自然杀伤细胞参与脑缺血后损伤的作用机制

目的 探讨自然杀伤细胞(NK)参与脑缺血后损伤的作用机制.方法 ①体内实验:免疫荧光检测永久性大脑中动脉栓塞(pMCAO)小鼠模型脑组织中NK细胞浸润情况以及干扰素(IFN)-γ表达情况;流式细胞术检测pMCAO小鼠模型脑中NK细胞浸润数目和IFN-γ表达;腹腔注射NK细胞中和抗体,流式细胞术检测pMCAO小鼠12 h脑内NK细胞浸润情况.②体外实验:建立体外血脑屏障并加入NK细胞和荧光标识的牛血清白蛋白(BSA-FITC),氧糖剥夺(OGD)实验6h后荧光分光光度计检测血脑屏障通透性;将NK细胞与小鼠神经细胞共培养,并加入IFN-γ阻断剂,OGD6h后流式细胞术检测神经细胞凋亡.结果 ①体内实验示pMCAO小鼠脑中有NK细胞浸润和IFN-γ表达,与非缺血侧相比,缺血侧的NK细胞浸润显著增多并于12 h达到高峰(P12h＜0.001);脑缺血组织中浸润的NK细胞表达IFN-γ与非缺血侧相比增多(P12h＜0.001、P24h＜0.01、P96h ＜0.05);清除体内NK细胞后,pMCAO小鼠脑内NK细胞浸润显著减少(P＜0.001),脑内IFN-γ表达显著下降(P ＜0.001).②体外实验示OGD条件下,NK细胞组与对照组相比,BSA-FITC渗透显著增多(P＜0.01);NK细胞可促进神经细胞死亡(P＜0.01).结论 NK细胞参与脑缺血损伤过程;NK细胞通分泌IFN-γ加重血脑屏障破坏和神经细胞损伤.     

CD49a阳性NK细胞参与类风湿关节炎疾病进程

目的 研究外周血中CD49a阳性NK细胞的功能及其在类风湿关节炎中的作用。方法 流式细胞术检测健康志愿者和类风湿关节炎患者外周血NK细胞及其亚群包括CD56brightNK、CD56dimNK细胞群上CD49a及IFN-γ的表达;ELISA检测健康志愿者和类风湿关节炎患者血浆中IFN-γ的表达。结果 与健康志愿者相比,RA患者外周血NK细胞及其2个亚群上CD49a的表达均显著升高。在RA患者血浆、外周血NK细胞及其亚群上IFN-γ的表达显著升高;同时CD49a与IFN-γ双阳性的NK细胞比例增加,且CD49a阳性NK细胞较CD49a阴性NK细胞表达更高水平的IFN-γ。结论 CD49a阳性NK细胞参与类风湿关节炎疾病进程。     

一种IFN-γ ELISPOT检测方法的建立

目的:建立检测一种融合蛋白疫苗诱导特异性细胞免疫的ELISPOT实验方法,通过分析免疫小鼠分泌IFN-γ的水平,评价疫苗诱导的细胞免疫应答效应.方法:以融合蛋白疫苗免疫C57BL/6小鼠,14天后加强免疫一次,于第28天无菌取脾,分离脾淋巴细胞,计数并调整细胞浓度,在已包被好的ELISPOT板中分别加入细胞悬液和刺激肽进行刺激培养.裂解细胞,依次加入酶标二抗、底物、显色液,在ELISPOT读板仪进行斑点计数和分析.结果:ELISPOT检测结果与动物免疫途径、细胞培养时间、细胞密度、肽浓度等条件密切相关.实验结果证明:采用皮下注射的免疫途径,免疫效果最佳;小鼠脾淋巴细胞浓度为4×105个/孔,加入1 μg/孔的刺激肽刺激培养24～48小时的条件下,产生的特异性斑点数最多,本底干扰小,有利于结果判断.结论:实验建立了IFN-γ ELISPOT检测方法,可用于该融合蛋白疫苗细胞免疫研究.     

系统性红斑狼疮病人外周血Th细胞和Tc细胞IFN-γ及IL-4表达水平与疾病的关系

目的：观察SLE病人体内Th1／Th2及Tc1／Tc2比例失衡及其与疾病的关系。方法：SLE病人（活动期病人15例，稳定期病人20例）及正常人20例外周全血经PMA（20ns／ml）和离子霉索（ionomyein，1μmol／L）刺激4小时后，采用四色流式细胞术检测CD3^＋CD8^＋T细胞（主要为Th细胞）及CD3^＋CD8^＋T细胞（Tc细胞）胞浆内IFN-γ及IL-4的表达水平。血清抗dsDNA抗体检测采用ELISA法、血清免疫球蛋白和尿蛋白含量测定采用免疫速率散射比浊法。结果：SEE活动期病人Th细胞中IFN-γ的阳性百分率明显低于稳定期病人及正常人，Tc细胞中IFN-γ的阳性百分率明显低于正常人；IL-4的阳性百分率各组问无明显差异。稳定期病人仅Tc细胞IFN-1的百分率明显低于正常人。血清抗dsDNA抗体（＋）病人Th和Tc细胞IFN-γ的阳性百分率明显低于抗dsDNA（-）病人；免疫球蛋白（IgG，IgA，IgM中任何一种）异常增高的病人Th及Tc细胞中虽IL-4的阳性百分率无变化，但平均荧光强度明显高于免疫球蛋白水平正常的病人。Th及Tc细胞中IFN-γ和IL-4的表达水平与尿蛋白含量无明显关系。结论：SLE病人体内存在1型及2型细胞因子的异常表达，并与疾病活动程度存在一定的关系，值得进行深入研究。     

