Cathepsin B抑制剂对发育期惊厥大鼠海马自噬相关蛋白表达的调节

目的 探讨新生期大鼠反复惊厥后海马自噬、凋亡相关蛋白Beclin-1,Cathepsin B和Bcl-2的表达及溶酶体蛋白酶抑制剂CBI对表达的干预作用.方法 实验在苏州大学神经科学研究所进行.日龄6 d的Sprague-Dawley大鼠90只随机(随机数字法)分为3组,每组30只:对照组、反复惊厥组及CBI组.反复惊厥组(RS)每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30 min,连续9 d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;CBI组于惊厥前腹腔注射cathepsin B(2 μL,0.5μg/μL),同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥发作.各组分别于末次惊厥后1.5 h,3 h,6 h,24 h和生后35 d 5个时间点[(n=6/(每点,每组)]取海马组织,采用免疫印迹技术检测自噬相关蛋白Beclin-1,Cathepsin B和Bcl-2的表达,采用方差分析进行统计.结果 对照组和CBI组同一时间点Beclin-1,Cathepsin B和Bcl-2的表达差异无统计学意义,惊厥组(1.5 h,3 h,6 h,24 h)海马组织中Beclin-1和Cathepsin B的表达明显高于对照组和CBI组同一时间点的Beclin-1表达(F值分别为Beclin-1:7.44,6.58,5.43,9.69,P＜0.05;Cathepsin B:4.62,2.02,3.49,4.86);而惊厥组(1.5 h,3 h,6 h,24 h)Bcl-2的表达则明显低于对照组和CBI组同一时间点Bcl-2的表达(F值分别为4.34,3.79,4.88,4.42,P＜0.05).结论 发育期大鼠反复惊厥后海马神经元自噬信号通路激活,同时抗凋亡基因Bcl-2蛋白水平显著下调,表明自噬信号途径与凋亡途径共同激活,协调参与发育期大鼠惊厥急性期兴奋毒性脑损伤的病理生理机制.

Abstract：

Objective To explore the dynamic expressions of autophagia and apoptosis associated protein Beclin-1, Cathepsin B and Bcl-2 in hippocampus and the intervention efficacy of cathepsin-B inhibitor (CBI) after recurrent neonatal seizure. Method Ninty 6-day-old SD rats were randomly (random number) divided into the recurrent neonatal seizure group (RS group, n = 30), CBI-treated seizure group (CBI group, n = 30) and the control group (n = 30). Rats in RS group were subjected to 55 attacks of seizure induced by using flurothyl during the consecutive 9 days beginning on the 6 th postnatal day (P6). In CBI group, CBI (2 μL, 0.5 μg/μL) was administered every day before seizures induced. Western blot was employed to determine the protein level at different intervals (1.5 h,3 h,6 h,24 h) after the last convulsion.Results There were higher expressions of Beclin-1 and Cathepsin B, and lower expressions of Bcl-2 expression in RS group(1. 5 h,3 h,6 h and 24 h) than those at the same time in control group (P ＜ 0.05). Beclin1 and Cathepsin B expressions were lower while Bcl-2 expressions were higher in CBI group at the intervals of 1.5 h,3 h,6 h and 24 h compared with those in RS group (P ＜ 0. 05). Conciusions Autophagic and apoptotic pathways were activated immediately after recurrent neonatal seizures as indicated by expression changes of Beclin-1, Cathepsin B and Bcl-2 in hippocampus, which suggests a synergistic effect of the two pathways in the pathophysiology of the long-term brain damage of neonateε resulted from the adverse effects of recurrent neonatal seizures.     

