转录因子AP-2及其在肿瘤中作用机制

AP-2作为一个核转录因子家族,常以二聚体方式与特异的DNA序列结合,从而调节基因表达参与生长发育、细胞凋亡等重要生物学功能.病理状态下,AP-2能通过对细胞增殖和分化、细胞周期调控、细胞凋亡等各方面作用参与肿瘤的发生和发展.近年来,也有众多研究者寄希望以AP-2为靶点为临床治疗肿瘤提供新的思路.     

转录因子 AP-2在泌尿生殖系统肿瘤中的研究进展

转录因子激活蛋白-2（AP-2）在肿瘤细胞的增殖、分化、癌变及化疗耐药方面扮演着重要角色。AP-2在不同泌尿生殖系统肿瘤组织中分别呈现出抑癌或促癌的双向调控效应。研究 AP-2在泌尿生殖系统肿瘤中的作用及作用机制可为相关肿瘤的诊治提供新的思路和方向。     

AP-2α基因转染对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响

目的 探讨AP-2α基因对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响.方法 构建PODNA3.1(+)-AP-2α真核表达载体,利用脂质体介导pcDNA3.1(+)-AP-2α和pcDNA3.1(+)转染5W480细胞,并以正常SW480细胞作为空白对照;采用RT-PCR与Western blotting分别检测转染48 h后各组细胞中AP-2αmRNA与蛋白的表达情况;采用平板克隆、软琼脂克隆形成试验以及Transweil侵袭试验,分别检测各组细胞体外增生及侵袭能力.结果 SW480细胞内源性AP-2α蛋白表达缺失;转染AP-2α基因后,在SW480细胞中可检测到高水平的AP-2αmRNA及蛋白,细胞克隆形成率降低(P<0.05),软琼脂克隆体积小且数量少,细胞侵袭能力下降(P<0.05).结论 转染AP-2α基因可以抑制人类结肠癌SW480细胞的体外恶性增生以及侵袭能力.     

乳腺癌中转录因子AP-2 的表达及其与c-erbB-2 表达的相关性

 目的 探讨转录因子AP02在乳腺癌中表达及其与c-erbB-2表达的相关性。方法 应用免疫组织化学染色技术（SP法）检测128例乳腺癌组织中AP02和c-erbB-2的表达。结果 c-erbB-2和AP02在128例浸润性导管癌中过表达率分别为30．46％（39／128）和34．38％（44／128）。对照组乳腺增生病与乳腺癌组织中AP02的过表达率有显著差异（X^2=6．91，P〈0．01）。乳腺癌中AP_2的过表达与患者年龄（χ²=2．3，P〉0．05）、肿块大小（χ²=2．58，P〉0．05）及淋巴结转移（χ²=0．32，P〉0．05）无关，而与肿瘤组织学分级有关。在组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级肿瘤组织中AP-2（χ²=7．46，P〈0．05）的过表达均有显著差异，且随着组织学分级的增高，AP-2的过表达率也相应增加。128例乳腺癌中c-erbB-2和AP-2的过表达具有相关性（r=0．87，P〈0．01），且呈正相关关系（0〈r〈1）。结论 AP-2在乳腺癌组织中存在过表达，与c-erbB-2一样可作为判断预后或选择化疗用药的指标。     

大肠癌中转录因子Sp1与AP-2α的表达及其相关性

 目的　探讨转录因子特化蛋白1（Sp1）与转录因子激活蛋白-2α（AP-2α）在大肠癌发生、发展过程中的表达情况及其表达的相关性。方法　采用实时荧光定量PCR的方法分析60例大肠癌组织及癌旁正常组织中Sp1 mRNA及AP-2α mRNA表达差异,分析其与患者临床资料、病理参数之间的关系,探讨60例大肠癌组织中Sp1 mRNA与AP-2α mRNA表达的相关性。结果　大肠癌组织、癌旁正常组织Sp1 mRNA相对表达值（RQ）分别为13.621±2.433,6.464±1.757;AP-2α mRNA RQ值分别为3.264±0.877,17.484±3.608;大肠癌组织中Sp1 mRNA的表达显著高于癌旁正常组织,AP-2α mRNA含量显著低于正常组织,差异均具有统计学意义（P＜0.01）;大肠癌组织Sp1 mRNA和AP-2α mRNA表达率分别在患者不同性别、年龄≥或＜60岁、不同肿瘤部位各自差异均无统计学意义（P＞0.05）;在大肠癌的不同组织学分级及Duke分期中,Sp1呈现出过表达状态,则AP-2α呈现出表达降低或缺失状态;60例大肠癌组织中Sp1与AP-2α的表达具有相关性（r＝-0.849,P＜0.001）,且呈负相关关系（-1＜r＜0）。结论　转录因子Sp1在大肠癌组织中表达上调,而AP-2α则呈现低表达或缺失状态,Sp1与AP-2α的表达呈现一定的负相关关系,提示Sp1与AP-2α可能为肿瘤的诊断和治疗提供新的依据。     

