腺样囊性癌肺转移相关蛋白质的筛选鉴定

目的　初步筛选和鉴定人涎腺腺样囊性癌肺转移相关蛋白质。方法　利用腺样囊性癌细胞株 (ACC 2 )及其肺高转移细胞株 (ACC M) ,通过蛋白质组学方法 ,差减处理 ,发现两细胞株间蛋白质表达的差异 ,并对差异蛋白质点进行分析鉴定。结果　发现ACC 2和ACC M细胞系之间有 12个蛋白质点表达水平明显不同。其中转酮醇酶、v Ha ras蛋白等在ACC 2中低表达 ,在ACC M中高表达 ;肿瘤坏死因子超家族成员 4 (配合基 )在ACC 2中高表达 ,在ACC M中低表达 ,Pirin仅在ACC 2中表达。结论　 12个差异蛋白质可能通过不同途径参与腺样囊性癌肺高转移 ,为研究腺样囊性癌肺转移提供新的线索     

白血病抑制因子受体在人涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达

目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。     

XAGE-1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移中的作用

目的：探讨肿瘤睾丸抗原家族中XAGE—1b基因在唾液腺腺样囊性癌高转移细胞ACC—M中的高表达是否与其转移相关。方法：采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌低、高转移细胞ACC-2、ACC—M中XAGE—1b基因的表达，检测该基因表达改变对肿瘤细胞体外迁移能力以及裸鼠体内肿瘤细胞肺转移能力的影响。实验结果采用SPSS11．5软件包进行单因素方差分析。结果：XAGE—1b基因干扰质粒转染腺样囊性癌细胞后，RT—PCR验证干扰效率显示．XAGE—1b基因表达量显著下降；Boyden小室检测肿瘤细胞体外迁移能力明显下降；在裸鼠体内检测基因干扰后的肿瘤细胞肺转移能力与ACC—M相比也显著下降（P〈0．01）。结论：RNA干扰作用抑制了XAGE—1b基因的表达，体外实验和体内检测中显著影响了肿瘤细胞的迁移黏附以及肺转移能力，初步证实了XAGE—1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移方面有重要作用。     

ACC-M与ACC-2细胞差异表达基因的研究

目的 对人唾液腺腺样囊性癌肺高转移细胞株(ACC—M)和肺低转移细胞株(ACC—2)差异表达的部分基因进行克隆和蛋白表达研究。方法 应用cDNA基因表达谱芯片，对ACC—2及ACC—M细胞所检测的基因差异表达数据，结合NCBI和生物信息学软件分析技术，利用RT—PCR方法，克隆ACC—2和ACC—M表达有显著差异基因的EST，将得到的EST重组至质粒PET—24a—d( )中，构建表达质粒；质粒转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导后表达目的蛋白。结果 克隆了RAB7L1、h4F2hc、G8、L6、KlAA0119共5个差异表达基因，成功构建表达载体，EST测序结果与GeneBank对照一致，5个EST均可表达目的蛋白。结论 从ACC—2和ACC—M细胞差异表达基因中，可克隆到能够表达目的蛋白的新基因，这些基因可能与腺样囊性癌转移表型产生有关。     

涎腺腺样囊性癌c—erbB—2癌基因产物的阴性表达及意义

目的 研究涎腺腺样囊性癌（ACC）c-erb B-2癌基因的表达及其意义。方法 采用抗c-erb B-2癌基因的单克隆抗体对25例（ACC）肿瘤标本和两个ACC细胞株进行免疫组化研究。结果各种类型的ACC和两个细胞株均呈阴性表达。结论提示c-erb B-2不能作为ACC恶性程度的标志。     

纤维粘连蛋白对人涎腺腺样囊性癌细胞株侵袭和转移的影响

为了研究纤维粘连蛋白（FN）与人涎腺腺样囊性癌（Acc）转移的关系，本研究应用免疫组织化学染色，Boyden小室体外移动试验和体外粘附试验，对人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC—2和从其克隆出的高转移细胞株ACC—M细胞进行比较研究。结果发现FN在ACC—M表达明显高于ACC—2。在加入外源性FN后，ACC—2体外移动性、粘附率均明显提高，已接近ACC—M，而ACC—M无明显变化。结果表明FN在Acc侵袭和转移中起重要的调节作用。     

