皮肤瘢痕癌中Bcl-2蛋白的表达与癌细胞凋亡相关性的探讨

目的探讨瘢痕癌Bcl-2蛋白的表达与癌细胞凋亡相关性。方法以15例病理性瘢痕、20例皮肤瘢痕癌为研究对象,以10例正常皮肤组织为对照。免疫组织化学(SP法)技术检测Bcl-2蛋白的表达;以原位末端标记测定法(Tunel法)检测上述三种组织中的细胞凋亡情况。免疫组化结果应用图像分析软件计算阳性面积和平均光密度,Tunel结果计算凋亡指数。结果 (1)Bcl-2蛋白在正常皮肤表皮和病理性瘢痕上皮中分别仅见于基底细胞层少量表达、基底细胞层和极少量棘细胞层表达,均为阴性,在瘢痕癌组织中未见表达,为阴性,且其表达强度和表达水平在三组之间比较差异均无统计学意义(P0.05);(2)Tunel结果示凋亡指数在三组间有差异,瘢痕癌组低于余两组,且与余两组间比较差异有统计学意义(P0.05),但余两组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论在瘢痕癌组织中Bcl-2蛋白呈阴性表达,其凋亡抑制作用有待进一步探讨。     

瘢痕疙瘩组织中胰岛素样生长因子结合蛋白3的表达

目的:胰岛素样生长因子-1瘢痕疙瘩的病理过程密切相关,胰岛素样生长因子结合蛋白3是与胰岛素样生长因子-1结合的调节蛋白,探讨胰岛素样生长因子结合蛋白3在瘢痕疙瘩形成中的作用。方法:实验于2004-04/07在长海医院中心实验室完成。18份被检测标本中包括瘢痕疙瘩6份,肥厚性瘢痕6份,成人正常皮肤组织6份。用免疫组织化学的方法和半定量反转录-聚合酶链反应的方法从蛋白和核酸两个水平检测胰岛素样生长因子结合蛋白3在不同的组织内的表达情况。结果:免疫组化结果显示,瘢痕疙瘩组胰岛素样生长因子结合蛋白3染色阳性面积明显大于正常皮肤组,差异有显著性意义(t=39.52,P<0.01)。反转录-聚合酶链反应结果显示胰岛素样生长因子结合蛋白3mRNA在瘢痕疙瘩中的表达明显高于正常皮肤标本,差异有显著性意义(t=18.19,P<0.01)。结论:胰岛素样生长因子结合蛋白3在瘢痕疙瘩组织中的表达明显增加,提示其参与了瘢痕疙瘩的形成过程。     

单核细胞趋化蛋白1和骨形成蛋白7在病理性瘢痕中的表达

背景:单核细胞趋化蛋白1是新近明确的对单核/巨噬细胞有趋化和激活双重作用的趋化因子,骨形成蛋白7作为一种新发现的纤维化负性调节因子逐渐成为抗组织纤维化治疗的研究热点,但两者对病理性瘢痕形成中组织纤维化作用的研究至今鲜有报道。目的:研究单核细胞趋化蛋白1,骨形成蛋白7在病理性瘢痕中的表达水平。方法:采用免疫组织化学方法检测单核细胞趋化蛋白1、骨形成蛋白7在25例瘢痕疙瘩、30例增生性瘢痕、24例非病理瘢痕和20例正常皮肤组织中的表达水平。所有标本均来自2008-07/2010-01郑州大学第一附属医院整形外科住院患者,且均无皮肤疾病、结缔组织病、传染病、恶性肿瘤和其他重要脏器疾病,术前无射线治疗、激光治疗及免疫治疗史,其中所取瘢痕组织来自于临床诊断明确的瘢痕患者。结果与结论:单核细胞趋化蛋白1在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕中的阳性表达率均高于非病理性瘢痕与正常皮肤组织(P<0.05),骨形成蛋白7阳性表达率均降低(P<0.05),两者阳性表达率在病理性瘢痕(瘢痕疙瘩和增生性瘢痕)中呈明显负相关(r=-0.639,P<0.01)。结果显示,在病理性瘢痕的形成过程中单核细胞趋化蛋白1表达上调,而骨形成蛋白7表达下调。     

