制备抗原肽所用宫颈癌细胞培养方法的建立及HLA表达的检测

目的　探讨制备抗原肽所用宫颈癌细胞的培养方法及检测其HLA的表达。方法　先利用CO2孵箱和普通培养瓶进行培养 ,测定其生长状况 ,然后流式细胞仪检测HLA Ⅰ、Ⅱ类分子的表达 ,再用免疫荧光法检测不同浓度IFN γ对Hela细胞HLA Ⅰ、Ⅱ类分子的表达和IFN γ对不同培养时间Hela细胞HLA分子的表达。结果　IFN γ能够明显提高对数生长期的Hela细胞HLA Ⅰ类分子的表达 ,而IFN γ刺激前后Hela细胞HLA Ⅱ类分子的表达均为阴性。结论　本方法可缩短细胞培养时间 ,利用IFN γ诱导细胞提高HLA Ⅰ类分子的表达 ,为提供制备抗原肽所用宫颈癌细胞奠定了基础。     

苯乙酸钠增强肿瘤细胞表面HLA分子的表达

以分化绣导剂苯乙酸钠处理肿瘤细胞,以ELISA检测肿瘤细胞表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子表达的变化。结果发现MCF-7、MDA-453、MKN-45以及Hela细胞表面HLA Ⅰ类分子表达较低,而MKN-28和3AO细胞表面HLA Ⅰ类分子高表达。MDA-453、MKN-28、MKN-45、Hela以及3AO细胞表面亦表达HLA Ⅱ类分子,而MCF-7细胞表面缺乏HLA Ⅱ类分子。苯乙酸钠能够诱导MCF-7细胞表面表达HLA Ⅱ类分子;增强MCF-7细胞表面HLA Ⅰ类分子,MDA-453、MKN-28、MKN-45、Hela以及3AO细胞表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子的表达。并且肿瘤细胞表面HLA Ⅰ类分子的表达与苯乙酸钠的作用时间和剂量呈正相关。     

逆转录病毒载体介导的γ-干扰素基因在人肝癌细胞中的表达研究

以逆转录病毒载体(pLXSN)将人源γ-干扰素(huIFN-γ)基因转导入4种不同的人肝癌细胞株,经G418抗性筛选均获得了阳性克隆.PCR和RT-PCR结果均表明IFN-γ基因已在基因组DNA中整合并表达.IFN-γ生物活性检测结果表明,在基因修饰的4种不同个体人肝癌细胞株及同一细胞株的5种不同克隆中,分泌的IFN-γ活性有较大差别.流式细胞仪检测细胞表面HLAⅠ类分子,结果表明基因修饰肿瘤细胞表面HLAⅠ类分子表达有显著提高.同时还首次对HLAⅠ类分子专一位点A2表达进行了分析,结果表明经IFN-γ基因修饰后,A2表达增加与HLAⅠ类分子总体增加相一致,本实验为进行基因工程修饰的肿瘤疫苗研究奠定了基础.     

大肠癌与人类白细胞抗原表达

大肠癌在欧美国家发病率很高，在我国是十大常见恶性肿瘤之一，许多资料表明我国大肠癌发病率有逐年增高的趋势。人类白细胞抗原(human leucocyte antigen)是细胞表面标志之一，参与抗原递呈和T细胞激活的关键分子，在免疫应答和免疫调节中具有重要的作用。越来越多的资料表明肿瘤细胞表面的HLA-Ⅰ类抗原分子表达下降而HLA-Ⅱ类抗原表达上升。但是不同类型的肿瘤其HLA表达的情况和机制并不相同。     

HLA-Ⅱ类抗原与妇科恶性肿瘤的研究进展

HLA-Ⅱ类抗原主要表达于专职抗原递呈细胞表面,其生物学作用是将外源性抗原肽递呈给CD4 T细胞从而参与机体的免疫应答过程.HLA-Ⅱ类抗原的等位基因具有多态性从而导致其分子的抗原决定簇不同,可能与肿瘤的遗传易感性相关.HLA-II类抗原在恶性肿瘤组织中的异常表达,与肿瘤细胞逃避免疫监视形成肿瘤转移浸润相关.本文就HLA-Ⅱ抗原在妇科恶性肿瘤方面的研究作一综述.     