电针对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织Beclin-1蛋白及基因表达的影响

目的:观察电针(EA)对脑缺血再灌注认知障碍模型大鼠脑组织中Beclin-1的影响,探讨脑卒中后认知障碍的康复机制。方法:健康SD雄性大鼠105只,随机分为3组:电针组、模型组和假手术组,每组35只;大鼠缺血再灌注模型采用改良线栓法栓塞左侧大脑中动脉制备。电针"神庭穴"、"百会穴"各30min,1次/日,从术后第1天至第10天动物处死。采用Morris水迷宫实验观测模型大鼠的学习、记忆能力;采用Western blot和荧光定量PCR法检测大鼠脑组织Beclin-1蛋白和基因的表达。结果:造模后的第4到第8天,模型组大鼠的逃避潜伏期较假手术组长(P0.05),EA组大鼠的逃避潜伏期较模型组缩短(P0.05)。电针组大鼠海马及左侧大脑皮质中Beclin-1蛋白的电泳条带与假手术组相比,电针组条带灰度值较假手术组高(P0.05),与模型组相比,电针组Beclin-1蛋白电泳条带灰度较模型组高(P0.05)。模型组和电针组的Beclin-1基因表达的2~(-△△)Ct与假手术组相比差异明显,均升高(P0.05)。但电针组Beclin-1基因表达的2~(-△△)Ct明显较模型组高(P0.05)结论:(1)电针神庭、百会可以促进脑缺血再灌注后认知障碍模型大鼠的认知功能的恢复;(2)电针可以提高缺血再灌注模型大鼠脑组织中的Beclin-1表达。Beclin-1是一种自噬相关蛋白,直接执行自噬的过程,被作为自噬发生的标志物。对自噬网络系统的调控可能是电针能够改善脑卒中后认知障碍的生物学机制之一。     

Immunohistochemical expression of MAP1LC3A and MAP1LC3B protein in breast carcinoma tissues

Autophagy is a protein degradation process within the cell and its deregulation has been linked to various diseases and the formation of cancer. One of the important proteins involved in the autophagy process is microtubule‐associated protein 1 light chain 3 (MAP1LC3). The aims of this study were to determine the MAP1LC3A and MAP1LC3B protein expression in both normal and cancer breast tissues and to determine the relationship between the expression of these proteins and type of tissues. Immunohistochemistry assessments were carried out on tissue microarrays consisting of breast tissues. MAP1LC3A expression was detected in 52/56 of normal breast tissue cores and 65/67 of breast cancer tissue cores. MAP1LC3B expression was detected in 55/56 of normal breast tissue cores and 67/67 of breast cancer tissue cores. MAP1LC3A and MAP1LC3B protein are expressed in the majority of normal and cancer breast tissues. A large number of MAP1LC3A and MAP1LC3B positive breast cancer tissues cores have high proportion of stained cells (81–100%) as compared with normal breast tissues. However, a significantly higher number of breast cancer tissues were found to express the MAP1LC3A protein with strong immunoreactivity as compared with the normal tissues, suggesting that MAP1LC3A may play a role in breast cancer development. J. Clin. Lab. Anal. 23:249–258, 2009. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

新生大鼠反复惊厥对海马区肾上腺皮质激素受体表达的影响

目的 研究新生期大鼠反复惊厥对海马区肾上腺皮质激素受体MR和GR表达的影响,以及对成年期大鼠记忆功能的影响,探讨发育期脑损伤和脑内相关受体之间的相互关系.方法 生后7 d的SD大鼠随机分成两组,每组40只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作1次,每次持续30 min,连续6 d;于反复惊厥后1、3、7、30、60 d处死大鼠取脑,分别采用免疫组织化学方法观察大鼠海马肾上腺皮质激素受体MR和GR表达的变化.最后一组大鼠处死前于第61～65天行Morris水迷宫实验,检测大鼠的学习记忆功能.对照组同样操作但不吸入三氟乙醚.结果 61～64 d,两组大鼠寻找平台时间均逐渐缩短,惊厥组大鼠在第64天的平均寻找平台时间[(82 424.3±35 622.0)ms]与对照组[(40 712.4±29 467.6)ms]比较明显延长(P=0.001).在第65天,惊厥组大鼠120 s内穿越原平台位置次数[(1.2±0.9)次]较对照组[(3.1±1.3)次]明显减少(P<0.001).免疫组化结果显示新生大鼠反复惊厥后的1、3、7、30、60 d海马CA1～4区GR、MR的表达较埘照组明显降低(P<0.05).结论 海马区GR及MR随脑发育成熟表达不断增高,呈现一定规律及分布特点,参与了脑发育过程.新生大鼠反复惊厥造成海马GR、MR表达的持续异常,参与发育期脑损伤.     