病理性瘢痕成纤维细胞E2F1 mRNA的表达及其在瘢痕形成中的生物学作用

目的:检测E2F1基因在病理性瘢痕成纤维细胞中的表达,以正常皮肤和正常瘢痕组织作对照,初步探讨E2F1在病理性瘢痕形成中的生物学作用。方法:应用RT-PCR方法检测正常皮肤,正常瘢痕,增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞E2F1mRNA的水平。结果:增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞中E2F1mRNA水平显著高于正常皮肤、正常瘢痕组织,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:E2F1基因在病理性瘢痕成纤维细胞中增高,促进瘢痕组织中修复效应细胞的增生,对病理性瘢痕的形成可能起着重要作用。     

瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中胸腺素β4基因表达变化及其意义

目的观察病理性瘢痕中胸腺素β4(TMSB4)mRNA的表达水平,探讨其表达水平与病理性瘢痕形成的关系.方法以组织块培养法于体外培养原代成纤维细胞.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,比较瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤组织及其培养的3组成纤维细胞中TMSB4 mRNA表达水平的变化.结果在上述3种组织中,TMSB4 mRNA在瘢痕疙瘩中的表达量显著少于在增生性瘢痕和正常皮肤中的表达(P均<0.01),瘢痕疙瘩TMSB4 mRNA表达的平均值比增生性瘢痕减少66.98%,比正常皮肤减少62.48%.在上述3种组织培养的成纤维细胞中,TMSB4 mRNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达量显著少于增生性瘢痕,平均减少27.13%(P<0.01);比在正常皮肤成纤维细胞中的表达平均减少16.07%,但差异无显著性.结论 TMSB4 mRNA在瘢痕疙瘩组织及其培养的成纤维细胞中的表达说明其与瘢痕疙瘩形成密切相关;TMSB4 mRNA在瘢痕疙瘩中表达减少可能是瘢痕疙瘩发病的重要致病因素之一.     

转化生长因子β1对病理性瘢痕中成纤维细胞增殖及凋亡水平的影响

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在病理性瘢痕形成过程中的作用及其对病理性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法:收集病理性瘢痕标本58例、正常瘢痕标本42例和正常皮肤标本30例。采用免疫组织化学方法检测成纤维细胞TGF-β1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,以及TUNEL法检测成纤维细胞的凋亡水平。结果:病理性瘢痕组织中TGF-β1表达水平高于正常瘢痕组织(P<0.05),正常皮肤组织中TGF-β1表达水平明显低于病理性瘢痕及正常瘢痕组织(P<0.05)。而PCNA在病理性瘢痕成纤维细胞中表达水平与正常瘢痕及正常皮肤相比明显增高(P<0.05),正常瘢痕中成纤维细胞PCNA的表达亦高于正常皮肤(P<0.05)。另一方面,病理性瘢痕中成纤维细胞凋亡水平较正常瘢痕降低(P<0.05),而正常皮肤与正常瘢痕间差异无显著性(P>0.05)。比较病理性瘢痕组织中成纤维细胞增殖指数、凋亡指数与TGF-β1间的关系发现,细胞增殖指数与TGF-β1表达水平呈正相关关系(P<0.05),凋亡指数则与TGF-β1呈负相关关系(P<0.05)。结论:TGF-β1可能是通过调节瘢痕组织中成纤维细胞的增殖和(或)凋亡水平,来实现对瘢痕形成的调节。TGF-β1表达水平的失控可能是病理性瘢痕形成的重要诱因之一。     