AP-2α对大肠癌SW620细胞增生的影响及其作用机制

目的研究转录因子激活蛋白-2d（AP-2α）对大肠癌细胞株SW620增生能力的影响及可能的作用机制。方法构建pcDNA3．1（＋）-AP-2α重组质粒,采用脂质体介导质粒转染人SW620细胞,利用MTT法检测其对SW620细胞增生能力的影响;荧光定量PCR方法和Western印迹法检测转染前后各组细胞中雌激素受体-β（ER-β）表达水平的变化。结果转染AP-2α后SW620细胞内AP-2α mRNA含量及蛋白表达水平显著升高。MTT结果提示,转染AP-2α基因后SW620细胞增生速度受到抑制。转染AP-2α基因后ER-β mRNA和蛋白表达增加,且在转染48h增加最为明显,ER—β mRNA和蛋白质分别增加了94．47％和54．67％,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AP-2α可抑制SW620细胞的增生,其抑制机制很可能与增强ER-β的表达有关。     

转染AP-2α基因对结肠癌SW620细胞增殖及凋亡的影响(英文)

Objective:We investigated the effects of exogenous AP-2α gene on SW620 cell cycle, apoptosis and proliferation. Methods:The Plasmid pcDNA3.1(+)-AP-2α was transfected into colorectal carcinoma SW620 cells line by liposome mediation for transient expression. After AP-2α transfected SW620 cells, the exogenous AP-2α mRNA and protein express were determined by the method of Real-time PCR and Western blot. In order to elucidate the effect of expression of exogenous AP-2α gene on the colorectal cancer cell SW620, ...     

microRNA143表达对结肠癌组织中细胞增殖的影响及其作用机制

目的 探讨microRNA143(miR-143)表达对结肠肿瘤组织中细胞增殖和K-ras基因表达的影响.方法 采用Northern blot方法检测21例结肠癌组织和癌旁组织中miR-143的表达;构建miR-143的表达载体,将其转入人结肠癌细胞系SW480,用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)方法检测miR-143转染对细胞增殖的影响;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测K-rasmRNA和蛋白的表达变化.结果 在21例结肠癌组织标本中,有17例(81.0%)癌组织的miR-143表达水平低于癌旁组织.基因转染的SW480细胞中,miR-143表达水平显著升高,细胞增殖被抑制,K-ras蛋白的表达水平下降约40.3%,而K-ras mRNA水平未受影响.结论 miR-143在结肠癌组织中的表达明显低于癌旁组织,转染细胞中高表达的miR-143能够抑制细胞增殖,下调K-ras蛋白的表达.     

激活转录因子2及其在肿瘤中的研究进展

激活转录因子2(ATF2)主要通过介导细胞感受外界刺激而调节转录.多项研究显示ATF2参与恶性肿瘤的发生及肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡、侵袭及转移等过程的调节.ATF2的激活可促进肿瘤细胞生长,但也有部分报道显示ATF2的激活可抑制肿瘤细胞生长.进一步揭示ATF2在各种肿瘤形成过程中的作用机制,可为肿瘤的病因学研究和治疗学探索提供新的思路.     

RNAi干扰AP-2α对人乳腺癌细胞HER2表达及细胞增殖的影响

目的探讨RNAi干扰转录因子AP-2α对乳腺癌细胞MDA-MB-453中HER2表达及细胞增殖的影响。方法通过siRNA抑制MDA-MB-453细胞中AP-2α的表达,采用半定量RT-PCR和Western blot法,检测其对HER2表达的影响,采用MTT法测定细胞增殖情况。结果siRNA抑制AP-2α表达后,HER2 mRNA及其蛋白水平显著下降,RNAi干扰组与对照组比较MDA-MB-453细胞生长明显受抑制（P〈0.01）。结论AP-2αsiRNA可以下调乳腺癌细胞MDA-MB-453中HER2 mRNA及其蛋白的表达水平,抑制MDA-MB-453细胞的生长,提示AP-2α基因在乳腺癌细胞的发生、发展中具有重要作用,AP-2α可能是HER2过量表达乳腺癌的治疗靶点。     

