自然冻融蟾蜍脑组织的形态学观察

本实验用自然温度(-22℃)冷冻蟾蜍脑组织。将蟾蜍分为在体脑和离体脑组织冻融。分别自然暴露冷冻60分钟。以0.1％甘油30℃将蟾蜍复温,1～2分钟蟾蜍复苏。与此同时,经组织学常规处理,HE染色,光镜观察。结果在体冷冻复温组:脑组织结构完整,分辨清楚,可见星形胶质细胞和少突胶质细胞。离体冷冻脑组:脑组织细胞各层次分辨不清,这种现象是冷冻时冰晶形成所致。实验结果提示:蟾蜍脑组织可在-22℃条件下至少保存60分钟,其脑组织具有活力和功能。这对组织、细胞、器官的低温保存和移植具有重要价值。     

自然冻融蟾蜍眼球的形态学观察

本实验采用自然和离体冻融(—22),冷冻蟾蜍眼球。将其分为在体和离体冻融。冷冻60分钟后,用0.2%甘油30℃复温,1—2分钟后复苏,速将其眼球经组织学常规处理。HE染色,olympus显微镜观察及图像分析冻融后蟾蜍眼球组织结构的变化。离体眼球组,显微镜下可见:角膜、视网膜、脉络膜、巩膜细胞体积增大,颗粒增多现象。纤维呈透明玻璃样变。在体冷冻复温组,眼球组织结构完整。各种细胞和纤维清楚可见,实验结果提示:蟾蜍眼球可以左—22℃条件下至少保存60分钟。0.1%甘油30℃复温。1—2分钟复苏。实验结果提示:眼球器官具有活力和功能。     

大白鼠离体器官冻融组织学观察及理化特性

用AC15型复射式检流计和Olympus显微镜组织学观察研究以及图像分析了不同的温度浸冻大白鼠(Wistar)在体尾和离体心、肺、肝、脾、肾、脑的组织温度和组织有无显著变化。结果离体器官的组织温度和组织有显著变化。组织过冷点温度(-4.4±0.69℃～-12.13±1.87℃)与鼠尾的组织过冷点相比有统计学意义(p<0.01)。从过冷点到组织冻结点均为-0.60℃,时间均为2秒,我们认为细胞、组织、器官复温速率为120～360℃/min为宜。冷液浸冻组织以-12℃～-20℃为宜,否则组织将不出现过冷现象,或者细胞、组织变性,处于亚稳定状态。     

蟾蜍心肌组织自然冻融的组织学观察

本实验以自然温度(-22℃)冻融蟾蜍心脏。冷冻50分钟后,以温水30℃复温,1—2分钟后,蟾蜍复苏。经组织学常规处理,HE染色,光镜观察:结果发现,整体和开胸腹冻融的心肌组织结构完整,心肌纤维、心肌细胞核及闰盘清楚可见。离体冻融的心脏心肌纤维部分断裂和透明玻璃样变,心肌细胞核增大。上述结果表明:在体蟾蜍心脏可以在—22℃冷冻至少50分钟。蟾蜍在30℃温水中复温,1—2分钟后复苏,心肌组织有活力和功能。     

AkPase活性对组织细胞的测定方法

细胞、组织、器官的保存和移植是诸多学者多年一直在研究的课题 ,对于保存时间、温度、保存液的配制 ,特别是组织细胞保存活性还很少有人报道 ,本实验采用 Olympus显微镜观察冻融蟾蜍胃、肠 Ak Pase活性及三棵针合剂对胃、肠的保护效应。这将为临床细胞、组织器官的保存、移植提供理论依据。1　材料和方法实验用冬眠状态下中华大蟾蜍 ,体温 12～ 15℃ ,体重 5 0～ 70 g,性别不限 ,随机分为两组 ,每组 10只 ,分为药物复温组、正常冬眠对照组。将实验组蟾蜍置于 - 18℃冰箱内冷冻10～ 6 0 m in,在蟾蜍冻休克状态下 ,将其从冰箱中取出 ,将蟾…     