自然杀伤细胞的抗病毒活性

自然杀伤细胞是一类不同于T、B淋巴细胞的多功能淋巴细胞，在抗病毒免疫中发挥着重要作用。目前关于自然杀伤细胞参与抗病毒反应的研究主要集中于以下3点：①自然杀伤细胞介导抗病毒反应的路径；②自然杀伤细胞受体的功能；③自然杀伤细胞及自然杀伤T细胞在抗病毒反应中的激活和作用机理。尽管其中仍然存在许多悬而未决的问题，但大量的研究从分子水平揭示了自然杀伤细胞在病毒感染过程中的功能和反应。     

STZ诱导小鼠糖尿病模型中T、B淋巴细胞功能的变化

目的：探讨多次小剂量注射链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病模型小鼠中T、B淋巴细胞功能的变化及可能的机制，为小鼠糖尿病模型的应用提供实验依据。方法：①采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导昆明小鼠糖尿病作为动物模型。⑤用ConA和Insulin分别刺激脾和胸腺T细胞，采用MTT法检测成熟与未成熟T细胞对于丝裂原和特异性抗原的增殖转化能力。③采用ELISA间接法测定血清中Insulin自身抗体（IAA）的水平。④采用ELISA夹心法测定小鼠脾细胞及胸腺细胞培养上清的IL-4与IFN-γ的含量。结果：①糖尿病模型组血清中Insulin自身抗体（IAA）含量明显高于正常组（P〈0．05）。②模型组成熟T细胞（脾脏细胞）对于ConA刺激的增殖能力较弱（P〈0．05），对于Insulin刺激的增殖能力与正常组没有显著差别（P〉0．05）；模型组未成熟T细胞（胸腺细胞）对于ConA刺激的增殖能力与正常组没有显著差别（P〉0．05），而对于Insulin刺激的增殖能力较高（P〈0．05）。③模型组脾细胞培养上清的IFN-γ的含量明显高于对照组（P〈0．05），而胸腺细胞培养上清中IFN-1的含量在模型组与对照组之间无明显差异，IL-4在实验组和对照组均未检出。结论：多次小剂量注射STZ诱导糖尿病小鼠模型是自身免疫应答所导致；自身免疫性T、B细胞的功能及自身抗体均有增强；Th1介导的细胞免疫在STZ诱导的糖尿病中发挥着重要作用。     

人类自然杀伤细胞发育研究进展

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是淋巴细胞的一种亚型,能够参与机体的固有免疫和适应免疫.人类NK细胞是淋巴细胞循环中的一个重要部分,约占淋巴细胞的20%,在脾脏和骨髓占5%-10%,在其他未发生感染的淋巴器官只有很小的比例(小于1%).     

139例恶性肿瘤患者外周血自然杀伤细胞活性的研究

本研究采用细胞介导微量细胞毒测定法检测139例恶性肿瘤患者和355例健康个体外周血自然杀伤细胞(NK细胞)对用~(125)IUdR标记的K562靶细胞的细胞毒直接杀伤效应。结果表明,肿瘤患者NK细胞活性显著低于健康个体,其中,肝胆肿瘤和晚期肿瘤患者NK活性降低尤为显著,临床治愈者NK活性恢复到正常人水平。不同临床阶段肿瘤患者经过肿瘤手术切除以及药物加放射线治疗好转者NK活性均显著升高。健康个体随着年龄增长NK活性下降,说明非特异免疫监视能力减弱与肿瘤的发生、发展关系密切。     