微管相关蛋白1轻链3在新生期大鼠惊厥后海马的表达

Objective To explore the repetitive expressions of autophagy marker protein-rnicrotubule-associ-ated protein 1 light chain 3 (LC3) in hippocampus in newborn rats with recurrent seizure and the influence of 3-methyladeine (3-MA) on LC2 expressions. Method Seventy-two 6-day-old SD rats were randomly (random nam-ber) divided into the recurrent neonatal seizure group (RS group, n = 24), the 3-MA-treated seizure group (3-MA group, n = 24) and control group (n = 24). Rats in RS group were subjected to 55 attacks of seizure induced by flurothyl in 9 successive days from the 6th postnatal day (P6). In 3-MA group, 2 μL of 3-MA was injected every day till seizure induced. Western blot analysis was used to determine LC3 protein level in hippocampus at different intervals of 1.5 h,3 h,6 h and 24 h after the last convulsion. The LC3 protein level was analyzed with Dunnett test after ANOVA. Results LC3 protein levels in RS group at the different intervals were significantly higher than those in the control group and in 3-MA group (F =4.70,5.28,8.51 and 5.89, respectively, P <0.05), and there were no significant differences in LC3 protein level between 3-MA group and control group at those intervals (P > 0.05). Conclusions The autophagy/lysosomal pathway is immediately activated after recurrent seizure evidenced by the elevated expressions of LC3 in hippocampus. The 3-MA is involved in the regulation of autophagy/ lysosomal pathway by down-regulating the expressions of LC3.     

微管相关蛋白1轻链3在新生期大鼠惊厥后海马的表达

Objective To explore the repetitive expressions of autophagy marker protein-rnicrotubule-associ-ated protein 1 light chain 3 (LC3) in hippocampus in newborn rats with recurrent seizure and the influence of 3-methyladeine (3-MA) on LC2 expressions. Method Seventy-two 6-day-old SD rats were randomly (random nam-ber) divided into the recurrent neonatal seizure group (RS group, n = 24), the 3-MA-treated seizure group (3-MA group, n = 24) and control group (n = 24). Rats in RS group were subjected to 55 attacks of seizure induced by flurothyl in 9 successive days from the 6th postnatal day (P6). In 3-MA group, 2 μL of 3-MA was injected every day till seizure induced. Western blot analysis was used to determine LC3 protein level in hippocampus at different intervals of 1.5 h,3 h,6 h and 24 h after the last convulsion. The LC3 protein level was analyzed with Dunnett test after ANOVA. Results LC3 protein levels in RS group at the different intervals were significantly higher than those in the control group and in 3-MA group (F =4.70,5.28,8.51 and 5.89, respectively, P <0.05), and there were no significant differences in LC3 protein level between 3-MA group and control group at those intervals (P > 0.05). Conclusions The autophagy/lysosomal pathway is immediately activated after recurrent seizure evidenced by the elevated expressions of LC3 in hippocampus. The 3-MA is involved in the regulation of autophagy/ lysosomal pathway by down-regulating the expressions of LC3.     

微管相关蛋白1轻链3在新生期大鼠惊厥后海马的表达

目的 研究新生期大鼠反复惊厥后海马中自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达及3-MA对表达的干预作用.方法 实验在苏州大学衰老与神经疾病实验室进行.日龄6 d的sprague-Dawley大鼠72只随机(随机数字法)分成三组,每组24只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30 min,连续9 d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;3-MA组惊厥前腹腔注射3-MA(总量2μL),同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥,方法同惊厥组.三组大鼠于最后一次惊厥后分别按1.5 h,3 h,6 h,24 h后取海马组织,采用蛋白质免疫印迹技术(western blot)分别检测三组大鼠大脑海马中LC-3的表达.各组LC3蛋白水平采用方差分析进行比较.结果 对照组和3-MA组同一时间点LC3表达差异无统计学意义,惊厥组(1.5 h,3 h,6 h,24 h)海马组织中LC-3的表达明显高于对照组和3-MA组同一时间点LC3表达(F值分别为4.70,5.28,8.51,5.89,P<0.05).结论 惊厥后自噬途径被激活,3-MA参与了自噬途径的调控.     