端粒酶催化亚单位在病理性瘢痕组织中的表达及意义

目的:观察反映端粒酶的活性的端粒酶催化亚单位在病理性瘢痕组织中的表达情况。方法:实验于2005-05/07在长海医院中心实验室进行。取增生性瘢痕标本和瘢痕疙瘩标本各18例,来源于2004-06/2005-05解放军第二军医大学长海医院整形外科手术患者;正常皮肤标本18例,取自瘢痕邻近的正常皮肤。采用SP免疫组化法,对3组皮肤标本中成纤维细胞端粒酶催化亚单位蛋白表达进行检测,观察其阳性颗粒的平均吸光度A值和阳性面积率。结果:①端粒酶催化亚单位阳性颗粒的平均吸光度:瘢痕疙瘩组高于正常皮肤和增生性瘢痕组(5.940±0.675,0.456±0.078,1.352±0.193,P<0.01),增生性瘢痕组高于正常皮肤(P<0.05)。②端粒酶催化亚单位的阳性面积率:瘢痕疙瘩组高于正常皮肤和增生性瘢痕组眼(0.203±0.025)%,(0.038±0.010)%,(0.067±0.011)%,P<0.01演,增生性瘢痕组高于正常皮肤(P<0.05)。结论:端粒酶在病理性瘢痕中表达增高,与病理性瘢痕发生、发展及其演变过程密切相关。设想减少端粒酶催化亚单位在病理性瘢痕成纤维细胞的过度表达从而抑制端粒酶活性或许是抑制瘢痕增生的新途径。     

病理性瘢痕中S100蛋白基因的差异表达

目的:探讨S100蛋白基因的表达情况与病理性瘢痕形成的相关性。方法:实验于2003-05/2005-01在南方医科大学分子生物学研究所完成。病理性瘢痕标本来源于南方医院整形外科手术患者,正常皮肤组织来源于无瘢痕体质趋势及无免疫性疾病的包皮手术标本,患者均知情同意。增生性瘢痕组3例,瘢痕疙瘩组3例,正常皮肤组10例。抽提增生性瘢痕和瘢痕疙瘩与正常皮肤组织的总RNA,反转录并双色荧光标记,与含11个S100蛋白基因的人类基因表达谱芯片杂交,经荧光扫描和数据处理,进一步进行统计学分析,检测S100蛋白基因在3组组织中的表达变化。结果:与正常皮肤组织相比,11个S100蛋白基因在增生性瘢痕组织中差异表达具有显著性意义的基因有3个,S100A7,S100A8和S100A9均为上调表达;而瘢痕疙瘩组织中仅有S100A2基因的下调表达具有显著性意义。结论:①S100蛋白基因的差异表达与病理性瘢痕的形成密切相关。②S100蛋白基因成员在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中的差异表达有助于两者的鉴别诊断。③S100A2在瘢痕疙瘩中低表达而在增生性瘢痕中正常表达,可能与瘢痕疙瘩的恶性度高于增生性瘢痕,且能向周边正常组织浸润有关。     

热休克蛋白90和凋亡抑制蛋白Livin在病理性瘢痕中的表达

背景:近年来研究表明热休克蛋白90和凋亡抑制蛋白Livin在细胞的凋亡过程中扮演着非常重要的角色,而两者在病理性瘢痕形成过程中的作用研究至今鲜有报道。目的:从基因和蛋白水平分别检测热休克蛋白90和凋亡抑制蛋白Livin在病理性瘢痕中的表达情况及两者之间的关系。方法:分别采用RT-PCR方法和免疫组织化学方法检测热休克蛋白90和Livin在24例瘢痕疙瘩、26例增生性瘢痕、22例非病理性瘢痕和20例正常皮肤组织中的表达水平。结果与结论:瘢痕疙瘩,增生性瘢痕中热休克蛋白90和Livin的阳性表达水平高于非病理性瘢痕及正常皮肤组织(P<0.05)。病理性瘢痕中热休克蛋白90和Livin表达呈正相关(rs=0.436,P<0.05)。RT-PCR检测结果与免疫组织化学结果基本一致。结果提示热休克蛋白90和Livin在病理性瘢痕的形成过程中可能起着重要作用,且二者之间可能具有协同作用。     

