358例肺癌患者K-ras基因的突变分析

目的分析358例肺癌患者K-ras基因突变的突变情况,为肺癌患者的个体化治疗提供指导。方法通过嵌套和低变性温度下的复合PCR(COLD-PCR)-测序法分析358例肺癌患者K-ras基因突变状态。结果在358例肺癌患者中,K-ras基因总体突变率为8.10%。94份血浆标本、250份肿瘤组织标本、14份胸腔积液及腹水标本中的突变率分别为2.13%、9.60%、7.14%。突变类型包括G12C、G12D、G12A、G12V、G13D、Q61H,3种不同标本之间K-ras基因的突变率比较,差异无统计学意义(P=0.064 8);男性与女性患者的突变率分别为6.96%、8.59%,差异无统计学意义(P=0.574 0);30~45岁、45~60岁、大于或等于60岁患者中的突变率分别为4.76%、5.34%、9.22%,不同年龄段患者K-ras基因的突变率比较,差异无统计学意义(P=0.250 3)。结论肺癌患者K-ras基因突变类型主要为G12C、G12D、G12V、G13D,K-ras基因在不同标本类型、不同性别、不同年龄之间的突变率无明显差异。     

K-ras基因突变表达谱与结直肠癌肝转移的相关性分析

目的探讨K-ras基因突变谱与结直肠癌肝转移的相关性,为进一步阐明结直肠癌肝转移的分子机制提供理论依据。方法收集2008年1月至2010年8月在我院治疗的结直肠癌肝转移患者30例,进行K-ras基因突变检测,分析K-ras基因的突变类型及频率,探讨K-ras基因的突变谱与结直肠癌肝转移患者性别、年龄、原发灶位置、转移位置、病灶形态及TNM分期的相关性。结果 30例结直肠癌肝转移患者组织中K-ras基因突变者14例,突变率为47%,其中12密码子突变9例,突变率为30%;13密码子突变者5例,突变率为17%。突变表达谱在性别、年龄、原发部位、肝脏转移灶部位、病灶形态、TNM分期方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 K-ras基因在结直肠癌肝转移的患者中突变率较高,以12,13号密码子突变最为常见,突变类型及频率在性别、年龄、原发部位、肝脏转移灶部位、病灶形态、TNM分期方面无显著性差异。     

应用焦磷酸测序法检测进展期结直肠癌中K-ras基因点突变

目的建立基于焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)的结直肠癌K-ras基因点突变的检测方法,并应用于进展期结直肠癌及其转移灶中K-ras基因突变的检测。方法提取116例Ⅳ期结直肠癌及11例转移灶中的DNA,进行PCR扩增后应用Pyrosequencing法检测K-ras基因12及13密码子点突变。结果 116例Ⅳ期结直肠癌中有29例检出K-ras基因点突变,突变率为25.0%,在所有29例突变病例中12密码子点突变率为82.8%(24/29),13密码子点突变率为17.2%(5/29),所有11例转移灶的K-ras基因均与其原发病灶相一致。结论 Pyrosequencing能准确、快速、高通量地进行K-ras基因点突变测定,适合大规模临床标本检测,有利于指导结直肠癌尤其是转移性病变的个体化治疗。     

焦磷酸测序法检测结直肠癌患者K-ras基因外显子2第12和13密码子点突变

目的 探讨焦磷酸测序法检测结直肠癌患者肿瘤组织K-ras基因外显子2第12和13密码子点突变方法的临床应用价值.方法 以已知K-ras基因突变的结直肠癌细胞株SW480、DLD-1和野生型细胞株HT-29 DNA作为测序模板检验焦磷酸测序法的准确性.对含不同比例(2％、3％、5％、10％、20％、30％和50％)结直肠癌细胞株K-ras基因的DNA混合样本采用焦磷酸测序法进行基因突变率检测,并与Sanger测序结果平行进行Fisher精确检验比较,评价其灵敏度.同时用焦磷酸测序法检测分析30份临床结直肠癌患者石蜡包埋组织中K-ras基因第12和13密码子突变.结果 当混合已知突变类型的结直肠癌细胞株K-ras基因的DNA样本突变DNA比例在5％和10％浓度时,Sanger测序法检出K-ras基因突变率分别为33.3％ (4/12)和58.3％ (7/12),焦磷酸测序法分别为91.7％(11/12)和100％( 12/12),且2种方法检出K-ras基因突变率的差异有统计学意义(P＜0.05).此外,用焦磷酸测序法从30例结直肠癌患者石蜡包埋组织标本中检出K-ras基因外显子2第12和13密码子突变10例,均为杂合型突变,突变率为33.3％ (10/30).最常见的突变类型为G＞A转换[50％(5/1O)]和G＞T颠换[(30％(3/10)].结论 焦磷酸测序法检测结直肠癌K-ras基因外显子2第12和13密码子突变具有敏感、准确的优点,可用于临床个体化治疗中肿瘤基因突变检测.     

