英培育出首个人造肝脏组织人造器官

据医业网11月1日报道，英国科学家采用婴儿脐带血中的干细胞．成功培育出了世界首个人造肝脏组织。虽然目前它只是一块如硬币大小的迷你肝脏，一个功能完善、可供移植的完整人体肝脏将有望在未来15年内培育出来。     

肝脏干细胞

干细胞为机体进化过程中高度保守的细胞族 ,在机体细胞再生调控中具有特殊的作用。目前认为以肝内胆管系统源性为主的潜能肝脏干细胞分化群 ,既可向胆管细胞分化 ,又可向肝细胞分化。根据肝脏干细胞起源的不同 ,可将其分为肝源性肝干细胞和非肝源性肝干细胞 ,前者主要来源于分化的肝细胞和胆管上皮细胞 ,后者主要来源于骨髓造血干细胞及胰腺上皮细胞等。不同来源的肝脏干细胞虽然在形态、表面标志、功能及分化等诸方面有所差异 ,但均具有多向性演变的特性。近年来 ,在现代细胞生物学、分子生物学及分子遗传学研究推动下 ,有关肝脏干细胞定位…     

肝脏干细胞研究进展

干细胞是不分化而长期生存,具有自我更新能力且保持多种分化潜能的一种细胞群。从功能上定义,肝脏干细胞（hepatic stemcell,HSC）是指在特定的条件下能增殖分化为有功能的肝脏组织的细胞。根据肝脏干细胞的存在位置,分为内源性肝脏干细胞和外源性肝脏干细胞2种。内源性肝脏干细胞存在于肝脏组织本身,是未分化的、多潜能的、具有干细胞以及肝细胞或胆管细胞标记的、非肝实质细胞的上皮细胞前体细胞,目前认为卵圆细胞和小肝细胞属于这一类。外源性肝脏干细胞,本身不存在于肝脏内,包括：骨髓细胞、胰腺细胞、胚胎干细胞、脐带血细胞等,但在特定的微环境中可以分化为肝细胞和（或）胆管上皮细胞。     

小鼠胚胎干细胞体外定向心肌细胞分化的研究

目的：小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES细胞）体外定向心肌细胞分化模型的建立。方法：通过悬滴培养技术定向诱导ES细胞分化为拟胚体,进而分化为心肌细胞,并用RT－PCR对四种肌肉肌动蛋白在EBs中的表达进行了鉴定。结果：在拟胚体和进一步分化的ES细胞中观察到自发节律性收缩的心肌细胞,α－平滑肌肌动蛋白（血管和胃肠道平滑肌）以及纹状肌肉肌动蛋白（心肌和骨骼肌）在这些心肌细胞样的细胞中均能表达。结论：小鼠胚胎干细胞体外定向心肌细胞分化模型的建立,可用于研究相关基因在心肌发育过程中的直接或间接作用,有助于胚胎干细胞衍生的心肌细胞用于临床治疗作用的研究。     

小鼠胚胎与成体肝脏中干细胞变化的探讨

目的 依据干细胞生物学特性,探讨从胚胎到成体肝脏内具干细胞特性细胞的变化状况.方法 分离不同胎龄与日龄小鼠肝脏细胞进行体外培养,观察分离获得的细胞数、培养形成的集落数及生长状态,并对集落进行干细胞表面标记物(c-kit、c-Met、Nestin)、肝细胞表面标记物(AFP、ALB)及胆管上皮细胞表面标记物(CK19)的标记.结果 各组分离的细胞经体外培养均有集落形成,肝干细胞的表面标记提示形成的集落具有肝干细胞特性.其中以第15天胚胎肝脏分离所获的细胞数和培养形成的集落数最多、生长状态最好.15 d后观察的各项指标渐减,细胞生长状态渐差.结论 早期胚胎肝脏中大部分是具有干细胞特性的细胞,随胎龄增加,有干细胞特性的细胞逐渐减少,直至出生第5天仅有少数保持未分化状态的细胞存留在肝脏内.     

Iws1参与小鼠胚胎干细胞中胚层分化发育

目的揭示Iws1在小鼠胚胎干细胞分化发育中的作用。方法利用CRISPR-Cas9基因编辑建立稳定敲除Iws1的小鼠胚胎干细胞细胞系后,利用悬滴法诱导培养拟胚体(embryoid body,EB),在体外探究该基因是否会影响中胚层的发育。同时分离分别出生1天、7天、21天、56天的小鼠心肌细胞进行该基因的定量检测。并使用GeneMANIA数据库确定该基因的潜在靶标。此外,使用WebGestalt进行基因功能(gene ontology,GO)与信号通路(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。结果在小鼠胚胎干细胞诱导分化体系中,Iws1敲除抑制EB中胚层的发育。该基因在出生后21天的小鼠心肌细胞表现出高表达。Iws1具有19种潜在靶向基因。GO和KEGG分析表明,这些潜在靶基因与氧化还原反应,C型瘦蛋白受体信号通路和其他生理过程有关。结论Iws1参与小鼠胚胎干细胞中胚层分化,可能潜在调控中胚层源性终末分化器官的发育。     