经链球菌菌体制剂OK-432刺激的树突状细胞对自然杀伤细胞增殖及功能的影响

目的:探讨经链球菌菌体制剂OK-432刺激的树突状细胞(Dendritic cells,DC)对自体自然杀伤细胞(Naturalkiller cells,NK)体外扩增和功能的影响。方法:将DC分为未成熟DC组和OK-432刺激的DC组,48小时后MTT法检测DC增殖情况,FCM检测DC表型CD80、CD83、CD86的表达情况;后将未成熟DC组和OK-432刺激的DC组分别与NK细胞以1∶1、1∶5、1∶10、1∶20、1∶40比例混合继续培养。0、2、4、6天时计算NK细胞扩增倍数;FCM检测NK细胞PFP、GraB、CD107a的表达;LDH释放法检测NK对HepG2细胞的杀伤活性。结果:OK-432(5μg/ml)使DC增殖达到最佳(30%),且能显著增强DC表型表达(P<0.05)。1∶5(OK-DC)组NK细胞扩增倍数达最大(P<0.05);1∶5(OK-DC)组能显著促进NK释放穿孔素(Pore-forming protein,PFP)、颗粒酶(Granzyme B,GraB)、CD107a(P<0.05);1∶5(OK-DC)组对HepG2细胞的杀伤活性(67.12±5.36)%达到最大(P<0.05)。结论:OK-432(终浓度5μg/ml)能促进DC增殖,并促进DC成熟;OK-DC与NK细胞共培养能以剂量依赖的方式增强NK细胞杀伤HepG2细胞功能,可能与增加NK扩增倍数和PFP、GraB、CD107a的表达有关。     

贵州籍人群EHF疫苗接种后抗体应答及细胞因子变化

目的探讨贵州籍人群对EHF疫苗抗体应答能力和免疫后细胞因子的变化。方法对60名贵州健康自愿者进行EHF双价灭活疫苗全程接种,共3次(第0、7、28天),接种前及末次接种后2周用间接免疫荧光法(IFA)检测血清抗EHF抗体水平,效价≥1：640为高应答者;效价≤1：80为低应答者,ELISA法检测高低应答组人群血清TNF-α、IFN-γ。结果60名EHF疫苗接种者均对EHF疫苗产生免疫应答,汉族46人中19人(41％)为高应答者,5人(10％)为低应答者;侗族10人中5人(50％)为高应答者,3人(30％)为低应答者;布依族4人中1人为高应答者,1人为低应答者,疫苗接种后TNF-α、IFN-γ均有升高。结论60名。EHF疫苗接种者均对EHF疫苗产生免疫应答,其中汉族、侗族、布依族对EHF疫苗的抗体应答能力有所不同,同时诱导TNF-α、IFN-γ的分泌。     

自然杀伤细胞活化性受体的研究进展

自然杀伤细胞（NK）是机体固有免疫系统的重要效应细胞,其不仅能杀死病毒感染细胞和肿瘤细胞,还参与调节固有免疫应答和适应性免疫应答.NK细胞对靶细胞的杀伤效应取决于NK细胞抑制性受体和活化性受体与其配体相互作用的整合,而NK细胞不杀伤正常组织是因为抑制性受体对HLA-Ⅰ类分子的优势识别.NK细胞抑制性受体研究比较成熟,近几年NK细胞活化性受体研究进展很快.     

自然杀伤细胞的临床研究进展

自然杀伤（ＮＫ）细胞活性与肿瘤免疫和移植免疫密切相关，肿瘤病人ＮＫ细胞的数量和活性均低于正常，故其活性的变化可作为判断肿瘤预后的指标。ＮＫ细胞参与血液病和脾切除的非特异性免疫。全脾切除后，ＮＫ细胞活性降低。但在一些肿瘤患者，全脾切除后ＮＫ细胞活性上升     

一种新的红细胞衰老模型

在Ｍｏｈａｎｄａｓ工作的基础上，我们采用抗体诱导引起的大白兔球状红细胞贫血病，建立了一种在接近正常生理条件下，同步生长的红细胞衰老的新型动物模型。用此模型，我们连续地监测了从红细胞的新生到红细胞的衰老７０天的红细胞的血球压积１网织细胞计数。结果表明，贫血发生以后，由于应激反应，在注射抗体约１０天内所有的红几乎被新生红细胞所代替。     

人自然杀伤细胞体外活化扩增技术研究进展

自然杀伤细胞（NK）对不同来源的肿瘤细胞都具有很强的杀伤作用,在肿瘤的免疫治疗方面有着良好的应用和发展前景.因此在体外获得足够数量的高杀伤活性的NK细胞不但是研究NK细胞生物学特性的前提条件,同时也是将NK细胞应用到临床上的重要保证.了解人NK细胞活化扩增方法,以期达到临床治疗所需数量和杀伤活性,可为临床上应用NK细胞治疗肿瘤奠定了基础.     

自然杀伤细胞活化性受体及其配体的研究进展

自然杀伤细胞(NK)是固有免疫应答的重要淋巴细胞,其在抗肿瘤、抗病毒免疫应答中发挥关键性作用.然而,肿瘤、病毒可通过调控相应配体、受体的表达影响NK细胞活性,形成相应的免疫逃逸机制.故对NK细胞活化性受体、配体及其生物学功能的研究很有意义.     

自然杀伤细胞的基础研究和进展

人们对免疫系统的认识早已从单一的线性结构到充满着反馈性因素的网络结构,代表着固有免疫细胞的NK细胞是淋巴细胞中具有重要意义的第三类亚群.NK细胞具有特征性的功能包括杀伤病毒感染细胞或变异的肿瘤细胞,因而被称之为溶细胞性效应细胞,并且还有重要的分泌细胞因子和趋化因子功能,是固有免疫中重要的组成部分.