结直肠癌患者组织中K-ras和BRAF基因突变与不同病理特征的相关性分析

目的分析K-ras基因、BRAF基因突变在结直肠癌(CRC)不同病变中的特点,从而探索CRC基因治疗的靶点。方法采用实时荧光定量PCR法检测130例CRC患者肿瘤标本的K-ras基因、BRAF基因突变情况,并按不同的临床特征进行分析。结果 K-ras基因突变率在所有CRC患者中为36.15%(47/130),其在直肠癌患者中的突变率明显高于结肠癌患者[47.62%(30/63)vs 25.37%(17/67)],差异有统计学意义(χ~2=6.691,P0.01),直肠癌患者Gly12ASP位点的突变率显著高于结肠癌患者[46.03%(29/63)vs 26.87%(20/67)],差异有统计学意义(χ~2=5.167,P0.05);在Ⅰ+Ⅱ期CRC患者中的突变率显著低于Ⅲ+Ⅳ期CRC患者[15.28%(11/72)vs 62.07%(36/58)],差异有统计学意义(χ~2=30.469,P=0.000)。BRAF基因突变率在所有CRC患者中为6.92%(9/130),其在结肠癌患者中的突变率明显高于直肠癌患者[11.94%(8/67)vs 1.59%(1/63),使用Fisher确切概率法P0.05];BRAF基因突变率在CRC患者术前血清CA199水平升高者明显高于水平正常者[11.59%(8/69)vs 1.64%(1/61),使用Fisher确切概率法P0.05]。K-ras基因突变率与具体的病理学特征如性别、年龄、组织学分型等无统计学相关性(P0.05)。结论在CRC患者中,K-ras基因突变较BRAF基因突变更为常见,且直肠癌患者较结肠癌患者更易表现为K-ras基因突变;K-ras基因突变率越高,CRC患者的TNM分期就越高;K-ras基因上Gly12ASP位点的突变与直肠癌的发生发展密切相关,血清CA199水平可作为BRAF基因突变的标志性物质。K-ras和BRAF基因突变靶点的相关研究有望为CRC的分子靶向治疗提供有力的理论支持。     

蝎子PCR法与传统测序法检测K-ras基因突变的比较

目的建立一种简单、便捷、有效检测K-ras突变的蝎子PCR新方法.方法同时用蝎子PCR法和Sanger测序法对87例结直肠癌组织的K-ras基因进行热突变型G12D(GGT>GAT)进行检测,统计其符合率.结果87例结直肠癌组织样本中,蝎子PCR法和Sanger测序法检测到同样9例G12D突变,其符合率为100%.结论蝎子PCR法能有效检测到K-ras突变,且比Sanger测序法更为简便、快速,适合临床应用.     

大肠癌患者K-ras基因突变情况及临床意义

目的研究大肠癌患者K-ras基因的突变情况及其与临床病理特征间的关系。方法应用RT-PCR方法检测148例大肠癌患者组织标本K-ras基因第12和13密码子的突变情况,并与其临床病理特征进行对照。结果 148例大肠癌患者K-ras基因突变率为31.8%(47/148)。K-ras基因第12和13密码子突变在不同性别、肿瘤直径、大体形态、肿瘤部位、远处及淋巴结转移方面差异无统计学意义(P>0.05),在不同年龄与不同临床分期上差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RT-PCR可准确检测K-ras基因突变情况,K-ras基因突变与患者年龄、肿瘤临床分期关系密切。     