改良冰冻血小板制备方法的评价

目的 回顾性分析2008-2011年东莞市中心血站冰冻血小板制备及复融的情况,评价改良的冰冻血小板制备方法对复融后血小板不可逆聚集的影响.方法 统计2010-2011年两年我站使用75％二甲基亚砜(DMSO)溶液作为冷冻保护剂制备冰冻血小板后的复融情况,并以此作为实验组,统计2008-2009年两年我站使用二甲基亚砜原液制备冰冻血小板后的复融情况,并以此作为对照组.实验组血小板袋内加入75％二甲基亚砜溶液后,置-50℃速冻机速冻1h,再转移到- 80℃低温冰箱保存,即改良法;对照组血小板袋内加入二甲基亚砜原液后直接在-80℃低温冰箱保存,即经典法.复融后,肉眼观察发现血小板出现不可逆聚集,判为不合格.结果 实验组冰冻血小板复融后的血小板不可逆聚集率为0.37％(5/1352),而对照组冰冻血小板复融后的血小板不可逆聚集率为7.94％(98/1234),两组之间的血小板不可逆聚集率的差异有极显著性(P＜0.01),改良法制备的冰冻血小板在临床使用中未见不良反应的发生.结论 采用75％的二甲基亚砜溶液作为冷冻保护剂添加到血小板悬液内,-50℃速冻1h,再转移至-80℃低温冰箱保存的冰冻血小板制备方案血小板不可逆聚集率较低,是一个较好的制备冰冻血小板的方法,值得推广应用.     

人参合剂对冻融蟾蜍心脏电生理理化特性的影响

目的:观察人参合剂对冻融蟾蜍心脏和血液电生理物理化学的影响.探索:人参合剂对心血管保护作用及物理化学特性.方法:采用冰箱-22℃冷冻蟾蜍冷休克模型,并将其分为正常对照组、RS任氏液组,人参药物合剂组80～83℃复温,采用计算机生物机能实验系统,记录观察不同温度蟾蜍复活心电图变化.结果:人参合剂组心电图波形PQRST明显比RS任氏液和对照组好.结论:人参合剂复温对冻融蟾蜍心血管具有保护作用.     

断肢(指)保存的研究进展

正本文主要对断肢(指)保存的相关研究进展作综述,如下:1低温保存在低温的状态下,胞内酶对断肢(指)细胞破坏速度会有所减慢,且能够对细胞代谢速率进行控制,从而减少其能量的消耗。对于恒温动物,其组织器官温度降低的同时,会降低相关酶的活性,因此,在器官处于4℃左右的低温状态时,其细胞代谢速度也会有所降低~([1])。2低温+器官保存液保存根据器官保存液成分的不同可以分为非液体型保存液、载氧保存液、血浆类     

风湿性心脏病瓣膜置换术中脑静脉血氧变化的临床观察

目的观察风湿性心脏病瓣膜置换术体外循环过程中不同温度阶段脑静脉血氧含量的变化。方法在术中不同时点诱导气管插管后10min(T136.5℃)、转流低温期(T232℃)、复温期(T334℃)、转流结束20min(T436.5℃),分别采桡动脉及颈静脉球部血样本行脑静脉血氧变化监测。结果在在体外循环开始后Hb、PaO2、CaO2、CjvO2均有不同程度下降,随温度降低PjvO2、SjvO2升高,O2ER、O2EI降低;复温后PjvO2、SjvO2下降,O2ER、O2EI升高,CjvO2持续下降。结论脑组织氧耗随温度下降而减少,温度上升而增加;复温时注意加深麻醉,缓慢复温以减少脑氧耗,保持脑氧供需平衡。     

不同温度对冬病夏治膏药中芥子碱硫氰酸盐含量的影响

目的:在夏天室温(20～30℃)、冷藏(4～8℃)和冷冻(-18～-20℃)等3种条件下,考察冬病夏治膏药的稳定性.方法:采用HPLC法测定上述三种条件下保存10,30,60,90 d后冬病夏治膏药中芥子碱硫氰酸盐的含量变化.结果:在夏天室温条件下,10 d后有效成分芥子碱硫氰酸盐从100%下降至27.5%; 在冷藏条件下,10 d后有效成分芥子碱硫氰酸盐从100%下降至88.79%;在冷冻条件下,90 d后有效成分芥子碱硫氰酸盐从100%下降至97.35%.结论:冬病夏治膏药的最佳保存方法为冷冻贮藏.     

冻融法控制制药用转基因蓝藻在环境中释放

摘要:目的 用转基因生物制备重组药物中的1个关键问题就是防止其环境释放。为控制制备抗对虾白斑综合征病毒用的转vp28基因鱼腥藻7120蓝藻细胞在应用中的生长和繁殖能力,本研究探讨用冻融法在不破坏重组VP28蛋白活性的同时杀灭藻细胞。方法 通过把蓝藻细胞在2种低温环境(-20、-80 ℃)和室温中处理,选取最适温度以多次冻融法破坏藻细胞。用液体和固体培养观察其后续生长,用光学和扫描电镜检测细胞的损伤。结果 -20和-80 ℃与室温处理连用,都可使处理的藻细胞失去生长能力。为操作简便,选用冷冻温度为-20 ℃、反复冻融3次（24 h/次）,使蓝藻细胞100%失去繁殖能力,藻细胞在冻融处理后丝状体断裂,细胞遭破坏,固体培养发现无藻细胞生长,蛋白印迹法检测VP28蛋白无丢失。结论 冻融法可控制转基因鱼腥藻在环境中的释放。该方法成本低廉、操作简单,且无次生污染,既保障该药物在应用中的安全性,也可为其他转基因蓝藻在环境中的安全释放提供借鉴。     

