有NCTC2472细胞的α-MEM.于接种前1d、接种后3、5、7、10、14d测定痛行为学指标:自发性抬足次数、机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT).T组小鼠在接种后第14天,进一步按照随机数字表法分为对照control组(C组)8例和mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂2.5μg/5μl、5μg/5μl、10 μg/5μl组(G1组8例,G2组8例,G3组8例).G1～G3组分别鞘内注射相应剂量的mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂,S组和C组鞘内注射等体积的溶媒10％二甲基亚砜(DMSO).在给药后的2、12、24 h分别测定各组小鼠的痛行为学指标. 结果 与S组[(2.1±0.7)次]和术前基础值[(1.8±0.7)次]比较,肿瘤细胞接种后第14天T组小鼠自发性抬足次数[(13.5±1.4)次]显著增多(P＜0.05),PWMT[(0.47±0.19)g]较S组[(1.7±0.3)g]和基础值[(1.83±0.23)g]降低(P＜0.05).给药后2h,与C组及14 d给药前比较,G1、G2组和G3组自发性抬足次数减少,PWMT增高(P＜0.05),且G3组较G1和G2组痛行为学改善更明显(P＜0.05).至12 h,与C组比较,G2和G3组自发抬足次数减少(P＜0.05),PWMT增高(P＜0.05)；而G1组给药后痛行为学差异无统计学意义(P＞0.05).给药后24 h,G3组与C组比较,自发抬足次数减少,PWMT升高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 鞘内单次注射mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂能够改善骨癌痛小鼠的痛行为.     

鞘内注射sigma-1受体抑制剂BD1047对神经病理性痛大鼠的镇痛作用及对脊髓小胶质细胞活化的影响

目的 探讨鞘内注射sigma-1受体抑制剂BD1047对神经病理性痛(neuropathic pain,NP)大鼠痛阈和脊髓小胶质细胞活化的影响. 方法 采用坐骨神经慢性压迫损伤法(chronic constriction injury of sciatic nerve,CCI)建立NP模型.①雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,采用随机数字表法将大鼠分为3组(每组8只):假手术组(S组)、CCI组(C组)和CCI+BD1047组(B组).术后第0～5天,S组和C组鞘内注射生理盐水(20μl,1次/d,连续6d);B组鞘内注射BD1047(120 nmol/20μl,1次/d,连续6d).于术前1d,术后3、5、7、10、14 d,测定大鼠机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT).②雄性SD大鼠12只,分组(每组4只)和给药同第1部分实验.术后第10天处死,免疫荧光技术观察脊髓小胶质细胞的染色情况. 结果 与S组比较,C组大鼠术后第3天PWMT[(4.9±0.9)g]开始降低,持续到术后第14天(P＜0.05),术后第10天脊髓背角小胶质细胞数[(149±28)个]明显增加(P＜0.05);与C组比较,B组大鼠术后第3天PWMT[(8.6±1.2)g]明显升高,持续到术后第14天(P＜0.05),术后第10天脊髓背角小胶质细胞数[(92±22)个]明显减少(P＜0.05). 结论 鞘内注射BD1047可减轻大鼠NP,其机制与抑制脊髓小胶质细胞活化有关.     