基于高通量靶向测序的常见实体肿瘤基因突变图谱研究

目的采用含有50个基因组合的高通量靶向测序技术检测多种实体肿瘤的基因突变情况,分析实体肿瘤的基因突变情况,了解实体肿瘤的基因突变图谱,为临床诊疗提供理论依据。方法收集367例多种类型实体肿瘤样本,采用BES 4000平台检测50个基因状态,分析各种肿瘤中的基因突变情况。结果 367例样本中,64.03%的样本至少存在1种基因的突变;共检测到28种基因突变,突变率从高到低的前9个基因分别为EGFR(32.15%)、TP53(15.53%)、K-ras(8.17%)、c-kit(5.72%)、APC(3.00%)、PTEN(3.00%)、B-raf(2.72%)、ERBB2(2.72%)和PIKC3CA(2.72%)。在非小细胞肺癌中突变率最高的基因为EGFR(40.10%),该基因突变在本研究其他恶性实体肿瘤中未被发现。在非小细胞肺癌(NSCLC)、结直肠癌、胃癌和卵巢癌中均检测到TP53的突变,突变率分别为13.61%、34.38%、33.30%和50.00%。在结直肠癌中突变率最高的基因为K-ras(42.86%),胃肠间质瘤中突变率最高的基因为c-kit(53.13%)。在被检测到突变的样本中,28.97%(68/235)的样本存在基因的共突变,TP53的共突变率最高为16.60%(39/235)。统计学分析结果显示,是否发生基因突变与患者性别和年龄无关,但TP53基因突变在≥58岁患者明显高于58岁患者(P0.001)。在非小细胞肺癌中,女性(P0.01)、肺腺癌(P0.001)患者EGFR突变率较高;ERBB2在58岁患者中突变率较高(P=0.001)。结论不同肿瘤中存在不同基因突变图谱,TP53基因突变发生多种实体肿瘤中并且与年龄相关,高通量靶向测序技术可同时检测多种基因的突变情况,为临床治疗决策提供全面指导。     

FANCJ基因在成人急性髓系白血病中的突变图谱

目的:检测分析急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者FANCJ基因突变情况,为研究FANCJ突变类型的AML疾病致病机理奠定基础,同时为其疾病防治提供指导。方法:在FANCJ基因蛋白编码区设计引物,采用PCR扩增及sanger测序法检测222例初诊AML患者骨髓细胞中FANCJ基因编码区突变情况,同时检测AML患者黏膜上皮组织FANCJ基因突变情况;采用NCBI Blast在线生物信息学软件分析FANCJ基因突变在不同物种中的进化保守性。结果:测序分析显示,FANCJ基因在蛋白编码区的11个位点出现突变,分别为exon5:c.G430A:p.A144T,exon6:c.A587G:p.N196S,exon9:c.C1255T:p.R419W,exon10:c.G1442A:p.G481D,exon11:c.C1609G:p.L537V,exon16:c.C2360T:p.P787L,exon17:c.C2440T:p.R814C,exon19:c.C2608T:p.H870Y,exon19:c.A2686G:p.I896V,exon19:c.C2830G:p.Q944E,exon20:c.G3412A:p.D1138N,其中A144T、N196S、R814C、I896V及Q944E突变存在复现性;另外,A144、R419、G381、L537、P787、H870、Q944及D1138位点在不同物种中高度保守。结论:在222例AML患者中发现26名患者中存在FANCJ突变,并且突变位点在不同物种中相对保守,功能重要,这为接下来研究FANCJ突变类型的AML疾病致病机理奠定基础,同时为疾病防治提供指导。     

结直肠癌患者应用ARMS法检测KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因突变分析

目的探讨结直肠癌(CRC)患者应用扩增阻碍突变系统(Amplification Refractory Mutation System,ARMS)法检测KRAS、NRAS、PIK3CA及BRAF基因突变情况并分析其与临床病理特征的关系。方法收集中国医科大学附属盛京医院60例结直肠癌患者手术切除组织,采用ARMS法检测KRAS、NRAS、PIK3CA及BRAF基因突变情况。结果 KRAS基因突变23例,突变率为38.3%;NRAS基因突变1例,突变率为1.7%;PIK3CA基因突变4例,突变率为6.7%;BRAF基因突变3例,突变率为5%。检出双突变2例,分别为PIK3CA与KRAS突变,PIK3CA与BRAF突变。有淋巴结转移患者KRAS基因突变率显著高于无淋巴结转移患者(P=0.031)。KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因突变之间无明显相关性。结论在结直肠癌患者中,KRAS基因突变率最高,且多发生于有淋巴结转移患者,NRAS、PIK3CA、BRAF基因突变率较低。对结直肠癌患者进行KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因联合检测,为临床个体化靶向治疗提供更准确的理论依据。     