抑制PDK对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响及其机制的探讨

目的:探讨抑制丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)对结肠癌细胞增殖和化疗敏感性的影响及可能机制.方法:应用MTT法观察PDK抑制剂(DCA)对人结肠癌细胞化疗增敏效应;应用Hoechst33258染色通过激光共聚焦显微镜观察DCA诱导的LoVo细胞凋亡;用流式细胞术观察DCA诱导的细胞凋亡、线粒体膜电位和Ca2+通道开放的情况.结果:抑制PDK(DCA)能明显影响结肠癌细胞增殖,其中90 mmol/L DCA刺激SW620、LoVo、HT29、LS174T和293T细胞48 h后,活性细胞率分别为(23.90±2.79)%、(5.90±1. 31)%、(32.82±4.50)%、(29.72±3.03)%和(84.86±0.50)%.与小剂量DCA(2.5和5 mmol/L)联合作用LoVo细胞48 h,低剂量5-FU(5 mmol/L)的活性细胞率由(66.03±3.95)%分别降至(50.78±2.05)%和(39.8±2.86)%;而低剂量奥沙利铂(0.5 mmol/L)的活性细胞率由(71.18±0.62)%,分别降至(58.24±3.27)%和(53.17±2.65)%.30 mmol/L DCA作用4种结肠癌细胞48 h后,LS174T、SW620、HT29、LoVo和293T凋亡的发生率分别为(22.27±1.75)%、(14.42±2.36)%、(25.55±0.78)%、(13.20±1. 58)%和(10.73±1.49)%.30 mmol/L DCA作用LoVo细胞48 h后,线粒体膜电位值由4.04±1.47下降为2.09±0.86;胞内Ca2+浓度下降了83.6%.结论:抑制PDK能抑制结肠癌细胞增殖活性,增加化疗敏感性.该作用可能是通过线粒体功能异常引起结肠癌细胞凋亡.     

一类新的AP-2α转录共激活物Ku 70蛋白的鉴定

 目的 鉴定新的AP-2α转录共激活物,为乳腺癌的防治寻找新的靶点。 方法 以AP 2α为诱饵采用酵母双杂交技术寻找新的AP-2α结合蛋白,免疫共沉淀证实AP-2α与其结合蛋白的相互作用,免疫荧光技术检测AP-2α与其结合蛋白的亚细胞共定位。荧光素酶报导基因检测AP-2α结合蛋白对AP-2α转录活性的影响。 结果 酵母双杂交技术鉴定出Ku 70蛋白为新的AP-2α结合蛋白。免疫共沉淀证实了AP-2α和Ku 70蛋白在细胞内的相互作用。亚细胞共定位研究显示AP-2α和Ku 70蛋白都定位于细胞核内。在功能上发现Ku70可以增强AP-2α的转录活性。 结论 本研究首次揭示Ku70可以结合AP-2α并促进其转录活性,证明Ku70是一类新的AP-2α的转录共激活物,提示Ku70有望成为治疗AP-2α高表达乳腺癌的新靶点。     

乳腺癌细胞AP-2α表达上调机制

目的探讨乳腺癌中转录因子2α（AP-2α）蛋白高表达的机制。方法采用Western blot、Southern blot、liT—PCR方法,从蛋白水平、基因水平、mRNA水平等方面系统研究乳腺癌细胞中AP-2α的高表达。结果HER-2癌基因高表达的转移性乳腺癌细胞系MDA—MB-453和SK—BR-3中AP-2α蛋白水平高,但未检测到AP-2α基因扩增,AP-2αmR—NA水平也没有显著上调。结论翻译后修饰水平的异常可能导致在转移性乳腺癌细胞系MDA-MB-453和SK-BR-3中AP-2α蛋白水平高,AP-2α可能作为转录因子促进HER-2癌基因在这些细胞中的高表达而致癌。     

抗上皮细胞生长抑制因子细胞抑制作用机制

抗上皮细胞生长抑制因子(APF)是近年来新发现的能在多方面影响膀胱癌肿瘤细胞生长及增殖的因子,APF抑制肝素合成的上皮生长因子和激活蛋白-1(AP-1),影响多种细胞内因子,是研究膀胱癌预防和治疗的新方向.     