蛛网膜下腔注射Ro25-6981对切口痛大鼠的镇痛作用研究

目的 研究蛛网膜下腔注射Ro 25-6981,一种新型选择性的N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚基拮抗剂,对切口痛大鼠的镇痛作用.方法 雄性SD大鼠60只,将大鼠采用随机数字表法分为4组,每组15只:对照组(C组)、切口痛组(Ⅰ组)、鞘内注射Ro 25-6981 50μg/25μl组(R1组)、鞘内注射Ro 25-6981 200μg/25μl组(R2组),每组15只.C组和Ⅰ组均鞘内注射5%DMSO溶剂25 μl.Ⅰ组、R1组和R2组在鞘内注射后行右后足切口痛模型制备.所有动物接受鞘内注射和手术均在吸入七氟醚麻醉下进行.术前24 h、术后2、6、24h检测大鼠痛行为学指标,包括50%机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足反射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL),同时测定鞘内给药前后大鼠的运动功能.结果 与C组和术前基础值比较,Ⅰ组术后各时间点50%PWMT(7.0±0.9)、(6.7±0.7)、(6.4±1.2)g和PWTL(10.3±1.4)、(10.1±1.0)、(10.0±1.0)s均降低(P＜0.05);与Ⅰ组比较,R1组各时间点50%PWMT和PWTL差异无统计学意义(P＞0.05);R2组术后2 h 50%PWMT(9.0±0.8)g和PWTL(13.7±1.0)s与Ⅰ组相比均升高(P＜0.05),6、24 h痛行为学差异无统计学意义;鞘内给药前后大鼠运动功能差异无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射选择性的Np2B拮抗剂Ro 25-6981 200.0μg可以对切口痛大鼠产生明显的镇痛作用而不影响运动功能.

Abstract：

Objective To investigate the analgesic effects of intrathecal administration of Ro 25-6981, a selective antagonist of the NR2B subunit of NMDA receptors (NR2B), in a rat model of incision pain. Methods Sixty SD rats were randomly divided into 4 groups: control group (C); incisional pain group (Ⅰ); intrathecal group of Ro 25-6981 at the dose of 50 μg/25 μl(R1);intrathecal group of Ro 25-6981 at the dose of 200 μg/25 μl(R2). Intrathecal injection of 5% DMSO solvent at the dose of 25 μl was administrated in group C and Ⅰ. Rat models of incisional pain on the right hind were prepared after intrathecal injection in group Ⅰ,R1 and R2. All rats were anesthetized with sevoflurane. The 50% paw withdrawal mechanical threshold (PWMT) and paw withdrawal thermal latency (PWTL) were tested to evaluate the behavioral changes and measured at 24 h before incision and at 2,6,24 h after incision. And the locomotor functions were also examined at the same time points. Results Compared with group C and baseline,the decreases of 50% PWMT (7.0±0.9), (6.7±0.7), (6.4±1.2) g and PWTL (10.3±1.4), ( 10. 1±1.0), (10.0±1.0) s were observed at each time point after incision in group Ⅰ (P＜0.05); Compared with group Ⅰ, significant changes of 50% PWMT and PWTL were not observed at each time point in group R1 (P＞0.05); Compared with group Ⅰ, increases of both 50% PWMT (9.0±0.8) g and PWTL (13.7±1.0) s were observed at 2 h after incision in group R2 (P＜0.05), while no significant changes of 50% PWMT and PWTL were observed at 6 h and 24 h after incision in group R2. No significant changes in locomotor functions were observed before and after intrathecal administration in rats (P＞0.05). Conclusion Intrathecal injection of Ro 25-6981 at the dose of 200.0 μg, the selective antagonist of the NR2B, exerts significant analgesic effects on incision pain in rats without affecting of locomotor functions.     

大鼠切口痛模型中鞘内注射不同剂量KN93对瑞芬太尼诱发的痛觉过敏的影响

目的 观察不同剂量KN93对瑞芬太尼痛觉过敏大鼠痛行为的影响. 方法 采用完全随机分组方法,将36只雄性SD大鼠分为6组(每组6只):①空白对照组;②切口组;③瑞芬太尼组;④KN93 25 μg组;⑤KN93 50 μg组;⑥KN93 100 μg组.除空白对照组外,其余各组均制作切口痛模型、瑞芬太尼组及KN93 3个剂量组,手术过程中皮下输注瑞芬太尼(40 μg/kg,1 mg溶于40 ml生理盐水中)30 min.各组大鼠分别于术前24h、术后2、6、24、48 h测定术侧机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL). 结果 与切口组比较,瑞芬太尼组术后出现痛觉过敏表现PWMT (20.9±2.6,19.6±1.8,21.9±2.0,22.3±1.9)及PWTL[(8.5±1.5)s,(8.6±1.5)s,(8.5±2.0)s,(9.1±1.5)s],P＜0.05.鞘内注射KN93 25 μg对痛觉过敏大鼠痛行为无改善作用,鞘内注射KN93 50、100 μg能剂量依赖性改善瑞芬太尼所致痛觉过敏大鼠痛行为,P＜0.05. 结论 瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏;KN93剂量依赖性的改善瑞芬太尼诱发的痛觉过敏.     