高分辨熔解曲线检测苯丙氨酸羟化酶基因突变的临床价值

目的 研究用HRM分析技术检测经典型PKU患者PAH基因突变的临床应用价值。方法采用HRM分析技术对17例经典型PKU患者PAH基因的13个外显子及外显子-内含子交界区域进行检测,并采用DNA测序验证HRM检测结果。同时评价HRM诊断PKU的敏感度和特异度。另外,对其中2个家系的风险胎儿进行产前诊断。结果采用HRM分析技术从17例经典型PKU患者中检出有2个致病突变的患者16例,检出有3个致病突变患者l例。同时检出194V(c.280A＞G)、IVS4nt-1G＞A(c.442-1G＞A)、R158Q(c.473G＞ A)、Q160X(c.478C＞ T)、W187X(c.561G＞ A)、E6nt-96A＞ G(c.611A＞ G)、G239D(c.716G＞ A)、R241C(c.721C＞ T)、R243Q(c.728G＞ A)、G247R (c.739C-＞ C)、G247V(c.740G＞ T)、R261X(c.781C ＞T)、R261Q(c.782G＞ A)、H264R(c.791A ＞G)、F302 fsX39(c.904delT)、E305K(c.913G＞ A)、G312V(c.935G＞ T)、Y356X(c.1068C＞A)、V399V (c.1197A ＞T)、R408Q(c.1223G＞ A)、T418P(c.1252A ＞C)、A434D(c.1301C＞ A) 22种致病突变;Q232Q(c.696G＞A)、V245V(c.735G＞ A)、L385L(c.1155C＞G)3种沉默突变;1种单核苷酸多态点rs2280615(c.402A＞ C)。其中194V(c.280A＞ G)、Q160X(c.478C＞ T)、H264R(c.791A ＞G)、G312V (c.935G＞T)和E305K(c.913G＞ A)为PAH基因新发现的突变。2例风险胎儿经产前诊断,1例未发现致病突变,1例诊断为携带者。HRM突变筛查经典型PKU的敏感度和特异度均为100％,其检测结果与DNA测序结果完全一致。结论HRM分析技术是一种简单、准确、快速、高通量、低成本的遗传学分析方法,可用于经典型PKU的PAH基因突变筛查,并可用于已知父母突变的经典型PKU家系快速产前诊断。     

苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶exon6基因、exon7基因突变的研究

目的 探讨山西省苯丙酮尿症(PKU)患儿的苯丙氨酸羟化酶(PAH)exon6 基因、exon7 基因的突变特征.方法 通过测序及序列比对的方法对56 例PKU 患儿和112 例健康儿童的336 个PAH exon6 基因、exon7 基因进行序列分析,以确定其突变位点、性质和频率.结果 通过序列分析,发现在PKU 患儿和健康儿童中均高频率的出现Q232Q(CAA→CAG)、V245V(GTG→GTA)两种同义突变,其中cDNA 696 位点的频率高达96.2%,cDNA 735 位点的频率高达76.1%.健康儿童的其他序列与Genbank 完全相同.而PKU 患儿的基因序列中还发现了9 种共计37 个突变基因,占全部PAH 突变基因的33.04%.exon 6 仅发现一种突变基因Y204C,突变频率达9.8%;exon 7 中R243Q 的突变率最高,占10.7%,其次为Ivs7 +2 T ＞A,占5.4%,其余的G247V、R252Q、L255S、R261Q、T278I 和E280K 分别占0.9%、0.9%、0.9%、0.9%、2.7%和0.9%.9 种突变都在之前文献中有过报道,其中有7 种错义突变和2 种剪接位点突变.结论 明确了PAH exon6 基因、exon7 基因的突变种类和分布等特征,表明exon6 基因、exon7 基因中Y204C 和R243Q属于山西人群中PAH 基因突变的热点.     

胰腺癌中EGFR、KRAS、BRAF基因突变状况分析及意义

目的:检测胰腺癌组织EGFR、KRAS、BRAF基因突变状况,为胰腺癌EGFR靶向治疗研究奠定基础.方法:提取胰腺癌及胰腺良性病变石蜡组织切片中基因组DNA,PCR扩增EGFR 18、19、21外显子片段,KRAS2、3外显子片段,BRAF15外显子片段,采用直接测序法检测其突变状况.结果:32例胰腺癌患者中有24例患者存在KRAS基因突变,10例良性病变组织均未发现突变,两者差异具有统计学意义(x2=14.57,P=1.35× 10-4),其中22例12密码子突变(G12D14例,G12V8例);2例61密码子突变(Q61L).所有检测样本中未见BRAF突变.共3例EGFR突变,其中包括1例19外显子突变(de1746-750),2例21外显子突变(L858R),10例良性病变组织未见突变.结论:在胰腺癌中KRAS基因突变可能为EGFR通路失调的主要原因,其次是EGFR突变,BRAF突变未见.     