抑制上游转录因子2的表达对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨上游转录因子2（USF2）对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法 使用Lipofectamine?3000转染试剂将USF2 siRNA转染至BGC-823细胞（siRNA-USF2组）中,同时设空白对照组和阴性对照组（siRNA-NC组）。实时荧光定量PCR法检测转染后的BGC-823细胞中USF2mRNA的表达。Western blot实验检测转染后BGC-823细胞中USF2蛋白的表达。CCK-8和平板克隆实验检测每组BGC-823细胞的增殖能力和克隆形成能力。流式细胞术检测各组胃癌细胞的凋亡情况。Western blot实验检测各组BGC-823细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（PCNA）及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平。结果 与空白对照组和siRNA-NC组相比,siRNA-USF2组细胞USF2 mRNA和蛋白表达显著降低（均P<0.05）。转染后72 h,siRNA-USF2组的吸光度值低于空白对照组（P<0.05）。与空白对照组和siRNA-NC组比较,siRNA-USF2组BGC-823细胞中的克隆数明显较少（P<0.05）。空白对照组、siRNA-NC组和siRNA-USF2组胃癌BGC-823细胞的凋亡率差异具有统计学意义（P<0.05）。与空白对照组和siRNA-NC组比较,siRNA-USF2组BGC-823细胞中PCNA和Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加（P<0.05）。结论 抑制USF2表达能够抑制人胃癌细胞的增殖,诱导其凋亡。USF2抑制剂可能在胃癌治疗中具有重要价值。     

RNA干扰ART1表达对小鼠结肠癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的:通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰精氨酸特异性腺苷二磷酸核糖基化转移酶1(arginine-specific adenosinediphosphate-ribosyltransferase 1,ART1)基因的表达,研究沉默ART1基因对小鼠结肠癌CT26细胞增殖的影响及可能的机制。方法:细胞免疫荧光法检测ART1水平,以证实CT26细胞中有ART1的表达。用ART1-shRNA和阴性对照shRNA(negative control-shRNA,NC-shRNA)慢病毒感染CT26细胞后,分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中ART1mRNA和ART1、RhoA、c-myc及c-fos蛋白的表达;CCK-8(cell countingkit-8)法分析各组细胞增殖情况。结果:CT26细胞中有ART1的表达。ART1-shRNA和NC-shRNA慢病毒成功感染细胞,获得稳定低表达ART1基因的CT26细胞株。与感染NC-shRNA慢病毒和未感染的CT26细胞相比,感染ART1-shRNA慢病毒的CT26细胞中ART1mRNA表达水平及ART1、RhoA、c-myc和c-fos的蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),而细胞增殖抑制率明显升高(P<0.01)。结论:干扰ART1表达可抑制CT26细胞增殖,提示ART1在肿瘤生长、增殖过程中发挥重要作用,其机制可能与ART1基因沉默后RhoA及其下游因子c-myc和c-fos的表达被抑制有关。     

氯喹联合拓扑替康对结肠癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨靶向溶酶体药物氯喹(chloroquine,CQ)联合拓扑替康(topotecan,TPT)对结肠癌细胞的增殖抑制作用及其可能的机制.方法:应用MTT法检测TPT对结肠癌SW480、SW620、Colo205和LoVo细胞的抑制率,以及CQ和TPT联合应用对LoVo细胞的增殖抑制作用.CQ或TPT作用于LoVo细胞后,免疫印迹法检测自噬标志蛋白LC3、P62及自噬相关蛋白Beclin1的表达;共聚焦显微镜下观察细胞质内YFP-LC3的点状聚集;采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默Beclin1基因表达后,应用TPT作用LoVo细胞,锥虫蓝染色法计数细胞死亡率.结果:低浓度的CQ能够增强TPT对LoVo细胞的增殖抑制作用;CQ通过干扰自噬溶酶体功能阻断TPT诱导的自噬;通过siRNA沉默自噬相关基因Beclin1,也可增强TPT对LoVo细胞的杀伤作用.结论:CQ能够增强TPT对结肠癌细胞的增殖抑制作用,其机制可能与其阻断自噬有关.预测CQ在结肠癌治疗方面有望成为一种新型的化疗药物增敏剂.     

转录因子Yin-Yang1与肿瘤

Yin-Yang1( YY1)是一种具有双重转录活性的核转录因子,广泛分布于真核细胞中,调节多种基因的转录活性,在细胞生物学进程中发挥重要作用.近年来研究发现,YY1在多种肿瘤组织中有高表达,可能通过调控癌基因、抑癌基因、血管生成相关因子和抑制肿瘤细胞凋亡等途径促进肿瘤发生发展.提示YY1可能成为一种新的肿瘤标志物,将有助于判断肿瘤患者的预后及在肿瘤靶向治疗中取得新的突破.