肿瘤细胞HLAⅠ类分子表达对NK抗性的影响及IFN-γ的调节作用

目的 探讨肿瘤细胞表面HLAⅠ类分子的表达与NK杀伤的关系及IFN－γ的调节作用。方法 用间接免疫荧光法检测7种肿瘤细胞表面HLA－ABC分子的表达;用鼠抗人HLA－ABC单抗封闭靶细胞后,观察NK杀伤的变化;用IFN-γ处理靶细胞后,观察瘤细胞表面HLA分子表达的变化及NK杀伤的变化。结果 不同肿瘤细胞株表达HLA－ABC分子的比例及荧光强度均不相同,除Karpas外,均表现为不同程度的下降。HLA－ABC表达阴性的K562细胞对NK杀伤最敏感,其他细胞的敏感性均有下降。肿瘤细胞表达HLA－ABC分子的表达多有不同程度的下降。用抗HLA单抗封闭相应位 点后,可使NK杀伤明显增强。用IFN－γ500U／ml处理48h后,白血病细胞K562、黑色素瘤细胞M21和高转移肺癌细胞PG表面HLAⅠ类分子表达明显增加,对NK杀伤的敏感性降低;而人T细胞淋巴瘤Karpas、髓样白血病细胞HL60和结直肠癌细胞HT29经处理后,HLAⅠ类分子表达无明显变化,对NK杀伤的敏感性反而明显增强。IFN－γ促进HL60和HT29细胞的凋亡。结论 NK细胞能识别HLA－ABC分子表达下降或缺陷的肿瘤细胞并发挥杀伤作用;INF－γ能恢复部分肿瘤细胞HLA－ABC分子的丢失,并能促进部分肿瘤细胞的凋亡,提高肿瘤对机体抗瘤机制的敏感性。     

细胞因子基因转导的人肿瘤细胞免疫原性及致瘤性研究

用鼠抗人XHLA-A，B，C单抗W6／32及HLA-DR单抗HB55与细胞因子基因修饰肿瘤细胞结合，PAFITC兔抗鼠k为二抗，间接免疫荧光法流式细胞仪测定了HLA-Ⅰ，Ⅱ类抗原表达．与未修饰及空白载体修饰肿瘤细胞相比，基因修饰肿瘤细胞的HLA-Ⅰ，Ⅱ类抗原表达有明显增加，其中IFN-γ作用最强，     

黑色素瘤抗原研究进展

黑色素瘤抗原(MAGE)广泛表达于多种恶性肿瘤.该抗原经抗原提呈细胞加工后能被人类白细胞抗原(HLA)-Ⅰ类或HLA-Ⅱ分子提呈,引起针对MAGE表达阳性的肿瘤细胞的特异性免疫.近年来MAGE抗原已被广泛应用于肿瘤的诊断和免疫治疗.     

卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子表达异常和TAP,LMP基因表达的关系

目的:肿瘤细胞表达MHCⅠ类分子是激发肿瘤抗原特异性CTL进行肿瘤免疫治疗的关键,肿瘤细胞HLAⅠ类分子表达异常是肿瘤逃脱免疫监视的重要机制.我们探讨了卵巢癌细胞HLAⅠ类分子表达异常的分子基础.方法:本文以West-ern blot、免疫组化和流式细胞术检测卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子的表达,以RT-PCR检测TAP,IMP基因的表达,探讨肿瘤细胞HLA Ⅰ类分子表达异常的分子基础.结果:卵巢癌中HLA Ⅰ类分子表达异常相当普遍(5/8),并涉及抗原加工相关基因TAP,LMP基因表达异常.25℃培养肿瘤细胞可部分诱导Ⅰ类分子的表达;结论:卵巢癌HLA Ⅰ类分子表达异常与其Ⅰ类抗原加工途径异常有关.     

