p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控

目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580（p38蛋白激酶抑制剂）＋LPS组、PDTC（NF—κB抑制剂）＋LPS组和SB203580＋PDTC＋LPS组。分别采用免疫细胞化学（SP法）和Western blot检测NF—κB、p38蛋白激酶和NF—κB抑制蛋白（I-κB）的表达。结果与正常对照组相比，LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强，而I—κB的表达显著降低（均P〈0．01）。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB，p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比，并显著增强I—κB的表达（均P〈0．05）。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞，与LPS刺激组相比，p38蛋白激酶和NF—κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低（P〈0．05），I-κB的表达显著增强（P〈0．05），但分别与SB203580＋LPS和PDTC＋LPS组相比，差异均无显著性意义（均P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF—κB活化；p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF—κB的活化，NF—κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。     

脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶基因的表达

目的探讨脂多糖 (LPS)诱导的肺泡巨噬细胞 (AM) p3 8蛋白激酶mRNA及其蛋白质表达的变化。方法分离培养AM ,分别采用原位分子杂交和免疫细胞化学方法检测AM p3 8蛋白激酶mRNA及其蛋白质的表达。结果p3 8mRNA在正常对照组AM中有少量表达 ,LPS刺激后 p3 8mRNA表达显著增强 (P <0 .0 1 )。p3 8蛋白质在正常对照组AM中的表达呈弥散性分布 ,以胞浆为主 ,胞核较少 ;LPS刺激后 ,胞浆染色明显减弱 ,胞核染色明显增强 ,胞核染色阳性细胞的百分比由正常对照组的 6.1 2± 2 .0 5 %上升到 3 5 .2± 8.3 5 % ,为正常对照组的 5 .75倍 ,二者比较差异具有显著性 (P <0 .0 1 )。结论LPS刺激AM p3 8mRNA的表达增强 ,诱发 p3 8蛋白激酶由胞浆转位到胞核     

p38丝裂原活化蛋白激酶在溃疡性结肠炎中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在溃疡性结肠炎(UC)以及葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎中的作用。 方法 ①7只Balb/c小鼠随机分为3组:正常对照组、DSS结肠炎组、p38MAPK选择性抑制剂SB203580干预组。结肠炎组小鼠每日饮用5% DSS溶液,干预组小鼠则在饮用5% DSS溶液72 h后,加用SB203580[1 mg/(kg·d)]进行腹腔注射。观察并记录各组小鼠的疾病活动指数(DAI);7 d后处死小鼠,观察各组小鼠肠黏膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。②收集36例活动性UC患者的肠黏膜组织标本,并以18例结肠癌旁的正常组织标本作对照,通过体外组织培养,观察SB203580对UC患者肠黏膜活检组织中TNF-α和IL-1β表达的影响。 结果 ①DSS结肠炎小鼠的DAI评分、肠黏膜组织中TNF-α和IL-1β的水平明显升高(P均<0.01),经SB203580干预后,其DAI评分、TNF-α、IL-1β的水平均明显降低,但仍然高于正常对照组(P均<0.01)。②体外组织培养结果显示,与未用SB203580处理的UC组比较,SB203580处理后UC患者肠黏膜组织中TNF-α和IL-1β的水平明显降低(P<0.01)。 结论 SB203580能阻断p38MAPK信号转导通路,从而降低促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的释放。     

P38蛋白激酶对肺泡巨噬细胞环氧合酶-2mRNA表达的影响

目的　探讨 P3 8蛋白激酶对肺泡巨噬细胞环氧合酶 - 2 m RNA表达的影响。方法　采用蛋白质印迹、逆转录-聚合酶链反应 ( RT- PCR)和放射免疫分析法检测脂多糖 ( L PS)刺激的肺泡巨噬细胞 ( AM)核提取物 P3 8蛋白激酶、环氧合酶 - 2 ( COX- 2 ) m RNA及细胞培养上清血栓素 B2 ( TXB2 )和 6-酮 -前列腺素 F1α ( 6- Keto- PGF1α)含量的变化 ,并观察特异性 P3 8蛋白激酶抑制剂 SB2 0 3 5 80对 L PS作用的影响。结果　 L PS能显著刺激肺泡巨噬细胞 P3 8蛋白激酶活化 ,COX- 2 m RNA及细胞培养上清 TXB2 和 6- Keto- PGF1α含量随之增加 ( P<0 .0 1) ;SB2 0 3 5 80能显著抑制上述作用 ;P3 8蛋白激酶的活化与 COX- 2 m RNA及细胞培养上清 TXB2 和 6- Keto- PGF1α含量之间呈显著正相关 ( r=0 .862 ,0 .5 69,0 .715 ,均为 P<0 .0 1)。结论　 L PS刺激肺泡巨噬细胞 P3 8蛋白激酶活化可能参与了对 COX- 2 m RNA及其炎症介质的调控     