维生素C促进小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究

目的:利用经典的悬滴培养法形成拟胚体(EBs),诱导小鼠胚胎干细胞(m ESCs)在体外分化为心肌细胞,观察维生素C作为诱导剂对m ESCs体外诱导分化为心肌细胞的影响,进而寻找一种高效、安全的诱导方法。方法:复苏m ESCs,传代培养后,利用悬滴法使m ESCs形成拟胚体,用含0.1mg/m L维生素C的分化培养基对其进行诱导分化,以不添加任何诱导剂作为对照组,观察出现搏动拟胚体的时间,搏动拟胚体的数量,计算分化比率,统计搏动频率,并进行免疫荧光染色测定心肌肌钙蛋白T(c Tn T)的表达。结果:小鼠胚胎干细胞可自发分化为心肌细胞,但效率较低,0.1mg/m L的维生素C能明显提高m ESCs分化为心肌细胞的效率,约83.3%的EBs出现搏动,显著高于未添加任何诱导剂组,搏动频率为(81.2±7.8)次/分钟。两组搏动心肌细胞c Tn T免疫染色阳性。结论:维生素C能够显著提高m ESCs向心肌细胞分化效率,应用维生素C体外诱导m ESCs向心肌细胞分化是一种较为理想的体外诱导方式。     

TNNI3K基因过表达诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化

目的研究肌钙蛋白Ⅰ相关激酶(TNNI3K)对小鼠胚胎干细胞(m ESC)向心肌细胞分化的影响。方法从形态和细胞免疫荧光、碱性磷酸酶试验以及HE染色鉴定m ESC的多能性。采用悬滴法培养m ESC形成拟胚体(EB),自分化为跳动的心肌细胞,通过细胞免疫荧光和透射电镜(TEM)方法鉴定。慢病毒分别携带h TNNI3K基因和siRNA感染m ESC,并分别自分化为心肌细胞,通过流式细胞术(FCM)、细胞免疫荧光、Western blot等分析心肌特异性蛋白表达水平的差异。结果 m ESC表面蛋白分子SSEA-1和Oct-4表达呈阳性(绿色),ALP试验呈蓝紫色,核质比1。正常自分化的细胞免疫荧光显示cTnⅠ、cTnT、MLC2以及α-actinin阳性(绿色),肌节清晰可见。TEM显示心肌细胞独有的肌纤维亚细胞结构。过表达组cTnT+阳性细胞率高于对照组,Western blot显示心肌特异性蛋白cTnT、cTnⅠ、MLC2、α-actinin等显著高于对照组,且细胞免疫荧光结果显示MHC6蛋白提前表达。干扰组不仅cTnT+阳性细胞率显著低于对照组,而且心肌特异蛋白也显著低于对照组,MHC6蛋白表达延后。结论TNNI3K基因能增强心肌细胞的生成,促进m ESC向心肌细胞的分化。     

脐血干细胞治疗重型肝炎的研究进展

干细胞是指能自我复制更新并产生特化细胞的未成熟细胞.在特定条件下,可以分化成不同的功能细胞,形成多种组织和器官.脐血干细胞替代胚胎干细胞、骨髓干细胞及外周血干细胞进行干细胞移植治疗血液系统肿瘤、心肌梗塞及肝脏功能衰竭等已成为近年来的研究热点,现结合我科的体会对脐血干细胞治疗重型肝炎的进展综述如下.     

小鼠的双相胚胎肝干细胞索对于肝脏再生及分化成胆管和肝细胞有意义

细胞系有很多优点：它们能够被基因操纵、扩增，并且可以储存起来等待器官移植。新鲜分离的肝细胞、卵圆细胞、胰腺细胞和造血干细胞已经被证明可以重建肝脏。作在这里介绍了在白蛋白一尿激酶型纤溶酶原激活物／严重合并的免疫缺陷疾病（Alb-uPA／SCID）的转基因小鼠体内双相小鼠胚胎肝（BMEL）干细胞系可参与肝脏的再生。     

肝脏干细胞治疗肝病的研究现状及存在问题

干细胞是一类具有无限自我更新能力的细胞群体.根据来源可分为胚胎干细胞和成体干细胞两类,后者因其来源广泛且不涉及伦理问题,故最具有研究价值[1]。干细胞治疗技术对多种疾病如肿瘤、血液病、帕金森氏病等,已进入临床应用研究,并取得了一定成效。利用肝干细胞(LSC)进行细胞移     

胰高血糖素样肽1诱导小鼠胚胎干细胞E14分化为胰岛素表达细胞

将小鼠胚胎干细胞株E14以高血糖素样肽 1(GLP 1)诱导 ,观察细胞形态 ,用原位杂交和RT PCR检测细胞内胰岛素mRNA的变化 ,免疫组化、流式细胞仪、放射免疫法验证细胞是否能分泌胰岛素样物质。发现E14细胞在GLP 1的作用下可以分化成表达胰岛素样物质的细胞     

小鼠骨髓间充质干细胞对异基因肝移植模型大鼠淋巴细胞的免疫抑制及损伤修复作用的研究

目的 探讨异基因骨髓间充质干细胞(MSCs)应用于移植及自身免疫性疾病的治疗时替代免疫抑制剂的可能性.方法 体外分离纯化及培养小鼠MSCs;将小鼠肝组织块埋人大鼠肝脏切口,制备异基因肝移植大鼠模型;制备模型前后经尾静脉注射小鼠MSCs;通过体外淋巴细胞增殖实验检测其对模型大鼠淋巴细胞增殖抑制作用;采用HE染色方法观察小鼠MSCs对异基因肝组织移植大鼠肝组织损伤的修复情况.结果 MSCs治疗15 d大鼠胸腺和脾脏均出现淋巴细胞增殖抑制现象,与对照组相比存在显著性差异(P＜0.05);MSCs治疗2 d和5 d肝组织染色显示移植区域浸润的炎性细胞减少,可见肝组织结构.结论 小鼠MSCs具有抑制异基因肝移植大鼠淋巴细胞增殖的作用,并参与移植区肝脏组织的修复.