拓扑异构酶Ⅰ在病理性瘢痕组织中的表达

目的探讨拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)在病理性瘢痕组织中的表达。方法用SP免疫组织化学染色法检测病理性瘢痕组织和正常皮肤组织标本各21例,了解TopoⅠ的表达情况。结果正常皮肤组角质形成细胞及成纤维细胞TopoⅠ阳性表达率均为14.3%。病理性瘢痕组角质形成细胞TopoⅠ阳性表达率为33.3%,与正常皮肤组比较差异无统计学意义(P>0.05);成纤维细胞TopoⅠ阳性总表达率为57.1%,与正常皮肤组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在病理性瘢痕中,成纤维细胞的TopoⅠ表达明显高于正常皮肤,这为TopoⅠ抑制剂应用于瘢痕防治提供了理论依据。     

皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族12/13位密码子突变的检测

目的:探讨皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族(H-ras/N-ras/K-ras)12/13位密码子的突变情况。方法:从14例皮肤病理性瘢痕,14例瘢痕癌石蜡包埋组织中提取DNA,进行PCR扩增及测序,分析H-ras、N-ras、K-ras基因第12、13位密码子突变情况。结果:28个样本均成功提取DNA,扩增出基因片段,经测序均未发现H-ras、N-ras、K-ras基因第12、13位密码子的点突变。结论:皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族的突变位点有待进一步探讨。     

病理性瘢痕组织中E2F1基因的表达及其意义

目的：检测E2F1基因在病理性瘢痕组织中的表达，以正常皮肤和正常瘢痕组织作对照，初步探讨E2F1在病理性瘢痕形成中的生物学作用。方法：应用RT—PCR方法检测正常皮肤，正常瘢痕，增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中E2F1mRNA的水平。结果：增生性瘢痕、瘢痕疙瘩组织中E2F1mRNA水平显著高于正常皮肤、正常瘢痕组织，有统计学意义（P〈0．01）。结论：E2F1基因在病理性瘢痕组织中增高，促进瘢痕组织中修复效应细胞的增生，对病理性瘢痕的形成可能起着重要作用。     

细胞周期蛋白在食管癌中的表达及意义

目的探讨食管癌组织中细胞周期蛋白(CyclinD1、CyclinA、CyclinB1、CyclinE)的表达规律,其与食管癌临床病理参数的关系。方法采用免疫组化技术检测CyclinD1、CyclinA、CyclinB1、CyclinE在58例食管癌组织和45例正常食管黏膜组织中的表达情况。结果 CyclinD1、CyclinA、CyclinB1、CyclinE在正常食管黏膜组织中低表达。随着食管癌分化程度的降低,CyclinD1、CyclinA、CyclinB1、CyclinE表达的阳性率明显升高,高分化组、中分化组与低分化组间有显著差异(P<0.05)。结论可通过免疫组织化学法分析细胞周期的数据,这有利于肿瘤分级,并与预后相关。     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞胶原、纤维连接蛋白表达的影响

背景:碱性成纤维细胞生长因子能促进愈合伤口产生胶原蛋白、纤维连接蛋白和基质酶的基质成分.然而,细胞增殖、细胞外基质及新生血管的形成或伤口基质重塑过程失调,会导致瘢痕组织过度增殖.目的:观察碱性成纤维细胞生长因子在正常皮肤创面愈合和增生性瘢痕形成中的作用.方法:从5例进行瘢痕修复手术患者身上同时取正常皮肤和增生性瘢痕组织,分离培养正常人皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞.应用RT-PCR和酶联免疫吸附法检测两种成纤维细胞胶原、纤维连接蛋白基因表达和蛋白合成.采用JC-1染色和流式细胞术测定成纤维细胞线粒体膜电位改变,采用化学发光法检测细胞内ATP水平改变.观察碱性成纤维细胞生长因子对两种细胞的上述指标的影响.结果与结论:不同浓度碱性成纤维细胞生长因子可减慢增生性瘢痕成纤维细胞生长,抑制增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原表达和合成(P<0.05).碱性成纤维细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞Ⅲ型胶原表达和合成均无影响.然而可上调正常皮肤成纤维细胞表达纤维连接蛋白(P<0.05).此外,10,100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子处理后增生性瘢痕成纤维细胞线粒体膜电位呈去极化趋势,正常皮肤成纤维细胞中ATP水平显著增高(P<0.05).结果表明,碱性成纤维细胞生长因子在正常皮肤创面愈合和增生性瘢痕形成中可能有不同的作用和机制.     