罗红霉素对LPS诱导的肺泡巨噬细胞NF-κB活化及对TNF-α,IL-10释放的影响

目的:探讨罗红霉素(RM)对内毒素(LPS)诱导下肺泡巨噬细胞(PAM)核因子-κB(NF-κB)活化及对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10表达的调节作用. 方法:收集大鼠支气管肺泡灌洗液中PAM进行培养,分为正常对照组、模型组和RM治疗组. 用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和放射免疫法分别测定各组核提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α,IL-10含量. 结果:模型组NF-κB活性明显高于正常对照组,用RM干预后NF-κB活性高于正常对照组(P<0.05),但比模型组低(P<0.05). LPS刺激1~4 h内TNF-α含量高于正常对照组;RM(20 mg/L) 能够抑制培养上清液中TNF-α的升高(P<0.05). NF-κB活性与TNF-α浓度有相关性(r=0.684,P<0.01). LPS刺激在观察早期IL-10高于正常对照组(P<0.05),使用RM干预后IL-10无明显变化(P>0.05). 正常对照组与治疗组TNF-α/IL-10比值在观察期间无明显上升和下降,模型组TNF-α/IL-10比值变化明显. 结论:RM可能通过PAM NF-κB活化的抑制,减少了TNF-α的释放,调节TNF-α/IL-10的比例,对LPS诱导的急性肺损伤模型有保护作用.     

人参皂甙对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子的作用及机制探讨

目的：研究人参皂甙Rg1和Rb1对脂多糖（LPS）诱导小鼠肺泡巨噬细胞（AM）过度分泌肿瘤坏死因子（TNF－α）的影响,并探讨人参皂甙的作用机制。方法;体外培养小鼠AM,分为对照组、LPS组、RG1 LPS组、Rg1组和Rb1 LPS组,Rb1组。分别收集培养细胞及上清液,测定上清TNF－α水平、上清LPS水平以及细胞中1－κB表达情况。结果：LPS可使AM分泌大量TNF－α（P＜0．01）,并使I－κB表达明显减少（P＜0．01）。Rg1 LPS组与LPS组相比,上清TNF－α水平显著下降（P＜0．01）,细胞内I－κB表达明显增加（P＜0．01）。Rgl LPS组上清游离LPS水平明显高于LPS组（P＜0．05）。Rb1的作用结果与Rg1相似。结论：人参皂甙Rg1和Rb1在体外能抑制AM过量分泌TNF－α,其可能作用机制为通过阻断LPS与AM膜的结合,抑制LPS诱导的细胞内I－κB的低表达,从而使TNF－α的分泌水平下降。     

健脾清化方对肾衰大鼠磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶介导的炎症因子的调控作用

目的：研究中药复方健脾清化方对慢性肾衰肾纤维化大鼠磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）介导的炎症因子的调控作用,探讨其改善肾纤维化可能的作用机制。方法：用5/6肾切除（Platt法）建立慢性肾衰大鼠模型,分为假手术组、模型组、健脾清化方组和氯沙坦钾片（科素亚）组。治疗60 d后用免疫组化法测定各组肾组织TNF-α的表达,用ELISA法测定IL-10水平,用蛋白免疫印迹（Western blotting,WB）法检测p-p38MAPK蛋白表达。结果：与假手术组比较,各组大鼠肾组织TNF-α、IL-10及p-p38MAPK蛋白表达均明显增加（P〈0.05）;与模型组比较,健脾清化方组和科素亚组肾组织TNF-α、IL-10及p-p38MAPK蛋白表达均明显下降（P〈0.05）。结论：健脾清化方可通过有效阻止p38MAPK信号通路的活化,继而动态调控致炎因子TNF-α与抑炎因子IL-10的表达,从而改善慢性肾衰炎症状态,延缓肾衰进程。     