川芎嗪对大鼠惊厥性脑损伤caspase-1 mRNA表达的影响

目的探讨幼年大鼠反复惊厥后caspase-1 mRNA的表达及川芎嗪对其表达的影响。方法162只20日龄健康Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为3组:对照组、惊厥组及川芎嗪干预组。通过三氟乙醚反复吸入(连续6次,1次/d)制作发育期大鼠惊厥动物模型。RT-PCR方法检测各组动物反复惊厥后6h、1d、3d、7d时点的脑组织caspase-1 mRNA的表达,同时观察脑含水量变化及对脑损伤进行神经病理半定量积分。结果川芎嗪干预组各时间点caspase-1 mRNA表达较惊厥组显著下调、脑含水量和脑损伤积分显著降低(P<0.01)。结论川芎嗪能有效减轻惊厥性脑水肿和神经元病理损伤,其机制可能与抑制caspase-1 mRNA的异常表达有关。     

Wortmannin 对血管性痴呆大鼠海马 CA1区自噬相关蛋白 Beclin-1及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响

目的探讨Wortmannin对血管性痴呆大鼠海马 CA1区的自噬及凋亡表达的影响及意义。方法将150只大鼠随机分为假手术组、模型组及Wortmannin组。每组又随机分为1周、2周、4周、8周和12周5个亚组（n＝10）。采用四血管阻断法制备血管性痴呆模型,应用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力,HE染色观察大鼠海马区神经元形态变化,免疫组化法检测Beclin-1及Caspase-3蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组出现明显学习记忆障碍,海马CA1区Beclin-1阳性表达在1周开始增多,4周达到高峰,8周开始下降,到12周仍增多;Caspase-3阳性表达在1周开始增多,2周达到高峰;4周开始下降,到12周仍增多,差异有统计学意义（ P＜0.05）;与模型组比较,Wortmannin组学习记忆障碍明显改善,海马CA1区Beclin-1及Caspase-3阳性表达减少,差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论 Wortmannin可能通过减轻自噬及凋亡对神经细胞的损伤,从而达到保护神经细胞,增强和调节学习记忆能力的作用。这可能为血管性痴呆的治疗提供一个靶点。     

PD-L1、Beclin-1、P62在NSCLC中的表达与复发转移的关系

目的研究程序性死亡配体1(PD-L1)、Beclin-1、P62在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达与复发转移的关系。方法选取2019年7月至2020年6月三峡大学附属仁和医院检验科收治的88例NSCLC患者作为病例组,另选距离病例组癌组织5 cm以上的癌旁组织作为对照组,采用免疫组化法检测两组PD-L1、Beclin-1、P62的表达情况,采用Cox分析NSCLC患者无复发生存情况的影响因素。结果病例组PD-L1、P62的阳性率均高于对照组,Beclin-1的阳性率低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤直径、临床分期、分化程度和吸烟史的NSCLC患者的PD-L1、Beclin-1阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同淋巴结转移情况、肺膜浸润的NSCLC患者的Beclin-1、P62阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同肿瘤直径的NSCLC患者的P62阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。末次随访,88例NSCLC患者复发16例,复发率为18.18%。临床分期、淋巴结转移和P62阳性是影响NSCLC患者无复发生存...     