加巴喷丁对糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节Toll样受体4表达的影响

目的 探讨加巴喷丁(gabapentin,GBP)对糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的影响. 方法 108只成年健康雄性SD大鼠,采用完全随机分组法分为4组:对照组(C组)、模型组(DNP组)、生理盐水(SC)+DNP组和GBP+DNP组(每组27只).观察链脲佐菌素(streptozocin,STZ)注射前1d及注射后3、7、10、14、21、28 d测定缩足反射机械刺激阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和缩足反射热辐射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL),SC+DNP组和GBP+DNP组于STZ注射15d起分别腹腔注射生理盐水或GBP 50 mg/kg,1次/d,连续7d,并于21、28 d测定PWMT和PWTL.行为学测试完成后选择21 d大鼠用免疫组化和Western blot方法检测大鼠DRG中TLR4的表达. 结果 与C组比较,DNP组PWMT (3.9±0.9)g降低,PWTL[(6.1±0.8)s]缩短,DRG中TLR4蛋白的表达显著上调(P＜0.05);与DNP组比较,SC+DNP组大鼠在腹腔注射生理盐水后,PWMT、PWTL和TLR4蛋白的表达无明显改变(P＞0.05);与DNP组和SC+DNP组比较,GBP+DNP组PWMT(8.3±0.8)g升高,PWTL[(9.9±1.2)s]延长,DRG中TLR4蛋白的表达下调(P＜0.05). 结论 GBP可通过抑制DRG中TLR4表达,从而减轻大鼠DNP.     

鞘内注射Roscovitine对小鼠骨癌痛行为学的影响

目的 探讨鞘内给予细胞周期依赖性激酶5(cyclin-dependent kinases,Cdk5)特异性拮抗剂Roscovitine对小鼠骨癌痛行为学的影响.方法 24只C3H/Hej 小鼠采用随机数字表法随机分为3组,S组(假手术后14 d+溶媒)、C组(接种后14d+溶媒)、R组(接种后14 d+Roscovitine),每组8只.C组和R组将含2×105个纤维肉瘤NCTC 2472细胞的最小必需培养基(α-MEM)20μl注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型.S组只注入不含肿瘤细胞的α-MEM.术后14 d,R组小鼠鞘内注射含有20μg Roscovitine的二甲基亚砜(DMSO)5μl,C组及S组小鼠鞘内注DMSO 5 μl.观察给药前及给药后1、6、24、48、72 h检测小鼠痛行为学的变化:机械缩足阈值(paw uithdrawal mechanical threshold,PMWT)和热缩足潜伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL).结果 各组术前基础机械缩足阈值及热缩足潜伏期比较差异无统计学意义(P＞0.05).接种后7 d,C组PMWT(1.08±0.24)g,与S组(1.85±0.28)g相比明显降低(P＜0.05);接种后10 d,C组PTWL(12.7±1.4)s较S组(18.6±2.1)s明显缩短(P＜0.05),C组小鼠的痛行为学随时间逐渐加重,与S组小鼠比较差异有统计学意义(P＜0.05);与C组及给药前基础值相比,鞘内注射Roscovitine 20μg后6 h PMWT(0.70±0.19)g显著增加(P＜0.05),PTWL(14.16±1.07)s显著延长(P＜0.05),并随时间逐渐增加,12 h达最大值,后逐渐降低,72 h降低到C组水平.结论 鞘内注射Roscovitine可有效缓解小鼠骨癌痛.     