sCD14在内毒素诱导巨噬细胞活化中的调节机制

目的 观察不同浓度的sCD14和脂多糖（LPS）经过孵育和不孵育同时刺激佛波醇酯（PMA）诱导分化的THP-1细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,以研究sCD14在LPS转运和活化过程中的重要调节作用.方法 通过细胞培养,实验细胞为PMA诱导分化的THP-1细胞;同时将实验分为sCD14组（终浓度分别为1、0.5、0.1、0.01μg/ml）、sCD14～LPS混合物预孵育组（LPS终浓度分别为10、1ng/ml;sCD14终浓度为分别1、0.5、0.1、0.01μg/m1）、sCD14-LPS不孵育组（LPS终浓度分别为10、1ng/ml;sCD14终浓度为1、0.5、0.1、0.01μg/ml）,并分别培养4h后,吸出上清液至1.5ml的离心管中,于-70℃内保存并采用化学发光法检测TNF-α.结果 sCD14本身不能刺激单核细胞分泌TNF-α;LPS浓度为1ng/ml、sCD14浓度为0.01μg/ml和0.1μg/ml时,与LPS单独刺激TNF-α分泌量的差异均无统计学意义（均P＞0.05）;sCD14浓度为0.5μg/ml和1μg/ml时,TNF-α分泌量的差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）.在LPS浓度为10ng/ml、sCD14浓度为0.5μg/ml和1μg/ml时,与LPS单独作用TNF-α分泌量均有显著性差异（均P＜0.01）.sCD14/LPS混合物预孵育组曲线低平,无明显分泌高峰.结论 适当浓度的sCD14可明显增强LPS对单核巨噬细胞的活化作用,且在LPS高浓度时尤为明显,而将sCD14和LPS混合孵育可使上述效应减少甚至消失.     

烧伤大鼠肾脏p38激酶活化和TNF-α含量变化

目的探讨严重烧伤大鼠休克期肾脏组织p38MAKP活化水平以及血浆和肾组织TNF-α含量水平变化。方法清洁级成年雄性Wistar大鼠88只,随机分为对照组,烫伤组和SB组(烫伤+SB203580组,SB203580为p38MAPK特异性抑制剂),正常对照组(0h)8只;烫伤组和SB两组各48只,后两组又分为1、3、6、12、24h五个时相点,用Westernblotting方法检测肾脏组织p38MAKP的活化水平,放射免疫法检测血浆及肾脏组织TNF-α的含量变化。结果烫伤组伤后1h肾组织p38活化水平明显增多,3h达峰值(与对照组比较,P<0.05),6h后活化量明显减少,血浆和肾脏组织TNF-α含量在伤后6h开始增加,12h达峰值(与对照组比较,P<0.05),24h仍较高、未恢复正常,SB组上述指标要比烫伤组显著减少(P<0.05)。结论大鼠严重烫伤后1h肾组织p38MAPK活化明显增加、3h活化水平达峰值,从伤后6h开始血浆和肾脏组织TNF-α的含量水平增加明显、12h为最高,说明p38的活化在肾脏损伤中起到十分重要的作用。     

脂多糖激活p38在诱导肿瘤坏死因子α基因表达中的作用

目的探讨防治内毒素休克的新方法,研究脂多糖（ＬＰＳ）诱导肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）表达的分子机制。方法用蛋白激酶活性测定检测ＬＰＳ刺激引起的激酶活性变化;共聚焦激光扫描技术显示ｐ３８激活移位;用反转录聚合酶链反应和报告基因系统研究ＴＮＦα基因转录的分子机制。结果发现ＬＰＳ刺激ＲＡＷ细胞引起ｐ３８激活并由胞浆移位至胞核。ＬＰＳ刺激引起ＴＮＦαｍＲＮＡ表达增加,而且由ＬＰＳ引起的ＴＮＦα的转录活性可被ｐ３８特异性抑制剂所抑制。结论激活的ｐ３８通过磷酸化转录因子增加ＴＮＦα基因转录活性,这是中毒性休克时ＴＮＦα生成增加的一个重要机制。ｐ３８是ＬＰＳ诱导ＴＮＦα基因表达的重要调节物质。     

Electroacupuncture Attenuates Spinal Nerve Ligation-Induced Microglial Activation Mediated by p38 Mitogen-Activated Protein Kinase

Objective

To investigate whether analgesic effect of electroacupuncture (EA) is affected by p38 mitogen-activated protein kinase (p38 MAPK) on microglia.