3-甲基腺嘌呤对大鼠新生期惊厥致神经行为损伤的干预

目的 探讨大鼠新生期反复惊厥急性期应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对惊厥所致神经行为损伤的干预作用及机制。方法 实验在苏州大学衰老与神经疾病实验室进行。日龄6d(P6,下同)的Sprague-Dawley大鼠45只随机(随机数字法)分成三组,每组15只,惊厥组在P6吸入三氟乙醚诱导惊厥发作,持续30 min,连续6d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;3-MA组惊厥前腹腔注射3 -MA(总量2μL),同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥,方法同惊厥组。三组大鼠于P12进行游泳行为评分测试大鼠神经运动发育,P17进行旷场实验,P43～P49行Morris水迷宫测试大鼠学习记忆功能,于PS0取海马组织,采用免疫印迹技术(Western blot)检测抗凋亡基因Bcl-2及自噬标记蛋白Beclin1的表达。各组行为学指标和蛋白水平采用方差分析进行统计。结果 惊厥后各组大鼠游泳行为测评,各项评分惊厥组明显低于对照组及3-MA组(P＜0.01),旷场实验显示惊厥组延迟时间[(13.33±6.69)8]较对照组[(7.11±2.37)8]和3-MA组[(9.91±4.23)s]显著延长,差异具有统计学意义(F=4.39,P＜0.05);Morris水迷宫测试RS组第4、5天逃避潜伏期较对照组和3-MA组明显延长(P＜0.05)。惊厥组海马Bcl-2表达水平(0.587±0.139)较对照组(0.782±0.083)及3-MA组(0.799±0.163)显著降低,差异具有统计学意义(F=4.71,P＜0.05)。各组Beclin1的表达差异无统计学意义(F =0.27,P＞0.05)。结论 3-MA能显著改善大鼠惊厥后神经行为损伤,并可能与上调海马抗凋亡基因Bcl-2表达有关。     

川芎嗪对发育期大鼠惊厥性脑损伤后海马caspase-1 mRNA表达的影响

目的:探讨发育期大鼠反复惊厥后海马caspase 1 mRNA表达及川芎嗪对其表达的影响。方法:162只20日龄健康SD大鼠随机分为对照组、惊厥组及川芎嗪组。采用三氟乙醚反复吸入(连续6次,每日1次)方法制作发育期大鼠惊厥模型。逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测各组动物反复惊厥后6 h及1、3、7 d时海马组织caspase 1 mRNA的表达,同时观察脑含水量的变化和光镜下海马区神经元病理改变,并对脑损伤进行病理半定量积分。结果:川芎嗪干预组各时间点caspase 1 mRNA表达较惊厥组均显著下调,脑含水量(7 d时除外)和脑损伤积分显著降低(P均<0.01),海马神经元水肿、变性、坏死均明显减轻。结论:川芎嗪能有效减轻惊厥性脑水肿和海马神经元病理损伤,其机制可能与抑制海马caspase 1 mRNA异常表达有关。     

PI3KI/Akt1在辐射诱导的乳腺癌细胞自噬发生中表达调控及作用机制

目的研究不同剂量X线诱导乳腺癌细胞株MCF-7自噬发生过程中Akt表达的变化以及探讨小分子干扰RNA沉默Akt基因后对自噬的影响及可能的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR方法检测MCF-7中Akt基因表达,Western blot方法检测Akt蛋白表达;实时荧光定量PCR方法检测Akt过表达和沉默模型中MAP1LC3B基因表达。结果正常照射组MCF-7细胞量效研究表明,在4、8、16 h Akt1表达分别在24、、8Gy区间内呈剂量依赖下降变化,照射后Akt1总体表达均低于假照组(P0.01);32 h量效结果表明,Akt1表达明显呈剂量依赖下降变化,4、8、12Gy有显著性差异(P0.05)。时间效应研究表明,48、、12Gy时程研究Akt1表达量均于8 h降至最低,差异显著(P0.05),照射后Akt1基因总体变化均低于假照组。正常照射组MCF-7细胞Akt1蛋白表达情况为,照射后2 h Akt1蛋白表达即有明显下降趋势,24 h达至最低值;4Gy时效研究表明,照射后0.5 h Akt1蛋白表达明显下降,8 h达至最低值;8 Gy时效研究表明,照射后Akt1蛋白表达在0.5-4 h区间内呈时间依赖下降趋势,4 h达至最低值。Akt1 siRNA模型照射组量效研究表明,MAP1LC3B表达在8、163、2 h均有不同程度升高变化,12 Gy达至最大值(P0.05);时间效应关系表明,2、48、Gy MAP1LC3B表达在16 h3、2 h上升变化显著(P0.05),12 Gy时效表明,8、163、2 h MAP1LC3B表达呈剂量依赖上升变化,于32 h达至最大值(P0.05)。结论 X线可能通过抑制PI3KI/AKT转导通路活性来促进乳腺癌细胞株MCF-7发生自噬。     

稽留流产与子宫蜕膜组织中PSG1 mRNA、BMP-2、Beclin-1 mRNA的相关性分析

目的 探究稽留流产与子宫蜕膜组织中重组人妊娠特异性β1糖蛋白(PSG1)mRNA、重组人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、Beclin-1 mRNA水平的相关性.方法 选取2018年6月至2019年6月绵阳市中心医院收治的稽留流产患者50例,作为观察组;另外,选取同期未发生稽留流产的人工流产者50例,作为对照组.观察并...     