ERG11基因突变与白念珠菌对氟康唑耐药性的初步研究

目的探讨白念珠菌氟康唑作用的靶酶编码基因（ERG11）突变与氟康唑耐药性的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）扩增临床分离的23株白念珠菌ERG11基因,包括2株耐氟康唑株、9株氟康唑剂量依赖敏感株和12株氟康唑敏感株,并进行双向测序。应用B last软件,将测序结果与网上已发表序列（GenBankAY856352）进行比对,以确定是否发生基因突变。结果23株白念珠菌的ERG11基因序列共检出16个同义突变位点和18个错义突变位点。错义突变中Y205E、I437V、A255V、E260V、K487N、G472R、N435V、D502E、K143Q为新发现的突变位点。结论Y205E、I437V、A255V位点突变发现于敏感株,可能与白念珠菌耐药无关;K487N、G472R、N435V、D502E、E260V发现于剂量依赖敏感株,K143Q发现于耐药株,可能与耐药的形成有关。     

结肠直肠癌KRAS、NRAS、BRAF基因突变及其与临床病理特征、p53蛋白表达间相关性研究

目的：筛查肠直肠癌患者的KRAS、NRAS和BRAF基因亚型突变状态, 并分析其与患者临床病理特征及p53蛋白表达情况间的相关性。方法：收集110例手术切除的结肠直肠癌病理资料及组织学样本, 总结临床病理特征;采用突变阻滞扩增系统法检测KRAS、NRAS基因2、3、4号外显子第12、13、61、117、146密码子及BRAF基因15号外显子第600密码子的突变情况;采用免疫组织化学（免疫组化）法检测p53蛋白的表达情况。结果：KRAS基因突变率为45.4%（50/110）, 其中49例患者检测到2号外显子第12和13密码子突变, 1例检测到4号外显子第117和146密码子突变;NRAS基因突变率为6.3%（7/110）, 其中3例检测到2号外显子第12和13密码子突变, 3例检测到3号外显子第61密码子突变, 1例检测到4号外显子第146密码子突变, 且与KRAS基因存在共突变;BRAF基因15号外显子第600密码子突变率为2.7%（3/110）;p53蛋白阳性表达率为57.3%（63/110）, 其中27例患者存在KRAS基因突变, 7例存在NRAS基因突变, 2例存在BRAF基因突变。KRAS基因突变率与患者的淋巴结转移显著相关（P<0.05）;而NRAS基因突变与其组织分型及p53蛋白表达显著相关（P<0.05）;BRAF基因突变率与右半结肠癌显著相关（P<0.05）。结论：KRAS与结肠直肠癌发生、发展的分子机制关系密切;BRAF基因突变仅见于右半结肠, 提示右半结肠癌发生机制可能有其特殊性;p53蛋白表达与NRAS基因突变之间是否存在相互作用关系值得进一步研究。     