涎腺腺样囊性癌细胞株p16基因缺失、突变及表达意义

目的　研究 p16基因在涎腺腺样囊性癌细胞株中的缺失和突变等结构变化及其表达之间的关系。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)和 PCR-单链构象多态性 (SSCP)对涎腺腺样囊性癌细胞株 ACC- 2和高转移细胞克隆 ACC- M进行 p16基因缺失、突变的检测 ,应用免疫组化方法检测 p16基因在细胞株中的蛋白表达。结果　涎腺腺样囊性癌细胞株 ACC- 2检测 p16基因阳性 ,高转移细胞克隆 ACC- M缺失 ,两个细胞克隆均无点突变 ,ACC- 2的p16蛋白表达阳性 ,而 ACC- M蛋白表达阴性。结论　 p16基因在高转移涎腺腺样囊性癌克隆中的缺失 ,表明 p16基因在涎腺腺样囊性癌的演进和转移中具有抑癌作用。     

涎腺腺样囊性癌侵袭转移相关微小RNA的筛选

目的 探讨不同转移能力涎腺腺样囊性癌(ACC)表达微小RNA(miRNA)的差异,以期筛选与ACC侵袭转移相关的miRNA及其所调控的靶基因.方法 以ACC高转移细胞株(ACC-M)为实验组,低转移细胞株(ACC-2)为对照组,采用高通量miRNA微阵列初步筛选两株细胞中差异表达的内源性miRNA,然后挑选几个显著差异表达的miRNA,采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)进一步加以验证,同时运用miRNA靶基因预测软件预测其可能调控的靶基因.结果 芯片初筛显示,与ACC-2相比,ACC-M中表达差异具有统计学意义的miRNA分子有23个,其中上调表达的有14个(miR-15a、miR-16、miR-509-3p等),下调表达的有9个(miR-24、miR-98、miR-320等).qRT-PCR验证与miRNAs芯片结果相符合.靶基因软件预测显示,miR-98的靶基因为Ras和高迁移率蛋白A2,miR-320的靶基因为整合素β3,miR-509-3p的靶基因为CD164,它们均与恶性肿瘤侵袭转移有关.结论 不同转移能力的ACC存在差异表达的miRNA、miR-98、miR-320和miR-509-3p可能与ACC侵袭转移相关,可能通过调控相关靶基因参与ACC的侵袭转移进程.     

TIP30蛋白在ACC-M细胞中的表达鉴定及作用

目的 :筛选含有TIP3 0的涎腺腺样囊性癌高转移细胞 ,检测TIP3 0蛋白在涎腺腺样囊性癌高转移细胞中的表达 ,检测携带外源性TIP3 0细胞的细胞周期分布变化。方法 :应用脂质体转染方法将TIP3 0导入ACC M细胞中 ,G418筛选阳性克隆 ,用免疫印记杂交法 (Westernblot)检测转染细胞中TIP3 0蛋白的表达 ;流式细胞仪测定细胞周期分布。结果 :筛选 14d后 ,含有TIP3 0的ACC M克隆形成 ,TIP3 0蛋白在ACC M中表达稳定 ;携带外源性TIP3 0的细胞G0 G1期比例增高 ,G2 M、S期细胞比例降低。结论 :ACC M细胞能稳定表达外源基因TIP3 0 ,携带外源性TIP3 0的细胞G0 G1期细胞比例增高 ,G2 M、S期细胞比例降低 ,从而影响ACC M细胞的生长 ,是TIP3 0抑制涎腺腺样囊性癌细胞生长的可能机制之一。     

肝素对ACC-M细胞与血小板粘附影响的体外实验研究

目的 :通过肝素体外对涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC M细胞与血小板粘附影响的实验 ,了解肝素抗ACC M肺转移的作用及其机制。方法 :健康成年人静脉血 ,制备富血小板血浆 (PRP) ,调整PRP血小板数至 2× 10 8/ml加入 1mMCaCl2 、1mMMgCl2 ,加入 2 4孔细胞培养板中 ,按不同分组要求在不同时间加入相应剂量的肝素后 3 7℃孵育 ,在不同时间消化贴壁粘附细胞 ,用 1%多聚甲醛固定后 ,用计数板进行细胞计数 ,计算粘附率。结果 :肝素体外对涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC M细胞与血小板粘附有明显抑制作用。结论 :肝素体外对涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC M细胞与血小板粘附有明显抑制作用 ,其机制可能是肝素通过与肿瘤细胞P 选择素配体的竞争作用抑制了P 选择素中介的血小板对肿瘤细胞的包被。     