反复惊厥幼鼠脑内氧化抗氧化水平和神经元凋亡

目的探讨反复惊厥后幼鼠脑内氧化、抗氧化能力平衡的变化和神经元凋亡的关系。方法96只20日龄健康SD大鼠随机分为两组:对照组及惊厥组。通过三氟乙醚反复吸入(连续6次,每天1次)制作发育期大鼠惊厥动物模型。检测各组动物反复惊厥后6h、1d、3d、7d海马组织MDA含量、SOD活性、T-AOC水平变化,同时原位末端标记法(TUNEL)进行大鼠海马神经元凋亡检测。结果反复惊厥后6h、1d、3d海马MDA含量均较对照组显著增高,SOD活性及T-AOC水平显著降低(P<0.01),皆以第1天改变最显著,第7天三者与对照组相比较差异均无统计学意义(P>0.05);而海马神经元凋亡却于反复惊厥后1d才显著增加,持续到惊厥后7d仍显著多于对照组(P<0.01)。结论反复惊厥后海马MDA含量显著增高,SOD活性、T-AOC水平显著降低,且三者的变化皆发生在神经元凋亡增多之前,提示氧化损伤、抗氧化能力下降可能参与惊厥大鼠海马神经元凋亡的发生。     

运动训练对新生期大鼠反复惊厥所致学习能力损害及海马ZnT3表达的影响

目的探讨踏转轮运动训练对新生期大鼠反复惊厥所致学习能力损害及海马ZnT3表达的影响。 方法将出生后6 d的SD大鼠随机分为惊厥组和对照组。惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作1次，每次持续30 min,连续6 d；对照组给予同样操作，但期间不吸入三氟乙醚。2组大鼠分别于出生后29～35 d及61～67 d进行Y迷宫学习训练,检测其学习、记忆功能。期间2组大鼠于出生后51～56 d进行踏转轮训练，每天1次，每次30 min，连续6 d。最后于出生后78 d时将各组大鼠处死行脑组织切片，检测ZnT3在海马中的表达。 结果①学习能力测试：惊厥组大鼠第1次Y-迷宫辨别学习达标的电刺激次数为(60.0±14.1)次，与对照组［(37.5±17.2)次］比较,差异有统计学意义(P<0.05)；第2次惊厥组Y-迷宫辨别学习达标的电刺激次数为(27.5±14.1)次,与对照组［(21.0±11.0)次］比较,差异无统计学意义(P&rt;0.05)；2组大鼠第2次学习能力成绩均较第1次显著改善,差异均有统计学意义（P<0.05）。②记忆能力测试：惊厥组与对照组2次测试结果间差异均无统计学意义（P&rt;0.05）。③ZnT3原位杂交检测：2组大鼠ZnT3 mRNA在海马各区均有明显表达，差异无统计学意义（P&rt;0.05）；但惊厥组大鼠齿状回ZnT3 mRNA灰度值与CA3区比值较对照组显著减小，差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论运动训练能显著改善新生期反复长程惊厥对大鼠学习能力的损害，并能有效调节海马区ZnT3的异常表达水平。     