重组hDCN对肝癌细胞株HepG2表面HLA分子表达的影响

目的研究peDNA3．1（＋）-核心蛋白聚糖（DCN）重组质粒对体外培养的HepG2细胞株表面HLAⅠ、Ⅱ类分子表达的影响,探讨DCN增强抗肿瘤免疫应答的作用。方法重组质粒pcDNA3．1（＋）-DCN转染HepG2细胞,用流式细胞术（FCM）检测转染前后HepG2细胞表面HLAⅠ、Ⅱ类分子的表达。结果HepG2细胞低表达HLAⅠ、Ⅱ类分子,经转染重组质粒作用后,HLAⅠ、Ⅱ类分子的荧光强度明显增强。结论rhDCN核心蛋白能上调肿瘤细胞表面HLAⅠ、Ⅱ类分子的表达,这一作用可能参与其抗肿瘤效应机制。     

非经典HLA I类分子（HLA—G和HLA—E）在人肿瘤细胞系的表达及IFN—γ的调节作用

目的：探讨非经典HLA I类分子在人肿瘤细胞系的表达及IFN-γ的调节作用。方法：用RT-PCR法检测12种肿瘤细胞系和人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织标本HLA-G和HLA-E mRNA的表达。结果：人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织均有HLA-G和HLA-E mRNA的表达;12株肿瘤细胞中仅人T细胞淋巴瘤Karpas存在HLA-G3的mRNA表达,经IFN-γ处理后,Karpas出现HLA-G1/G5和HLA-G2/G4的表达,宫颈癌Hela细胞、黑色素瘤M21细胞和膀胱癌T24细胞出现HLA-G3 mRNA的表达;12株肿瘤细胞中有9株表达HLA-E mRNA。结论：肿瘤存在HLA-G和HLA-E mRNA的表达,IFN-γ可促进HLA-G mRNA的表达。肿瘤细胞HLA-G和HLA-E的表达可能是肿瘤逃避免疫系统监视的机制之一。     

树突状细胞改变以及HLA-Ⅱ类分子表达在肠癌中意义

目的 研究肠癌组织中专职抗原递呈细胞树突状细胞数量以及兼职抗原递呈细胞肠癌组织中HLA-Ⅱ类分子表达强度改变,揭示肠癌组织中的抗原递呈功能改变,为肠癌免疫治疗提供理论依据.方法 用免疫组化的方法标记肠癌组织中的树突状细胞、HLA-Ⅱ类分子,以切端组织形态正常的黏膜组织(距离癌组织5 cm)作为对照,结合临床资料分析肠癌组织中的树突状细胞数量改变以及HLA-Ⅱ类分子表达情况.结果 相对于切端黏膜,肠癌组织中HLA-Ⅱ类分子表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),树突状细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05).肠癌组织HLA-Ⅱ类分子表达在肠癌不同分级、分期差异无统计学意义(P>0.05).树突状细胞的数量在肠癌不同分级、分期差异无统计学意义(P>0.05).结论 肠癌组织中HLA-Ⅱ类分子表达显著下降,树突状细胞数量显著减少,导致肠癌组织中的肿瘤抗原递呈功能下降,是肠癌组织逃避机体免疫监视的重要途径.     

NK细胞杀伤人骨髓瘤RPMI8226细胞的活性及其可能的机制

目的:研究同种异体NK细胞对人骨髓瘤RPMI 8226细胞的杀伤活性及其可能的机制。方法:LDH释放法检测NK细胞对RPMI 8226细胞和人白血病K562细胞的杀伤活性,流式细胞术和RT-PCR法分别检测K562和RPMI 8226细胞中NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子的表达;阻断K562和RPMI 8226细胞中NKG2D配体的表达后,检测NK细胞的杀伤活性。结果:NK细胞对RPMI 8226靶细胞的杀伤活性明显低于对K562靶细胞的杀伤(P<0.01)。K562细胞高表达NKG2D配体,不表达HLA-Ⅰ类分子;RPMI 8226细胞低表达NKG2D配体,高表达HLA-Ⅰ类分子,其HLA基因型为A 01,66;B 58,58;Cw 03,06。阻断NKG2D配体后NK细胞杀伤K562细胞的活性明显降低(P<0.01),而杀伤RPMI 8226细胞的活性无明显改变;阻断HLA-Ⅰ类分子,NK细胞杀伤K562细胞的活性无变化,而杀伤RPMI 8226细胞的活性明显提高(P<0.01)。结论:NK细胞杀伤RPMI 8226细胞的活性较低,其机制与RPMI 8226细胞高表达HLA-Ⅰ类分子、低表达NKG2D配体有关。     