rpoB基因在结核分枝杆菌利福平/利福布丁交叉耐药株中突变情况的差异分析

目的 了解结核分枝杆菌利福平/利福布丁交叉耐药株与利福平耐药/利福布丁敏感株rpoB全基因突变特征的差异.方法 测定rpoB全基因序列,比较278株利福平/利福布丁交叉耐药(rifampicin/rifabutin cross-resistant,RIF/Rfb-R)株和40株利福平耐药/利福布丁敏感(rifampicinresistant/rifabutin-susceptible,RIF-R/Rfb-S)株,30株利福平/利福布丁敏感(rifampicin-susceptible/rifabutin-susceptible,RIF-S/Rfb-S)株及标准株H37 Rv之间的rpoB全基因序列突变差异.结果 利福平/利福布丁敏感株和H37Rv rpoB全基因未发现突变;利福平/利福布丁交叉耐药株的常见突变位点是531(70.5％)和526( 20.9％).223( 80.2％)株单点突变株分别含有S531L、S531W、H526D、H526Y、H526R、Q513K、Q513P、Q510H、V176F、P287R、Y395C及H404Y单点突变,55( 19.8％)株多重突变株分别以S531L、H526R、H526Y、H526D、D516G和Q513K位点与其他位点联合突变为主.利福平耐药/利福布丁敏感株的常见突变位点分别是516(65.0％)、526( 17.5％)和533( 10.0％).21(52.5％)株单点突变株分别含有L533P、H526L、H526S、S522L、D516V、D516Y和D516F单点突变,19(47.5％)株多重突变株分别以D516V和L533P位点与其他位点联合突变为主.结论 本批标本中,利福霉素耐药株rpoB基因突变率为100％,利福平/利福布丁交叉耐药株与利福平耐药/利福布丁敏感株rpoB全基因单点突变株的突变位置或氨基酸替换类型、多重突变株的突变位置或组合类型以及常见突变位点或其氨基酸替换类型完全不同,rpoB全基因DNA序列分析对临床科学应用利福平和利福布丁有指导意义.     

Highlight on DPYD gene polymorphisms and treatment by capecitabine*

Abstract

Background: Sequencing of DPYD exome was conducted in a prospective cohort of advanced breast cancer patients receiving capecitabine.

Methods: A total of 243 patients were analyzed. Digestive, neurologic and hematotoxicity over cycles 1–2 showed 10.3% G3 and 2.1% G4, including one toxic death. DPYD exome, flanking intronic regions (20?bp), 3’UTR and part of 5’UTR (500?bp) were sequenced on MiSeq Illumina (Integragen, 97% coverage, HWE checked).

Results: In total, 48 SNPs were identified: three in 3’UTR, 19 in coding regions (four synonymous including E412E; 15 missenses including D949V, V732I, R592W, I560S, I543V, S534N, S492L, M406I, D342G, M166V, T65M, C29R), 19 in flanking intronic regions (including *2A) and seven in 5’UTR. In total, 11 SNPs have not been previously described, including three missense variations each heterozygous in three separate patients: R696H, F100L and A26T. The patient with a toxic death carried one D949V allele. The three consensual variants *2A, D949V and I560S were carried by seven patients (heterozygous). Analysis of consensual variants showed that they were associated with G3–4 toxicity (OR?=?21.0, sensitivity 16.7%) but not with G4 toxicity. Adding the variants previously associated with DPD deficiency in vitro, i.e. R592W, S492L and D342N/G, increased sensitivity on G3–4 (23.3%, OR?=?21.1) and was predictive of G4 toxicity (sensitivity 40%, OR?=?19.0). Of note, adding the new F100L variant further improved predictivity of genotyping on G4 toxicity (sensitivity 60%, OR?=?42.8).

Conclusions: Present data establish the impact of consensual variants on capecitabine toxicity and reveal the existence of a novel DPYD variant, F100L, associated with G4 toxicity.     

Microsatellite stable colorectal cancers in clinically suspected hereditary nonpolyposis colorectal cancer patients without vertical transmission of disease are unlikely to be caused by biallelic germline mutations in MYH

Microsatellite analysis and immunohistochemistry are commonly used initial screening tests for hereditary nonpolyposis colorectal cancer. However, tumors in roughly one-half of the patients fulfilling the Bethesda guidelines are microsatellite stable. In addition, normal mismatch repair protein expression in these tumors suggests that a defect in the mismatch repair system is unlikely. Because biallelic MYH mutations occur in patients with both high and low numbers of adenomas, we hypothesized that MYH is involved in the tumorigenesis of microsatellite stable colorectal cancers in patients without vertical transmission of disease and who fulfill the Bethesda guidelines. MYH was analyzed in 50 cancer patients and 116 healthy controls by complete genomic DNA sequencing. No biallelic germline mutations were identified. One patient was a heterozygous carrier for the p.G382D missense mutation, and another patient was a heterozygous carrier for the novel missense mutation p.Q484H. We identified six common variants, three in the coding region (p.V22M, p.Q324H, and p.S501F) and three in adjacent intronic regions (c.157+30A>G, c.462+35G>A, and c.1435–40G>C). In summary, biallelic germline mutations of MYH are unlikely to cause colorectal cancer in patients sharing clinical features with hereditary nonpolyposis colorectal cancer families without mismatch repair defect and therefore cannot fill the molecular diagnostic gap in this subgroup of Bethesda-positive patients.