蟾蜍肌组织自然冻融的组织学观察

本实验观察了冬眠状态下,蟾蜍在体和离体的心脏和骨骼肌冻融后形态学变化。Olympus显微镜观察和图像分析:在体冻融蟾蜍心肌和骨骼肌,组织结构完整。肌纤维,肌细胞,毛细血管均清楚可见。结果表明:蟾蜍心脏及骨骼肌可在自然温度—22℃暴露冷冻50分钟。以500ml温术为30℃复温,1—2分钟,使其心脏和骨骼肌组织恢复活力和功能。     

微囊化牛嗜铬细胞及冷冻保存的体外培养研究

目的 观察体外培养的微囊化牛嗜铬细胞及其冷冻保存复苏后的细胞活力,探索微囊化牛嗜铬细胞的冻存保存方法,为将来进行大规模细胞移植治疗疼痛奠定临床基础.方法 经胶原酶消化成单细胞,微囊包裹,并取部分进行冷冻保存及复温,观察细胞的生长情况;放免法分别检测其培养液中去甲肾上腺素、甲-脑啡呔的含量和在高钾、乙酰胆碱刺激下的分泌量来观察其功能活性.结果 微囊化牛嗜铬细胞及其冷冻复苏后的细胞形态结构完整,生长良好;冻存复苏后的微囊保留了儿茶酚胺和甲-脑啡呔的的分泌功能,基础与刺激分泌量大约为冻存前微囊化牛嗜铬细胞分泌量的92%;同时刺激后去甲肾上腺素、甲-脑啡呔水平较其基础值均有明显增加（P＜0.01）.结论 微囊化牛嗜铬细胞及其冷冻复苏后的细胞具有良好的细胞功能,冷冻保存的微囊化牛嗜铬细胞是有效和成功的.     

国外医学近况

Mayo医院的Gorenstein等在6例肺癌用冷冻外科治疗,5例用局麻,1例用全麻。冷冻探头通过气管镜放入,其尖端可冷却至-170℃放在肿瘤内两分钟,共进行3—5次,整个操作需30分钟,因冷冻探头大小和气管镜的限制,对于一定体积的肿瘤在一次治疗操作需要反复数次冰冻,很低的温度使瘤组织很快冻结,减少癌细胞扩散的危险,冰冻后组织融化增加组织破坏,患者均可耐受手术,次日即可出院,两周后复查并决定是否进行第二次冰冻治疗,在他们所治疗的6例中5例肿瘤体积缩小或消失,2例在治疗前有严重气道梗阻治疗后得     

宿主组织对F-30066抗血吸虫作用的影响

本文研究了宿主组织对F-30066[卽β-(5-硝基-2-呋喃)丙烯酰异丙胺]体外杀虫作用的影响。实验结果表明,F-30066与小白鼠或家兔的脑、肝、小肠、脾及肾等组织匀浆在36—37℃水浴中保温15—120分钟时,药物的杀虫效价明显降低或消失,心及肺等组织对药物杀虫效价的影响较小。此外,小白鼠的肝、小肠切片降低药物效价的速率较其匀浆慢。F-30066与小白鼠或家兔的红血细胞在上述温度中保温较长时间后(4—8小时),药物的杀虫作用亦有不同程度的降低,但人与犬的红血细胞对药物抗血吸虫作用的影响不明显。     

冷冻保存角膜缘上皮器官培养的超微结构观察

为探讨超低温(-196℃)冷冻保存对角膜缘上皮细胞超微结构的影响，对12只角膜缘冷冻材料(人和兔材料各6只)在培养的第5、10、15、20天，用透射电镜扫描观察了角膜缘上皮细胞超微结构。结果表明，超低温保存的人与兔角膜缘上皮细胞超微结构变化相似。器官培养第5天的标本复温后显示主要改变为线粒体肿胀、内质网扩张；培养第10天和15天的标本可见角膜缘上皮细胞出现灶状变性；培养第20天，角膜缘中间层和基底层上皮细胞只见细胞轮廓，细胞间桥粒尚可见；核溶解坏死；有的细胞核内可见凋亡小体。结论：超低温冷冻保存的角膜缘上皮细胞超微结构基本完整；潜在的细胞冷冻损伤可能诱导角膜缘上皮细胞凋亡。     