冷冻影响肝癌细胞HLA和B7分子表达的实验研究

目的：探讨冷冻治疗后机体免疫功能提高的机制。方法：应用流式细胞仪检测人肝癌细胞经0℃或－20℃冷冻后，HLA和B7分子表达率和平均荧光强度的变化。结果：0℃组与对照组比较，HLA－Ⅰ分子和B7－2分子的表达率和平均荧光强度均无明显变化；HLA－Ⅱ分子和B7－1分子的表达率增高，平均荧光强度增强。－20℃组与对照组比较，HLA－Ⅰ、HLA-Ⅱ、B7-1和B7－2分子的表达率均增高，平均荧光强度均增强。－20℃组和0℃组比较，HLA－Ⅱ和B7－1分子的表达率和平均荧光强度均无显著性差异；HLA－Ⅰ和B7－2分子表达率均增高，平均荧光强度均增强。结论：0℃和－20℃冷冻可增强人肝癌细胞HLA和B7分子的表达，这可能是冷冻治疗提高机体免疫功能的机制之一。     

中国人经典霍奇金淋巴瘤中人类白细胞共同抗原表达的研究

 目的　既往的研究发现在高加索人中,经典霍奇金淋巴瘤肿瘤细胞人类白细胞共同抗原（HLA）的表达与EB病毒感染密切相关,研究在亚洲人中两者的相关性。方法　随机选取北京大学医学部病理学系常规外检及会诊病例中确诊为经典霍奇金淋巴瘤的145例,所有病例均有石蜡包埋组织蜡块。常规HE染色、形态学观察,根据WHO分类标准对所有病例进行重新分类。原位杂交方法检测EB病毒编码的小RNA（EBER）以提示肿瘤与EB病毒的相关性。HLA-Ⅰ类抗原的表达使用HC-10和β2-微球蛋白抗体检测,而HLA-Ⅱ类抗原的表达使用CR3／43抗体检测。结果　145例中,40 %（58例）的病例为EB病毒相关性。EB病毒阳性病例中,混合细胞型较结节硬化型更为常见（71 %比16 %,P＜0.001）。HLA-Ⅰ类抗原在EB病毒阳性病例中的表达率明显高于EB病毒阴性的病例（79 %比30 %,P＜0.001）。而HLA-Ⅱ类抗原的阳性率在EB病毒阳性和阴性病例中差异无统计学意义（52 %比43 %,P＝0.277）。结论　中国人经典霍奇金淋巴瘤HLA-Ⅰ类抗原的表达与EB病毒感染密切相关,与高加索人一样,但HLA-Ⅱ类抗原的表达与EB病毒感染无显著相关性。     

流式细胞术检测肺癌组织HLA-ABC的意义

检测HLA—ABC（经典人类白细胞抗原Ⅰ类抗原）在肺癌组织的表达可为肺癌的免疫治疗提供指导。恶性转化的肿瘤细胞可通过不同的机制使其表面的HLA—ABC的表达缺失或下降，从而逃避机体的免疫监视。针对不同的缺失类型，其免疫治疗方案不同。如TAP缺陷造成的HLA—ABC整个分子缺失，可选择性使用某些细胞因子；而HLA单倍型缺失，染色体异常，则用基因治疗。非小细胞肺癌HLA—ABC表达低下在大多数研究中得到证实，但多采用免疫组化方法进行检测，费时费力且检测结果不一，同时对HLA—ABC表达低下的临床意义也存在着争议。针对以上问题，本实验采用流式细胞术（FCM）检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织HLA—ABC的表达，评价其对肺癌免疫治疗方案选择的意义。     