增生性瘢痕成纤维细胞中CyclinD1,CDK2,CDK4作用及与细胞周期的相关性

背景:增生性瘢痕的发生和发展可能与细胞周期调节相关基因的异常表达有关。目的:检测增生性瘢痕不同阶段细胞CyclinD1、CDK2和CDK4 mRNA及蛋白的表达,以及同一标本增生性瘢痕成纤维细胞的细胞周期运行中3者之间的一致性。方法:采集32份增生性瘢痕标本,以增生性瘢痕形成时段分为3个月组、6个月组、1年组、2年组,各8份,并以8份正常真皮标本作为对照。利用实时荧光定量PCR法、Western blotting法检测标本中CyclinD1、CDK2、CDK4 mRNA及蛋白表达,流式细胞术检测成纤维细胞的细胞周期。结果与结论:增生性瘢痕标本发展过程中CyclinD1、CDK2、CDK4 mRNA及蛋白表达水平由强至弱变化。3,6个月增生性瘢痕中成纤维细胞主要分布在S、G2/M期;1,2年增生性瘢痕与对照组成纤维细胞多处于G0/G1期。表明增生性瘢痕不同时期CyclinD1、CDK2、CDK4各自的mRNA和蛋白表达趋势基本一致,同时增生性瘢痕中成纤维细胞的细胞周期分布与这3个蛋白所执行的功能情况相对应。     

Identification of viscoelastic parameters of skin with a scar in vivo, influence of soft tissue technique on changes of skin parameters

The goal of the experiment was to develop an identification method capable of objective detection of changes of viscoelastic properties of skin with a scar remaining after a modified radical mastectomy. We compared the intact skin and the skin with a scar, a scar before and after physiotherapy. We used two methods. The first one is based on measurements of the local dynamic deformation response of the skin and the second one is the matrix identification of static deformation that identifies properties of the whole tested region of the explored tissues. We identified the skin stretchability, shiftability against deeper layers and deeply analysed both the methods. In some patients, we found statistically proven difference. In all these cases the measurement methods have detected changes of the observed tissue condition. We found both methods to be potentially applicable after further improvements as a diagnostic tool, which can contribute to the improvement of postoperative care of patients.     

兔耳瘢痕成熟过程中血管内皮细胞生长因子与缺氧诱导因子1α的表达

背景：尽管近20年来在组织、细胞和分子各个水平上展开了瘢痕的研究,但瘢痕形成的完整机制尚未阐明,探索瘢痕的形成的分子机制,寻求理想的瘢痕防治方法是医学研究和实践中一项紧迫而艰巨的任务。目的：观察兔耳瘢痕从形成到消退成熟过程中血管内皮细胞生长因子与缺氧诱导因子1α变化,探讨瘢痕形成的分子机制。方法：制作兔耳瘢痕从形成到消退成熟的动物模型,收集兔耳术后14,30,60和90d瘢痕和正常皮肤,应用苏木精-伊红染色方法观察兔耳术后各时间点瘢痕的组织形态学变化,免疫组织化学法方法检测术后各时间点血管内皮细胞生长因子、缺氧诱导因子1α在瘢痕组织中的表达。结果与结论：术后14d瘢痕组织中血管内皮细胞生长因子和缺氧诱导因子1α表达较其他时间点和正常组织均升高,而随着时间的延长,瘢痕的萎缩成熟,两者的表达水平逐渐降低,并在术后90d达到正常组织表达水平。结果表明缺氧诱导因子1α与血管内皮细胞生长因子在瘢痕组织内氧分压的变化过程中起到一定的调节作用。     