NF-κB(p65)蛋白核转位与唾液腺腺样囊性癌侵袭和转移关系的研究

目的检测NF-κB p65蛋白在唾液腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma,ACC）临床组织标本中的表达水平和转位情况,分析其与ACC侵袭和转移之间的关系。方法应用免疫组织化学法,检测58例唾液腺腺样囊性癌石蜡标本中p65蛋白的表达和细胞定位,分析p65蛋白的表达、转位与ACC转移和其他临床病理参数的关系。结果在转移和非转移的ACC组,p65细胞表达阳性率无显著差异（P=0.2641）;而p65蛋白的核阳性表达率ACC转移组明显高于非转移组（P=0.0261）,并且与ACC神经浸润相关（P=0.0244）。结论 NF-κB通路的激活可能在唾液腺腺样囊性癌侵袭和转移中发挥重要作用。     

细胞粘附蛋白在涎腺腺样囊性癌细胞中的表达

目的　探讨具有不同转移能力的涎腺腺样囊性癌（ａｄｅｎｏｉｄ ｃｙｓｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍ ａ; Ａ Ｃ Ｃ）细胞系中粘附分子表达的差异。方法　采用免疫组化方法对两株人腺样囊性癌细胞系（ Ａ Ｃ Ｃ２ 和 Ａ Ｃ Ｃ Ｍ）培养细胞及其 Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ 小鼠移植瘤模型进行粘附分子 Ｃ Ｄ４４ｓ（标准型）、 Ｃ Ｄ４４ｖ６（变异型）、 Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ（ Ｅｃａｄ）、αｃａｔｅｎｉｎ（αｃａｔ）、βｃａｔｅｎｉｎ（βｃａｔ）的检测。结果　（１） Ａ Ｃ Ｃ肺转移灶的肿瘤细胞中粘附分子的表达普遍高于其皮下移植瘤细胞;（２） Ａ Ｃ Ｃ Ｍ 肺转移灶肿瘤生长缓慢,细胞分化相对较好,而其皮下移植瘤和腹腔种植瘤肿块生长迅速,细胞分化差;（３） Ｃ Ｄ４４ｖ６ 在 Ａ Ｃ Ｃ Ｍ 和 Ａ Ｃ Ｃ２ 体外培养细胞中均有弱阳性表达,而在异体移植瘤中包括皮下移植瘤和肺部转移灶均无表达。结论　 Ａ Ｃ Ｃ细胞中 Ｃ Ｄ４４ｓ 的表达受细胞分化程度影响,并影响了肿瘤细胞本身的生长状况; Ｅｃａｄ／ｃａｔ复合体的表达与否或表达强度与肿瘤细胞的分化成正比; Ｃ Ｄ４４ｖ６ 在涎腺 Ａ Ｃ Ｃ中的表达和转移能力可能无关。     

Coexpression of hypoxia-inducible factor-2α, TWIST2, and SIP1 may correlate with invasion and metastasis of salivary adenoid cystic carcinoma

J Oral Pathol Med (2012) 41 : 424–431 Background: Adenoid cystic carcinoma (ACC) of salivary gland is characterized by advanced local invasion and distant metastasis. Intratumoral hypoxia was reported to be associated with epithelial–mesenchymal transition (EMT) regulators. The purpose of this study was to evaluate the relationship between hypoxia‐inducible factor (HIF)‐2α, TWIST2, and SIP1 expression and the invasion and metastasis in ACC of salivary gland. Method: In vitro we first detected the expression of HIF‐2α, TWIST2, and SIP1 in two ACC cell lines by Western blot and real‐time RT‐PCR. Then, in vivo, a retrospective investigation of 121 patients with ACC from Department of Oral and Maxillofacial Surgery, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University between 1996 and 2005 was carried out using immunohistochemistry to analyze the association between the expression of these three factors and clinical–pathological factors of patients. Results: The protein and mRNA levels of HIF‐2α, TWIST2, and SIP1 in the high‐metastasis cell line (ACC‐M) were much higher than those of the low‐metastasis cell line (ACC‐2). The positive expression of HIF‐2α, TWIST2, and SIP1 (71.07%, 42.98%, and 38.02%, respectively) was associated with the perineural invasion, the local recurrence, and distant metastasis of patients with ACC (P < 0.05). The patients with the positive coexpression of the three factors had a lower survival rate than those with the negative expression (P < 0.05). Conclusion: It is proposed that the elevated expression of HIF‐2α, TWIST2, and SIP1 can contribute to invasion and metastasis of ACC, and there might be some correlation between the hypoxia microenvironment and EMT in ACC.     