加波沙朵对神经病理性痛大鼠的镇痛作用及对脊髓胶质细胞活化的影响

目的 探讨皮下注射γ-氨基丁酸(γ aminobutyric acid,GABA)A型受体激动剂加波沙朵对神经病理性痛(neuropathic pain,NP)大鼠痛阈和脊髓星形胶质细胞活化的影响. 方法 用坐骨神经慢性压迫损伤(chronic constriction injury of sciatic nerve,CCI)法建立NP模型.雄性SD大鼠36只,采用随机数字表法分为3组(每组12只):假手术组(S组)、CCI组(C组)和CCI+加沙波朵组(G组).术后10～14 d,S组和C组分别皮下注射生理盐水,G组皮下注射加波沙朵10 mg/kg,1次/d.每组随机选取8只大鼠,分别于术前,术后3d,术后10 d给药前,术后14 d给药后0.5、1、2、4、8、12 h,测定大鼠机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT).每组取4只大鼠,于术后14 d给药后2h处死,采用免疫荧光技术观察脊髓星形胶质细胞的染色情况. 结果 与S组比较,C组大鼠术后3 d PWMT[(13.46±1.67)g比(4.65±0.46)g]开始降低,持续到术后14 d给药后12 h(P＜0.05),术后14d给药后2h脊髓背角星形胶质细胞数明显增加[(103±7)个比(402 ±20)个](P＜0.05);与C组比较,G组大鼠术后14 d给药后0.5 h PWMT[(2.73±0.57)g比(7.31±0.55)g]明显升高,持续到给药后8 h(P＜0.05),术后14 d给药后2h脊髓背角星形胶质细胞数明显减少[(251±20)个](P＜0.05). 结论 皮下注射GABAA受体激动剂加波沙朵可减轻大鼠NP,其机制与抑制脊髓星形胶质细胞活化有关.     

环氧化酶在神经病理性痛大鼠背根神经节P2X3受体表达上调中的作用

目的 探讨环氧化酶(COXs)在神经病理性痛大鼠背根神经节P2X3受体表达上调中的作用.方法 雄性SD大鼠24只,体重250～280g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=6),神经病理性痛组(CCI组)、COX-1抑制剂组(Ⅰ组)和COX-2抑制剂组(C组)制备坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)模型,假手术组(S组)仅暴露坐骨神经.于术后3～14 d Ⅰ组和C组分别以COX-1抑制剂布洛芬40mg·kg-1·d-1和COX-2抑制剂塞来昔布30mg·kg-1·d-1灌胃.分别于术前(基础状态)、术后3、5、7、10、14 d时测定热缩足潜伏期(PWL)和机械缩足阈值(PWT).然后处死大鼠,取L()-6节段背根神经节,测定P2X3受体mRNA及其蛋白表达水平.结果 与S组比较,CCI组术后PWL缩短,PWT降低,P2X3受体mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05);与CCI组比较,I组和C组术后PWL延长,PWT升高,P2X3受体mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05);与I组比较,C组术后PWL延长,PWT升高,背根神经节P2X3受体mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05).结论 COXs参与了神经病理性痛大鼠背根神经节P2X3受体表达上调,且COX-1的作用强于COX-2.

Abstract：

Objective To investigate the role of cyclooxygenases (COXs) in the up-regulation of the expression of P2X3 receptors in the dorsal root ganglion (DRG) in rats with neuropsthic pain. Methods Twenty-four male SD rats, weighing 250-280 g, were randomly divided into 4 groups ( n = 6 each): sham operation group (group S), chronic constrictive injury (CCI) group, COX-1 inhibitor ibuprofen group (group Ⅰ), and COX-2 inhibitor celecoxib group (group C). Neuropathic pain was induced by CCI. The animals were anesthetized with intraperitoneal 10% chloral hydrate 300-500 mg/kg. CCI was produced by placing 4 ligatures on the left sciatic nerve at 1 mm intervals. In group S, the left sciatic nerve was only exposed but not ligated. In groups Ⅰ and C, ibuprofen 40 mg·kg-1 ·d-1 and celecoxib 30 mg·kg-1 ·d-1 were given through a gastric tube into the stomach at day 3-14 after operation respectively. Paw withdrawal latency (PWL) and paw withdrawal threshold (PWT) were measured before operation (baseline), and at 3, 5, 7, 10 and 14 days after operation. Then the rats were sacrificed and their L()-6 DRGs were removed to detect the expression of P2X3 mRNA and protein. Results Compared with group S, PWL was significantly shortened, PWT decreased, and P2X3 mRNA and protein expression up-regulated in group CCI ( P ＜ 0.05＝. Compared with group CCI, PWL was significantly prolonged, PWT increased, and P2X3 mRNA and protein expression down-regulated in groups Ⅰ and C (P ＜0.05＝. Compared with group Ⅰ, PWL was significantly prolonged, PWT increased, and P2X3 mRNA and protein expression up-regulated in group C ( P ＜0.05＝. Conclusion COXs are involved in the up-regulation of the expression of P2X3 receptors in the DRG in rats with neuropathic pain, and the effect of COX-1 is stronger than that of COX-2.     