兔耳瘢痕成熟过程中血管内皮细胞生长因子与缺氧诱导因子1α的表达

背景:尽管近20年来在组织、细胞和分子各个水平上展开了瘢痕的研究,但瘢痕形成的完整机制尚未阐明,探索瘢痕的形成的分子机制,寻求理想的瘢痕防治方法是医学研究和实践中一项紧迫而艰巨的任务。目的:观察兔耳瘢痕从形成到消退成熟过程中血管内皮细胞生长因子与缺氧诱导因子1α变化,探讨瘢痕形成的分子机制。方法:制作兔耳瘢痕从形成到消退成熟的动物模型,收集兔耳术后14,30,60和90d瘢痕和正常皮肤,应用苏木精-伊红染色方法观察兔耳术后各时间点瘢痕的组织形态学变化,免疫组织化学法方法检测术后各时间点血管内皮细胞生长因子、缺氧诱导因子1α在瘢痕组织中的表达。结果与结论:术后14d瘢痕组织中血管内皮细胞生长因子和缺氧诱导因子1α表达较其他时间点和正常组织均升高,而随着时间的延长,瘢痕的萎缩成熟,两者的表达水平逐渐降低,并在术后90d达到正常组织表达水平。结果表明缺氧诱导因子1α与血管内皮细胞生长因子在瘢痕组织内氧分压的变化过程中起到一定的调节作用。     

三七总甙对增生性瘢痕的作用

背景：增生性瘢痕的传统治疗手段如手术切除、类吲孵激素、抗代谢药、免疫抑制剂和放射疗法等,均易复发或有严重的不良作用而限制了其临床应用。近年来应用活血化瘀类中药提取成分治疗增生性瘢痕取得了较为理想的进展,而且不良反应小。目的：通过组织染色及相关基因检测的方法,观察三七总甙对兔耳增生性瘢痕的作用以及对转化生长因子β1mRNA表达的影响。方法：创建兔耳增生性瘢痕模型,约术后4周,按随机数字表法将24只大耳白兔分为3组,三七总甙组、曲安奈德组及空白对照组每组8只。以曲安奈德为阳性对照,分组分次瘢痕基底局部给药,用药5次后取瘢痕组织,以苦味酸酸性复红染色法、苏木精一伊红染色法对胶原纤维、成纤维细胞进行观察,应用反转录PCR方法检测细胞内转化生长因子β1基因的表达情况。结果与结论：苏木精-伊红染色结果示三七总甙组兔耳瘢痕中成纤维细胞数量低于空白对照组,与曲安奈德组无明显差异。苦味酸酸性复红染色结果示三七总甙组兔耳瘢痕中胶原纤维较空白对照组排列整齐,与曲安奈德组无明显差异。基因检测结果显示三七总甙组、曲安奈德组转化生长因子β1mRNA的表达显著低于空白对照组（P〈0．05）。提示三七总甙及曲安奈德均能通过抑制转化生长因子β1mRNA的表达,降低转化生长因子G1在瘢痕组织中的含量,从而抑制成纤维细胞的过度增殖及以胶原为主的细胞外基质过度沉积,进而降低胶原纤维合成,来达到有效抑制瘢痕组织过度增生的目的。     

脂肪干细胞源性外泌体对瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响

目的 观察脂肪干细胞源性外泌体（ADSC-Exos）对瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控作用。方法 将瘢痕成纤维细胞分为对照组、ADSC-Exos组。采用CCK-8法检测不同组别中瘢痕成纤维细胞的增殖情况;采用蛋白免疫印迹法检测纤维化指标的表达量;采用实时荧光定量-PCR检测纤维化相关基因mRNA的表达水平。结果 与对照组相比,在ADSC-Exos作用下,瘢痕成纤维细胞的增殖能力减弱,纤维化相关指标水平降低（P均<0.05）。瘢痕成纤维细胞在ADSC-Exos的作用下,Ⅰ、Ⅲ胶原及α-平滑肌肌动蛋白的mRNA表达下调（P均<0.05）。结论 ADSCExos能抑制瘢痕成纤维细胞的生物学活性。