基因表达谱芯片技术筛选涎腺腺样囊性癌转移相关基因

目的:应用基因芯片技术对口腔涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-2及其肺高转移细胞株ACC-M的基因表达谱进行对比分析。筛选差异表达基因,以期从基因水平上探讨肿瘤转移机制。方法:以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-2及其肺高转移细胞株ACC-M作为研究肿瘤转移分子机制的模型。提取mRNA,逆转录为cDNA,用Cy3和Cy5荧光染料标记,制备成cDNA探针,与表达谱芯片进行杂交扫描和分析;并应用RT-PCR技术对其中7个基因进行验证。结果:在1152个基因表达谱的筛选中,26个基因表达差异(2倍以上),其中19个基因表达水平上调,7个基因表达水平下调。RT-PCR技术对其中7个基因表达差异的验证结果与基因芯片结果一致。结论:基因芯片筛选发现其中2.3%的基因可能与涎腺腺样囊性癌细胞转移侵袭相关。     

Overexpression of metastasis-associated MTA1 in oral squamous cell carcinomas: correlation with metastasis and invasion

Metastasis-associated protein 1 (MTA1) is physiologically expressed at low levels in human tissues. Its expression is associated with progression of solid cancers and is common in cancer cell lines. This study investigated whether MTA1 was expressed in squamous cell carcinoma (SCC) and would be a useful metastatic marker. Specimens from 38 patients with oral SCC were stained using the avidin-biotin-peroxidase technique with polyclonal antibodies against MTA1. Human SCC cell lines SAS, HSC2, OSC19 and OSC20 were analysed for MTA1 mRNA expression. MTA1 expression in control tissues was significantly lower than in carcinomas. MTA1 protein expression was detected in 33 of 38 SCC tissues from patients. Histologically, MTA1 protein production was strongly associated with cancer cell invasion, and clinically there was a correlation between lymph node metastasis and MTA1 protein production. Among the cancer cell lines, HSC2 showed the lowest mRNA expression, and OSC20 showed the highest MTA1 mRNA expression. In the Matrigel invasion assay, the HSC2 cell line showed the lowest invasion and the OSC20 cell line showed the highest invasion. RNAi-mediated MTA1 silencing in the OSC20 cells decreased the invasion index. MTA1 expression in oral SCC may be associated with increased invasive ability, which may cause lymph node metastasis.     

High expression of the autophagy gene Beclin‐1 is associated with favorable prognosis for salivary gland adenoid cystic carcinoma

J Oral Pathol Med (2012) 41 : 621–629 Background: Although autophagy is universally involved in tumorigenesis and tumor progression, the roles of autophagy and autophagy‐regulating genes in salivary gland adenoid cystic carcinoma (ACC) remain unknown. In this study, we investigated the expression of the autophagy‐regulating genes Beclin‐1, death‐associated protein kinase‐1, ultraviolet radiation resistance–associated gene, and phosphatase and tensin homolog in salivary gland ACC samples. Methods: Immunohistochemistry and real‐time polymerase chain reaction were used to analyze the expression of these genes in 89 ACC samples and normal salivary gland tissue samples. The relationship of their expression with clinicopathological features was analyzed. Results: The data showed significantly lower expression of these genes in the tumor samples than in normal salivary gland tissue samples. Furthermore, Beclin‐1 expression was significantly correlated with histological pattern of ACC (P < 0.05), and high expression of ultraviolet radiation resistance–associated gene was associated with distant metastasis (P < 0.05). Most importantly, univariate and multivariate survival analyses suggested that Beclin‐1 protein and mRNA expression in cancer cells were independent prognostic indicators for ACC. Conclusion: Our results suggest that autophagy‐regulating genes may participate in the pathogenesis of salivary gland ACC. Further research will be required to gain a better understanding of autophagy in ACC.     

染料木黄酮抗涎腺腺样囊性癌远处转移的实验研究

目的　研究染料木黄酮抗涎腺腺样囊性癌 (ACC)实验性肺转移的作用。方法　分别用ACC M细胞及经染料木黄酮处理的ACC M细胞对 2 0只裸鼠尾静脉接种形成肺转移模型 ,6周后处死动物 ,比较治疗组与对照组裸鼠ACC肺转移率、瘤结节数目 ;观察肺转移灶血管内皮生长因子 (VEGF)、基质金属蛋白酶 (MMP 9)的表达及凋亡情况。结果　染料木黄酮治疗组瘤结节数目明显少于对照组(分别为 9 2 9± 1 80和 2 7 4 4± 13 5 5 ,P <0 0 5 ) ;治疗组转移灶凋亡指数 (AI)明显高于对照组 ( 15 37±3 96及 6 0 3± 3 36 ,P <0 0 5 ) ;治疗组VEGF及MMP 9表达明显弱于对照组 (P <0 0 5 )。结论　染料木黄酮有一定的抗ACC M远处转移的作用 ,这可能是多种机制作用的结果