μ受体在抗神经生长因子抗体减轻大鼠骨癌痛中的作用

目的 评价μ受体在抗神经生长因子抗体(anti-NGF)减轻大鼠骨癌痛中的作用.方法 实验一健康雌性SD大鼠60只,体重200～220 g,随机分为4组(n=15):假手术组(S组)、假手术+anti-NGF组(SN组)、骨癌痛组(P组)和骨癌痛+anti-NGF组(PN组).P组和PN组于左侧胫骨上段骨髓腔内注射10μl Walker256乳腺癌细胞(1×105个)制备骨癌痛模型;S组和SN组于左侧胫骨上段注射PBS 10μl.于肿瘤细胞接种后13 d时,进行鞘内置管.鞘内置管成功后3 d,SN组和PN组鞘内注射anti-NGF 10μg(用生理盐水稀释至10μl),S组和P组鞘内注射生理盐水10μl,2次/d,连续5 d.于肿瘤细胞接种前、肿瘤细胞接种后13、16、18、21 d时测定自发缩足次数(NSF)、热缩足潜伏期(PWL)和机械性痛阈(PWT).肿瘤细胞接种后21 d时,处死大鼠,取L4.5段脊髓背角和背根神经节,测定μ受体及其mRNA的表达.实验二健康雌性SD大鼠30只,体重200～220 g,随机分为2组(n=15):骨癌痛+anti-NGF组(PN组)和骨癌痛+纳洛酮+anti-NGF组(PNN组).于左侧胫骨上段骨髓腔内注射10μlWalker256乳腺癌细胞(1×105个)制备骨癌痛模型.于肿瘤细胞接种后13 d时,进行鞘内置管.鞘内置管成功后3 d,PN组鞘内注射鞘内注入anti-NGF 10μg(生理盐水稀释至25μl);PNN组鞘内注射纳洛酮10μg(生理盐水稀释至25μl),0.5 h后,鞘内注射anti-NGF 10μg(生理盐水稀释至25 μl),2次/d,连续5 d.于肿瘤细胞接种前、肿瘤细胞接种后13、16、18、21 d时测定大鼠NSF、PWL和PWT.结果 实验一与S组比较,SN组NSF、PWL和PWT差异无统计学意义,SN组和PN组μ受体及其mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),P组和PN组瘤细胞接种后13～21 d时NSF增加,PWL缩短,PWT降低,P组μ受体及其mRNA表达下调(P＜0.05或0.01);与P组比较,PN组肿瘤细胞接种后18～21 d时NSF减少,PWL延长,PWT升高,μ受体及其mRNA表达上调(P＜0.05或0.01).实验二与PN组比较,PNN组肿瘤细胞接种后18～21 d时NSF增加,PWL缩短,PWT降低(P＜0.05或0.01).结论 anti-NGF减轻大鼠骨癌痛与μ受体的激活有关.     

炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节CGRP、SP、BDNF表达的变化及电针对吗啡耐受的影响

目的 探讨炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的变化及电针对吗啡耐受的影响.方法 取鞘内置管成功的25只大鼠,于左后足踝关节腔注射完全弗氏佐剂50μl致炎,致炎后第4天开始鞘内给药.随机分为5组(n=5):A组鞘内给予生理盐水10μl,2次/d,连续7 d;B组鞘内给予吗啡10 μg/kg(10μl),2次/d,仅给药1 d;C组鞘内给予吗啡10 μg/kg(10μl),2次/d,连续7 d;D组鞘内给药方法同C组,同时每日首次给药后用电针刺激仪电针大鼠阳陵泉穴和足三里穴,刺激强度2 mA,刺激频率2 Hz,波宽0.6ms,刺激时间30 min;E组电针刺激频率15Hz,波宽0.4 m,余同D组.于致炎前、鞘内给药前1 d、给药后1、2、3、4、5、6、7 d(T0-8)时测定大鼠后肢热缩足潜伏期(PWL).给药7 d后取L4～L6背根神经节,采用RT-PCR法测定CGRP、SP、BDNF的mRNA表达.结果 与T0时比较,各组T1时PWL缩短(P＜0.05);与T1时比较,B组～E组T2时PWL延长(P＜0.05);与T2时比较,B组～E组T3-8时PWL缩短(P＜0.05).与A组比较,B组～E组PWL延长,C组CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达上调(P＜0.05);与B组比较,C组～E组PWL延长(P＜0.05);与C组比较,D组和E组PWL延长,CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达下调(P＜0.05);与D组比较,E组PWL缩短,CGRP mRNA、SPmRNA、BDNF mRNA表达上调(P＜0.05).结论 大鼠背根神经节内CGRP mRNA、SPmRNA、BDNF mRNA表达上调参与了吗啡镇痛耐受的形成;电针治疗可抑制吗啡镇痛耐受的形成,机制可能与抑制背根神经节内CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达有关.     

远位触液神经元5-HT1A受体在大鼠神经病理性痛中的作用

目的 评价远位触液神经元5-羟色胺1A(5-HT1A)受体在大鼠神经病理性痛中的作用.方法 雄性SD大鼠40只,体重230～270 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=10):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和8-羟基-2-(双-正丙胺基)-四氢萘满组(8-OH-DPAT组).采用坐骨神经慢性压迫法(CCI制备大鼠神经病理性痛模型,S组仅暴露坐骨神经,但不结扎.CCI后第7天,8-OH-DPAT组和DMSO组向远位触液神经元分别缓慢注射5-HT1A受体特异性激动剂8-OH-DPAT或DMSO 1 μl,5 min内注射完毕.分别于CCI前(T0)、CCI后第7天(T1)和给药后3、6 h(T2,3)时,测定缩足潜伏期(PWL)和缩足阈值(PWT).于给药后6 h时处死大鼠,取脑组织,采用免疫荧光标记法检测远位触液核神经元5-HT1A受体的表达.结果 与S组比较,NP组、DMSO组和8-OH-DPAT组T1时PWL缩短,PWT降低(P＜0.01);与DMSO组比较,8-OH-DPAT组T2和T3时PWL延长,PWT升高(P＜0.01).与S组比较,NP组和DMSO组5-HT1A受体表达下调(P＜0.01);与NP组和DMSO组比较,8-OH-DPAT组5-HT1A.受体表达上调(P＜0.01);NP组和DMSO组间5-HT1A受体表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 远位触液神经元5-HT1A受体参与了大鼠神经病理性痛的调控.