PI3K/Akt信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡中的意义

目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt (PI3K/Akt)信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧(H-R)大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)凋亡中的意义.方法 将培养的SD大鼠MMECs随机分为正常对照组(C组)、缺氧-复氧组(H-R组,缺氧2h复氧2 h)、二氮嗪+缺氧-复氧组(DZ组,二氮嗪100 μmol/L预处理2 h+缺氧2h复氧2 h)、PI3K特异性阻滞剂LY294002+二氮嗪+缺氧-复氧组(LY294002组,LY294002 100 μmol/L预处理2 h+二氮嗪100μmol/L预处理2 h+缺氧2h复氧2 h).Hoechst染色观察凋亡细胞结构,Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测Akt的mRNA和蛋白表达水平.结果 与C组比较,H-R组细胞凋亡率升高,Akt mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05或P＜0.01);与H-R组比较,DZ组细胞凋亡率降低,Akt mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05或P＜0.01);与DZ组比较,LY294002组细胞凋亡率升高,Akt mRNA和蛋白表达减少(P＜0.01).结论 H-R损伤引起MMECs凋亡.线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道(mito-KATP)开放后通过PI3K/Akt信号途径能部分抑制该作用.     

两步降温对鲑鱼受精卵细胞膜完整性的影响

冷冻对各种细胞均引起破坏作用。Benjamin和Robert认为这种破坏是由于细胞内形成冰晶以致促使电解质浓度升高而引起细胞脱水皱缩致使细胞失活。但冷冻损伤发生的机制尚不清楚,尤其用象鲑鱼卵细胞这样大的细胞来进行冷冻损伤机理的研究,我们尚未见到报道。参照LE.Mc Gann的测定冷冻损伤部位的方法,我们进行了该项试验,以其了解鲑鱼卵细胞在冷冻过程中损伤发生的部位。 1 材料和方法鲑鱼受精卵的采集如文献所示。保存液为鱼Ringer’s液+1M DMSO(低     

低温保存胎盘组织的效果及对自体化基因治疗与细胞治疗效果的影响

目的观察低温保存胎盘组织的效果及对自体化基因治疗与细胞治疗效果的影响。方法选择2017年1月-2019年1月靖西市人民医院低温保存的胎盘组织30个作为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组,各15个。对照组给予冷藏方式保存,观察组给予冷冻方式保存,并选择不同体积比的抗冻剂进行程序降温,体积比分别为5 kg/m^3、10 kg/m^3、15 kg/m^3、20 kg/m^3,降温后采取-80℃转液氮中保存,比较2组低温方式对细胞培养和形态学、胎盘来源贴壁细胞(HPDAC)免疫表型的鉴定结果。结果2组新鲜胎盘组织贴壁的培养物中有1个细胞沿着瓶底从组织块边缘向外延伸。观察组中10 kg/m^3和15 kg/m^3浓度1周左右有较多细胞从组织块边缘伸展出来;5 kg/m^3浓度1周有少数细胞从组织块边缘伸展出来。可见10 kg/m^3的浓度组织低温保存效果最好,15 kg/m^3的浓度次之。不同的甲基亚砜(DMSO)浓度冷冻对胎盘组织细胞的影响差异有统计学意义(P<0.05)。免疫细胞化学结果显示,CD105,CD73为阳性,CD90为弱阳性,CD34、CD45为阴性。结论低温保存胎盘组织的效果较好,可为将来实现自体化的基因治疗提供丰富的细胞及组织资源储备,是一种切实可行的临床方式,值得推广应用。     

-80℃低温冻存保护剂对不同来源的造血干细胞体外冻存效果分析

目的分析-80℃体外冻存保护体系对不同来源的造血干细胞的冻存效果。方法以国产或进口药用二甲基亚砜(DMSO)、羟乙基淀粉(HES)、人血白蛋白(HSA)配制细胞冷冻保护剂,分别对人外周血、纯化的CD34+、骨髓及脐血造血干细胞进行-80℃低温保存,冻融前、后计数MNC、CD34+细胞、CFU-GM数量、回收率及台盼蓝拒染率,了解其生理活性。结果 4种来源的造血干细胞各30例,以120g/L HES加10%(V/V)DMSO和64g/L HSA为保护剂-80℃冻存360d,观察组与对照组在冻融前、后MNC、CD34+细胞、CFU-GM数量、回收率及台盼蓝拒染率无统计学意义(P>0.05)。应用国产试剂对118例外周血干细胞、39例纯化CD34+造血干细胞、3例脐血干细胞进行-80℃低温冻存1～9个月,进行冻存的造血干细胞移植,移植后7～19d内均成功恢复造血重建。结论以120g/L HES加10%(V/V)DMSO和64g/L HSA为细胞冷冻保护剂,能够良好保持干细胞数量及生理活性,且国产试剂与进口试剂无显著差别,具有价格低廉,容易购买,低毒安全,操作简便等特点,可临床应用于造血干细胞-80℃低温短期保存。