转导B7-1基因消除IFN-γ对黑色素瘤转移潜力的增强作用

γ干扰素(IFN-γ)可通过增加MHCⅠ类分子或其它机制增强多种肿瘤的转移能力,而将T细胞共刺激分子B7基因导入肿瘤细胞能增强机体免疫系统对肿瘤的攻击。本文以Lipofectamine转染法将小鼠B7-1(mB7-1)基因导入B16黑色素瘤低转移株,导入空载体(只含neo基因)的B16细胞作对照。亲本B16细胞和基因转导细胞(B16-B7-1和B16-neo)经100U/ml IFN-γ预处理36小时后进行实验性肺转移试验,同时流式细胞分析细胞表面MHCⅠ类和Ⅱ类分子的表达。结果发现,IFN-γ预处理明显增强B16和B16-neo细胞的肺转移能力,而经IFN-γ预处理的B16-B7-1细胞转移能力并不增强,其实验性肺转移结节数与未经处理的对照组无差别。流式细胞分析显示IFN-γ预处理使B16、B16-neo和B16-B7-1三种细胞的MHCⅠ类(H-2K~b和H-2D~b)分子均明显增高,但IFN-γ增加B16-B7-1细胞MHCⅡ类分子I-A~b表达程度显著高于其它两种细胞。结果表明,转导B7-1基因可降低IFN-γ诱导的B16细胞转移能力,MHCⅡ类分子表达增高可能在其中起一定作用。     

灭活肠球菌抗结肠肿瘤免疫效应

 【摘要】　目的　研究灭活状态的肠球菌作用于结肠癌细胞HT-29后，HT-29表面HLA-Ⅰ类分子及协同刺激分子CD80和CD86的表达。方法　应用流式细胞检测技术分析了结肠癌细胞表面HLA-Ⅰ分子和协同刺激分子B7-1（CD80）、B7-2（CD86）分子表达的变化。结果　热灭活状态的肠球菌能够明显地提高结肠癌细胞表面HLA-Ⅰ类分子和共刺激分子CD80和CD86的表达，结肠癌细胞的存活率均＞90 ％。结论　灭活的肠球菌具有潜在的抗肿瘤效应。     

K-ras点突变与非小细胞肺癌经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调相关性的研究

目的:探讨癌基因K-ras点突变与非小细胞肺癌(NSCLC)原发灶及淋巴结癌转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的关系.方法:应用流式细胞术检测65例NSCLC原发灶及31例淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达;应用PCR-RFLP技术检测K-ras基因第12位密码子点突变(正常肺组织及淋巴结组织作对照);根据不同的变量类型及目的,采用t检验、Spearman相关分析和x2检验等进行统计分析.结果:淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达率为(15.35±6.24)％,明显低于NSCLC原发灶的(39.68±12.46)％,t=2.06,P=0.034;且与NSCLC原发灶经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调明显呈正相关,rs=0.487,P=0.008.经典HLA-Ⅰ类抗原表达阳性的NSCLC原发灶中未检测到K-ras基因突变,经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达者的K-ras基因突变率为54.5％(6/11),低表达者的K-ras基因突变率为20.0％(9/45),差异有统计学意义,x2 =5.38,P=0.042.结论:经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调是NSCLC淋巴结转移的机制之一,癌基因K-ras突变与NSCLC原发灶及淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原低表达有关.     

γ—干扰素在乳癌细胞短期培养中对DF_3、ICMA—Ⅰ及Ⅱ类MHC的上调作用

人类干扰素（IFNS）在激发免疫应答链反应中起着重要作用。现已证明在干扰素的家族中，γ干扰素对瘤细胞抗原的表达有直接作用，同时对免疫效应分子群也有间接作用。在体外短期培养的人类原发性及转移性乳癌细胞系中加入重组的人类γ干扰素（IFN－γ）能显著增加与之相关的DF3（一种见于乳腺上皮鳞癌中的高分子糖蛋白）抗原、细胞内粘质分子I（ICA—I）及Ⅱ类组织相容性复合体（MHC一Ⅱ）的表达。原发性乳癌细胞培养系中基本上都有HLA－I类抗原的高度表达，转移性乳癌细胞培养系中DF3、MHC－I抗原也有高度的表达．转移性乳癌细胞…