Methods

There were two experiments. The experiment 1: 40 male Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into the normal, surgery, EA and sham EA groups, and the L5 spinal nerve ligation (SNL) on the right side was used to establish neuropathic pain model. EA was applied to bilateral Zusanli (ST36) and Kunlun (BL60) at 24, 48 and 72 h after SNL for 30 min, once per day. The paw withdrawal thresholds (PWTs) were measured before surgery (as base) and at 24, 25, 49 and 73 h after surgery. Phospho-p38 MAPK (p-p38 MAPK), oxycocin-42 (OX-42, marker of microglia), and glial fibrillary acidic protein (GFAP, marker of astrocyte) in bilateral spinal cord dorsal horn (SCDH) were detected by immunofluorescence, respectively. The experiment 2: 40 male SD rats were cannulated for SNL-induced neuropathic pain, and then were randomly divided into the dimethyl sulfoxide (DMSO), EA plus DMSO, 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-methylsulfonylpheny)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole (SB203580) and EA plus SB203580 groups. SB203580 (30 nmol/L) was administered 5 min prior to EA treatment. The PWTs and OX-42 in bilateral SCDH were measured as mentioned above.

Results

SNL-induced neuropathic pain reduced PWTs and increased the expression of p-p38 MAPK and OX-42 in bilateral lumbar SCDH of rats (P<0.01). Spinal p-p38 MAPK was only co-localized with OX-42 in our study. EA treatment significantly alleviated SNL-mediated mechanical hyperalgesia, and suppressed the expression of p-p38 MAPK and OX-42 in lumbar SCDH (P<0.05 or P<0.01). Intrathecal injection of low dose SB203580 had no influence on PWTs (P>0.05), but significantly inhibited the expression of OX-42 positive cells in bilateral SCDH (P<0.01 or P<0.05). EA plus SB203580 synergistically increased PWTs, and reduced the expression of bilateral spinal OX-42 (P<0.01 or P<0.05).

Conclusions

The central mechanism of EA-induced anti-hyperalgesia may be partially associated with the reduced expression of p-p38 MAPK, and subsequently reducing the activation of OX-42 in neuropathic pain. Therefore, EA may be a new complementary and alternative therapy for neuropathic pain.

     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在丙泊酚器官保护中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在对细胞外刺激因素进行应答时发挥着重要作用,介导多种细胞行为的变化。其中,p38信号通路是MAPK家族中关键通路之一,其介导细胞生长、发育、分化及死亡的全过程。丙泊酚除具有麻醉作用外,还可作用于一些MAPK,包括细胞外信号调节激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38MAPK,从而发挥抗肿瘤、抗炎、抗氧化和抗凋亡等积极作用。该文通过总结p38MAPK信号通路在丙泊酚对器官保护中所发挥的作用,为丙泊酚的临床器官保护作用机制提供一种新的研究思路。     

P38蛋白激酶和核因子κB对大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮合酶表达的调控

目的　探讨P38蛋白激酶和核因子κB (NF κB) 在脂多糖(LPS) 诱导肺泡巨噬细胞诱生型一氧化氮合酶(iNOS) 表达过程中的调控作用。方法　分离培养大鼠肺泡巨噬细胞, 设正常对照组, LPS刺激组, P38 蛋白激酶抑制剂SB203580干预组(SB203580 LPS组)。分别采用免疫组织化学、RT- PCR、Western blot 及Griess 方法检测NF- κB、iNOS mRNA、核蛋白P38的表达以及培养上清NO含量。结果　LPS刺激组核蛋白P38、胞核NF κB染色阳性细胞百分比、iNOS -mRNA的表达以及培养上清NO含量均较正常对照组显著升高(P<0. 01); 加入SB203580干预后上述指标均显著降低, 与LPS刺激组相比差异均具有极显著性意义(P<0 .01)。核蛋白P38 的表达与胞核NF κB染色阳性细胞百分比、iNOS mRNA以及培养上清NO含量均呈显著正相关(r= 0. 862, 0 .569, 0. 715, 均P<0. 01), 胞核NF κB染色阳性细胞百分比与iNOS mRNA 的表达以及NO 的产生亦呈显著正相关(r= 0 .653,0 .597, 均P<0 .01)。结论　LPS刺激肺泡巨噬细胞P38 活化可上调胞核NF-κB、iNOS- mRNA和NO的表达; NF-κB可能是P38信号途径下游的重要位点之一。     