热惊厥幼龄大鼠脑内Prolactin蛋白及Zinc transporter 1 mRNA表达

目的 探讨热应激(Heat stress,HS)和热惊厥(Febrile convulsions,FC)对脑内催乳素蛋白(Prolactin,PRL)和锌离子转运体1(Zinc transporter 1,ZnT1)表达的影响,探讨FC的神经免疫学机制.方法 实验在浙江大学附属邵逸夫医院中心实验室进行.采用热水浴诱导FC模型.21 d龄雄性sD大鼠随机分为正常对照组(8只)和热应激组(28只),28只热应激处理大鼠中15只达到5级(设为热性惊厥组,FC),10只未出现惊厥(设为单纯热应激组,HS),3只达到2级惊厥,弃用.应用免疫组织化学技术对HS和FC大鼠PRL免疫反应性在不同脑区的表达进行分析,原位杂交检测ZnT1表达.各组阳性细胞数采用方差分析进行统计.结果 ①对照组大脑皮层偶见零星表达,着色淡且无定位分布特征.HS组PRL-IR阳性细胞在大脑皮层PIR、Ent和Rs区免疫染色较深,PRH、PAR和Fr区染色较浅;另外PRL-IR阳性细胞还分布于丘脑中线一带;而FC组则于大脑皮层、海马、杏仁核、丘脑及下丘脑见大量PRL-IR阳性细胞,呈弥漫性分布,无明显核团分布特征.②HS和FC两组大脑皮层各区PRL-IR阳性细胞数均明显高于对照组(P<0.01).FC组大鼠大脑皮层PIR、Ent、RS区PRL-1R阳性细胞数与HS组大鼠差异无统计学意义(F值分别为688.9、744.3、0.56,P>0.05),PRH和PAR区FC组明显高于HS组(F值分别为2.68、1.48,P<0.01).③FC组海马区域可见明显ZnT1 mRNA表达,而HS组和对照组无明显表达.结论 ①PfuL在HS组和FC组大脑皮层各区明显表达,而FC组在海马和杏仁核等前脑结构内亦有明显表达,表明PRL不仅与热应激的中枢调控有关,也参与海马等前脑结构对惊厥活动的中枢调控机制.②FC组海马ZnT1 mRNA明显表达提示FC组海马区域存在异常增高的锌离子转运.     

银杏叶提取物对幼年期大鼠惊厥后海马caspase-3 FasL表达的影响

目的研究幼年大鼠反复惊厥后海马组织caspase-3、FasL表达的变化及银杏叶提取物干预对其的影响。方法108只加日龄健康SD大鼠随机分为三组：正常对照组、惊厥组及银杏叶提取物干预组，通过三氟乙醚反复吸入（每天1次，连续6d），制作幼年大鼠惊厥动物模型。用免疫组化（sP）法检测各组动物反复惊厥结束后1、3、7d海马组织中caspase-3和Fa8L蛋白的表达，RT—PCR方法检测各时相点海马组织中caspase-3mRNA的表达。结果反复惊厥结束后1、3、7d海马组织均有caspase-3、FasL的表达，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。银杏叶提取物干预组海马各时间点ca8pase-3mRNA及caspa8e-3、FasL蛋白的表达均较惊厥组显著下调（P〈0．05）。结论caspase-3、FasL参与了幼年期惊厥性脑损伤。银杏叶提取物对幼年期惊厥性脑损伤的保护机制，可能与抑制海马caspase-3、FasL的异常表达有关。     

Claudin-1、Id-1、Id-3蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的研究胃癌组织Claudin-1、Id-1、Id-3表达与胃癌细胞分化、增殖、侵袭转移和预后的关系。方法应用免疫组织化学检测Claudin-1、Id-1、Id3-蛋白在胃癌组织中的表达。结果Claudin-1表达水平与胃癌组织学类型、肿瘤侵袭程度及淋巴结转移相关（P〈0．05）,Id-1蛋白表达与胃癌淋巴结转移呈负相关（P〈0．05）;Id-3蛋白表达在不同组织起源的胃癌之间差异有统计学意义（P〈0．05）;Claudin-1作为细胞间紧密连接的构成成份在胃癌组织中的表达作用与Id蛋白表达正相关。结论Claudin-1表达上调以及在胃癌侵袭过程中表达转化提示参与肿瘤的生物学行为的转化;Id-1在胃癌淋巴结转移的预测中有一定的应用价值;不同组织起源的胃癌Id-3呈差异性表达;Claudin及Id蛋白在胃癌的侵袭转移及临床治疗及预后判断有一定的应用价值。