Abstract：

Objective To evaluate the role of 5-HT1A receptors in distal cerebrospinal fluid (CSF)-contacting neurons in neuropathic pain (NP) in rats. Methods Forty male SD rats weighing 230-270 g were randomly divided into 4 groups (n = 8 each): sham operation group (group S); NP group; dimethyl sulfoxide (DMSO) group and 8-OH-DPAT (a specific 5-HT1A receptor agonist) group. NP was induced by chronic constrictive injury (CCI) in groups NP, DMSO and 8-OH-DPAT. Four silk ligatures were placed on the sciatic nerve at 1 mm intervals . In group S, the sciatic nerve was exposed but not ligated. 8-OH-DPAT and DMSO 1 μl were injected into the region where most of CSF-contacting neurons are present over 5 min on 7th day after CCI in groups 8-OH-DPAT and DMSO respectively. Paw withdrawal latency (PWL) and paw withdrawal threshold (PWT) were measured before CCI, on 7th day after CCI, and at 3 and 6 h after administration. The rats were sacrificed 6 h after administration, and the brain tissues removed for determination of the expression of 5-HT1A receptors in the distal CSF-contacting neurons by immunofluorescence. Results Compared with group S, PWL was significantly shorten and PWT decreased at T, in groups NP, DMSO and 8-OH- DPAT (P ＜ 0.01) . Compared with group DMSO, PWL was significantly prolonged and PWT increased at T2 and T3 in group 8-OH-DPAT ( P ＜ 0.01). The 5-HT1A receptor expression was significantly down-regulated in groups NP and DMSO compared with group S, while up-regulated in group 8-OH-DPAT compared with groups NP and DMSO ( P ＜ 0.01). There was no significant difference in 5-HT1A receptor expression between groups NP and DMSO ( P ＞ 0.05). Conclusion 5-HT1A receptors in distal CSF-contacting neurons are involved in the regulation of NP in rats.     

乳铁蛋白对神经病理性痛大鼠脊髓背角PKG活性的影响

目的 探讨乳铁蛋白对神经病理性痛大鼠脊髓背角cGMP依赖性蛋白激酶(PKG)活性的影响.方法 雄性SD大鼠32只,体重200～250 g,随机分为4组(n=8):假手术组仅分离坐骨神经,不结扎,鞘内注射生理盐水10μl+50%二甲基亚砜(DMSO)10μl;余3组采用结扎坐骨神经的方法制备大鼠神经病理性痛模型,神经病理性痛组鞘内注射生理盐水10μl+50%DMSO10μl;乳铁蛋白组鞘内注射乳铁蛋白100μg+50%DMS010μl;PKG抑制剂KT5823组鞘内注射乳铁蛋白100μg+KT582310μl.给药后180 min内每隔30 min以热刺激法测定大鼠缩爪潜伏期,随后处死大鼠取脊髓背角,采用免疫荧光法检测PKG活性,并行定量分析.结果 与神经病理性痛组和KT5823组相比,乳铁蛋白组缩爪潜伏期延长,乳铁蛋白组脊髓背角PKG活性升高(P＜0.05);神经病理性痛组与KT5823组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乳铁蛋白可通过抑制脊髓背角PKG活性减轻大鼠神经病理性痛.     

鞘内注射P300 siRNA对神经病理性痛大鼠的镇痛效果

目的 评价鞘内注射p300小干扰RNA(p300siRNA)对神经病理性痛大鼠的镇痛效果.方法 取鞘内置管成功的雄性SD大鼠96只,采用坐骨神经慢性压迫性损伤法(CCI)建立神经病理性痛模型,随机分为4组(n=24):假手术+生理盐水组(S组)、CCI+生理盐水组(CCI组)、CCI+转染试剂组(V组)和CCI+p300siRNA组(P组).于术后3～6 d时鞘内注射生理盐水、转染试剂或p300siRNA(siRNA 4μg溶于转染试剂)各20μl,2次/d,10μl/次,连续4 d.于术前1 d(基础状态)、术后1、3、5、7、9、11、14 d时测定机械痛阈和热痛阈;于术后3、7、14 d时取腰段脊髓,测定p300蛋白及其mRNA、乙酰化组蛋白H3(Ac-H3)的表达.结果 与基础值比较,CCI组、V组和P组术后各时点机械痛阈和热痛阈降低(P＜0.05).与S组比较,其余各组机械痛阈和热痛阈降低,p300蛋白及其mRNA和Ac-H3蛋白表达上调(P＜0.05).与CCI组比较,P组机械痛阈和热痛阈升高,p300蛋白及其mRNA和Ac-H3蛋白表达下调(P＜0.05).结论 鞘内注射p300 siRNA可减轻大鼠神经病理性痛,其机制与抑制脊髓p300和Ac-H3蛋白的表达有关.