p38MAPK信号通路在脓毒症大鼠海马区神经元自噬中的作用

  目的  探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路在脓毒症大鼠海马区神经元自噬中的作用。  方法  通过盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture, CLP)建立大鼠脓毒症模型。SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(CLP组)、溶媒组(CLP+Veh组)、p38MAPK抑制剂组(CLP+SB203580组),每组分为3、6、12、24和48 h亚组;CLP+Veh组和CLP+SB203580组分别侧脑室注射1% DMSO 5 μL和0.1 mmol/L SB203580 5 μL,注射后30 min建立CLP模型,sham组仅翻看盲肠后关腹,未做其他处理。监测大鼠生命体征,包括平均动脉压(mean arterial pressure, MAP)和心率(heart rate, HR);神经行为学评分了解大鼠的脑损伤情况;大鼠脑海马区组织HE染色观察病理改变;透射电镜下观察大鼠脑海马区神经元自噬过程;Western blot检测海马区微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3, LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ选择性自噬接头蛋白(p62/sequestosome-1, p62/SQSTM1)、MAPK激活蛋白激酶2(MAPK-activated protein kinase 2, MK-2)、磷酸化MK-2(phosphorylation MK-2, p-MK-2)的蛋白表达;免疫荧光染色观察大鼠海马区神经元LC3和p62/SQSTM1的表达。  结果  在不同时间点,CLP组大鼠MAP低于、HR高于sham组,以造模后12 h变化最明显;CLP组大鼠神经行为学评分最低,海马区组织病理改变明显,透射电镜下观察有较多自噬空泡形成。与CLP组比较,CLP+SB203580组大鼠神经行为学评分回升,海马区病理改变好转,透射电镜下自噬空泡中的包裹物降解;Western blot结果显示,与sham组比较,造模后CLP组大鼠海马组织LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ和p-MK-2/MK-2表达升高,p62/SQSTM1表达下降,前者至12 h达到高峰,后者至12 h达到谷底,CLP+SB203580组与其它组相比,在造模12 h时,大鼠海马组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-MK-2/MK-2表达升高,而p62/SQSTM1表达进一步下降(P＜0.05);免疫荧光法观察结果显示,海马区LC3和p62/SQSTM1在NeuN的定位及表达与Western blot所测得的结果一致。  结论  脓毒症大鼠抑制p38 MAPK信号通路,可以使自噬进一步激活,对海马区神经元起到保护作用。     

Role of p38 Mitogen-activated Protein Kinase in Mediating Monocyte Chemoattractant Protein-1 in Human Umbilical Vein Endothelial Cells

p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK)is a member of the mitogen-activated protein kinase (MAPK) family. p38MAPK pathway is one of the most widely studied signaling pathways involved in the transduction of intracellular signals including survival, growth,differentiation and death.     

内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织p38 mRNA及其蛋白质表达的变化

目的探讨内毒素性急性肺损伤 (ALI)大鼠肺组织p38mRNA及其磷酸化蛋白质表达的变化。方法静脉注射脂多糖 (LPS)复制大鼠ALI模型。分别采用原位分子杂交和蛋白质印迹方法检测肺组织 p38mRNA及其磷酸化蛋白质的表达 ,并观察肺组织病理学改变。结果正常大鼠肺组织有少量p38mRNA表达 ,可见于平滑肌细胞、内皮细胞、肺泡上皮细胞和肺泡巨噬细胞。静脉注射LPS 2小时能成功复制ALI模型 ,PaO2 显著下降 (p <0 .0 1) ,p38mRNA及其磷酸化蛋白质表达显著增加 ,分别为正常对照组的 2 .34和 2 .74倍 (p <0 .0 1)。通过直线相关分析发现 ,PaO2 与肺组织 p38mRNA和磷酸化p38MAPK表达之间分别呈显著负相关 (r=- 0 .6 5 2 ,- 0 .713,p均 <0 .0 1)。结论内毒素性肺损伤肺组织 p38mRNA及其磷酸化蛋白质的表达均上调 ,可能与ALI的病理生理过程有关。